儀分實(shí)驗(yàn)-實(shí)驗(yàn) 10分子熒光光譜法

1、編寫教師：鄭洪副教授編寫教師：鄭洪副教授編寫日期：編寫日期：2006年年9月月 實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)10 分子熒光分析法分子熒光分析法 編寫教師：鄭洪副教授編寫教師：鄭洪副教授編寫日期：編寫日期：2006年年9月月 光光 譜譜 分分 析析 原原子子光光譜譜（略略） 分分子子 光光譜譜 分分子子吸吸收收 U UV V- -V Vi is s（紫紫外外- -可可見見） I IR R（紅紅外外） 分分子子發(fā)發(fā)光光 光光致致發(fā)發(fā)光光 其其它它發(fā)發(fā)光光形形式式 如如：化化學(xué)學(xué)發(fā)發(fā)光光等等 熒熒光光、磷磷光光 (對光的吸收對光的吸收) 編寫教師：鄭洪副教授編寫教師：鄭洪副教授編寫日期：編寫日期：2006年年9月月 2

2、 1 V=0 3 2 1 V=0 2 1 V=0 S0 S1 S2 T1 發(fā)生激發(fā)發(fā)生激發(fā) 態(tài)反應(yīng)態(tài)反應(yīng) 分子內(nèi)的激發(fā)和衰變過程分子內(nèi)的激發(fā)和衰變過程 2 1 V=0 A1A2 VR F ic isc P VR 激發(fā)態(tài)能量的躍遷與轉(zhuǎn)激發(fā)態(tài)能量的躍遷與轉(zhuǎn) 化的形式和速率：化的形式和速率： A1,A2 吸收吸收: 10-15 s VR 振動松弛：振動松弛： 10-12 s ic 內(nèi)轉(zhuǎn)化：內(nèi)轉(zhuǎn)化： 10-11 s isc 系間竄越：系間竄越： 10-6 10-2 s F 熒光：熒光： 10-9 10-6 s P 磷光：磷光： 10-6 100 s 編寫教師：鄭洪副教授編寫教師：鄭洪副教授編寫日期：編

3、寫日期：2006年年9月月 250300350400450500550600 0 200 400 600 800 Ex. Wavelength (nm) Relative Fluorescence Intensity 激發(fā)光譜激發(fā)光譜發(fā)射光譜發(fā)射光譜 任何熒光化合物，都具有兩種特征的光譜：激發(fā)光譜和任何熒光化合物，都具有兩種特征的光譜：激發(fā)光譜和 發(fā)射光譜。發(fā)射光譜。 組成、結(jié)構(gòu)與衍化信息組成、結(jié)構(gòu)與衍化信息 物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu) 環(huán)境與介質(zhì)條件環(huán)境與介質(zhì)條件 與其它溶質(zhì)的相互作用與其它溶質(zhì)的相互作用 反應(yīng)動力學(xué)反應(yīng)動力學(xué) 編寫教師：鄭洪副教授編寫教師：鄭洪副教授編寫日期：編寫日期：2

4、006年年9月月 O -O COO- O -O COO- NH2 萘 紫外區(qū) 蒽 藍(lán)區(qū) 丁省 綠區(qū) 1）共軛結(jié)構(gòu) 2）剛性的平面結(jié)構(gòu) 熒光黃會發(fā)熒光 酚酞不發(fā)熒光 3）取代基 編寫教師：鄭洪副教授編寫教師：鄭洪副教授編寫日期：編寫日期：2006年年9月月 F = KI0fC I I0 0：光源強(qiáng)度；：光源強(qiáng)度； f f：熒光量子產(chǎn)率；：熒光量子產(chǎn)率； C C：熒光體濃度）：熒光體濃度） 1 1）影響相對熒光強(qiáng)度的因素有哪些？）影響相對熒光強(qiáng)度的因素有哪些？ 2 2）試比較熒光法與紫外）試比較熒光法與紫外- -可見分光光度法的分析性能?？梢姺止夤舛确ǖ姆治鲂阅堋?? 問題：問題： 5505605

5、70580590600610620 0 600 1200 1800 2400 3000 3600 4200 4800 C Fluorescence Intensity Wavelength(nm) （注意：注意：在一定濃度范圍內(nèi)適用）在一定濃度范圍內(nèi)適用） 編寫教師：鄭洪副教授編寫教師：鄭洪副教授編寫日期：編寫日期：2006年年9月月 ？問題問題：熒光光度計(jì)與紫外熒光光度計(jì)與紫外- -可見分光光度計(jì)在光路設(shè)置可見分光光度計(jì)在光路設(shè)置 上有什么不同？為什么？上有什么不同？為什么？ 編寫教師：鄭洪副教授編寫教師：鄭洪副教授編寫日期：編寫日期：2006年年9月月 常規(guī)分析應(yīng)用：常規(guī)分析應(yīng)用： 定性分

6、析：定性分析：f；ex；em；峰形等；峰形等 定量檢測：定量檢測： F = KI0fC 其它（略）其它（略） 高端生化研究：高端生化研究： 分子相互作用研究；分子相互作用研究； 代謝動力學(xué)跟蹤；代謝動力學(xué)跟蹤； 顯微成像顯微成像（物理遷移與化學(xué)衍化的原位（物理遷移與化學(xué)衍化的原位“顯跡顯跡”） 編寫教師：鄭洪副教授編寫教師：鄭洪副教授編寫日期：編寫日期：2006年年9月月 編寫教師：鄭洪副教授編寫教師：鄭洪副教授編寫日期：編寫日期：2006年年9月月 2.1 2.1 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 N CH2OHHO H3C R R = CH2NH2, CH2OH, CHO. 在近中性的水溶液在近中性的水溶

7、液 中有較強(qiáng)的熒光發(fā)射中有較強(qiáng)的熒光發(fā)射: : （323nm/392nm 323nm/392nm 附近）附近） 在堿性介質(zhì)中不穩(wěn)定在堿性介質(zhì)中不穩(wěn)定 易發(fā)生光降解易發(fā)生光降解 VBVB6 6 的化學(xué)結(jié)構(gòu)的化學(xué)結(jié)構(gòu) 編寫教師：鄭洪副教授編寫教師：鄭洪副教授編寫日期：編寫日期：2006年年9月月 、試液配制、試液配制 、VB6的熒光光譜的繪制的熒光光譜的繪制 、標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的制作、標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的制作 、未知液的配制、未知液的配制 編寫教師：鄭洪副教授編寫教師：鄭洪副教授編寫日期：編寫日期：2006年年9月月 注射液的移取與稀釋注射液的移取與稀釋 系列標(biāo)液的測定順序系列標(biāo)液的測定順序 即放即測，防光降解即放即測，防光降解 熒光儀的開關(guān)機(jī)順序熒光儀的開關(guān)機(jī)順序 編寫教師：鄭洪副教授編寫教師：鄭洪副教授編寫日期：編寫日期：2006年年9月月 1.從熒光光譜圖上讀出最大激發(fā)（從熒光光譜圖上讀出最大激發(fā)（ex）和發(fā)射波