【doc】藍莓花色苷的降血脂和抗氧化作用

1、藍莓花色苷的降血脂和抗氧化作用foodandfermentationindustr藍莓花色苷的降血脂和抗氧化作用李穎暢,孟憲軍,孫靖靖.,于娜1(渤海大學生物與食品科學學院,遼寧錦州,121000)2(沈陽農(nóng)業(yè)大學食品學院,遼寧沈陽,110161)3(遼寧醫(yī)學院,遼寧錦州,121000)摘要研究藍莓花色苷(anthocyaninsfromblueberryfruits,abbf)對實驗性高脂血癥大鼠的血脂水平和抗氧化能力的影響.將sd大鼠分成正常對照組,高脂組,低,中,高劑量藍莓花色苷組,測定其血脂水平及血清和肝臟總抗氧化能力(t-aoc),谷胱甘肽過氧化物酶(gshpx),超氧化物歧化酶(s

2、od)活性和mda含量.結果表明:攝入藍莓花色苷后高脂血癥大鼠血脂水平和動脈粥樣硬化指數(shù)(ai)均較高脂組顯著降低,而血清和肝臟ta0c,sod和gshpx活性明顯增強,mda的生成量顯著減少.關鍵詞藍莓花色苷,高脂血癥,降血脂,抗氧化高血脂,動脈硬化等心腦血管疾病的增加已成為當今社會影響人類健康的一大難題,因此,具有降血脂,抗動脈硬化的藥品和保健品一直受到人們的廣泛重視,黃酮類化合物在這方面具有較好的療效口,花色苷屬于黃酮類物質,李進等人口研究表明,黑果枸杞色素具有降低高脂血癥小鼠血脂的作用.藍莓(blueberry),又稱越橘,藍漿果,屬杜鵑花科(ericaceae)越橘屬(vaccini

3、um.spp)多年生落葉或常綠灌木.藍莓果實呈深藍色,含有豐富的花色苷,具有促進視紅素再合成,抗炎癥,提高免疫力,延緩衰老,抗癌等多種生理活性功能3.國內(nèi)外對藍莓花色苷生理功能的研究主要集中在清除自由基作用,抗癌等方面,而其對體內(nèi)生理活性影響的研究還很少.本文探討藍莓花色苷對高脂血癥大鼠血脂和抗氧化的影響,為藍莓花色苷功能食品的開發(fā)提供理論依據(jù).1材料與方法1.1實驗材料1.1.1藍莓花色苷的制備取一定質量藍莓果,破碎,用ph3.0的體積分數(shù)6o乙醇溶液按1g:15ml的比例混合均勻,于4o下浸提2h后抽濾,收集濾液,40減壓濃縮得到紅色粘稠的粗提液,經(jīng)ab一8大孔樹脂純化,4o減壓濃縮得到純

4、化的藍莓花色苷濃縮液,真空干燥得到紫黑色粉末.純化后莓花色苷的色價為54.1o,水分含量為0.01%.第一作者:博士,副教授(孟憲軍為通訊作者).收稿日期:20080512,改回日期:2008053o44iqq曼旦!:曼皇q!1曼1.1.2大鼠飼料基礎飼料由遼寧省沈陽市于洪區(qū)動物實驗飼料廠提供,高脂飼料配方:基礎飼料86.5,蛋黃粉5.8,豬油7.0,膽固醇0.5%,0.2牛膽酸鈉,由遼寧省沈陽市于洪區(qū)動物實驗飼料廠軋制,低溫保存.1.1.3實驗動物清潔級雄性sd大鼠5o只,體重(18020)g,由遼寧省中醫(yī)學院實驗動物中心提供.1.1.4實驗試劑總膽固醇(tc)測定試劑盒,甘油三脂(tg)測

5、定試劑盒,高密度脂蛋白膽固醇(hdlc)測定試劑盒,低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)測定試劑盒,購自北京中生北控生物科技股份有限公司;總抗氧化能力(t-aoc)測定試劑盒,谷胱甘肽過氧化物酶(gshpx)活力測定試劑盒,丙二醛(mda)測定試劑盒,超氧化物歧化酶(sod)測定試盒,考馬斯亮蘭蛋白質測定試劑盒,購自南京建成生物工程研究所;膽固醇,牛膽酸鈉,購自北京奧博星生物科技有限公司;分析所用的其他化學試劑均為國產(chǎn)分析純.1.1.5實驗儀器電熱恒溫水浴鍋,國華儀器有限公司;漩渦混合器,上海精科實業(yè)有限公司;uv-1600型紫外可見分光光度計,北京瑞利分析儀器公司;dzf-6050型真空干燥箱,

6、上海精宏儀器設備有限公司;電子天平,北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司.1.2實驗方法1.2.1實驗動物分組將實驗大鼠用普通飼料喂養(yǎng)5d,適應環(huán)境后,按體重隨機分成5組:陰性對照,高脂模型,低,中,高3個藍莓花色苷劑量組,每組1o只,分別按實驗設計飼以不同的飼料,開始進入實驗期.1.2.2動物飼養(yǎng)及處理將各組大鼠按組分籠飼養(yǎng),除對照組飼以基礎飼料外,其他4組飼以高脂飼料.各組每天灌胃處理如下:低,中,高藍莓花色苷劑量組分別給予50mg花色苷/kg體重,100mg花色苷/kg體重,200mg花色苷/kg體重,對照組和高脂模型組給予同樣體積的生理鹽水.自由攝食飲水,飼養(yǎng)時間40d.40d后,禁食12h,

7、頸總動脈采血,3000g離心15rain分離血清,測血脂水平和抗氧化指標.動物飼養(yǎng)在沈陽農(nóng)業(yè)大學牧醫(yī)學院清潔級動物實驗室完成.1.2.3檢測指標及方法1.2.3.1血脂水平測定以大鼠血清為材料,分析tc,tg,hdl-c,ldlc等血脂4項,同時計算動脈硬化指數(shù)(atherosclerosisindex,ai),按照公式ai1一(tc_hdl-c)/hdl_c和ai一ldl-c/hdlc計算各組大鼠的ai,以反映機體發(fā)生as的危險性的大小.1.2.3.2肝組織勻漿液的制備與蛋白質含量測定肝組織勻漿液的制備與蛋白質含量測定:取肝組織在冷的生理鹽水中漂洗,除去血液,濾紙拭干,稱重,用滅菌生理鹽水做

8、勻漿介質,4c下制得100g/l肝勻漿,將肝勻漿液2500r/rain,4離心15rain,取上清液分裝,4保存?zhèn)溆?考馬斯亮藍法測定蛋白質含量.1.2.3.3血清和肝勻漿總抗氧化能力,sod活性,gsh-px,mda的測定總抗氧化能力,sod活性,gshpx活性,mda含量的測定方法按照試劑盒說明書進行,用分光光度計測定.1.3實驗數(shù)據(jù)處理以spss10.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析,實驗數(shù)據(jù)用xs表示.2結果與分析2.1藍莓花色苷對高脂血癥大鼠血脂水平的影響由表1可以看出,模型組甘油三酯(tg),總膽固醇(tc),低密度脂蛋白膽固醇(ldl_c)含量顯著(p<0.05)高于陰性對照組

9、,高密度脂蛋白膽固醇(hdl_c)含量顯著(p<0.05)低于陰性對照組.3個藍莓花色苷劑量組tg,tc,ldl-c含量顯著(p<o.05)低于模型組,低,高藍莓花色苷劑量組之間差異達到顯著水平.3個藍莓花色苷劑量組hdl-c含量相對模型組顯著(p<0.05)升高,3個藍莓花色苷劑量組之間hdl-c含量差異顯著(p<o.05).由此說明藍莓花色苷具有降低高脂大鼠血清中tg,tc,lddc的作用,提高hdlc的作用,并存在一定的量效依賴性.表1灌胃不同劑量藍莓花色苷對實驗大鼠血脂水平的影響注:新復極差法的多重比較,不同英文小寫孚母表不0.05水平的差異顯著,相同字母差異不

10、顯著,表2表6l司.2.2藍莓花色苷對高脂血癥大鼠動脈硬化指數(shù)的影ai和ai均較模型組顯著降低(p<0.05),3個藍響莓花色苷劑量組之間ai差異達到顯著水平(p<由表2可知,大鼠經(jīng)高脂誘導后,其動脈硬化指0.05),高劑量藍莓花色苷組ai已降到正常水平.數(shù)ai(tc-hdl_c)/hdl_c)和ai.(ldl-c/hdl一高劑量藍莓花色苷組與低劑量藍莓花色苷組ai差c)顯著(p<0.05)升高,3個藍莓花色苷劑量組的異顯著.表2灌胃不同劑量藍莓花色苷實驗大鼠的動脈硬化指數(shù)生蔓鲞筻塑(星篁塑i45dandfermentat10nindust2.3藍莓花色苷對高脂血癥大鼠總抗氧

11、化(t-aoc)能力的影響大鼠血清和肝臟t_aoc結果(表3)表明,經(jīng)高脂飼料誘導后,模型組大鼠血清和肝臟的taoc較陰性對照組均顯著(p<o.05)降低,灌胃藍莓花色苷后,3個劑量組大鼠血清和肝臟中的ta0c均較模型組顯著(p<o.05)升高.在大鼠血清中,中,高劑量藍莓花色苷組較陰性對照組顯著(p<o.05)升高,低劑量藍莓花色苷組與陰性對照組相比差異不顯著.在大鼠肝臟中,高劑量藍莓花色苷組較陰性對照組顯著(p<0.05)升高;低,中藍莓花色苷劑量組taoc與陰性對照組無顯著性差異.說明藍莓花色苷具有提高大鼠血清和肝臟的taoc能力,并表現(xiàn)劑量依賴性.表3灌胃不同劑

12、量藍莓花色苷大鼠血清和肝臟的總抗氧化能力2.4藍莓花色苷對高脂血癥大鼠超氧化物歧化酶(sod)的影響高脂誘導后,模型組大鼠血清和肝臟s0d活性較陰性對照組顯著(p<0.05)降低;與模型組相比,3個藍莓花色苷劑量組血清和肝臟sod活性均顯著(p<o.05)提高;高劑量藍莓花色苷組的血清和肝臟sod活性相對陰性對照組顯著(p<o.05)升高,并且其與低劑量組之間sod活性差異達顯著水平(p<o.05),低,中劑量藍莓花色苷組和對照組sod活性無顯著差異(見表4).表4灌胃不同劑量藍莓花色苷大鼠血清和肝臟的sod活性2.5藍莓花色苷對高脂血癥大鼠谷胱甘肽過氧化物酶(gsh-

13、px)的影響由表5可以看出,與模型組相比,3個藍莓花色模型組的gshpx較陰性對照組顯著(p<0.05)下降,3個藍莓花色昔劑量組的gshpx活性較模型組顯著(p<o.05)升高,且高藍莓花色苷劑量組與陰性苷劑量組的血清gshpx活性顯著(p<o.05)上升,對照組的差異達顯著水平(p<o.05),低,中劑量藍藍莓花色苷3個劑量組之間差異不顯著;在肝臟中,莓花色苷組gshpx活性差異不顯著.表5灌胃不同劑量藍莓花色苷大鼠血清和肝臟的gsh-px活力2.6藍莓花色苷對高脂血癥大鼠丙二醛(mda)的影響經(jīng)高脂誘導后,模型組大鼠血清和肝臟中的mda水平顯著(p<o.05

14、)增加,灌胃藍莓花色苷后,3個劑量組血清和肝臟的mda含量較模型組顯著(p<0.05)下降,其中,低,中藍莓花色苷劑量組血清46l2008vo1.34no,10(total250)mda和陰性對照組無顯著差異,高劑量組血清mda相對陰性對照組顯著降低(p<0.05).中,高劑量組肝臟mda水平與陰性對照組相比亦顯著下降(p<o.05).表明藍莓花色苷可以有效降低大鼠體內(nèi)的氧化代謝產(chǎn)物丙二醛含量,并呈量效依賴性(見表6).表6灌胃不同劑量藍莓花色苷大鼠血清和肝臟的mda含量3討論動物試驗和臨床研究顯示高脂血癥與脂質過氧化之間存在密切關系l7.研究發(fā)現(xiàn),高脂模型組大鼠在血脂升高的

15、同時,血清和肝臟中的mda含量顯著增加,血清和肝臟中的抗氧化酶sod和gsh-px活性顯著下降,說明了血脂升高的同時脂質過氧化作用增強,抗脂質過氧化物酶活性降低.灌胃藍莓花色苷后,各劑量組大鼠血清和肝臟的mda含量較高脂模型組顯著下降,而sod和gshpx活性較高脂模型組明顯升高.提示藍莓花色苷可能通過提高機體抗氧化酶類活性降低體內(nèi)自由基水平,減少自由基的毒副作用,降低自由基造成的損傷,從而起到調(diào)節(jié)血脂和預防動脈硬化的作用.研究表明,藍莓花色苷能顯著提高高脂血癥大鼠血清中hdlc含量,同時降低血清中tc,tg,ldl-c含量.血清tc,tg含量高是高血脂癥的主要指標,hdl-c能夠轉運動脈壁膽

16、固醇到肝臟分解為膽酸,是有效的抗動脈硬化(as)因子.kayamories給老鼠喂食含大量膽固醇的食物,同時飼喂一種從茄子中提取的酰基化飛燕草花色苷,結果鼠血清中的總膽固醇含量下降,而糞便排泄物中的膽固醇和膽汁酸卻增加,藍莓花色苷使總膽固醇降低可能是由于其阻礙了小腸對膽固醇和膽汁酸的吸收.筆者試驗中發(fā)現(xiàn),apoai濃度升高可激活lcat活性,但藍莓花色苷降血脂的機制還需進一步研究.研究還表明,灌胃不同劑量的藍莓花色苷提取物后,相對高脂模型組動脈粥樣硬化指數(shù)ai,ai均有下降趨勢,提示藍莓花色苷對as有一定的預防作用.動脈粥樣硬化是多因素所致的慢性疾病,其中血脂水平升高和高膽固醇血癥已經(jīng)被確認為

17、動脈粥樣硬化發(fā)生和發(fā)展的重要因素,降低血脂尤其是膽固醇水平可減少動脈粥樣硬化危險性93.hdl能夠將外周組織和細胞的膽固醇逆向轉運到肝臟代謝,生成膽酸,以降低血漿中的膽固醇,是有效的抗動脈粥樣硬化(as)因子.ldl的功能之一是將膽固醇帶到外圍組織,充當膽固醇的主要載體.由于ldl攜帶的膽固醇可能沉積在血管壁上,故血漿中l(wèi)dl濃度過高對機體是不利的,而且當體內(nèi)氧化狀態(tài)升高時,ldl易被氧化,氧化的ldl(ox-ldl)可能損傷內(nèi)皮細胞,且極易被單核巨噬細胞清道夫受體識別而進入細胞,使細胞內(nèi)膽固醇堆積并轉變?yōu)榕菽毎?形成as早期病變.sod和gshpx是機體重要的抗氧化酶,在清除過氧化物和保護

18、細胞免于損傷中起重要作用.thoms等人1.報道,gshpx對內(nèi)皮細胞防御氧化ldl損傷起到重要作用.藍莓花色苷可能通過升高hd卜c含量,提高機體抗氧化能力,從而降低脂質過氧化物對動脈壁細胞及其成分(如ldl)的損傷,達到預防as的作用.4結論藍莓花色苷使高脂血癥大鼠血脂水平和動脈粥樣硬化指數(shù)(ai)顯著降低,血清和肝臟taoc,sod和gshpx活性明顯增強,mda的生成量顯著減少.藍莓花色苷具有降血脂和抗氧化生物活性,降低動脈硬化發(fā)生的危險性.參考文獻1張妍,李厚偉,張永春.山楂中總黃酮幾種提取方法的考察及含量測定j.哈爾濱醫(yī)科大學,2001,(7):1832李進,瞿偉菁,劉叢,等.黑果枸

19、杞色素對高脂血癥小鼠血脂及脂質過氧化的影響口.食品科學,2007,28(9):5145183凌關庭.可供開發(fā)食品添加劑(ix):蘭莓提取物及其抗氧化作用j.糧食與油脂,2003,(6):45484孫志健,張燕,陳芳,等.對藍莓產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的思考ej3.食品工業(yè)科技,2005,26(12):1831845mazzag,kayd,tonycotterll,eta1.absorptionofanthocyaninsfromblueberiesandserumantioxidantstatusinhumansubjeetsj.jagricfoodchem,2002,50(10):773177376wei

20、guangy,casimircakoh,joanfischer,eta1.effectsofphenoliccompoundsinblueberriesandmuscadinegrapesonhepg2cellviabilityandapoptosisj.foodresearchinternational,2006,39(5):6286387郭紅,陳在嘉,徐義樞.血清脂質與脂質過氧化關系的l2008年第34卷第10期(總第250期)i4/.if00dandfermentat10nindu臨床研究u1.中國循環(huán)雜志,1991,6(5):3733758kayamorif,igarashik.eff

21、ectsofdietarynasunioontheserumcholesterollevelinratsej.biosci.biotechnolbio-chem,1994,58:5075719王克勤.脂蛋白與動脈粥樣硬化m.北京:人民衛(wèi)生出版社,1995,417?lotomasjp,geigerpg,girottiam.lethaldamagetoendothelialcellbyoxidizedlowdensitylipoprotein:roleofse1enoper0xidaseincyctopr0tectionagainslipidhydroperoperoxide-andiron-me

22、diatedreactionsej.lipidres,1993,479490effectsofanth0cyanionsfromblueberryonlowingthecholesterolandantioxidationliyingchang,mengxianjun,sunjingjing.,yuna1(collegeofbidogyandfoodscience,bohaiuniversity,jinzhou121000,china)2(collegeoffoodscience,shenyangagriculturaluniversity,shenyang110161,china)3(lia

23、oningmedicalcollege,jinzhou121000,china)abstracttheeffectsofblueberryanthocyaninsonthelevelofserumlipidsandantioxidativeabilityinhyperlipidemicratswerestudied.thesdratsweredividedinto5groups,includingnormalgroup,modelgroups,low-,medium-andhighdosesblueberryanthocyaninsgroups.thelevelsofserumlipids,t

24、aoc,thecontentofmdaandactivityofsod,gsh-pxinserumandliverweremeasured.theresultsshowedthatthelevelsofserumlipidsandather0sclerosisindexinhyperlipidemicratsfedwithblueberryanthocyaninonweresignificantlylowerthanthoseofthemodelgroup.thecapabilityoftaocandactivitiesofsod,gshpxwerealsoincreasedwhilethecontentsofmdainserumandliverweredecreased.keywordsblueberryanthocyaninons,hyperlipidemia,decreasingbloodlipid,antioxidation累酵飲料將葡國標作為健康飲料的重要一員,