殘留溶劑測定法(二部)檢驗標準操作規(guī)程

1、文件類別：技術標準 13/12文件名稱： 殘留溶劑測定法(二部)檢驗標準操作規(guī)程 文件編號：09t-i626-01分發(fā)部門：質量控制科1. 目的：建立殘留溶劑測定法(二部)檢驗標準操作規(guī)程，并按規(guī)程進行檢驗，保證檢驗操作規(guī)范化。2. 依據： 2.1. 中華人民共和國藥典2010年版二部。3. 范圍：適用于所有用殘留溶劑測定法(二部)測定的供試品。4. 責任：檢驗員、質量控制科主任、質量管理部經理對本規(guī)程負責。5. 正文：5.1. 藥品中的殘留溶劑系指在原料藥或輔料的生產中，以及在制劑制備過程中使用的，但在工藝過程中未能完全去除的有機溶劑。藥品中常見的殘留溶劑及限度見附表1，除另有規(guī)定外，第一、

2、第二、第三類溶劑的殘留限度應符合表1中的規(guī)定；對其他溶劑，應根據生產工藝的特點，制定相應的限度，使其符合產品規(guī)范、藥品生產質量管理規(guī)范（gmp）或其他基本的質量要求。5.2. 本法照氣相色譜法（附錄 ）測定。5.3. 色譜柱5.3.1. 毛細管柱：除另有規(guī)定外，極性相近的同類色譜柱之間可以互換使用。5.3.1.1. 非極性色譜柱：固定液為100%的二甲基聚硅氧烷的毛細管柱。5.3.1.2. 極性色譜柱：固定液為聚乙二醇（peg-20m）的毛細管柱。5.3.1.3. 中性色譜柱：固定液為（35%）二苯基-（ 65%）甲基聚硅氧烷、（50%）二苯基-（50%）二甲基聚硅氧烷、（35%）二苯基-（

3、65%）二甲基聚硅氧烷、（14%）氰丙基苯基-（86%）二甲基聚硅氧烷、（6%）氰丙基苯基-（94%）二甲基聚硅氧烷的毛細管柱等。5.3.1.4. 弱極性色譜：柱固定液為（5%）苯基-（95%）甲基聚硅氧烷、（5%）二苯基-（95%）二甲基硅氧烷的毛細管柱等。5.3.2. 填充柱：以直徑為0.180.25mm 的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球或其他適宜的填料作為固定相。5.4. 系統(tǒng)適用性試驗。5.4.1. 用待測物的色譜峰計算，毛細管色譜柱的理論板數一般不低于5000；填充柱的理論板數一般不低于1000。5.4.2. 色譜圖中，待測物色譜峰與其相鄰色譜峰的分離度應大于1.5。5.4.3

4、. 以內標法測定時，對照品溶液連續(xù)進樣5次，所得待測物與內標物峰面積之比的相對標準偏差（rsd）不大于5；若以外標法測定,所得待測物峰面積的rsd應不大于10。5.5. 供試品溶液的制備。5.5.1. 頂空進樣：除另有規(guī)定外，精密稱取供試品0.11g，通常以水為溶劑；對于非水溶性藥物，可采用n，n-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜或其他適宜溶劑；根據供試品和待測溶劑的溶解度，選擇適宜的溶劑且應不干擾待測溶液的測定。根據各品種項下殘留溶劑的限度規(guī)定配制供試品溶液，其濃度應滿足系統(tǒng)定量測定的需要。5.5.2. 溶液直接進樣：精密稱取供試品適量，用水或合適的有機溶劑使溶解；根據各品種項下殘留溶劑的限度規(guī)定配

5、制供試品溶液，其濃度應滿足系統(tǒng)定量測定的需要。5.6. 對照品溶液的制備：精密稱取各品種項下規(guī)定檢查的有機溶劑適量，采用與制備供試品溶液相同的方法和溶劑制備對照品溶液；如用水作溶劑，應先將待測有機溶劑溶解在50%二甲基亞砜或n,n-二甲基甲酰胺溶液中，再用水逐步稀釋。若為限度檢查，根據殘留溶劑的限度規(guī)定確定對照品溶液的濃度；若為定量測定，為保證定量結果的正確性，應根據供試品中殘留溶劑的實際殘留量確定對照品溶液的濃度；通常對照品溶液的色譜峰面積不宜超過供試品溶液中對應的殘留溶劑的色譜峰面積2倍。必要時，應重新調整供試品溶液或對照品溶液的濃度。5.7. 測定法。5.7.1. 第一法（毛細管柱頂空進

6、樣等溫法）。5.7.1.1. 當需要檢查有機溶劑的數量不多，且極性差異較小時，可采用此法。5.7.1.2. 色譜條件：柱溫一般為40100；常以氮氣為載氣，流速為每分鐘1.02.0ml；以水為溶劑時頂空瓶平衡溫度為7085，頂空瓶平衡時間為3060分鐘；進樣口溫度為200 ；如采用火焰離子化檢測器（fid），溫度為 250。5.7.1.3. 測定法：取對照品溶液和供試品溶液，分別連續(xù)進樣不少于2次，測定待測峰的峰面積。5.7.1.4. 對色譜圖中未知有機溶劑的鑒別，可參與附表2進行初篩。5.7.2. 第二法（毛細管柱頂空進樣系統(tǒng)程序升溫法）。5.7.2.1. 當需要檢查的有機溶劑數量較多，且極

7、性差異較大時，可采用此法。5.7.2.2. 色譜條件：柱溫一般先在40維持8分鐘，再以每分鐘8的升溫速率升至120，維持10分鐘；以氮氣為載氣，流速為每分鐘2.0ml；以水為溶劑時頂空瓶平衡溫度為7085，頂空瓶平衡時間為3060分鐘；進樣口溫度為200；如采用fid檢測器，進樣口溫度為250。5.7.2.3. 具體到某個品種的殘留溶劑檢查時，可根據該品種項下殘留溶劑的組成調整升溫程序。5.7.2.4. 測定法：取對照品溶液和供試品溶液，分別連續(xù)進樣不少于2次，測定待測峰的峰面積。5.7.2.5. 對色譜圖中未知有機溶劑的鑒別，可參考附表3進行初篩。5.7.3. 第三法（溶液直接進樣法）。5.

8、7.3.1. 可采用填充柱，亦可采用適宜極性的毛細管柱。5.7.3.2. 測定法：取對照品溶液和供試品溶液，分別連續(xù)進樣23次，測定待測峰的峰面積。5.7.3.3. 計算法。5.7.3.3.1. 限度檢查：除另有規(guī)定外，按品種項下規(guī)定的供試品溶液濃度測定。以內標法測定時，供試品溶液所得被測溶劑峰面積與內標峰面積之比不得大于對照品溶液的相應比值。以外標法測定時，供試品溶液所得被測溶劑峰面積不得大于對照品溶液的相應峰面積。5.7.3.3.2. 定量測定：按內標法或外標法計算各殘留溶劑的量。5.8. 【附注】。5.8.1. 除另有規(guī)定外，頂空條件的選擇。5.8.1.1. 應根據供試品中殘留溶劑的沸點

9、選擇頂空平衡溫度。對沸點較高的殘留溶劑，通常選擇較高的平衡溫度；但此時應兼顧供試品的熱分解特性，盡量避免供試品產生的揮發(fā)性熱分解產物對測定的干擾。5.8.1.2. 頂空平衡時間一般為3045分鐘，以保證供試品溶液的氣-液兩相有足夠的時間達到平衡。頂空平衡時間通常不宜過長，如超過60分鐘，可能引起頂空瓶的氣密性變差，導致定量準確性的降低。5.8.1.3. 對照品溶液與供試品溶液必須使用相同的頂空條件。5.8.2. 定量方法的驗證。 5.8.2.1. 當采用頂空進樣時，供試品與對照品處于不完全相同的基質中，故應考慮氣液平衡過程中的基質效應（供試品溶液與對照品溶液組成差異對頂空氣-液平衡的影響）。由

10、于標準加入法可以消除供試品溶液基質與對照品溶液基質不同所致的基質效應的影響，故通常采用標準加入法驗證定量方法的準確性；當標準加入法與其他定量方法的結果不一致時，應以標準加入法的結果為準。5.8.3. 干擾峰的排除：供試品中的未知雜質或其揮發(fā)性熱降解物易對殘留溶劑的測定產生干擾。干擾作用包括在測定的色譜系統(tǒng)中未知雜質或其揮發(fā)性熱降解產物與待測物的結構相同（如甲氧基熱裂解產生甲醇）。當測定的殘留溶劑超出限度，但未能確定供試品中是否有未知雜質或其揮發(fā)性熱降解物對測定有干擾作用時，應通過試驗排除干擾作用的存在。對第一類干擾作用，通常采用在另一種極性不同的色譜柱系統(tǒng)中對相同供試品再進行測定，比較不同色譜

11、系統(tǒng)中對相同供試品再進行測定，比較不同色譜系統(tǒng)中測定結果的方法。如兩者結果一致，則可以排除測定中有共出峰的干擾。對第二類干擾作用，通常要通過測定已知不含該溶劑的對照樣品來加以判斷。5.8.4. 含氮堿性化合物的測定。 5.8.4.1. 普通氣相色譜儀中的不銹鋼管路、進樣器的襯管等對有機胺等含氮堿性化合物具有較強的吸附作用，致使其檢出靈敏度降低，應采用惰性的硅鋼材料或鎳鋼材料管路；采用溶液直接進樣法測定時，供試品溶液應不呈酸性，以免待測物與酸反應后不易汽化。5.8.4.2. 通常采用弱極性的色譜柱或其填料預先經堿處理過的色譜柱分析含氮堿性化合物，如果采用胺分析專用柱進行分析，效果更好。5.8.4

12、.3. 對不宜采用氣相色譜法測定含氮堿性化合物，如n-甲基吡咯烷酮等，可采用其他方法如離子色譜法等測定。5.8.5. 檢測器的選擇：對含鹵素元素的殘留溶劑如三氯甲烷等，采用電子捕獲檢測器（ecd），易得到高的靈敏度。5.8.6. 由于不同的實驗室在測定同一供試品時可能采用了不同的實驗方法，當測定結果處于合格與不合格邊緣時，以采用內標或標準加入法為準。5.8.7. 頂空平衡溫度一般應低于溶解供試品所用溶劑的沸點10以下，能滿足檢測靈敏度即可；對于沸點過高的溶劑，如甲酰胺、2-甲氧基乙醇、2-乙氧基乙醇、乙二醇、n-甲基吡咯烷酮等，用頂空進樣測定的靈敏度不如直接進樣，一般不宜用頂空進樣方法測定。5

13、.8.8. 利用保留值定性是氣相色譜中最常用的定性方法。色譜系統(tǒng)中載氣的流速、載氣的溫度和柱溫等的變化都會使保留值改變，從而影響定性結果。校正相對保留時間（rart）只受柱溫和固定相性質的影響，以此作為定性分析參數較可靠。應用中通常選用甲烷測定色譜系統(tǒng)的死體積（）rart=式中 為組分的保留時間； 為參比物的保留時間。附表1：藥品中常見的殘留溶劑及限度。溶劑名稱限度%溶劑名稱限度%第一類溶劑 （應該避免使用） 苯四氯化碳1，2-二氯乙烷1，1-二氯乙烷1，1，1- 三氯乙烷第二類溶劑 （應該限制使用）乙腈氯苯三氯甲烷環(huán)己烷1,2-二氯乙烯二氯甲烷1,2-二甲基乙烷n，n-二甲基乙酰胺n，n-二

14、甲基甲酰胺0.00020.00040.00050.00080.150.0410.0360.0060.3880.1870.060.010.1090.088第二類溶劑 （應該限制使用） 二氧六環(huán)2-乙氧基乙醇 乙二醇 甲酰胺 正己烷 甲醇 2-甲氧基乙醇 甲基丁基酮 甲基環(huán)己烷 n-甲基吡啶咯烷酮 硝基甲烷 吡啶 四氫噻吩 四氫化萘 四氫呋喃 甲苯 1,1,2-三氯乙烯二甲苯0.0380.0160.0620.0220.0290.30.0050.0050.1180.0530.0050.020.0160.010.0720.0890.0080.217溶劑名稱限度%溶劑名稱限度%第三類溶劑（藥品gmp或其

15、他質量要求限制使用） 醋酸丙酮甲氧基苯正丁醇仲丁醇乙酸丁酯叔丁基甲基醚異丙基苯二甲基亞砜乙醇乙酸乙酯乙醚甲酸乙酯甲酸正庚烷乙酸異丁酯乙酸異丙酯乙酸甲酯3-甲基-1-丁醇丁酮0.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.50.5第三類溶劑（藥品gmp或其他質量要求限制使用） 甲基異丁基酮 異丁醇 正戊烷正戊醇正丙醇異丙醇乙酸丙酯第四類溶劑（尚無足夠毒理學資料） 1,1-二乙氧基丙烷 1,1-二甲氧基甲烷 2,2-二甲氧基丙烷 異辛烷 異丙醚 甲基異丙基酮 甲基四氫呋喃 石油醚 三氯醋酸 三氟醋酸0.50.50.50.50.50.5

16、0.5 通常含有60%間二甲苯、14%對二甲苯、9%鄰二甲苯和17%乙苯。 藥品生產企業(yè)在使用時應提供該類溶劑在制劑中殘留水平的合理性論證報告。附表2 常見有機溶劑在等溫法測定時相對于丁酮的保留值參考值非極性色譜柱極性色譜柱溶劑名稱tr/minrart溶劑名稱tr/minrart柱溫40甲醇乙醇乙腈丙酮異丙醇正戊烷乙醚甲酸乙酯二甲氧基甲烷1,1-二氯乙烯乙酸甲酯二氯甲烷硝基甲烷正丙醇1,2-二氯乙烯叔丁基甲基醚丁酮仲丁醇正己烷異丙醚乙酸乙酯三氯甲烷四氫呋喃異丁醇1,2-二氯乙烷1,1,1-三氯乙烷甲基異丙基酮1,2-二甲氧基乙烷苯乙酸異丙酯正丁醇四氯化碳環(huán)己烷甲基四氫呋喃三氯乙烯二氧六環(huán)異辛烷

17、正庚烷乙酸丙酯甲基環(huán)己烷甲基異丁基酮3-甲基-1-丁醇吡啶甲苯正戊醇甲烷柱溫80乙酸異丁酯甲基丁基酮乙酸丁酯氯苯甲氧基苯異丙基苯丁酮甲烷柱溫120四氫化萘丁酮甲烷1.8282.0902.1792.2762.3562.4872.4892.5222.5842.6092.6352.6552.8072.9823.1093.2523.4493.6663.8983.9083.9133.9544.2644.2644.5174.8084.9764.9855.2815.3115.3405.4705.5835.6766.7606.8236.9577.4344.4788.6288.7388.8709.28311.1

18、8011.3821.5943.6113.8594.2995.2537.4368.1482.5021.4938.0671.6301.4050.1260.2680.3150.3680.4110.4810.4820.5010.5340.5470.5610.5720.6540.748.8170.8941.0001.1171.2421.2471.2501.2721.4391.4401.5761.7331.8231.8281.9882.0042.0192.0892.1502.2012.7852.8192.8913.1483.1723.7922.8513.9224.1455.1685.2762.0992.3

19、452.7783.7265.8906.5891.00029.6091.000柱溫40正戊烷正己烷乙醚異辛烷異丙醚叔丁基甲基醚正庚烷環(huán)己烷1,1-二氯乙烯二甲氧基甲烷甲基環(huán)己烷丙酮甲酸乙酯乙酸甲酯1，2-二氯乙烯四氫呋喃甲基四氫呋喃四氯化碳1,1,1-三氯乙烷乙酸乙酯乙酸異丙酯甲醇丁酮1,2-二甲氧基乙烷甲基異丙基酮二氯甲烷異丙醇乙醇苯乙酸丙酯三氯乙烯甲基異丁基酮乙腈乙酸異丁酯三氯甲烷仲丁醇甲苯正丙醇二氧六環(huán)1,2-二氯乙烷乙酸丁酯甲基丁基酮甲烷柱溫80異丁醇正丁醇硝基甲烷異丙基苯吡啶3-甲基-1-丁醇氯苯正戊醇丁酮甲烷柱溫120甲氧基苯四氫化萘丁酮甲烷1.6821.7871.8421.9261

20、.9432.0052.0212.1592.2092.2432.4052.8762.9673.0003.3473.4033.4813.6353.6533.8103.9804.0624.0794.6044.7164.7584.8224.9754.9776.0206.6437.2027.3687.4977.9858.3908.7469.23810.33510.82711.01211.4861.6023.5774.4604.8855.2885.6255.9346.4397.3322.1761.4913.8377.4271.6501.4040.0320.0750.0970.1310.1380.1630.

21、1690.2250.2450.2590.3240.5150.5510.5640.7050.7270.7580.8210.8280.8910.9600.9931.0001.2121.2571.2741.3001.3621.3621.7842.0352.2612.3282.3802.5772.7402.8843.0833.5263.7243.7993.9903.0454.3344.9485.5436.0356.4867.2238.5271.0009.89024.4841.000附表3 常見有機溶劑在程序升溫法測定時相對于丁酮的保留值參考值非極性色譜柱極性色譜柱溶劑名稱tr/minrart溶劑名稱t

22、r/minrart甲醇乙醇乙腈丙酮異丙醇正戊烷乙醚甲酸乙酯二甲氧基甲烷1,1-二氯乙烯乙酸甲酯二氯甲烷硝基甲烷正丙醇1,2-二氯乙烯叔丁基甲基醚丁酮仲丁醇正己烷異丙醚乙酸乙酯三氯甲烷四氫呋喃異丁醇1,2-二氯乙烷1,1,1-三氯乙烷甲基異丙基酮1,2-二甲氧基乙烷苯乙酸異丙酯正丁醇四氯化碳環(huán)己烷甲基四氫呋喃三氯乙烯異辛烷二氧六環(huán)正庚烷乙酸丙酯甲基環(huán)己烷甲基異丁基酮3-甲基-1-丁醇吡啶甲苯正戊醇乙酸異丁酯甲基丁基酮乙酸丁酯氯苯甲氧基苯異丙基苯四氯化萘甲烷1.8462.1212.2012.3032.4012.5122.5192.5442.6112.6232.6652.6742.8393.0513

23、.1283.3023.5073.7563.9663.9713.9814.0054.3874.3974.61244.8435.0875.0995.3805.3985.4025.5015.6495.7396.8156.9286.9287.5637.5838.5818.8308.9689.17810.25910.44810.63811.02512.17513.16615.27015.72422.4091.6040.1270.2720.3140.3670.4190.4770.4810.4940.5290.5350.5580.5620.6490.7600.8010.8921.0001.1311.2410.2441.2490.2620.4621.4681.5811.7021.8301.8371.9841.9941.9962.0482.1262.1732.7382.7982.7983.1313.1423.6663.7973.8703.9804.5484.6474.7474.9515.5556.0767.1817.42010.933正戊烷正己烷乙醚異辛烷異丙醚叔丁基甲基醚正庚烷環(huán)己烷1,1-二氯乙烯二甲氧基甲烷甲基環(huán)己