新型卟啉化合物測定不孕不育癥精漿鋅介紹

1、新型卟啉化合物測定不孕不育癥精漿鋅介紹 精漿鋅通過干擾垂體分泌促性腺激素，降低性腺功能而影響精液質(zhì)量和精子代謝1，因此是診斷男性不孕癥的重要微量元素指標(biāo)。目前，臨床上測定鋅的方法主要有原子吸收光譜法、電化學(xué)法等2，但這些方法均需要特殊的儀器和特定的工作環(huán)境，設(shè)備昂貴，試劑成本高。本課題依據(jù)張志華等3的報(bào)道卟啉吡啶季銨鹽分光光度法測定水中痕量銅原理用于測定精漿鋅離子，經(jīng)過多例臨床實(shí)驗(yàn)表明，該方法靈敏度高，準(zhǔn)確性好，簡便、價(jià)廉、快速，克服了現(xiàn)有臨床測鋅方法的缺點(diǎn)。 關(guān)鍵詞：卟啉；精漿鋅 ；分光光度法 中圖分類號：r271.14 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：c 文章編號：1005-0515（2013）5-139-0

2、1 1 原理 溴化5-4-n-（對硝基）芐銨基吡啶基-10，15，20-三（4-n-吡啶基）卟啉在酸性介質(zhì)中與鋅反應(yīng)，產(chǎn)生可溶于有機(jī)溶劑的有色復(fù)合物，與同樣處理的鋅標(biāo)準(zhǔn)液比色，求得其含量。 2. 材料與方法 2.1 主要儀器： 2.1.1 uv-900分光光度計(jì)； 2.1.2普析通用mb5血液元素分析儀； 2.2 試劑 2.2.1：鋅標(biāo)準(zhǔn)液（0.15mmol/l） 2.2.2： 卟啉顯色劑溶液：稱取一定量溴化5-4-n-（對硝基）芐銨基吡啶基-10，15，20-三（4-n-吡啶基）卟啉溶于n，n-二甲基甲酰胺（dmf）中，配成濃度為1.998mmol/l溶液； 2.2.3鄰苯二甲酸氫鉀-鹽酸緩

3、沖溶液：ph=1.2； 2.2.4鎂遮蔽液： 稱取10g 十二烷基硫酸鈉溶于約500 ml 蒸餾水中， 再加入氟化銨10g， 待溶解用蒸餾水稀釋至900ml。 2.3病例 正常生育男性精液200例，選自至少已生育過一個(gè)小孩的男子，年齡在2838歲間；男性不育癥患者210例，年齡2440歲，平均28歲（不育組），身體健康，性生活正常，均為婚后2年以上未育，均進(jìn)行詳細(xì)的體格檢查，排除生殖器官先天性異常、遺傳、內(nèi)分泌障礙，以及損傷、感染等引起的器質(zhì)性的病變；兩組病例均禁欲5天以上采用手淫法收集精液，于2小時(shí)內(nèi)送檢，離心分離精漿，-20保存。 2.4 操作3 2.4.1 吸光光度法 （1）取三支5ml

4、試管，分別標(biāo)明空白管、測定管、標(biāo)準(zhǔn)管。 （2）在測定管中，加入精漿20?l，空白管加重蒸餾水20?l，標(biāo)準(zhǔn)管中加鋅標(biāo)準(zhǔn)液20?l。 （3）各管加ph=1.2的鄰苯二甲酸氫鉀-鹽酸緩沖溶液0.5ml，卟啉溶液0.5ml，鎂遮蔽液1ml，搖勻，37水浴15min，加重蒸餾水2ml，用uv-900分光光度計(jì)，0.5cm比色杯，438.0nm波長，空白管調(diào)零，測定標(biāo)準(zhǔn)管、測定管吸光度。 （4）計(jì)算 2.4.2 原子吸收法 按普析通用mb5血液元素分析儀標(biāo)準(zhǔn)操作文件操作。 2.4.3 兩組標(biāo)本均用上述兩種方法測定。 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用x士sd表示，采用t檢驗(yàn)，以p 3 結(jié)果 3.1與原子吸收

5、法比較 200例正常生育男性精漿用分光光度法檢測結(jié)果均值為（2.1487.10）mmol/l，用原子吸光譜法測得均值為（2.1669.23 mmol/l）， 二者關(guān)系數(shù)r= 0.9986。 3.2正常生育男性組與不孕癥組比較 不孕癥組精漿鋅均值為（1.655.71） mmol /l。與正常生育男性組（2.1487.10mmol/l）相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p 3.3 重復(fù)性： 取n = 30，每份測定4次，變異系為為2.6 %。 4.討論 人類精液鋅包括精漿鋅及精子鋅兩部分，精液鋅能與琉基結(jié)合可逆性地抑制精子核染色質(zhì)解聚，延長精子壽命4。其對精子獲能也有影響，高濃度的鋅對精子頂體酶活性有抑制作用

6、，從而抑制頂體反應(yīng)發(fā)生。因此，精液鋅減少可影響精子功能。 據(jù)報(bào)道，鋅元素對維持性器官的發(fā)育和正常功能具有非常重要的作用，缺鋅影響垂體分泌促性腺激素，可導(dǎo)致性功能減退，睪丸縮小、重量減輕、精子數(shù)量減少，重者可使精子生成陷于停止5。 目前測微量元素鋅有原子吸收法和分光光度法，但前者需大型儀器和特殊的設(shè)施，基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)受經(jīng)濟(jì)條件所限無法購買大型設(shè)備，該方法很難推廣。本法采用分光光度法，操作簡便，試劑價(jià)格低廉， 又能避免鎂離子的干擾，與公認(rèn)的原子吸收法比較，方法誤差在允許范圍，結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，易被基層醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)接受。我室采用該方法已對210例男性不育癥患者進(jìn)行精漿鋅的測定，為患者診治提供了準(zhǔn)確的依據(jù)。 參考文獻(xiàn)： 1王雪楠 牛煥付 劉曉鐘. 少精患者精漿鋅酸性磷酸酶的檢測及意義j.濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào).2007，2（30）：133. 2高榜華 葉英，精漿鋅的簡易測定方法j. 四川醫(yī)學(xué)，1998，9 （3）：165-166 3張志華，韓士田，卟啉吡啶季銨鹽分光光度法測定水中痕量銅 j.理化檢驗(yàn)，2010，46（2）：120-121 4 李永海.精液鋅與精子功能j.男性學(xué)雜志，1996，3（4）：183-1855孫輝臣，吳軍，董志英等j.北京軍區(qū)醫(yī)藥，2001，2（13）：83-85