靈芝水煎劑對(duì)應(yīng)激小鼠血清胰島素樣生長因子

1、靈芝水煎劑對(duì)應(yīng)激小鼠血清胰島素樣生長因子 作者：左永昌，唐和生，彭菲，劉宗生，文安華，劉繼志 【關(guān)鍵詞】 靈芝；束縛應(yīng)激；胰島素樣生長因子 effect of aqueous extract from ganoderma lucidum on levels of serum insulinlike growth factori in restraint stressed mice 【abstract】 aim: to investigate the effect of aqueous extract from ganoderma lucidum on levels of serum insul

2、inlike growth factori (igfi) in restraint stressed mice. methods: the different doses of aqueous extract from ganoderma lucidum were given orally for 10 d in mice before restraint stress, and its serum igfi was assayed by using the radioimmunoassay (ria) after restraint stress for 20 h. results: the

3、 level of serum igfi in restraint stressed mice given aqueous extract from 8 g/（kgd）ganoderma lucidum before restraint stress was increased by 32% as compared with that in restraint stress control group (p0.01). conclusion: taking orally aqueous extract from ganoderma lucidum could resist the decrea

4、se of serum igfi due to restraint stress in mice, and could prevent or alleviate damages aroused by the restraint stress in mice. 【keywords】 ganoderma lucidum; restraint stress; insulinlike growth factori 【摘要】 目的： 探討靈芝水煎劑對(duì)束縛應(yīng)激小鼠血清胰島素樣生長因子i(igfi)含量的影響. 方法： 以不同劑量的靈芝水煎劑給應(yīng)激前的小鼠灌胃10 d，應(yīng)激20 h后用放射免疫分析法（ria

5、）測(cè)定其血清igfi的含量. 結(jié)果： 束縛應(yīng)激前以8 g/（kgd）靈芝水煎劑灌胃的小鼠，束縛應(yīng)激期間血清igfi含量比單純應(yīng)激小鼠增加了32% (p0.01). 結(jié)論： 口服靈芝水煎劑有對(duì)抗應(yīng)激所致的血清igfi含量下降的作用，能預(yù)防或減輕應(yīng)激給機(jī)體帶來的危害. 【關(guān)鍵詞】 靈芝；束縛應(yīng)激；胰島素樣生長因子i 0引言 靈芝自古被列為“扶正固本”、“滋補(bǔ)強(qiáng)壯”的精品藥物，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究也證實(shí)靈芝對(duì)機(jī)體生理功能的影響有“扶正固本”式的調(diào)節(jié)作用，如平衡機(jī)體過強(qiáng)或過低的免疫功能1. 顯然，這種調(diào)節(jié)作用對(duì)治療以激素失衡和生理功能紊亂為主要特征的應(yīng)激來說，可謂針鋒相對(duì)、對(duì)癥下藥. 我們?cè)^察到束縛應(yīng)激小鼠

6、血清胰島素樣生長因子i（igfi）含量明顯減少2-3，本實(shí)驗(yàn)我們觀察了靈芝水煎劑對(duì)應(yīng)激小鼠血清igfi含量的影響. 1材料和方法 1.1材料balb/c純系雌、雄性小鼠，鼠齡68 wk，體質(zhì)量2226 g，北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部動(dòng)物中心提供. 羊抗兔igg為北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部免疫研究中心自制品，人基因重組胰島素樣生長因子i(rhigfi)和多克隆igfi抗血清購自promega公司，na125i為中科院上海原子能研究所產(chǎn)品，硫酸鯡魚精蛋白（純度100%, prolamine）和iodogen購自sigma公司. 靈芝（赤芝）購自北京同仁堂，產(chǎn)地山東，常規(guī)水煎2次，兩次藥液經(jīng)紗布過濾后混合并濃縮至1 g生藥

7、/1 ml, 4保存，用時(shí)以生理鹽水稀釋. 1.2方法 1.2.1動(dòng)物分組實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分成17組，每組10只. 正常對(duì)照組小鼠飼養(yǎng)方法不變；單純應(yīng)激組小鼠不喂藥，但每天加喂生理鹽水1次，每次0.4 ml，連續(xù)10 d；應(yīng)激前喂藥組和喂藥后不應(yīng)激組分別以4 g/（kgd）, 8 g/（kgd）, 16 g/（kgd）三個(gè)不同劑量的靈芝煎劑灌胃，1次/d，每次0.4 ml，連續(xù)10 d. 應(yīng)激前喂藥組小鼠分別于應(yīng)激期和應(yīng)激后第3日、第6日、第12日進(jìn)行血清igfi含量測(cè)定，分析其變化情況. 1.2.2小鼠應(yīng)激與血清制備靈芝灌胃10 d后分別將小鼠束縛于特制籠中20 h，眶靜脈取血，血液置4冰箱中凝

8、固46 h后低速離心分離血清. 1.2.3小鼠血清igfi含量放射免疫分析iodogen法制備125irhigfi,標(biāo)記率45%，比放射性125147 uci/ug. 實(shí)驗(yàn)參照mohan等4描述的方法，以logitb/bo法作標(biāo)準(zhǔn)曲線并求出各樣品igfi的含量. 抗清和方法學(xué)的質(zhì)量控制:抗體特異性經(jīng)雙向免疫擴(kuò)散法測(cè)定，與家兔血清無交叉反應(yīng)；bo變異系數(shù)分析結(jié)果為批內(nèi)cv 2.31%，批間cv 3.90%；最小可測(cè)劑量按零標(biāo)準(zhǔn)平均b%減去兩倍批內(nèi)cv計(jì)算，最小檢出值為7.50 pg/ml；回收試驗(yàn)： 按標(biāo)準(zhǔn)曲線制作程序，將不同量標(biāo)準(zhǔn)品加入反應(yīng)體系中的5次回收試驗(yàn)，回收率平均為96%. 此外，ri

9、a 緩沖液配制中以tween20代替小牛血清，以避免血清中含有igfi. 實(shí)驗(yàn)和計(jì)數(shù)使用北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部免疫研究中心603室、北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部人類疾病基因研究中心的現(xiàn)有設(shè)備. 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理： 用統(tǒng)計(jì)軟件spss10.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量數(shù)據(jù)以xs表示，兩兩比較用t檢驗(yàn)，p0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義. 2結(jié)果 2.1靈芝對(duì)應(yīng)激期間小鼠igfi含量的影響單純應(yīng)激組小鼠血清igfi含量（68.03.3 ng）比正常對(duì)照組小鼠（129.02.6 ng）減少了47%（表1）；應(yīng)激前每天每只用8 g/kg以上靈芝灌胃的小鼠，應(yīng)激后的血清igfi含量均比單純應(yīng)激小鼠的血清igfi含量明顯增加，其中應(yīng)激前每天每只用8 g

10、/kg靈芝灌胃的應(yīng)激小鼠血清igfi含量（90.02.9 ng）比單純應(yīng)激的小鼠血清igfi含量增加了32%（p0.01）；給予靈芝灌胃而不進(jìn)行應(yīng)激的小鼠血清igfi含量比正常小鼠略有增加，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p0.05). 表1靈芝對(duì)小鼠應(yīng)激期間血清igfi含量(ng)的影響(略) 2.2靈芝對(duì)恢復(fù)期小鼠igfi含量的影響應(yīng)激后的第3日，應(yīng)激前10 d內(nèi)每天每只喂藥8 g/kg的應(yīng)激小鼠其血清igfi含量（122.02.9）比沒有喂靈芝煎劑的單純應(yīng)激小鼠血清igfi含量（89.03.0）增加了37%（p0.01），接近正常小鼠的水平. 應(yīng)激后的第6天，血清igfi含量則恢復(fù)到正常水平（表2）.

11、表2靈芝對(duì)小鼠恢復(fù)期血清igfi含量的影響略 3討論 應(yīng)激是一種常見的現(xiàn)象，恐懼、悲傷、高度精神緊張或嚴(yán)重疾患、身體傷害等均可誘發(fā)機(jī)體處于應(yīng)激狀態(tài). 應(yīng)激時(shí)機(jī)體的內(nèi)環(huán)境會(huì)發(fā)生很多變化，神經(jīng)內(nèi)分泌免疫系統(tǒng)功能紊亂尤為突出，體內(nèi)激素、細(xì)胞因子間顯著失衡，如生長激素（gh）減少和固醇類激素、兒茶酚胺類激素增多，血清igfi含量也明顯減少. 本實(shí)驗(yàn)沿用建立了多年的igfi放免分析法檢測(cè)束縛應(yīng)激小鼠血清igfi含量，得到與以前一致的結(jié)果. 現(xiàn)已知igfi有廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，神經(jīng)細(xì)胞、免疫細(xì)胞、生殖細(xì)胞、內(nèi)分泌細(xì)胞以及許多組織上分布了igfi的受體，應(yīng)激時(shí)體內(nèi)igfi如此減少無疑會(huì)嚴(yán)重影響這些組織細(xì)胞的功

12、能或生長. 因此，設(shè)法提高血清igfi濃度對(duì)預(yù)防或治療應(yīng)激帶來的損害有積極意義. 本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明靈芝能對(duì)抗小鼠應(yīng)激期間的血清igfi含量下降和促進(jìn)小鼠應(yīng)激后血清igfi濃度的恢復(fù). 血清igfi濃度的穩(wěn)定取決于igfi的合成、分泌、消耗和與血清igfs結(jié)合蛋白（igfbp）結(jié)合情況等因素的變化，任何一個(gè)因素的變化都將引起血清igfi含量的改變. 應(yīng)激時(shí)生長激素（gh）的減少和固醇類激素、兒茶酚胺類激素的增多是引起血清igfi含量減少的原因之一. 固醇類激素能促進(jìn)igfbp1生成，而更多的igfi與igfbp1結(jié)合后其生物活性也隨之下降；兒茶酚胺類激素能通過降低葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)能力抑制胰島細(xì)

13、胞分泌胰島素5而使血清igfi減少. 有研究證明胰島素可刺激肝臟分泌igfi6，另據(jù)peter等7報(bào)道，給手術(shù)應(yīng)激者輸入胰島素后明顯增強(qiáng)了體內(nèi)igfbp3的水解活性，使組織、血液中的游離igfi升高. 正常情況下血清igfi約有75%與igfbp3呈結(jié)合狀態(tài). 較早的研究證明靈芝有促進(jìn)胰島素分泌作用，最近研究發(fā)現(xiàn)靈芝可通過促進(jìn)胰島細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)而增強(qiáng)胰島細(xì)胞分泌胰島素8. 由此可見，靈芝促進(jìn)胰島素分泌是提高應(yīng)激小鼠血清igfi濃度的一條重要途徑. 目前還沒有證據(jù)表明靈芝對(duì)固醇類激素、兒茶酚胺類激素的分泌有調(diào)節(jié)作用. 許多資料顯示靈芝提高應(yīng)激小鼠血清igfi濃度是多途徑的，靈芝能保護(hù)肝

14、臟和促進(jìn)白細(xì)胞dna、rna的合成，而肝細(xì)胞是igfi的主要合成細(xì)胞，t, b淋巴細(xì)胞也是igfi的潛在來源9. 我們?cè)谘芯繎?yīng)激狀態(tài)下的t, b淋巴細(xì)胞體外自分泌或旁分泌igfi的機(jī)制時(shí)（待另文報(bào)道），卻未觀察到靈芝有直接誘導(dǎo)t, b淋巴細(xì)胞的igfi mrna表達(dá). 靈芝究竟如何作用于這些靶細(xì)胞和有哪些途徑調(diào)節(jié)體內(nèi)igfi水平還需要做很多工作，同時(shí)我們以為在對(duì)靈芝藥效機(jī)制的研究中把中醫(yī)的“整體性、調(diào)節(jié)性和多成分參與”的主要藥理特點(diǎn)考慮進(jìn)去可能會(huì)有助于了解這些“謎”. 從對(duì)靈芝多糖的研究看，靈芝的主要生物活性成分是1, 3鍵的葡聚糖，實(shí)際上人體腸道內(nèi)無法酶解1, 3鍵的葡聚糖，但研究證明口服靈

15、芝多糖同樣能發(fā)揮它的生物活性作用. 總之，本實(shí)驗(yàn)根據(jù)中醫(yī)藥理特點(diǎn)，口服靈芝水煎劑，提高了應(yīng)激機(jī)體的血清igfi濃度，有利于諸如考生、航空員、消防員、有關(guān)患者等廣大人群預(yù)防或減輕應(yīng)激的危害，且方法簡(jiǎn)便、有效. 【參考文獻(xiàn)】 1 王坤，吳光，戴盛明. 廣西靈芝對(duì)小鼠免疫功能的實(shí)驗(yàn)研究j. 廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2003,20（6）:871. 2 zuo yc, li yf, mei l, et al. brain interleukin1 is involved in generation of the serum suppressive factor induced by restraint str

16、ess in micej. neuroimmunomodulation, 1995, 2: 82-87. 3 左永昌，朱玉珍，李文，等. 束縛應(yīng)激小鼠血清胰島素樣生長因子i含量的影響j. 井岡山醫(yī)專學(xué)報(bào)，2000,7（3）:1-2. 4 mohan s, bautista cm, herring st, et al. development of valid methods to measure insulinlike growth factor i and ii in bone cell conditioned mediumj. endocrinology, 1990,126:2534-25

17、40. 5 kuroda m, honnor rc, cushman sw, et al. regulation of insulinstimulated glucose transport in the isolated rat adipocyte campindependent effects of lipolytic and antilipolytic agentsj. j boil chem, 1987,262:245-253. 6 bondy ca, underwood le, clemmons dr, et al. clinical uses of insulinlike growth factor i j. ann intern med, 1994,120:593. 7 bang p, nygren j, christine cs, et al. postopertive induction of insulinlike growth factor binding protein3 protelytic activity: relation to insulin and insulin sensitivityj. j clin endocrinol metab, 1998,83:2