微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)完整版

1、特點(diǎn)：小特點(diǎn)：小; ; 簡(jiǎn)單簡(jiǎn)單; ; 低等低等; ; 代謝速度快。代謝速度快。微生物微生物真菌真菌原生生物原生生物 一、微生物：一、微生物：1、包括、包括:是一切肉眼看不見或看不清楚是一切肉眼看不見或看不清楚的微小生物的總稱的微小生物的總稱原核生物原核生物非細(xì)胞結(jié)構(gòu)非細(xì)胞結(jié)構(gòu)真核生物真核生物常見的三種細(xì)菌典型形態(tài)常見的三種細(xì)菌典型形態(tài)A.球菌球菌 B.桿菌桿菌 C.弧菌弧菌芽孢的壁很厚，對(duì)干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時(shí)候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個(gè)細(xì)菌.芽孢芽孢：橢圓形的休眠體：橢圓形的休眠體酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌二

2、、培養(yǎng)基二、培養(yǎng)基 人們按著微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，人們按著微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。1、概念、概念 微生物主要化學(xué)元素組成：2、微生物的營(yíng)養(yǎng)、微生物的營(yíng)養(yǎng)C、H、O、N、P、S1）、一般都含有水、碳源、氮源、和無機(jī)鹽。2）、還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求營(yíng)養(yǎng)元素營(yíng)養(yǎng)元素碳源譜碳源譜有機(jī)碳有機(jī)碳無機(jī)碳無機(jī)碳異養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物自養(yǎng)微生物自養(yǎng)微生物氮源譜氮源譜有機(jī)氮有機(jī)氮無機(jī)氮無機(jī)氮NH3銨鹽銨鹽硝酸鹽硝酸鹽N2蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)核酸核酸氨基酸氨基酸尿素尿素注：對(duì)于異養(yǎng)微生物，含注：對(duì)于異養(yǎng)微生物，含C C、N

3、N的化合物既為碳源，也是氮源。的化合物既為碳源，也是氮源。微生物生長(zhǎng)不可缺少的微生物生長(zhǎng)不可缺少的微量有機(jī)物微量有機(jī)物如：如：維生素、氨基酸、堿基維生素、氨基酸、堿基等等 生長(zhǎng)因子：生長(zhǎng)因子：牛肉膏當(dāng)中含有牛肉膏當(dāng)中含有肌酸、肌酸酐、多肽類、氨基酸類、核苷酸類、肌酸、肌酸酐、多肽類、氨基酸類、核苷酸類、有機(jī)酸類、礦物質(zhì)類及維生素類。有機(jī)酸類、礦物質(zhì)類及維生素類。的水溶性物質(zhì)。的水溶性物質(zhì)。牛肉膏為微生物提供碳源、牛肉膏為微生物提供碳源、氮源、氮源、能源、磷酸鹽和維生素，能源、磷酸鹽和維生素，蛋白胨主要提供蛋白胨主要提供氮源氮源和和維生素維生素。 氮源、能源、生長(zhǎng)因子氮源、能源、生長(zhǎng)因子碳源、能

4、源、生長(zhǎng)因子碳源、能源、生長(zhǎng)因子按成分不同劃分按成分不同劃分天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基化學(xué)成分不恒定的天然有機(jī)物化學(xué)成分不恒定的天然有機(jī)物牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基。用于工業(yè)麥芽汁培養(yǎng)基。用于工業(yè)生產(chǎn)生產(chǎn)化學(xué)成分完全了解的物質(zhì)配化學(xué)成分完全了解的物質(zhì)配制而成的培養(yǎng)基制而成的培養(yǎng)基高氏高氏1 1號(hào)培養(yǎng)基、查氏培養(yǎng)號(hào)培養(yǎng)基、查氏培養(yǎng)基。用于基。用于分類和鑒定分類和鑒定分類分類一般用錐形瓶盛裝一般用錐形瓶盛裝按物理狀態(tài)不同劃分按物理狀態(tài)不同劃分固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基在液體培養(yǎng)基中加入一定量凝固劑，使其成在液體培養(yǎng)基中加入一定量凝固劑，使其成為

5、固體狀態(tài)，瓊脂含量一般為為固體狀態(tài)，瓊脂含量一般為1.5%-2.0%1.5%-2.0%瓊脂含量一般為瓊脂含量一般為0.2%-0.7%0.2%-0.7%不加任何凝固劑不加任何凝固劑半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基常用來進(jìn)行固體培養(yǎng)基常用來進(jìn)行微生物的分離、鑒微生物的分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)及菌種保藏定、活菌計(jì)數(shù)及菌種保藏 觀察微生物的運(yùn)動(dòng)特征、分類鑒定及觀察微生物的運(yùn)動(dòng)特征、分類鑒定及噬菌體效價(jià)滴定噬菌體效價(jià)滴定 大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)及在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行微生大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)及在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行微生物的基礎(chǔ)理論和應(yīng)用方面的研究物的基礎(chǔ)理論和應(yīng)用方面的研究 一般用試管或培養(yǎng)皿盛裝一般用試管或培養(yǎng)皿盛裝按用途不同劃分按用途

6、不同劃分基礎(chǔ)培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基含有一般微生物生長(zhǎng)繁殖所需的基本營(yíng)含有一般微生物生長(zhǎng)繁殖所需的基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）用來將某種或某類微生物從混雜的微生物用來將某種或某類微生物從混雜的微生物群體中分離出來的培養(yǎng)基群體中分離出來的培養(yǎng)基用于鑒別不同類型微生物的培養(yǎng)基用于鑒別不同類型微生物的培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基微生物產(chǎn)生某種代謝產(chǎn)物，與培養(yǎng)基中的微生物產(chǎn)生某種代謝產(chǎn)物，與培養(yǎng)基中的特殊化學(xué)物質(zhì)發(fā)生特定的化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生特殊化學(xué)物質(zhì)發(fā)生特定的化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征變化明顯的特征變化在培養(yǎng)基中加入相應(yīng)的特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)或化在培養(yǎng)基

7、中加入相應(yīng)的特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)或化學(xué)物質(zhì)，抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)，有學(xué)物質(zhì)，抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)，有利于所需微生物的生長(zhǎng)利于所需微生物的生長(zhǎng)加入青霉素的培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基: :不加氮源的無氮培養(yǎng)基不加氮源的無氮培養(yǎng)基: : 不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基: : 幾種選擇培養(yǎng)基舉例：幾種選擇培養(yǎng)基舉例：分離酵母菌、霉菌等真菌分離酵母菌、霉菌等真菌分離固氮菌分離固氮菌 分離自養(yǎng)型微生物分離自養(yǎng)型微生物唯一碳源為纖維素的培養(yǎng)基唯一碳源為纖維素的培養(yǎng)基分解纖維素的細(xì)菌分解纖維素的細(xì)菌【例例】以下是單克隆抗體制備流程示意圖：以下是單克隆抗體制備流程示意圖： 根據(jù)培養(yǎng)基的根據(jù)培

8、養(yǎng)基的_分類，圖中分類，圖中HATHAT培養(yǎng)基培養(yǎng)基屬于屬于_培養(yǎng)基培養(yǎng)基選擇選擇用途用途培養(yǎng)基配置原則培養(yǎng)基配置原則目的明確目的明確營(yíng)養(yǎng)協(xié)調(diào)營(yíng)養(yǎng)協(xié)調(diào)理化條件適宜理化條件適宜經(jīng)濟(jì)節(jié)約經(jīng)濟(jì)節(jié)約根據(jù)不同的微生物的營(yíng)養(yǎng)要求配制針對(duì)強(qiáng)的培養(yǎng)基。根據(jù)不同的微生物的營(yíng)養(yǎng)要求配制針對(duì)強(qiáng)的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中各營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)之間的濃度配比也直接影響微生培養(yǎng)基中各營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)之間的濃度配比也直接影響微生物的生長(zhǎng)繁殖和代謝產(chǎn)物的形成和積累物的生長(zhǎng)繁殖和代謝產(chǎn)物的形成和積累如：如：pH二、無菌技術(shù)二、無菌技術(shù)（1 1）對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的）對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行，進(jìn)行清潔和消清潔和消毒毒。（2 2

9、）將用于微生物培養(yǎng)的）將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具等器具進(jìn)行滅菌。進(jìn)行滅菌。（3 3）為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在）為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈酒精燈火焰附近火焰附近進(jìn)行。進(jìn)行。（4 4）實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)）實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具滅菌處理的材料用具與周圍的物與周圍的物品相接觸。品相接觸。 【20102010廣州調(diào)研廣州調(diào)研】下列實(shí)驗(yàn)方法及其結(jié)果合理下列實(shí)驗(yàn)方法及其結(jié)果合理的是的是 A A稀釋的雞蛋清溶液與蛋白酶混合后用雙縮稀釋的雞蛋清溶液與蛋白酶混合后用雙縮脲試劑檢測(cè)會(huì)發(fā)生紫色反應(yīng)脲試劑檢測(cè)會(huì)發(fā)生紫色反

10、應(yīng) B B酒精溶液與重鉻酸鉀溶液混合后在沸水浴酒精溶液與重鉻酸鉀溶液混合后在沸水浴條件下才會(huì)出現(xiàn)灰綠色條件下才會(huì)出現(xiàn)灰綠色 C C在植物組織培養(yǎng)中，可用酒精對(duì)外植體進(jìn)在植物組織培養(yǎng)中，可用酒精對(duì)外植體進(jìn)行滅菌行滅菌 （雙選）（雙選）消毒消毒滅菌滅菌概念概念指使用指使用較為溫和較為溫和的物理或化的物理或化學(xué)方法僅殺死學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)物體表面或內(nèi)部一部分部一部分對(duì)人體有害的微生對(duì)人體有害的微生物物( (不包括芽孢和孢子不包括芽孢和孢子) )指使用指使用強(qiáng)烈強(qiáng)烈的理化因素的理化因素殺死殺死物體內(nèi)外所有物體內(nèi)外所有的微的微生物，包括芽孢和孢子生物，包括芽孢和孢子常用方常用方法法煮沸消毒法煮沸消

11、毒法、巴氏消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法毒法灼燒消毒法、干熱滅菌、灼燒消毒法、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌適用對(duì)適用對(duì)象象操作空間、液體、雙手等操作空間、液體、雙手等接種環(huán)、接種針、玻璃接種環(huán)、接種針、玻璃器皿，培養(yǎng)基等器皿，培養(yǎng)基等1、常用消毒和滅菌方法、常用消毒和滅菌方法灼燒滅菌灼燒滅菌干熱滅菌箱干熱滅菌箱高壓蒸汽滅菌鍋高壓蒸汽滅菌鍋煮沸煮沸消毒消毒法法巴氏消毒法巴氏消毒法化學(xué)藥劑（化學(xué)藥劑（70%酒精等）酒精等）紫外線紫外線針對(duì)不耐高溫的液體針對(duì)不耐高溫的液體接種室、超凈工作臺(tái)接種室、超凈工作臺(tái)能耐高溫的，需要保持干燥的物品能耐高溫的，需要

12、保持干燥的物品灼燒法灼燒法干熱滅菌干熱滅菌高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌接種工具（接種環(huán)等）接種工具（接種環(huán)等）吸管吸管實(shí)驗(yàn)操作者的雙手實(shí)驗(yàn)操作者的雙手培養(yǎng)皿等玻璃器皿培養(yǎng)皿等玻璃器皿培養(yǎng)基培養(yǎng)基1 1、消毒方法、消毒方法2、滅菌方法、滅菌方法干熱滅菌干熱滅菌計(jì)算計(jì)算稱量稱量溶化溶化滅菌滅菌倒平板倒平板三、實(shí)驗(yàn)操作三、實(shí)驗(yàn)操作1、制備培養(yǎng)基、制備培養(yǎng)基【例例2 2】進(jìn)行細(xì)菌接種培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)時(shí)，以下哪個(gè)進(jìn)行細(xì)菌接種培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)時(shí)，以下哪個(gè)操作步驟是非必要的？操作步驟是非必要的？ A A雙手帶上膠手套雙手帶上膠手套 B B接種前后都灼燒接種環(huán)接種前后都灼燒接種環(huán) C C接種前后都灼燒菌種試管口和待接種斜面接種前

13、后都灼燒菌種試管口和待接種斜面 試管口試管口 D D要丟棄帶菌培養(yǎng)基前，進(jìn)行高壓蒸汽滅菌要丟棄帶菌培養(yǎng)基前，進(jìn)行高壓蒸汽滅菌 或加熱滅菌或加熱滅菌1.1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到5050左右時(shí)，才能用來倒平板。左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？剛剛不燙手時(shí)剛剛不燙手時(shí)2.2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？灼燒滅菌灼燒滅菌，防止瓶口的微生物的污染，防止瓶口的微生物的污染有關(guān)問題有關(guān)問題防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。3.3.為什么將平板倒

14、置？為什么將平板倒置？2、純化大腸桿菌、純化大腸桿菌平板劃線法平板劃線法稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法平板分離平板分離由由一個(gè)細(xì)胞一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體，就是菌落。繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體，就是菌落。根霉根霉 曲霉曲霉 青霉青霉將接種環(huán)放在火將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到焰上灼燒，直到接種環(huán)接種環(huán)_在在_旁冷旁冷卻接種環(huán)，并卻接種環(huán)，并打開棉塞打開棉塞 將試管口通過火焰將試管口通過火焰 .將已將已_的接種環(huán)伸的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液入菌液中蘸取一環(huán)菌液 左手將皿蓋打開一條縫隙，右手左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，

15、板內(nèi)，劃劃_條平行線，條平行線，蓋上皿蓋。注意不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基。蓋上皿蓋。注意不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基。.將試管通過火將試管通過火焰，并塞上棉塞焰，并塞上棉塞 火焰火焰冷卻冷卻三至五三至五灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的第一區(qū)域劃線的_開始開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。線。注意不要將最后一區(qū)的劃注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。線與第一區(qū)相連。末端末端燒紅燒紅將平板將平板_放放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 倒置倒置 操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上

16、可能存在避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者種，避免細(xì)菌污染環(huán)境

17、和感染操作者。 避免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種避免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少 2.2.稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法 將菌液將菌液進(jìn)行一系列的梯度進(jìn)行一系列的梯度稀釋稀釋，然后，然后將不同稀將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)。 在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單物將分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落。個(gè)的菌落。 稀釋涂布平板法操作過程分稀釋涂布平板

18、法操作過程分兩個(gè)步驟兩個(gè)步驟，即，即系列系列稀釋操作稀釋操作和和涂布平板操作涂布平板操作。將涂布器浸將涂布器浸在盛有酒精在盛有酒精的燒杯中的燒杯中 取少量稀釋液滴取少量稀釋液滴加到培養(yǎng)基表面加到培養(yǎng)基表面 灼燒灼燒 待酒精燃盡后待酒精燃盡后冷卻冷卻8 810s 10s 涂布涂布 將沾有少量酒將沾有少量酒精的涂布器在精的涂布器在火焰上引燃火焰上引燃用涂布器將菌液均勻地用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使涂布均勻涂布均勻(3)(3)菌種培養(yǎng)：菌種培養(yǎng)：培養(yǎng)基倒置放入培養(yǎng)基倒置放入3737的恒溫箱中。的恒溫箱中。(4)(4)實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察

19、實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察稀釋涂布平板法獲取的菌落 1.1.未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長(zhǎng)？如未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長(zhǎng)？如果有菌落生長(zhǎng)，說明了什么？果有菌落生長(zhǎng)，說明了什么？ 未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1 12 d2 d后無后無菌落生長(zhǎng)，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需菌落生長(zhǎng)，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。要重新制備。 2.2.在接種大腸桿菌的培養(yǎng)基上，能否觀察到在接種大腸桿菌的培養(yǎng)基上，能否觀察到獨(dú)立的菌落？它們的大小、形狀、顏色相似嗎？獨(dú)立的菌落？它們的大小、形狀、顏色相似嗎？ 如果接種成功的話，在培養(yǎng)基的表面可觀察如果接種成功的話，在培養(yǎng)基的表面

20、可觀察到大小、形狀、顏色相似的菌落。到大小、形狀、顏色相似的菌落。四、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)四、結(jié)果分析與評(píng)價(jià) 3.3.培養(yǎng)培養(yǎng)12h12h和和24h24h后，觀察到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相同后，觀察到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相同嗎？如果不同，請(qǐng)分析產(chǎn)生差異的原因？嗎？如果不同，請(qǐng)分析產(chǎn)生差異的原因？ 培養(yǎng)培養(yǎng)12 h12 h與與24 h24 h后的大腸桿菌菌落的大小會(huì)后的大腸桿菌菌落的大小會(huì)有明顯不同。隨著時(shí)間的延長(zhǎng)、菌落的不斷生長(zhǎng)，有明顯不同。隨著時(shí)間的延長(zhǎng)、菌落的不斷生長(zhǎng)，使菌落不斷增大。使菌落不斷增大。 4.4.如果在培養(yǎng)基上觀察到不同形態(tài)的菌落，如果在培養(yǎng)基上觀察到不同形態(tài)的菌落，請(qǐng)分析其可能的原因。請(qǐng)分析其可能的原

21、因。 無菌操作未達(dá)到要求：可能是培養(yǎng)基滅菌不無菌操作未達(dá)到要求：可能是培養(yǎng)基滅菌不徹底；可能是接種時(shí)發(fā)生了污染；也可能是在培徹底；可能是接種時(shí)發(fā)生了污染；也可能是在培養(yǎng)的過程中受到了污染。養(yǎng)的過程中受到了污染。 1.1.試管低溫臨時(shí)保藏試管低溫臨時(shí)保藏 將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)成菌落后，置于培養(yǎng)成菌落后，置于4 4O OC C的冰箱中保存（每隔的冰箱中保存（每隔3 36 6個(gè)月要重新接種培養(yǎng)后再保存）。個(gè)月要重新接種培養(yǎng)后再保存）。 2.2.甘油管長(zhǎng)期保藏甘油管長(zhǎng)期保藏 在在3mL3mL的甘油瓶中加入的甘油瓶中加入1mL1mL的甘油，高壓滅菌

22、。的甘油，高壓滅菌。將將1mL1mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，充分混合后，培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，充分混合后，置于置于2020O OC C的冷凍箱中保存的冷凍箱中保存。五、課題延伸五、課題延伸-菌種的保藏菌種的保藏?cái)R置斜面擱置斜面課題課題2 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)1 1、篩選菌株、篩選菌株無機(jī)鹽無機(jī)鹽碳源碳源氮源氮源凝固劑凝固劑尿素是唯一氮源，只有能利用尿素的尿素是唯一氮源，只有能利用尿素的微生物才能生長(zhǎng)。微生物才能生長(zhǎng)。1 1、篩選菌株、篩選菌株2 2、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目思考思考：選用什么方法統(tǒng)計(jì)？：選用什么方法統(tǒng)計(jì)？稀釋涂布平板法、顯微鏡

23、直接計(jì)數(shù)稀釋涂布平板法、顯微鏡直接計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵是統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵是恰當(dāng)?shù)南♂尪惹‘?dāng)?shù)南♂尪茸⒁庾⒁猓航y(tǒng)計(jì)菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。因此，統(tǒng)計(jì)：統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)。結(jié)果一般用菌落數(shù)。計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片，上面有一個(gè)特定計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片，上面有一個(gè)特定的面積（的面積（1 mm1 mm2 2）和高（）和高（0.1 mm0.1 mm）的計(jì)數(shù)室，在）的計(jì)數(shù)室，在1 mm1 mm2 2的面積里又被劃分成的面積里又被劃分成2525個(gè)（或個(gè)（或1616個(gè)）中格，個(gè)）中格，每個(gè)中格進(jìn)一步劃分成每個(gè)中格進(jìn)一步劃分成1616個(gè)（或者個(gè)（或者252

24、5個(gè)）小格，個(gè)）小格，但計(jì)數(shù)室都是由但計(jì)數(shù)室都是由400400個(gè)小格組成。個(gè)小格組成。計(jì)數(shù)室計(jì)數(shù)室操作：操作：將清潔干燥的血球計(jì)數(shù)板將清潔干燥的血球計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片蓋上蓋玻片，再將，再將稀釋的樣品滴稀釋的樣品滴在計(jì)數(shù)板上，然后在顯微鏡下統(tǒng)計(jì)在計(jì)數(shù)板上，然后在顯微鏡下統(tǒng)計(jì)4 45 5個(gè)中格中的細(xì)菌數(shù)，并求出每個(gè)小格所含細(xì)菌的平均個(gè)中格中的細(xì)菌數(shù)，并求出每個(gè)小格所含細(xì)菌的平均數(shù)，再按下面公式求出每毫升樣品中所含的細(xì)菌數(shù)。數(shù)，再按下面公式求出每毫升樣品中所含的細(xì)菌數(shù)。 計(jì)算公式：計(jì)算公式：每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)每小格平均細(xì)每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)每小格平均細(xì)菌數(shù)菌數(shù)4004001000010000稀釋倍數(shù)。稀釋倍數(shù)。1 1、篩選菌株、篩選菌株2 2、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目3 3、設(shè)置對(duì)照、設(shè)置對(duì)照目的目的：排除非測(cè)試因素影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果可信度：排除非測(cè)試因素影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果可信度潮濕、富含有機(jī)物、潮濕、富含有機(jī)物、pH7，選用表層，選用表層土。土。1 1、篩選菌株、篩選菌株2 2、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目3 3、設(shè)置對(duì)照、設(shè)置對(duì)照土壤中各類微生物土壤中各類微生物數(shù)量不同。一般來數(shù)量不同。一般來說。細(xì)