高中生物選修一知識(shí)點(diǎn)大全書(shū)本知識(shí)浙科版[共6頁(yè)]

1、選修1生物技術(shù)實(shí)踐知識(shí)點(diǎn)歸納 實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的培養(yǎng)和分離1.微生物是指結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、形體微小的單細(xì)胞、多細(xì)胞或沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的低等生物,包括病毒、原核生物、原生生物和某些真菌。細(xì)菌是單細(xì)胞的原核生物,有細(xì)胞壁（肽聚糖）、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì),無(wú)成型的細(xì)胞核,只有一環(huán)狀DMA分子(擬核)。以分裂(二分裂)的方式繁殖,分裂速度很快。用革蘭氏染色法將細(xì)菌分為革蘭氏陽(yáng)性菌(革蘭氏染液染色后,再脫色處理,細(xì)菌仍保留染色液的顏色)和革蘭氏陰性菌兩大類,區(qū)別在細(xì)胞壁的成分不同。大腸桿菌是革蘭氏陰性(細(xì)胞壁薄,有莢膜)、兼性厭氧的腸道桿菌。 2.細(xì)菌的分離方法有兩種:劃線分離法和涂布分離法。是消除污染雜菌的通用方法,也是

2、用于篩選高表達(dá)量菌株的最簡(jiǎn)便方法之一。劃線分離就是用接種環(huán)蘸菌液后在含有固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿平板上劃線,在劃線的過(guò)程中菌液逐漸減少,細(xì)菌也逐漸減少,。劃線最后,可使細(xì)菌間的距離加大。將接種后的固體培養(yǎng)基培養(yǎng)1020小時(shí)后,一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞就會(huì)繁殖成許多細(xì)菌細(xì)胞,形成菌落,不會(huì)重疊。在斜面上劃線,則每個(gè)斜面的菌群就是有一個(gè)細(xì)菌產(chǎn)生的后代。用于基因工程的大腸桿菌的工程菌,可以用劃線分離法獲得產(chǎn)物表達(dá)能力高的菌株。由于工程菌的質(zhì)粒中通常有抗性基因(如抗氨芐青霉素基因),如在培養(yǎng)基中加入一定量的氨芐青霉素,由于非工程菌的其他雜菌都沒(méi)有抗性基因,所以在劃線后只有存在抗性基因的工程菌能生存下來(lái)。涂布分離時(shí),需要

3、先將培養(yǎng)的菌液稀釋,通常稀釋10-510-7倍之間,然后取0.1mL不同稀釋度的稀釋菌液放在培養(yǎng)皿的固體培養(yǎng)基上,用玻璃刮刀涂布在培養(yǎng)基平面上進(jìn)行培養(yǎng),在適當(dāng)?shù)南♂尪认?可產(chǎn)生相互分開(kāi)的菌落,每個(gè)培養(yǎng)基里有20個(gè)以內(nèi)的單菌落為最合適。優(yōu)點(diǎn)：劃線分離法,方法簡(jiǎn)單；涂布分離法,單菌落更易分開(kāi),但操作復(fù)雜 。在培養(yǎng)微生物時(shí),必須進(jìn)行無(wú)菌操作。其首要條件是各種器皿必須是無(wú)菌的,各種培養(yǎng)基也必須是無(wú)菌的,轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基、倒平板、接種、平板劃線、平板稀釋涂布等操作中的每一步都要做到無(wú)菌(防止雜菌污染)。進(jìn)行恒溫培養(yǎng)時(shí),要將培養(yǎng)皿倒置,是因?yàn)榕囵B(yǎng)基中的水分會(huì)以水蒸氣的形式蒸發(fā),倒放培養(yǎng)皿會(huì)使水蒸氣凝結(jié)成水滴后,

4、落入培養(yǎng)基的表面并且擴(kuò)散,菌落中的細(xì)菌也會(huì)隨水?dāng)U散,菌落相互影響,很難再分成單菌落,達(dá)不到分離的目的。4.細(xì)菌擴(kuò)大培養(yǎng)要用LB液體培養(yǎng)基(通用培養(yǎng)基、常用于做生理學(xué)研究和發(fā)酵工業(yè)),劃線分離要用LB固體培養(yǎng)基(常用于微生物分離、鑒定、計(jì)數(shù)和菌種保存)。我們?cè)诶梦⑸飼r(shí),常常要求所利用的微生物不被其他微生物污染。因此,在培養(yǎng)微生物時(shí)必須進(jìn)行無(wú)菌操作無(wú)菌操作的首要條件是各種器皿必須是無(wú)菌的,如各種大小的培養(yǎng)皿、試管、三角瓶、取樣器的頭(或稱“槍頭”、“tip”)、移液管、三角刮刀、接種環(huán)、鑷子等等。這些用具通常用高壓蒸汽滅菌法前各種用品均需用牛皮紙或報(bào)紙包好。培養(yǎng)皿可幾個(gè)包在一起;試管加棉花塞或

5、塑料蓋后也是幾個(gè)包在一起;三角瓶可用封口膜(市售產(chǎn)品,既通氣又不使菌進(jìn)入)或6層紗布封口,再用牛皮紙或報(bào)紙封口;移液管上端用鑷子放入少量棉花,再用牛皮紙包上(現(xiàn)在多不用移液管而用取樣器);取樣器的“槍頭”放在可滅菌的專用塑料盒中,也可放在上口用牛皮紙包好的燒杯中在121(1kg/cm2壓力)下滅菌15min。值得注意的是,實(shí)驗(yàn)中所需的棉花不能用脫脂棉,因脫脂棉易吸水,吸水后容易引起污染。滅菌后,通常將實(shí)驗(yàn)用具放入6080的烘箱中烘干,以除去滅菌時(shí)的水分。在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作前,將需要使用的用具從烘箱中取出,放到超凈臺(tái)上(沒(méi)有超凈臺(tái)時(shí),可制作一個(gè)雙手在內(nèi)操作、又可在外觀看、并有紫外燈滅菌的箱子),然后

6、打開(kāi)紫外燈和過(guò)濾風(fēng),滅菌30min。除了實(shí)驗(yàn)用具必須無(wú)菌外,各種培養(yǎng)基也必須是無(wú)菌的。培養(yǎng)基是微生物生存的環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。“細(xì)菌喜葷,霉菌喜素”,通常細(xì)菌培養(yǎng)基要用蛋白胨和酵母提取物來(lái)配制,還要加入一定量的氯化鈉,以維持一定的滲透壓;霉菌培養(yǎng)基一般用無(wú)機(jī)物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可。此外,細(xì)菌通常要求在中性偏堿的環(huán)境中生長(zhǎng),霉菌要求在中性偏酸的環(huán)境中生長(zhǎng),因此,在制備培養(yǎng)基時(shí)需調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的酸堿度。加入培養(yǎng)基的三角瓶、試管也要在121下滅菌15min,如果培養(yǎng)基中有葡萄糖,為防止葡萄糖分解碳化,要用500g/cm2壓力(90以上)滅菌30min。有些不能加熱滅菌的化合物,如尿素(加熱會(huì)分解等,只

7、能用G6玻璃砂漏斗過(guò)濾,但玻璃砂漏斗使用前也要在121下用紙包好滅菌。玻璃砂漏斗有6種,即G1G6,G6孔徑最小,細(xì)菌不能濾過(guò)。玻璃砂漏斗用后需用1molL的HCL浸泡,并抽濾去酸再用蒸餾水洗至洗出液呈中性,干燥后保存。在將培養(yǎng)基加到三角瓶、試管和培養(yǎng)皿中時(shí),三角瓶口、試管口、培養(yǎng)皿壁上不能沾有培養(yǎng)基,否則容易發(fā)生污染。因此,在將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到三角瓶和試管中時(shí)必須用三角漏斗;向培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)移已滅菌的培養(yǎng)基時(shí),也不要沾在壁上。用棉花制作三角瓶和試管的塞子時(shí),通常將棉花攤成一圓片,再裹到一適當(dāng)直徑的木頭(或筷子)上。放入三角瓶或試管口中后,周圍沒(méi)有皺褶和縫隙容易拔出,但用手提著棉塞時(shí),三角瓶或試管又不

8、能落下。塞子制作的好壞是控制污染發(fā)生的關(guān)鍵。如果有條件,可以用封口膜代替棉塞。干熱滅菌:160170。盡管培養(yǎng)基的配方各不相同,但其基本成分都一樣(五類)。人及動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì):水、無(wú)機(jī)鹽、糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素六類植物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：礦質(zhì)元素、水、二氧化碳等三類；微生物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源及生長(zhǎng)因子等五類。4.無(wú)菌技術(shù)（1）獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌的入侵。要注意以下幾個(gè)方面:對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手,進(jìn)行清潔和消毒。將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌為避免周圍環(huán)境中微生物的污染,實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的

9、材料用具與周圍的物品相接觸。(2)消毒與滅菌的區(qū)別消毒指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子)。消毒方法常用煮沸消毒法,還有化學(xué)藥劑(如酒精、氯氣、石炭酸等)消毒、紅外線消毒。滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物,包括芽孢和孢子。滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌法。5.培養(yǎng)基(1)培養(yǎng)基可分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基(按照物理性質(zhì))。在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑瓊脂后制成瓊脂固體培養(yǎng)基。微生物在固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng),可以形成肉眼可見(jiàn)的菌落。根據(jù)菌落的特征可以判斷是哪一種菌。（2)各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽四

10、種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。滿足微生物生長(zhǎng)還需要適宜的pH、氧氣的要求(根據(jù)微生物的需求提供有氧或無(wú)氧環(huán)境)、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等碳源:能為微生物的代謝提供碳元素的物質(zhì)。如CO2、NaHCO3等無(wú)機(jī)碳源;糖類、蛋白質(zhì)、脂肪等有機(jī)碳源。異養(yǎng)微生物只能利用有機(jī)碳源。單質(zhì)碳不能作為碳源。氮源:能為微生物的代謝提供氮元素的物質(zhì)。如N2、NH3、NO2、蛋白質(zhì)、氨基酸等。只有固氮微生物才能利用N2。（3）培養(yǎng)基配制的原則:目的要明確、pH值要適宜、營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)和要經(jīng)濟(jì)節(jié)約。該實(shí)驗(yàn)步驟1.培養(yǎng)基的配置與滅菌：在兩個(gè)250mL的三角瓶中分別裝入50mLLB液體培養(yǎng)基和50mLLB固體培養(yǎng)基(剛配好,尚未凝固),加上封口膜。將培養(yǎng)皿

11、用牛皮紙包好,放入滅菌鍋內(nèi),1kg壓力滅菌15min。如使用高壓鍋滅菌,則有壓力后開(kāi)始計(jì)時(shí)滅菌15min。2.倒平板：滅菌后,待高壓鍋或滅菌鍋壓力與大氣壓相同時(shí)（即沒(méi)有壓力了）打開(kāi)鍋蓋。將有培養(yǎng)基的三角瓶和培養(yǎng)皿放到超凈臺(tái)上,打開(kāi)超凈臺(tái)的紫外燈和過(guò)濾風(fēng)(注意:打開(kāi)紫外燈后人必須離開(kāi)),待固體培養(yǎng)基冷卻到60時(shí)(手放上還有些熱的時(shí)候),關(guān)閉紫外燈,點(diǎn)燃酒精燈,用鑷子夾出酒精棉球擦拭桌面,并用酒精棉球擦手。在酒精燈火焰旁,以右手無(wú)名指及小指夾持含有固體培養(yǎng)基的三角瓶的封口膜,右手其他3個(gè)手指拿著三角瓶;左手拿著培養(yǎng)皿并打開(kāi)上蓋的一邊,將三角瓶中的培養(yǎng)基(1012mL)倒在培養(yǎng)皿里。將培養(yǎng)基分別倒至

12、4個(gè)培養(yǎng)皿中,每倒入一個(gè)培養(yǎng)皿后立即將培養(yǎng)皿置于水平位置上,并輕輕晃動(dòng),使培養(yǎng)基鋪滿底部,待凝固后即形成平面。3.大腸桿菌的擴(kuò)大培養(yǎng)：將大腸桿菌斜面和有液體培養(yǎng)基的三角瓶放在左手中,靠近酒精燈火焰；右手拿著接種環(huán),并用右手無(wú)名指和小指夾住斜面的棉塞和三角瓶封口膜。將接種環(huán)在火焰上燒紅再深入到斜面。接種前,應(yīng)先使接種環(huán)接觸培養(yǎng)基以達(dá)到冷卻的目的,然后再取菌體。將菌體放入三角瓶的液體培養(yǎng)基中,將三角瓶的封口膜和斜面的棉塞復(fù)原。三角瓶在37,每分鐘200轉(zhuǎn)的搖床上振蕩培養(yǎng)12h。4.劃線分離。在酒精燈火焰上灼燒接種環(huán),在搖床上培養(yǎng)了12h的菌液(由教師代做)打開(kāi),接種環(huán)部分深入到菌液中。然后,在固體

13、培養(yǎng)基的平板上連續(xù)劃線,接種環(huán)只在菌液中蘸菌液一次,劃線后蓋好培養(yǎng)皿。最后,將培養(yǎng)皿倒置(蓋在下面),在37恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1224h后,可看到在劃線的末端出現(xiàn)不連續(xù)的單個(gè)菌落,表明菌已被分離。5.培養(yǎng)保存：在無(wú)菌操作下將單菌落用接種環(huán)取出,再用劃線法接種在斜面上,37培養(yǎng)24h后,置于4冰箱中保存。 實(shí)驗(yàn)二 分離以尿素為氮源的微生物一、實(shí)驗(yàn)原理 脲酶(NH2)2C=O+H2O 2NH3+CO2二.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.使用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基分離細(xì)菌(有脲酶)2.通過(guò)指示劑(酚紅)顏色的變化檢知培養(yǎng)基pH的變化(脲酶催化的化學(xué)反應(yīng))三、材料1.在100mL燒杯中裝入50mL70%酒精,將玻璃刮刀浸

14、泡在其中。2.在100mL三角瓶中配制好25mL全營(yíng)養(yǎng)LB固體培養(yǎng)基(0.25g蛋白胨,0.12g酵母提取物,0.25gNaCL和0.5g瓊脂糖,水25mL),加上封口膜后滅菌待用。3.在100mL三角瓶中配制好25mL尿素固體培養(yǎng)基(0.025g葡萄糖,0.12gNaCL,0.12gK2HPO4,0.25mg酚紅和0.5g瓊脂糖,水15mL),加上封口膜后滅菌,待冷卻至60時(shí),加入通過(guò)G6玻璃漏斗過(guò)濾(使之無(wú)菌)的10mL尿素溶液(內(nèi)含2g脲),搖動(dòng),混合均勻后待用。4.將盛有4.5mL蒸餾水的5支有塞試管滅菌后待用。5.在250mL三角瓶中裝入99mL蒸餾水,用封口膜蓋上,滅菌后待用。6.

15、土樣1g(從有哺乳動(dòng)物排泄物的地方取得)。四、實(shí)驗(yàn)步驟1.制備無(wú)菌的LB固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基:在60左右時(shí),將兩只三角瓶中已滅菌的LB固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基,在酒精燈旁分別倒入兩個(gè)培養(yǎng)皿中,在水平的超凈臺(tái)上搖勻,平放至凝固。2.倒平板3.制備一定濃度梯度的細(xì)菌懸液；在無(wú)菌條件下,1g土樣+99m1無(wú)菌水,振蕩10min,為10-2稀釋液,依次制備10-3、10-4、10-5的土壤稀釋液。取樣時(shí),盡量只取懸液。搖勻,放在試管架上。4.用涂布分離法分離細(xì)菌：取10-4和10-5的土壤稀釋液各0.1mL,分別加到有LB培養(yǎng)基和尿素培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中,再將保存在70%酒精中的玻璃刮刀放在酒精燈

16、火焰上,待刮刀上火焰熄滅,在酒精燈火焰旁打開(kāi)培養(yǎng)皿,將菌液涂布到整個(gè)平面上。5.培養(yǎng)觀察：a)將培養(yǎng)皿倒置,在37恒溫箱中培養(yǎng)2448h。觀察菌落數(shù)。b)全營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中有較多的菌落,而尿素為氮源的培養(yǎng)基平板中只有少量菌落。Q:本實(shí)驗(yàn)分離出來(lái)的細(xì)菌一定都是以尿素為氮源的細(xì)菌嗎?不一定,有些細(xì)菌能利用其它微生物的代謝產(chǎn)物。實(shí)驗(yàn)4果汁中的果膠和果膠酶1.果膠是植物細(xì)胞壁的主要成分,由半乳糖醛酸和半乳糖醛酸甲酯組成。山楂的果實(shí)中果膠含量最多,煮沸的山楂泥可制成山楂糕,就是由于果膠的作用。果膠起著將植物細(xì)胞粘合在一起的作用,去掉果膠,就會(huì)使植物組織變得松散。果膠不溶于乙醇,這是鑒別果膠的一種簡(jiǎn)易方法。用

17、95%的乙醇。2. 果膠酶和果膠甲酯酶可水解果膠,與制取果汁有關(guān)。有些微生物如黑曲霉,蘋(píng)果青霉都可用于生產(chǎn)果膠酶。除去果膠有利于果汁的形成,提高出汁率和果汁變澄清。一、材料1.山楂或蘋(píng)果,每組10g2.黑曲霉提取液或果膠酶溶液。3.95%的乙醇。二、步驟1.用小刀除去蘋(píng)果或山楂果實(shí)中帶種子的部分,并切成塊,由教師用勻漿機(jī)加入少量水制成勻漿。2.取兩個(gè)100mL的燒杯,編號(hào)A、B,各加入5g勻漿液,再向A號(hào)燒杯較中加入10mL黑曲霉的提取液或果膠酶溶液,B號(hào)燒杯中加入10mL水,間歇攪拌2030min。3.取4支試管,編號(hào)14。將A燒杯中的混合物放入1號(hào)和2號(hào)試管中每管入4mL;將B燒杯中的混合

18、物放入3號(hào)和4號(hào)試管中,每管也放入4mL。將1號(hào)和3號(hào)試管放在沸水浴中或酒精燈上加熱,觀察有何變化?2號(hào)和4號(hào)試管不加熱。加熱使纖維素等物質(zhì)發(fā)生凝聚而形成大顆粒而沉淀,也可使一些物質(zhì)溶解。4.再向上述4支試管中各加入95%的乙醇4mL,觀察有什么變化?將觀察結(jié)果記入下表中。絮狀沉淀是果膠不溶于酒精析出形成的。Q：果膠酶在制作果汁時(shí)起什么作用？催化劑,分解果膠實(shí)驗(yàn)6 -淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的檢測(cè) 酶是生物體內(nèi)各種化學(xué)反應(yīng)的催化劑,它有高度的專一性和高效性。但酶在水溶液中很不穩(wěn)定,且不利于工業(yè)化使用。固定化酶就是將水溶性的酶用物理或化學(xué)的方法固定在某種介質(zhì)上,使之成為不溶于水而又有酶活性的

19、制劑。固定化的方法有吸附法、共價(jià)偶聯(lián)法、交聯(lián)法和包埋法等。將固定化酶裝柱,當(dāng)?shù)孜锝?jīng)過(guò)該柱時(shí),在酶的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物。 本實(shí)驗(yàn)內(nèi)容是用吸附法將-淀粉酶固定在石英砂上。一定濃度的淀粉溶液經(jīng)過(guò)固定化酶柱后,可使淀粉水解成糊精。用淀粉指示劑溶液測(cè)試,流出物呈紅色,表明水解產(chǎn)物糊精生成。這里使用的是枯草桿菌的一淀粉酶,其作用的最適pH為5.5-7.5,最適溫度為5075。一、材料1.-淀粉酶的固定化。在燒杯中將5mg-淀粉酶溶于4mL蒸餾水中。由于酶不純,可能有些不溶物。再加入5g石英砂,不時(shí)攪拌,30min后裝入1支下端接有氣門心并用夾子封住的注射器中(石英砂體積約4mL)。（裝柱）用10倍體積的蒸餾

20、水洗滌此注射器以除去未吸附的游離淀粉酶,流速為1mL/min。（洗柱）2.可溶性淀粉溶液:取50mg可溶性淀粉溶于100mL熱水中,攪拌均勻。3.5mmol/L KI-I2溶液:稱取0.127gI2和0.83gKI。加蒸餾水100mL,完全溶解后裝入滴瓶中。二、步驟1.將灌注了固定化酶的注射器放在注射器架上,用滴管滴加淀粉溶液,使淀粉溶液以0.3mL/min的流速過(guò)柱。在流出5mL淀粉溶液后接收0.5mL流出液,加入12滴KI-I2溶液,觀察顏色。用水稀釋1倍后再觀察顏色。（控制流速：讓淀粉和淀粉酶充分反應(yīng)）2.實(shí)驗(yàn)后,用10倍柱體積的蒸餾水洗滌此柱,放置在4冰箱中,幾天后再重復(fù)上述實(shí)驗(yàn),看是

21、否有相同的結(jié)果。（把淀粉和糊精洗掉） Q；實(shí)驗(yàn)反思如何證明洗滌固定化酶柱的流出液中沒(méi)有淀粉酶?可在試管中加入1mL可溶性淀粉,再加幾滴淀粉酶柱流出液,保溫幾分鐘后用碘液檢驗(yàn)。如仍顯藍(lán)色,則流出液中沒(méi)有淀粉酶了。實(shí)驗(yàn)8 果酒及果醋的制作本實(shí)驗(yàn)的內(nèi)容是制作果酒和果醋,所用的原料是葡萄或其他果汁。是酵母利用葡萄糖進(jìn)行酒精發(fā)酵(乙醇發(fā)酵)的產(chǎn)物。酵母菌只有在無(wú)氧條件下才能進(jìn)行酒精發(fā)酵,即將葡萄糖氧化成乙醇,而且當(dāng)培養(yǎng)液中乙醇的濃度超過(guò)16%時(shí),酵母菌就會(huì)死亡。葡萄糖氧化成乙醇的反應(yīng)式如下。 C6H12O6+O2CO2+H2O醋桿菌在有氧條件下才能將乙醇氧化為醋酸,醋桿菌所產(chǎn)生的醋酸可使培養(yǎng)液中醋酸的含

22、量高達(dá)13%。其反應(yīng)式如下。 C2H5OH+O2CH3COOH+H2O 一、材料1.葡萄2.55kg(若每人一組,葡萄用量可以酌減,用0.5kg葡萄即可,發(fā)酵瓶也可相應(yīng)小一些)。2.新鮮酵母或干酵母(一般商店有售,通常用于發(fā)面)。二、步驟1.葡萄清洗、榨汁:將2.55kg的成熟紫葡萄先用水洗凈,再在鮮紅紫色的高錳酸鉀溶液浸泡約5min,然后用清水沖洗。瀝去水后,用多效用榨汁機(jī)以低速(勿用高速以免將籽打碎)將葡萄打成漿狀(也可用杵和研缽搗爛)。2.制備酵母懸液:將適量干酵母(2.5kg葡萄約用1g干酵母)放在一小燒杯中,加入少量溫水(40),使干酵母成為糊狀。為使酵母迅速發(fā)生作用,可加極少量(小

23、撮)蔗糖,混勻,放置片刻。待酵母懸液中出現(xiàn)氣泡即可。（蔗糖:更多底物,可加速反應(yīng),使反應(yīng)更直觀）3.裝入發(fā)酵瓶：將葡萄漿放入發(fā)酵瓶中,裝量不要超過(guò)2/3,然后加入酵母懸液,攪拌均勻。瓶上加一軟木塞或橡膠塞,塞上有孔,孔中插一有彎曲的玻璃管,若用直的玻璃管或其他管子代替,效果稍差。4.酒精發(fā)酵：將上述已裝配好的發(fā)酵瓶放在2530的條件下23天。當(dāng)發(fā)酵瓶中停止出現(xiàn)氣泡,即表示發(fā)酵完畢。若溫度偏低,發(fā)酵時(shí)間相對(duì)延長(zhǎng)。若溫度高于30要采取降溫措施,否則酒的風(fēng)味不佳。5.過(guò)濾分裝保存：發(fā)酵完畢,將發(fā)酵液用兩層紗布過(guò)濾,除去葡萄皮和籽。同時(shí)可以用洗干凈的手?jǐn)D壓濾渣,以獲得盡可能多的葡萄酒。6、將獲得的濾液

24、(仍是渾濁的),分裝到12L的細(xì)口瓶中加蓋密封,靜置。待沉淀后,上清液即為葡萄酒。用這種簡(jiǎn)單工藝制造的葡萄酒,常溫下可保存12年。用果汁制作果酒用葡萄制作的葡萄酒不含糖,酒精含量也低(平均的體積分?jǐn)?shù)為8%)。下面介紹如何制作酒精含量較高(體積分?jǐn)?shù)約為15%)、糖含量也較高的果酒。一、材料1.蘋(píng)果(最好)、梨、柑橘或其他水果。2.新鮮酵母或干酵母。二、步驟1.制取果汁。將蘋(píng)果切成大塊,放在多效用榨汁機(jī)中打碎,也可用杵碎,但效果較差。水果根據(jù)實(shí)驗(yàn)規(guī)模確定用量。最低以不少于0.5kg為宜。打碎的果實(shí)雙層紗布過(guò)濾后即為果汁,供下一步使用。2.如以1L果汁為原料,則向2L左右的發(fā)酵瓶中加入約200g的蔗

25、糖,然后倒入果汁。轉(zhuǎn)動(dòng)發(fā)酵瓶,使蔗糖完全溶解。最后倒入酵母懸液(每升果汁加入約1g干酵母),混勻,加蓋。3.3天后可看到氣泡冒出,10天后劇烈的發(fā)酵停止。此時(shí)即可取出果酒過(guò)濾和分裝。4.發(fā)酵開(kāi)始時(shí),微生物的有氧呼吸會(huì)使發(fā)酵瓶?jī)?nèi)出現(xiàn)負(fù)壓(CO2溶于水中),這情況不能持續(xù)3天以上。若3天后還看不到氣泡冒出,必須加入更多的酵母,使發(fā)酵作用盡快發(fā)生。5.靜置56個(gè)月后,酵母下沉,上清液即為果酒?？捎煤缥ㄈ〕?。用果酒制果醋一、材料1.果酒。將200mL果酒與800mL蒸餾水混合作為發(fā)酵的原料,共1000mL。2.醋化醋桿菌。如能獲得醋化醋桿菌的菌種,可先在下列液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)繁殖。此液體培養(yǎng)基(1L)

26、的配方如下:蛋白胨3g、酵母提取物5g、甘露醇25g（提供碳源）。用300mL的錐形瓶振搖培養(yǎng)48h(振搖可用搖床,攪拌可用磁力攪拌器)后,再接種到發(fā)酵瓶中。如果沒(méi)有這些條件,可以用醋曲代替。只需將適量醋曲加到酒一水混合液中即可。適宜溫度：3035二、步驟1.發(fā)酵裝置。甲瓶的下口與一個(gè)雙通活塞相連。將活塞關(guān)閉,把800mL酒一水混合物倒入甲瓶中,用鋁箔將上口蓋住。甲瓶的底應(yīng)離桌面4050cm。2.乙瓶為發(fā)酵瓶,醋酸發(fā)酵在其中進(jìn)行。乙瓶?jī)?nèi)裝鋸末至八分滿,其下口用一雙孔橡膠塞塞緊,其中一個(gè)孔插直角玻璃管,是發(fā)酵液的出口,此玻璃管下面接一段膠管,膠管上有螺絲用以控制發(fā)酵液流出的速率。膠管下面再接一小

27、段玻璃管,通至500mL的錐形瓶(丙瓶)中,丙瓶口上蓋鋁箔。3.乙瓶下口的雙孔橡膠塞的另一孔插入一直角玻璃管,管內(nèi)塞脫脂棉球,不要塞得太緊,用以過(guò)濾空氣（防止空氣中的微生物進(jìn)入）。此管的另一端要升至鋸末之上。4.將適量醋化醋桿菌的培養(yǎng)物或醋曲懸液加在200mL酒水混合物中混勻,并調(diào)pH至7.0(用0.1mol/LNaOH)后倒入乙瓶中,使鋸末均勻濕透。醋化醋桿菌附著在鋸末上,此時(shí)瓶中幾乎沒(méi)有游離的液體存在。乙瓶的上口通過(guò)雙通活塞與甲瓶的下口相連。5.將水族箱通氣泵的出氣管與乙瓶上塞有棉花球的玻璃管連接,通氣不必太快。保持這種狀況,使醋酸發(fā)酵約48h后,用pH試紙檢查乙瓶中流出液的pH。若檢測(cè)結(jié)

28、果明顯顯酸性,則可進(jìn)入下一步。6.調(diào)節(jié)甲瓶下口的雙通活塞,使由甲瓶滴入乙瓶的液體流量約為每5min1滴。調(diào)節(jié)乙瓶下口處的螺旋夾,使滴入丙瓶中的液體也約是每5min1滴。（調(diào)節(jié)活塞控制流量）7.每天用pH試紙檢測(cè)流出液的pH,監(jiān)控發(fā)酵進(jìn)行的情況。等到流出液的pH不再減少,或甲瓶中的液體全部流入乙瓶時(shí),停止實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)10泡菜的腌制和亞硝酸鹽的測(cè)定泡菜腌制過(guò)程中起作用的主要是假絲酵母和乳酸菌。但這類食品中含有一定量的亞硝酸鹽。亞硝酸鹽對(duì)人體有害,是致癌物質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)的內(nèi)容是制作泡菜,所用的原料是白菜、洋白菜等。在無(wú)氧的條件下,微生物利用菜中的糖和其他營(yíng)養(yǎng)物進(jìn)行發(fā)酵,發(fā)酵產(chǎn)物有機(jī)酸和醇類物質(zhì)等,其中也有

29、亞硝酸(HNO2)。在一定的發(fā)酵時(shí)間內(nèi),泡菜酸度適口,時(shí)間過(guò)長(zhǎng),則霉菌生長(zhǎng)過(guò)多會(huì)產(chǎn)生霉變味。市場(chǎng)上有專用于泡菜的容器,它的口有凹槽,凹槽加水再加蓋,造成無(wú)氧條件。亞硝酸鹽可與對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)這一產(chǎn)物再N-1-萘基乙二胺偶聯(lián),形成紫紅色產(chǎn)物,可用光電比色法定量。步驟 1.各種菜洗凈并切成34cm長(zhǎng)的小塊。2.將泡菜壇洗凈,并用熱水洗壇內(nèi)壁兩次。3.將各種蔬菜、鹽水、糖及調(diào)味品放入壇,混合均勻。如果希望發(fā)酵快些,可將蔬菜在開(kāi)水中浸1min后入壇,再加上一些白酒(抑制雜菌滋生)4.將壇口用水封好,防止外界空氣進(jìn)入。5.腌制1周左右即可開(kāi)壇食用,也可隨時(shí)加入新鮮蔬菜,不斷取用。6.如果加入一

30、些已經(jīng)腌制過(guò)的泡菜汁更好,這相當(dāng)于接種已經(jīng)擴(kuò)增的發(fā)酵菌,可減少腌制時(shí)間。亞硝酸鹽的定量測(cè)定 一、材料1.氯化銨緩沖液。在500mL燒杯內(nèi)加入200mL蒸餾水、10mL鹽酸和50mL氫氧化銨,混合均勻后經(jīng)三角漏斗倒入500mL容量瓶,再用蒸餾水稀釋至刻度,緩沖液pH為9.7。2.硫酸鋅溶液(0.4mol/L)。取12g硫酸鋅(ZnSO47H2O),溶于少量蒸餾水中,再用蒸餾水稀釋至100mL。3.氫氧化鈉溶液(2mol/L)。取8gNaOH,加水至100mL。4.對(duì)氨基苯磺酸溶液。取5g對(duì)氨基苯磺酸,溶于350mL蒸餾水和150mL冰乙酸中,用棕色瓶室溫保存。5.N-1-萘基乙二胺溶液。取0.5

31、gN-1-萘基乙二胺,加入500mL60%乙醇溶解,混勻后,裝入棕色瓶后放入冰箱保存,1周內(nèi)溶液穩(wěn)定。6.顯色劑。用前將步驟“4”和“5”配制的溶液等體積混合。7.亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液儲(chǔ)液。取250mg亞硝酸鈉,在500mL燒杯中加入20mL蒸餾水和100mL氯化銨緩沖液混合,再移至500mL容量瓶中,用蒸餾水稀釋至刻度,冰箱中避光保存。8.亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液(測(cè)定時(shí)用)。用前,取亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00mL移至100mL容量瓶中,加蒸餾水稀釋到刻度。此溶液每毫升相當(dāng)于5.0g亞硝酸鈉。二、步驟1.樣品處理。腌制的泡菜25g及少量泡菜湯,在勻漿機(jī)中打成勻漿,用濾紙和三角漏斗過(guò)濾至500mL燒杯中,用

32、100mL水洗滌勻漿機(jī)和殘?jiān)鼉纱?每次均過(guò)濾如上,合并濾液,用氫氧化鈉溶液將pH調(diào)至8.0,再加入25mL硫酸鋅溶液?；靹?如不產(chǎn)生白色沉淀,再加入氫氧化鈉溶液至產(chǎn)生白色沉淀為止。在水浴中加熱至60,10min后,令其冷卻至室溫,然后用濾紙過(guò)濾,用少量水淋洗沉淀2-3次,將濾液和洗滌液在500mL容量瓶中定容。2.測(cè)定。取10mL樣品溶液,入4.5mL氯化銨緩沖液、2.5mL60%乙酸溶液和5mL顯色液,定容于25mL的容量瓶中?；旌暇鶆?(暗處?kù)o置25min)用光程為1cm的比色杯在550m處測(cè)定光密度值(OD值)。以10mL水為空白對(duì)照。3.標(biāo)準(zhǔn)曲線。取0、0.5、1.0、3.0和5.0m

33、L亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液,分別放在25ml容量瓶中,各加人45mL氯化銨緩沖液、25m60%乙酸溶液和5mL顯色劑加水定容,混合均勻,暗處?kù)o置25min,用光程1cm的比色杯在550m處分別測(cè)定光密度值。以亞硝酸鈉質(zhì)量為橫坐標(biāo),以光密度值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。4.計(jì)算X1=(m2xV1)/(m1xV2)式中:X1為樣品中亞硝酸鹽含量,單位mg/kg,m1為樣品質(zhì)量,單位m2為通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的亞硝酸鹽質(zhì)量,單位g,V1為樣品處理液總體積;V2為測(cè)定用樣品液體積。實(shí)驗(yàn)11 植物的組織培養(yǎng)扦插,嫁接和組織培養(yǎng)等都是植物無(wú)性繁殖的方法。組織培養(yǎng)就是取一部分植物組織,如葉、芽、莖、根、花瓣或花粉等,在無(wú)菌的條件下接種在三角瓶中的瓊脂培養(yǎng)基上,給予一定的溫度和光照,使