保留時(shí)間漂移

1、本文格式為word版，下載可任意編輯保留時(shí)間漂移 液相色譜故障排查 一飄移的保存時(shí)間 q：我的色譜峰保存時(shí)間在漂移，這是什么問題？ a：這是一個(gè)好玩的問題，可能有不同的緣由，讓我們一個(gè)一個(gè)來看。大多數(shù)人通常假設(shè)保存時(shí)間的漂移是平衡問題。假如你在使用未修飾的硅膠柱做正相色譜，那么這是最可能發(fā)生的問題。正相色譜的保存時(shí)間簡單受到硅膠外表吸附的水含量的影響，然后是溶解在流淌相中的水的作用。因?yàn)樗谡和榛蚨燃淄榈仍噭┲械娜芙舛忍貏e低，所以色譜柱平衡需要很長時(shí)間。我曾見過使用特別枯燥的正己烷平衡一星期后保存時(shí)間仍舊漂移的狀況，所以建議避開使用特別枯燥的試劑。通常解決硅膠和水的平衡問題的方法就是使用與

2、水“半飽和的試劑。制備方法是把1體積的疏水試劑用水飽和后，再與相同體積的“枯燥試劑混合。這個(gè)方法可以極大的加快平衡時(shí)間。 在反相色譜中，平衡通常會(huì)很快。幾個(gè)510柱體積的流淌相通常就足夠平衡了，但這也不是全部狀況。值得留意的是在離子對(duì)色譜中，使用離子對(duì)試劑平衡色譜柱。典型的離子對(duì)試劑使用濃度在25個(gè)umol/l或者更少，它們吸附在反相色譜柱填料外表，外表濃度在0.5-2 mmol/m2。1根250*4.6mm的色譜柱有大約3g外表積330 m2/g的填料，這意味著一根色譜柱有大約1000 m2的外表積，完全平衡需要2mol的濃度2 umol/l的試劑，這雖然是極端狀況，但假如用幾百毫升的流淌相

3、去平衡色譜柱也是很正常的。因此在保存色譜柱時(shí)，用有機(jī)溶劑代替離子對(duì)試劑保存過夜是不明智的，因?yàn)殡x子對(duì)試劑被去除后，第二天你又要花很長時(shí)間去平衡。 q：全部這些現(xiàn)象都有共同的因素：流淌相含有低濃度的強(qiáng)吸附試劑。這是保存時(shí)間漂移最常見的緣由么？ a：我想就是那樣的，其它的現(xiàn)象不多見。但是強(qiáng)吸附劑也可能源于樣品。這種狀況下它們?cè)谥貜?fù)進(jìn)樣中會(huì)漸漸累積，從而轉(zhuǎn)變色譜柱的化學(xué)性質(zhì)。舉個(gè)例子，藥品中的賦形劑。 我們可以通過觀看保存時(shí)間改變的速率來得知雜質(zhì)是從流淌相中引入還是從樣品中引入。 試驗(yàn)如下： 1 進(jìn)樣幾次，例如，4次一共1小時(shí)進(jìn)樣。 2 走相同量的流淌相，不進(jìn)樣。 3 重復(fù)第一步 4 做一個(gè)關(guān)系圖，

4、保存時(shí)間 a. 對(duì)時(shí)間的關(guān)系 b. 對(duì)進(jìn)樣次數(shù)的關(guān)系 假如第一個(gè)圖得到一條平滑的曲線，那么流淌相是引入雜質(zhì)的緣由。假如第二個(gè)圖得到一條平滑的曲線，那么雜質(zhì)的來源是樣品。 q：還是其它保存時(shí)間漂移的緣由么？ a：是的，假如流淌相的組成隨著時(shí)間轉(zhuǎn)變，那么就有可能導(dǎo)致保存時(shí)間漂移。假如你沒有使用儀器的在線混合裝置，那么流淌相的組分可能在緩慢的蒸發(fā)。當(dāng)你用氦氣流噴射流淌相的方法趕氣泡的時(shí)候，你必需掌握噴射的速率最小。 此外，一個(gè)常常被忽視的緣由就是鍵合相的水解。制造商通常會(huì)指定一個(gè)ph范圍，超出范圍可能導(dǎo)致鍵合相“不穩(wěn)定。這個(gè)范圍通常是ph2-8或9。然而，人們會(huì)有許多緣由不 液相色譜故障排查 得不接

5、近這個(gè)極限。這不是一個(gè)明顯的分界線，因?yàn)樗庖矔?huì)取決于其他因素如溫度或有機(jī)溶劑，但是緩慢的水解會(huì)在這個(gè)極限上發(fā)生。 要保持固定相的水解穩(wěn)定性，最好是在中性ph值，低溫下3-5左右，等度條件好于梯度條件。當(dāng)?shù)榷葪l件下發(fā)生水解時(shí)，鍵合相通常會(huì)自我吸附，達(dá)成一種區(qū)域平衡。然而，在使用高濃度的有機(jī)溶劑時(shí)，例如在梯度洗脫或者沖洗色譜柱的過程中，這種平衡被打破，鍵合相見被沖洗杰出譜柱。 q：我會(huì)記住的。溫度能導(dǎo)致保存時(shí)間漂移么？ a：是的，溫度通常是有可能的。假如你的樣品是自動(dòng)分析過夜或者過了周末的，那么你得到的保存時(shí)間漂移的結(jié)果可能和試驗(yàn)室溫度改變有關(guān)。在很多地方，室溫的設(shè)置在晚上或者周末通常是不一樣的。通常來講，1的改變導(dǎo)致保存時(shí)間漂移大約1%到2%。這個(gè)可以聯(lián)系最終一個(gè)導(dǎo)致保存時(shí)間漂移的緣由色譜柱返壓的增加。增加的返壓說明色譜柱被污染，但是僅僅是污染的塞板還足以影響保存時(shí)間。壓力會(huì)讓流淌相通過塞板時(shí)產(chǎn)生比正常狀況大的摩擦，導(dǎo)致流淌相受熱，這個(gè)增加的溫度會(huì)導(dǎo)致保存時(shí)間的漂移。 此外還有其他的一些緣由，但是極少發(fā)生。 在反相色譜上發(fā)生平衡很慢的現(xiàn)象是由于流淌相中有機(jī)溶劑比例太少。高鍵合覆蓋率、“完全封端的c18沒有被流淌相良好的“潮濕。這會(huì)導(dǎo)致一些現(xiàn)象，如流淌相和固定相失去聯(lián)系造成的“疏水塌陷，這是由于固定相之間的互相吸附，從而導(dǎo)致可用于和樣品互相作用的外表積的削