胡蘿卜的組織培養(yǎng)

1、胡蘿卜的組織培養(yǎng)（一） 組織培養(yǎng)1 準(zhǔn)備（1） 器具準(zhǔn)備： 高壓蒸汽滅菌鍋： 培養(yǎng)基，接種工具，蒸餾水的消毒。手持噴霧器： 裝70%的酒精，用于外植體，接種工具，操作人員的消毒。 超凈工作臺(tái)： 用于無(wú)菌操作。 設(shè)備：培養(yǎng)架，溫度控制器，搖床，光照培養(yǎng)箱，烘干器，蒸餾水器，冰箱，電爐，天平，溫度計(jì)，酸度計(jì)，顯微鏡，分注器，移液器，磁力攪拌器， 常用玻璃器具：量筒，培養(yǎng)皿，燒杯，50ml錐形瓶，容量瓶，廣口瓶，滴管，移液管，試管，酒精燈，玻璃棒， 常用金屬儀器：鑷子，剪刀，解剖刀，解剖針，接種針，刀架 其他用品：濾紙，標(biāo)簽，消毒酒精棉球，封口用品（2） 試劑：MS基本培養(yǎng)基 2,4-D：生長(zhǎng)素類似

2、物 NAA：生長(zhǎng)素類似物 6-BA：細(xì)胞分裂素類似物 酒精（體積分?jǐn)?shù)70%）：消毒次氯酸鈉（體積分?jǐn)?shù)20%）：消毒 無(wú)菌水2 .配制類別化合物稱取量/mg擴(kuò)大倍數(shù)體積/mL1L培養(yǎng)基的吸收量/mL大量元素儲(chǔ)備液NH4NO3KNO3CaCl22H2OMgSO47H2OKH2PO433000380008800740034002020202020100050微量元素儲(chǔ)備液KIH3BO3MnSO44H2OZnSO47H2ONaMoO42H2OCuSO45H2OCoCl26H2O166124044601720505520020020020020020020010005鐵鹽儲(chǔ)備液FeSO47H2ONa2E

3、DTA5560746020020010005有機(jī)物儲(chǔ)備液肌醇煙酸維生素B6維生素B1甘氨酸200001001002040020020020020020010005A. MS基本培養(yǎng)基配方：上述4種儲(chǔ)備液+30g蔗糖+8g瓊脂+蒸餾水定容至1000mL （pH5.65.8）B. 分別向MS基本培養(yǎng)基中加入植物激素：（pH5.65.8）誘導(dǎo)愈傷組織形成培養(yǎng)基：MS+0.5mg/L 6-BA+0.125 mg/L2,4-D誘導(dǎo)分化芽的培養(yǎng)基：MS+1.0mg/L 6-BA + 0.1 mg/LNAA誘導(dǎo)生根的培養(yǎng)基：MS+0.1 mg/L NAA3.滅菌：滅菌后冷卻置于常溫下觀察3天，檢查滅菌是否徹

4、底。4.取材接種：a將蘿卜洗凈削皮切段，擦手消毒。b在超凈工作臺(tái)上將蘿卜用酒精消毒30秒，用無(wú)菌水清洗兩到三次，用次氯酸鈉溶液處理30min，用無(wú)菌水清洗兩到三次。c用無(wú)菌濾紙吸取水分，在培養(yǎng)皿上用無(wú)菌刀將蘿卜切成1cm厚的橫切片，選取有形成層的部位，切取1cm2的小塊。d將組織塊接種到培養(yǎng)基上，封口。貼上標(biāo)簽，寫明材料、日期、編號(hào)。e將培養(yǎng)基放在23-26C的恒溫箱培養(yǎng)。4天后觀察材料污染情況，14天后，觀察愈傷組織生長(zhǎng)情況。5觀察記錄：每天觀察外植體的生長(zhǎng)情況，記錄愈傷組織的大小、質(zhì)地、顏色等情況。6轉(zhuǎn)接，培養(yǎng)：培養(yǎng)一段時(shí)間后，將生長(zhǎng)良好的愈傷組織轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時(shí)間后，胡蘿卜的愈傷組織就可以誘導(dǎo)出試管苗。（二）露地栽培1培育壯苗:添加一定數(shù)量的生長(zhǎng)延緩劑（如矮壯素、PP333）同時(shí)打開(kāi)瓶蓋，