生物化學(xué)有動(dòng)畫

1、教教 師師：李偉國資料收集資料收集：楊延璽 易勝 王濤 則巴古力 董興 馮瑩 賴照明 劉亞京資料整合資料整合：楊林芳 吳菲菲 余星星 pptppt制作制作：劉亮講講 課課：曾棟梁生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)報(bào)告生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)報(bào)告 蛋白質(zhì)的提取、純化以及檢測蛋白質(zhì)的提取、純化以及檢測已知某蛋白的分子量約為已知某蛋白的分子量約為17 kda17 kda，等電點(diǎn)，等電點(diǎn)3.94.13.94.1，它能耐一，它能耐一定的高溫，在定的高溫，在90 90 c c加熱加熱34 min34 min后仍然能夠保持后仍然能夠保持80%80%的活的活性。該蛋白含有較多的疏水性殘基，與性。該蛋白含有較多的疏水性殘基，與caca2

2、+2+結(jié)合后可以暴露結(jié)合后可以暴露它的疏水基團(tuán)。它的疏水基團(tuán)。該蛋白的作用是作為生物體內(nèi)酶的激活劑該蛋白的作用是作為生物體內(nèi)酶的激活劑。題目解析在鈣離子的作用下才能起到暴露疏水集團(tuán)發(fā)揮性能，結(jié)合蛋白質(zhì)基礎(chǔ)知識(shí)從而可以判斷其為鈣調(diào)蛋白。鈣調(diào)蛋白（英語：calmodulin，又稱鈣調(diào)素、攜鈣素，簡稱cam），是一種能與鈣離子結(jié)合的蛋白質(zhì)，普遍存在真核生物細(xì)胞中。鈣調(diào)素由148個(gè)氨基酸組成（分子量為16700）；含有大量酸性氨基酸（有1/3是谷氨酸和天冬氨酸），為酸性蛋白質(zhì)（等電點(diǎn)為4.3）。鈣調(diào)素含有4個(gè)ef手結(jié)構(gòu)片斷，其中每一個(gè)都可以結(jié)合一個(gè)鈣離子。鈣調(diào)蛋白是一種鈣結(jié)合蛋白，存在于幾乎所有的真核

3、細(xì)胞中。它的作用是對任何微量的鈣都能敏感地捕獲。鈣調(diào)蛋白只有在與ca2+結(jié)合后才有活性。與鈣結(jié)合后，cam發(fā)生構(gòu)型上的變化，成為一些酶的激活物。因不含有易氧化的絡(luò)氨酸、半胱氨酸，因此十分的穩(wěn)定實(shí)驗(yàn)方法：熱變性吸附層析法，基因重組大 腸桿菌法（論文無法下載）蛋白檢測：分為定性檢測和活性檢測實(shí)驗(yàn)總結(jié)：總結(jié)當(dāng)前實(shí)驗(yàn)第 18 卷第 4 期journal of shanxi teachers universityvol. 18 no. 42004 年 12 月natural science edition動(dòng)物腦組織中鈣調(diào)蛋白的分離純化動(dòng)物腦組織中鈣調(diào)蛋白的分離純化 袁麗環(huán), 段江燕試劑準(zhǔn)備：試劑準(zhǔn)備：

4、新鮮鼠腦；標(biāo)準(zhǔn)鈣調(diào)蛋白；pde；pipes； buffera：10 mmol/l pipes, 1 mmol/l edta, ph=7.0; bufferb：10 mmol/l pipes, 1 mmol/l cacl2, ph=7.0; bufferc：50 mmol/l tris-hcl, 0.5 mmol/l nacl, 10 mmol/l edta, ph=8.0; 測定buffer：360 mmol/l tris-hcl，360 mmol/l 咪唑，4.5 mmol/l mgac2。儀器準(zhǔn)備：儀器準(zhǔn)備： tgl-16l-a 高速冷凍離心機(jī)； 2001-b-c七件套豪華層析系統(tǒng)； uv

5、-2201紫外分光光度計(jì)。取新鮮的鼠腦共20 g ， 切碎并于100 ml buffera 中勻漿 將勻漿液置100 水浴中煮沸 3 min ， 冷卻后離心 10000rpm， 60min. 取上清液調(diào)成2 mmol/l cacl2 溶液。取樣取樣，采用離心法：，采用離心法：粗樣品的純化粗樣品的純化：（吸附層析法）：（吸附層析法）裝柱： 采用葡聚糖g -5 0 ( 分離蛋白質(zhì)的范圍在 1.5103-3104 ) 用蒸餾水浸充分膨脹( 3 h-4 h ) 后再裝柱； 平衡： 用提取鈣調(diào)蛋白的緩沖溶液buffera平衡；上樣： 經(jīng)過平衡的凝膠過濾柱。 當(dāng)平衡液流動(dòng)到與固定相表面一致時(shí)， 用滴管輕輕

6、地把分離樣品的溶液加到固定相表面， 要盡量避免沖毀基質(zhì) 加入樣品液的體積一般應(yīng)少于床體積的1/2; 洗脫： 待樣品液的液面流到固定相表面時(shí)， 用50 ml bufferb 淋洗之后用200 ml 0.5 mol/l nacl 的bufferb淋洗， 最后用bufferc洗脫； 收集： 在進(jìn)行洗脫的同時(shí)柱的下端與部分收集器接通。按時(shí)間分管收集，每管滴2 min ，流速控制在大約1.5 ml/ min。 鈣調(diào)蛋白的定性檢測如圖，倘若兩者最大吸收峰以及峰形基本重合，那么可以判斷該物質(zhì)即為鈣調(diào)蛋白采用紫外光譜法：鈣調(diào)蛋白的活性檢測根據(jù)磷酸二酯酶( pde) 可特異地把環(huán)核苷酸水解為 5- 核苷酸, 并在蛇毒中的核苷酸作用下, 進(jìn)一步水解成腺苷和磷酸. 而鈣調(diào)蛋白可以激活 pde, 從而使最終的產(chǎn)物無機(jī)磷的量增加, 因此可依據(jù)磷的含量判斷鈣調(diào)蛋白的生物學(xué)活性.機(jī)理圖如下對活性的計(jì)算存在以下定量關(guān)系：采用pde法：熱變性離心，以及用鈣離子絡(luò)合鈣調(diào)蛋白組提取采用葡聚糖柱交換吸附法鈣調(diào)蛋白純化采用紫外光譜法與標(biāo)準(zhǔn)cam譜圖對比鈣調(diào)蛋白定性鑒別采用pde水解法和磷的含量測定鈣調(diào)蛋白活性測定本文通過動(dòng)物腦組織為材料經(jīng)熱變性、離心、葡聚糖sephade