生物化學有動畫

1、教教 師師：李偉國資料收集資料收集：楊延璽 易勝 王濤 則巴古力 董興 馮瑩 賴照明 劉亞京資料整合資料整合：楊林芳 吳菲菲 余星星 pptppt制作制作：劉亮講講 課課：曾棟梁生物化學實驗設計報告生物化學實驗設計報告 蛋白質的提取、純化以及檢測蛋白質的提取、純化以及檢測已知某蛋白的分子量約為已知某蛋白的分子量約為17 kda17 kda，等電點，等電點3.94.13.94.1，它能耐一，它能耐一定的高溫，在定的高溫，在90 90 c c加熱加熱34 min34 min后仍然能夠保持后仍然能夠保持80%80%的活的活性。該蛋白含有較多的疏水性殘基，與性。該蛋白含有較多的疏水性殘基，與caca2

2、+2+結合后可以暴露結合后可以暴露它的疏水基團。它的疏水基團。該蛋白的作用是作為生物體內酶的激活劑該蛋白的作用是作為生物體內酶的激活劑。題目解析在鈣離子的作用下才能起到暴露疏水集團發(fā)揮性能，結合蛋白質基礎知識從而可以判斷其為鈣調蛋白。鈣調蛋白（英語：calmodulin，又稱鈣調素、攜鈣素，簡稱cam），是一種能與鈣離子結合的蛋白質，普遍存在真核生物細胞中。鈣調素由148個氨基酸組成（分子量為16700）；含有大量酸性氨基酸（有1/3是谷氨酸和天冬氨酸），為酸性蛋白質（等電點為4.3）。鈣調素含有4個ef手結構片斷，其中每一個都可以結合一個鈣離子。鈣調蛋白是一種鈣結合蛋白，存在于幾乎所有的真核

3、細胞中。它的作用是對任何微量的鈣都能敏感地捕獲。鈣調蛋白只有在與ca2+結合后才有活性。與鈣結合后，cam發(fā)生構型上的變化，成為一些酶的激活物。因不含有易氧化的絡氨酸、半胱氨酸，因此十分的穩(wěn)定實驗方法：熱變性吸附層析法，基因重組大 腸桿菌法（論文無法下載）蛋白檢測：分為定性檢測和活性檢測實驗總結：總結當前實驗第 18 卷第 4 期journal of shanxi teachers universityvol. 18 no. 42004 年 12 月natural science edition動物腦組織中鈣調蛋白的分離純化動物腦組織中鈣調蛋白的分離純化 袁麗環(huán), 段江燕試劑準備：試劑準備：

4、新鮮鼠腦；標準鈣調蛋白；pde；pipes； buffera：10 mmol/l pipes, 1 mmol/l edta, ph=7.0; bufferb：10 mmol/l pipes, 1 mmol/l cacl2, ph=7.0; bufferc：50 mmol/l tris-hcl, 0.5 mmol/l nacl, 10 mmol/l edta, ph=8.0; 測定buffer：360 mmol/l tris-hcl，360 mmol/l 咪唑，4.5 mmol/l mgac2。儀器準備：儀器準備： tgl-16l-a 高速冷凍離心機； 2001-b-c七件套豪華層析系統(tǒng)； uv

5、-2201紫外分光光度計。取新鮮的鼠腦共20 g ， 切碎并于100 ml buffera 中勻漿 將勻漿液置100 水浴中煮沸 3 min ， 冷卻后離心 10000rpm， 60min. 取上清液調成2 mmol/l cacl2 溶液。取樣取樣，采用離心法：，采用離心法：粗樣品的純化粗樣品的純化：（吸附層析法）：（吸附層析法）裝柱： 采用葡聚糖g -5 0 ( 分離蛋白質的范圍在 1.5103-3104 ) 用蒸餾水浸充分膨脹( 3 h-4 h ) 后再裝柱； 平衡： 用提取鈣調蛋白的緩沖溶液buffera平衡；上樣： 經過平衡的凝膠過濾柱。 當平衡液流動到與固定相表面一致時， 用滴管輕輕

6、地把分離樣品的溶液加到固定相表面， 要盡量避免沖毀基質 加入樣品液的體積一般應少于床體積的1/2; 洗脫： 待樣品液的液面流到固定相表面時， 用50 ml bufferb 淋洗之后用200 ml 0.5 mol/l nacl 的bufferb淋洗， 最后用bufferc洗脫； 收集： 在進行洗脫的同時柱的下端與部分收集器接通。按時間分管收集，每管滴2 min ，流速控制在大約1.5 ml/ min。 鈣調蛋白的定性檢測如圖，倘若兩者最大吸收峰以及峰形基本重合，那么可以判斷該物質即為鈣調蛋白采用紫外光譜法：鈣調蛋白的活性檢測根據磷酸二酯酶( pde) 可特異地把環(huán)核苷酸水解為 5- 核苷酸, 并在蛇毒中的核苷酸作用下, 進一步水解成腺苷和磷酸. 而鈣調蛋白可以激活 pde, 從而使最終的產物無機磷的量增加, 因此可依據磷的含量判斷鈣調蛋白的生物學活性.機理圖如下對活性的計算存在以下定量關系：采用pde法：熱變性離心，以及用鈣離子絡合鈣調蛋白組提取采用葡聚糖柱交換吸附法鈣調蛋白純化采用紫外光譜法與標準cam譜圖對比鈣調蛋白定性鑒別采用pde水解法和磷的含量測定鈣調蛋白活性測定本文通過動物腦組織為材料經熱變性、離心、葡聚糖sephade