X3-1-1__DNA重組技術(shù)的基本工具

1、1專題專題1 1 基因工程基因工程1.1 DNA1.1 DNA重組技術(shù)的基本工具重組技術(shù)的基本工具角似鹿角似鹿鼻似獅鼻似獅目似虎目似虎唇似牛唇似牛爪似鷹爪似鷹髭似馬髭似馬鱗似魚鱗似魚身似蛇身似蛇設(shè)想一設(shè)想一 能否培養(yǎng)出具有抗蟲能否培養(yǎng)出具有抗蟲性狀的抗蟲棉呢？性狀的抗蟲棉呢？藍色玫瑰藍色玫瑰能生產(chǎn)胰島素的大腸桿菌能生產(chǎn)胰島素的大腸桿菌 轉(zhuǎn)基因鼠轉(zhuǎn)基因鼠能發(fā)熒光的轉(zhuǎn)基因豬能發(fā)熒光的轉(zhuǎn)基因豬9 是指是指按照人們的意愿按照人們的意愿，進行嚴(yán)格的設(shè)計，通過，進行嚴(yán)格的設(shè)計，通過體外體外DNADNA重組和轉(zhuǎn)基因重組和轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物以等技術(shù)，賦予生物以新的遺傳新的遺傳特性特性，創(chuàng)造出更符合人們需要

2、的，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生新的生物類型和生物產(chǎn)品物產(chǎn)品。 由于基因工程是在由于基因工程是在DNADNA分子水平分子水平上進行設(shè)計和上進行設(shè)計和施工的，又叫施工的，又叫DNADNA重組技術(shù)或基因拼接技術(shù)。重組技術(shù)或基因拼接技術(shù)。生長激素、胰島素生長激素、胰島素10對基因工程概念的理解對基因工程概念的理解 一種定向改造生物的新技術(shù)一種定向改造生物的新技術(shù)121.1 DNA重組技術(shù)的基本工具重組技術(shù)的基本工具1314關(guān)鍵步驟一：抗蟲基因從蘇云金芽孢桿關(guān)鍵步驟一：抗蟲基因從蘇云金芽孢桿 菌細胞內(nèi)提取。菌細胞內(nèi)提取。關(guān)鍵步驟二：抗蟲基因與載體關(guān)鍵步驟二：抗蟲基因與載體DNA連接。連接。關(guān)

3、鍵步驟三：抗蟲基因進入棉細胞。關(guān)鍵步驟三：抗蟲基因進入棉細胞?；虻姆肿邮中g(shù)刀基因的分子手術(shù)刀限制性內(nèi)切酶。限制性內(nèi)切酶?；虻姆肿涌p合針基因的分子縫合針DNADNA連接酶。連接酶?；虻姆肿舆\輸車基因的分子運輸車載體。載體?？瓜x棉培育抗蟲棉培育閱讀課本閱讀課本4-5頁頁“限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶分子手術(shù)刀分子手術(shù)刀”的相關(guān)內(nèi)容，填寫下表的相關(guān)內(nèi)容，填寫下表自主學(xué)習(xí)一自主學(xué)習(xí)一主要主要從原核生物中分離純化而來從原核生物中分離純化而來已經(jīng)分離出大約已經(jīng)分離出大約4000種種1、識別雙鏈、識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序分子的某種特定核苷酸序列列2、使每一條鏈中使每一條鏈中特定部位特定

4、部位的兩個核的兩個核苷酸之間的苷酸之間的磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵斷開。斷開。12345脫氧核苷酸的結(jié)構(gòu)脫氧核苷酸的結(jié)構(gòu) G1234512345 A3,5-磷磷酸二酯酸二酯鍵鍵3端5端3端5端磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵18仔細觀察各限制酶仔細觀察各限制酶 識別的特定序列有識別的特定序列有何特點？何特點？限制酶的識別序列限制酶的識別序列限制酶所識別的序列的特限制酶所識別的序列的特點是：點是：找到一條中心軸線，找到一條中心軸線，中軸線兩側(cè)的雙鏈中軸線兩側(cè)的雙鏈DNA上上的堿基是的堿基是反向?qū)ΨQ重復(fù)反向?qū)ΨQ重復(fù)排排列的列的 ，稱為，稱為回文序列回文序列中軸線在G與A之間切割大腸桿菌的一種限制酶(EcoR)只能識

5、別GAATTC序列，并在G和A之間切開。EcoRIEcoRI限制酶的作用限制酶的作用黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端EcoRIEcoRI限制酶的切割限制酶的切割 被限制酶切開的被限制酶切開的DNA兩條兩條單鏈的切口，帶有幾個單鏈的切口，帶有幾個伸出的伸出的核苷酸核苷酸，他們之間正好互補配他們之間正好互補配對，這樣的切口叫對，這樣的切口叫黏性末端黏性末端。錯位切錯位切SmaISmaI只能識別CCCGGG序列，并在C和G之間切開。中軸線SmaISmaI限制酶的作用限制酶的作用在G與C之間切割SmaISmaI限制酶的切割限制酶的切割當(dāng)限制酶從識別序列的中心軸線處切開時，切開的當(dāng)限制酶從識別序列的中心

6、軸線處切開時，切開的DNADNA兩條單鏈的切口，是平整的，這樣的切口叫兩條單鏈的切口，是平整的，這樣的切口叫平末端平末端。限制酶作用特點回文序列：回文序列：在切割部位，一條鏈在切割部位，一條鏈正向讀的堿基順序與正向讀的堿基順序與另一條鏈反向讀的順另一條鏈反向讀的順序完全一致。序完全一致。你能推測限制酶存在于原核生物中的你能推測限制酶存在于原核生物中的作用是什么嗎？作用是什么嗎？原核生物原核生物（主要是細菌）易受自然界（主要是細菌）易受自然界外源外源DNADNA（噬菌（噬菌體體DNADNA）的入侵，但生物在長期的進化過程中形成了）的入侵，但生物在長期的進化過程中形成了一套完善的防御機制，以防止外

7、來病原物的侵害。一套完善的防御機制，以防止外來病原物的侵害。限制酶就是細菌的一種防御性工具，當(dāng)外源限制酶就是細菌的一種防御性工具，當(dāng)外源DNADNA侵入侵入時，會利用限制酶將外源時，會利用限制酶將外源DNADNA切割掉，以保證自身的切割掉，以保證自身的安全。安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源切割外源DNADNA、使之失效使之失效，從而達到，從而達到保護自身保護自身的目的。的目的。尋根問底尋根問底尋根問底尋根問底為什么限制酶不剪切細菌本身的為什么限制酶不剪切細菌本身的DNA？通過長期的進化，細菌中含有某種限制酶通過長期的進化，細菌中含有某種限制酶的細胞

8、，其的細胞，其DNADNA分子中分子中不具備這種限制酶不具備這種限制酶的識別切割序列的識別切割序列，或者，或者通過甲基化酶將甲通過甲基化酶將甲基轉(zhuǎn)移到所識別序列的堿基上，使限制酶基轉(zhuǎn)移到所識別序列的堿基上，使限制酶不能將其切開不能將其切開。這樣，盡管細菌中含有某。這樣，盡管細菌中含有某種限制酶也不會使自身的種限制酶也不會使自身的DNADNA被切斷，并被切斷，并且可以防止外源且可以防止外源DNADNA的入侵。的入侵。 26思考思考? ?類型來源功能相同點差別EcoliDNA連接酶T4DNA連接酶大腸桿菌T4噬菌體催化形成磷酸二酯鍵只能連接黏性末端能連接黏性末端和平末端(效率較低)閱讀課本第閱讀課

9、本第5頁頁“分子縫合針分子縫合針DNADNA連接酶連接酶”的相關(guān)內(nèi)容，填寫下表的相關(guān)內(nèi)容，填寫下表自主學(xué)習(xí)二自主學(xué)習(xí)二28將兩段將兩段DNADNA片段連片段連接接1分類：根據(jù)酶的來源不同，可分為分類：根據(jù)酶的來源不同，可分為EcoliDNA連連 接酶和接酶和T4DNA連接酶兩類連接酶兩類2功能：恢復(fù)被限制酶切開了的兩個核苷酸之間的功能：恢復(fù)被限制酶切開了的兩個核苷酸之間的 磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵。兩種兩種DNA連接酶連接酶(EcoliDNA連接酶和連接酶和T4DNA連接酶連接酶)的比較：的比較：相同點：都縫合相同點：都縫合磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵區(qū)別：區(qū)別：EcoIiDNA連接酶來源于大腸桿菌，只能

10、連接酶來源于大腸桿菌，只能 使使黏性末端黏性末端之間連接；之間連接； T4DNA連接酶能縫合連接酶能縫合兩種末端兩種末端，但連接平末，但連接平末 端之間的效率較端之間的效率較低低。把切下來的DNA片段拼接成新的DNA，即將脫氧核糖和磷酸連接起來催化形成磷酸二酯鍵DNADNA連接酶的作用連接酶的作用兩兩DNADNA片段要具有片段要具有互補互補的黏性末端的黏性末端才能拼起來才能拼起來DNADNA連接酶的縫合作用連接酶的縫合作用可把黏性末端之間的可把黏性末端之間的縫隙縫隙“縫合縫合”起來起來，注意：注意：DNADNA連接酶可連接雙鏈連接酶可連接雙鏈DNADNA中的中的DNADNA單鏈缺口，單鏈缺口，

11、但不能連接單鏈但不能連接單鏈DNADNA！DNADNA連接酶與連接酶與DNADNA聚合酶是一回事嗎？聚合酶是一回事嗎？T T4 4 DNA DNA連接酶連接酶還可把還可把平末端之間的縫隙平末端之間的縫隙“縫合縫合”起來，起來，但效率較低但效率較低DNADNA連接酶的縫合作用連接酶的縫合作用A A T T GA A T T GC CA AA AT TT TA AA AT TT TDNA聚合聚合酶酶DNA聚合聚合酶酶DNA聚合聚合酶酶DNA聚合聚合酶酶DNA聚合聚合酶酶DNA聚合酶的作用聚合酶的作用都能催化形成都能催化形成磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵都是蛋白質(zhì)都是蛋白質(zhì)不需要不需要需要需要形成完整的重形成

12、完整的重組組DNA分子分子形成形成DNA的一條的一條鏈鏈基因工程基因工程DNA復(fù)制復(fù)制DNA連接酶與連接酶與DNA聚合酶的比較聚合酶的比較只能將只能將單個核苷單個核苷酸酸連接到已有的連接到已有的DNADNA片段上，形片段上，形成磷酸二酯鍵成磷酸二酯鍵在兩個DNA片段之間形成磷酸二酯鍵34DNA連接酶的種類連接酶的種類35362個個4個個1 1、每連接兩個相同的黏性未端要連接幾個磷酸每連接兩個相同的黏性未端要連接幾個磷酸二酯鍵？二酯鍵？2 2、用限制酶切一個特定基因要切斷幾個磷酸二用限制酶切一個特定基因要切斷幾個磷酸二酯鍵？酯鍵？思考：思考：2.為什么限制酶和為什么限制酶和DNA連接酶在微生物中

13、能夠分連接酶在微生物中能夠分離到離到,而高等植物和動物中沒有而高等植物和動物中沒有? 原核生物容易受到自然界外源原核生物容易受到自然界外源DNA的的入侵，但是生物在長期的進化過程中形成入侵，但是生物在長期的進化過程中形成了完善的防御機制，以防止外來病原物的了完善的防御機制，以防止外來病原物的侵害。侵害。 限制性核酸內(nèi)切酶就是細菌的防御性工限制性核酸內(nèi)切酶就是細菌的防御性工具，當(dāng)外源具，當(dāng)外源DNA侵入時，限制性核酸內(nèi)切侵入時，限制性核酸內(nèi)切酶會將外源酶會將外源DNA切割掉，以保證自身的安切割掉，以保證自身的安全。全。 所以，限制性核酸內(nèi)切酶在原核生物中所以，限制性核酸內(nèi)切酶在原核生物中主要起到

14、切割外源主要起到切割外源DNA、使之失效，從而、使之失效，從而保護自身的作用。保護自身的作用。載體的作用載體的作用載體的必載體的必要條件要條件載體的種類載體的種類閱讀課本第閱讀課本第6頁頁“分子運輸車分子運輸車運載體運載體”的相關(guān)的相關(guān)內(nèi)容，填寫下表內(nèi)容，填寫下表自主學(xué)習(xí)三自主學(xué)習(xí)三能夠能夠宿主細胞中宿主細胞中復(fù)制復(fù)制保存保存限制酶切點限制酶切點便與外源基因連接便與外源基因連接標(biāo)記基因標(biāo)記基因鑒定鑒定選擇選擇安全安全無害無害大小適中大小適中提取提取操作操作運載工具運載工具大量復(fù)制大量復(fù)制細菌的質(zhì)粒細菌的質(zhì)粒改造改造病毒：病毒：、動植物病毒等。、動植物病毒等。 39條件條件40有標(biāo)記基因的存有標(biāo)

15、記基因的存在，可用含青霉在，可用含青霉素的培養(yǎng)基鑒別。素的培養(yǎng)基鑒別。有切割位點有切割位點能復(fù)制并帶著能復(fù)制并帶著插入的目的基插入的目的基因一起復(fù)制因一起復(fù)制質(zhì)粒質(zhì)粒裸露的、結(jié)構(gòu)簡單的、獨立于細菌裸露的、結(jié)構(gòu)簡單的、獨立于細菌擬核擬核DNA之外，并具有之外，并具有自我復(fù)制能力自我復(fù)制能力的很小的雙鏈環(huán)狀的很小的雙鏈環(huán)狀DNA分分子。子。最常用運載體最常用運載體質(zhì)粒質(zhì)粒 實際上在基因工實際上在基因工程操作中，真正程操作中，真正被用作載體的質(zhì)被用作載體的質(zhì)粒，都是在天然粒，都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進行過行過人工改造人工改造的。的。42Plasmids 434445464748重組重組D

16、NA分子的模擬操作分子的模擬操作 注意：這兩條注意：這兩條DNA分子的堿基對不是隨意亂寫的。分子的堿基對不是隨意亂寫的。 首先，每個首先，每個DNA分子上的兩條鏈上的堿基要互補分子上的兩條鏈上的堿基要互補配對；配對； 第二，每個第二，每個DNA分子中每條鏈都存在一個分子中每條鏈都存在一個G-A-A-T-T-C的堿基序列，也就是說是的堿基序列，也就是說是EcoRI限制酶的識限制酶的識別位點，并存在別位點，并存在G-A的切割位點。的切割位點。49505152一、一、質(zhì)粒是基因工程中最常用的運載體，它的主要特質(zhì)粒是基因工程中最常用的運載體，它的主要特點是點是（ ）1 1能自我復(fù)制能自我復(fù)制 2 2、

17、不能自我復(fù)制不能自我復(fù)制3 3、結(jié)構(gòu)很小結(jié)構(gòu)很小 4 4、成分是蛋白質(zhì)成分是蛋白質(zhì) 5 5、是環(huán)狀是環(huán)狀DNADNA分子分子 6 6、是環(huán)狀是環(huán)狀RNARNA分子分子7 7、鏈狀鏈狀DNADNA分子分子 8 8、能友好地借居在宿主細胞中能友好地借居在宿主細胞中二、二、質(zhì)粒上會存在某些標(biāo)記基因，這些標(biāo)記基因有什質(zhì)粒上會存在某些標(biāo)記基因，這些標(biāo)記基因有什么用途？么用途？1、3、5、8 便于篩選、識別便于篩選、識別三、要想將某個特定基因與質(zhì)粒相連，需要用幾種限制三、要想將某個特定基因與質(zhì)粒相連，需要用幾種限制性內(nèi)切酶和幾種性內(nèi)切酶和幾種DNA連接酶處理？連接酶處理？ 為什么？為什么？一種一種53例1

18、、以下是兩種限制酶切割后形成的DNA片段， 試分析：GC AATTC GC CTTAA CG G CG G (1)其中和其中和 是由一種限制酶切割形成的是由一種限制酶切割形成的 末端，末端，兩者要重組成一個兩者要重組成一個DNA 分子，所用分子，所用DNA連接酶通常連接酶通常是是 。(2) 和和 是由另一種限制酶切割形成的是由另一種限制酶切割形成的 末末端，兩者要形成重組端，兩者要形成重組DNA片段，所用的連接酶通常片段，所用的連接酶通常是是 。平T4 DNA連接酶連接酶黏性黏性Ecoli DNA連接酶連接酶54例2、某科學(xué)家從細菌中分離出耐高溫淀粉酶（Amy） 基因a,通過基因工程的方法，將

19、a轉(zhuǎn)到馬鈴薯植株中，經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)Amy在成熟塊莖細胞中存在。這一過程涉及 A.目的基因進入受體細胞后，可隨著馬鈴薯的DNA分子的復(fù)制而復(fù)制，傳給子代細胞B.基因a導(dǎo)入成功后，將抑制細胞原有的新陳代謝，開辟新的代謝途徑C.細菌的DNA分子較小，可直接作為目的基因，導(dǎo)入受體中不需要整合到馬鈴薯的DNA分子中D.目的基因來自細菌，可以不需要運載體直接導(dǎo)入受體細胞A例：例：限制性內(nèi)切酶限制性內(nèi)切酶的識別序列和切點是的識別序列和切點是GGATCC，限，限制性內(nèi)切酶制性內(nèi)切酶的識別序列和切點是的識別序列和切點是GATC。在質(zhì)粒上有。在質(zhì)粒上有酶酶的一個切點，在目的基因的兩側(cè)各有一個酶的一個切點，在目的基因的

20、兩側(cè)各有一個酶的切點。的切點。（1）請畫出質(zhì)粒被限制酶）請畫出質(zhì)粒被限制酶切割后所形成的黏性末端。切割后所形成的黏性末端。（2）請畫出目的基因兩側(cè)被限制酶）請畫出目的基因兩側(cè)被限制酶切割后所形成的黏性末切割后所形成的黏性末端。端。（3）在）在DNA連接酶作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成連接酶作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接？為什么？的黏性末端能否連接？為什么？可以連接。因為由上述兩種不同限制酶切割后形成可以連接。因為由上述兩種不同限制酶切割后形成相同的相同的黏黏性末端性末端（或是可以互補的）（或是可以互補的） 小試身手小試身手隨堂練習(xí)：1、關(guān)于限制酶的說法中，正確的是

21、（、關(guān)于限制酶的說法中，正確的是（ ）A、限制酶是一種酶，只識別、限制酶是一種酶，只識別GAATTC堿基序堿基序 列列B、EcoRI切割的是切割的是GA之間的氫鍵之間的氫鍵C限制酶一般不切割自身的限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切分子，只切 割外源割外源DNAD限制酶只存在于原核生物中限制酶只存在于原核生物中答案：答案：C57585960617、在將胰島素的基因與質(zhì)粒形成重組DNA分子的過程中，下列哪組是所需要的 同一種限制酶切割兩者；不需同一種限制酶切割兩者；加入適量的DNA連接酶；不需加DNA連接酶A B C D8、（多選）（多選）答案：答案：BD9、下列四條、下列四條DNA分子，彼此

22、間具有粘性末端的一組是分子，彼此間具有粘性末端的一組是 A B C D答案：答案：D10、下列黏性末端屬于同種內(nèi)切酶切割而成的下列黏性末端屬于同種內(nèi)切酶切割而成的 是（是（ ） A、 B、 C、 D、T C GA G C T T A AA GG T T C C AA G C T T C A G A A T T C G1111、下列哪一種酶是基因工程的工具酶下列哪一種酶是基因工程的工具酶 A A、DNADNA連接酶連接酶 B B、DNADNA酶酶 C C、RNARNA酶酶 D D、運載體、運載體AA1212、下列不適合用于基因工程的運載體下列不適合用于基因工程的運載體是（是（ ） A A、質(zhì)粒、

23、質(zhì)粒 B B、噬菌體、噬菌體 C C、細菌、細菌 D D、病毒、病毒C13、下列說法正確的是下列說法正確的是：（：（ ） A、限制酶的切口一定是、限制酶的切口一定是GAATTC堿基序列堿基序列 B、質(zhì)粒是基因工程中唯一的運載體、質(zhì)粒是基因工程中唯一的運載體 C、重組技術(shù)所用的工具酶是限制酶、重組技術(shù)所用的工具酶是限制酶、 連接酶、運載體連接酶、運載體 D、利用運載體在宿主細胞內(nèi)對目的基因、利用運載體在宿主細胞內(nèi)對目的基因 進行大量復(fù)制的過程可稱為進行大量復(fù)制的過程可稱為“克隆克隆”D14、在基因工程中，切割運載體和含有目的基因在基因工程中，切割運載體和含有目的基因 的的DNA片段，需使用（片段

24、，需使用（ ）同種限制酶同種限制酶 B. 兩種限制酶兩種限制酶同種連接酶同種連接酶 D. 兩種連接酶兩種連接酶15、基因工程常用的受體細胞有（基因工程常用的受體細胞有（ ） (1)大腸桿菌大腸桿菌 （2）枯草桿菌）枯草桿菌（3）支原體）支原體 （4）動植物細胞）動植物細胞A. （3）（）（4） B. （1）（）（2）（）（4）C. （2）（）（3）（）（4） D. （1）（）（2）（）（3） 16、 如圖為大腸桿菌及質(zhì)粒載體的結(jié)構(gòu)模式圖，如圖為大腸桿菌及質(zhì)粒載體的結(jié)構(gòu)模式圖，據(jù)圖回答下列問題。據(jù)圖回答下列問題。(3)氨芐青霉素抗性基因在質(zhì)粒氨芐青霉素抗性基因在質(zhì)粒DNA上稱為上稱為_，其作用是

25、，其作用是_。(4)下列常在基因工程中用作載體的是下列常在基因工程中用作載體的是()A蘇云金芽孢桿菌抗蟲基因蘇云金芽孢桿菌抗蟲基因B土壤農(nóng)桿菌中的土壤農(nóng)桿菌中的RNA分子分子C大腸桿菌的質(zhì)粒大腸桿菌的質(zhì)粒D動物細胞的染色體動物細胞的染色體【思路點撥】【思路點撥】本題通過質(zhì)粒結(jié)構(gòu)的模式圖考查本題通過質(zhì)粒結(jié)構(gòu)的模式圖考查質(zhì)粒的功能和特點，分析如下：質(zhì)粒的功能和特點，分析如下： 17、(2011年北大附中高二檢測年北大附中高二檢測)下列關(guān)于下列關(guān)于DNA連連接酶的敘述正確的是接酶的敘述正確的是()催化相同黏性末端的催化相同黏性末端的DNA片段之間的連接片段之間的連接催化不同黏性末端的催化不同黏性末端

26、的DNA片段之間的連接片段之間的連接催化兩個黏性末端互補堿基間氫鍵的形成催化兩個黏性末端互補堿基間氫鍵的形成催化催化DNA分子兩條鏈的脫氧核糖與磷酸之間磷分子兩條鏈的脫氧核糖與磷酸之間磷酸二酯鍵的形成酸二酯鍵的形成ABC D 【嘗試解答】【嘗試解答】D 18 、(2011年雅禮中學(xué)高二檢測年雅禮中學(xué)高二檢測)基因工程中，須基因工程中，須使用特定的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，便于重組使用特定的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，便于重組和篩選。已知限制酶和篩選。已知限制酶的識別序列和切點是的識別序列和切點是GGATCC，限制酶，限制酶的識別序列和切點是的識別序列和切點是GATC。根據(jù)圖示判斷下列操作正確的是

27、。根據(jù)圖示判斷下列操作正確的是()A目的基因和質(zhì)粒均用限制酶目的基因和質(zhì)粒均用限制酶切割切割B目的基因和質(zhì)粒均用限制酶目的基因和質(zhì)粒均用限制酶切割切割C質(zhì)粒用限制酶質(zhì)粒用限制酶切割，目的基因用限制酶切割，目的基因用限制酶切割切割D質(zhì)粒用限制酶質(zhì)粒用限制酶切割，目的基因用限制酶切割，目的基因用限制酶切割切割【嘗試解答】【嘗試解答】D【解析】【解析】 首先把目的基因切下來要用到限制酶首先把目的基因切下來要用到限制酶；如果再用限制酶；如果再用限制酶切割質(zhì)粒，則切割質(zhì)粒，則2個標(biāo)記基因個標(biāo)記基因都被切開，標(biāo)記基因?qū)⑹プ饔?。而用限制酶都被切開，標(biāo)記基因?qū)⑹プ饔?。而用限制酶切切割質(zhì)?？杀Ａ粢粋€標(biāo)記基因，而產(chǎn)生的黏性末端和割質(zhì)?？杀Ａ粢粋€標(biāo)記基因，而產(chǎn)生的黏性末端和限制酶限制酶切割下來的目的基因可以互補配對。切割下來的目的基因可以互補配對?！净犹骄俊俊净犹骄俊可项}中限制酶上題中限制酶切開化學(xué)鍵后產(chǎn)生切開化學(xué)鍵后產(chǎn)生哪種類型的末端？哪種類型的末端？【提示】【提示】黏性末端。黏性末端?！疽渍`警示】【易誤警示】(1)限制性核酸內(nèi)切酶是一類酶而不限制性核酸內(nèi)切酶是一類酶而不是一種酶。是一種酶。(2)限制性核酸內(nèi)切酶作用的化學(xué)鍵為磷酸二酯鍵，限制性核酸內(nèi)切酶作用的化學(xué)鍵為磷酸二酯鍵，而不是氫鍵。而不是氫鍵。(3)不同種類的限制性核酸內(nèi)切酶識別與切割的位點不同種類的限制性核酸內(nèi)切酶識別與切