人體細胞治療研究和制劑質(zhì)量控制技術指導原則

1、人體細胞治療研究和制劑質(zhì)量控制技術指導原則 2003年03月20日 發(fā)布 一、序言 體細胞治療是指應用人的自體、同種異體或異種（非人體）的體細胞，經(jīng)體外操作后回輸（或植入）人體的治療方法。這種體外操作包括細胞在體外的傳代、擴增、篩選以及藥物或其他能改變細胞生物學行為的處理。經(jīng)過體外操作后的體細胞可用于疾病的治療，也可用于疾病的診斷或預防。體細胞治療具有多種不同的類型，包括體內(nèi)回輸體外激活的單個核白細胞如淋巴因子激活的殺傷細胞（LAK）、腫瘤浸潤性淋巴細胞（TIL）、單核細胞、巨噬細胞或體外致敏的殺傷細胞（IVS）等等；體內(nèi)移植體外加工過的骨髓細胞或造血干細胞；體內(nèi)接種體外處理過的腫瘤細胞（瘤苗

2、）；體內(nèi)植入經(jīng)體外操作過的細胞群如肝細胞、肌細胞、胰島細胞、軟骨細胞等等。 由于體細胞治療的最終制品不是某一種單一物質(zhì)而是一類具有生物學效應的細胞，其制備技術和應用方案具有多樣性、復雜性和特殊性，因此不能象一般生物制品那樣制訂出適合于每一種方案的具體標準，本指導原則只提出一個共同的原則，具體的申報資料和應用方案應根據(jù)本技術指導原則加以準備、申請和實施。對每個方案的整個操作過程和最終制品必須制定并嚴格執(zhí)行（實施）標準操作程序，以確保體細胞治療的安全、有效。 二、申報資料 （一）體細胞治療制劑的名稱、選題目的與依據(jù)、國內(nèi)外研究現(xiàn)狀或生產(chǎn)使用情況 1申請表 2體細胞治療制劑的名稱及命名依據(jù) 3選題的

3、目的和立題依據(jù) 4國內(nèi)外有關該制劑的研究現(xiàn)狀、生產(chǎn)及臨床應用情況（包括專利查詢情況） 5臨床應用的風險性評估 （二）體細胞的采集、分離和檢定 1體細胞類型和供體的情況 （1）體細胞類型 須指出細胞來源是屬于自體、同種異體、異種還是細胞系。必須提供細胞的組織來源及細胞類別的確證資料，其中包括形態(tài)生化或表面標志等。 （2）供體 若體細胞來源于同種異體，需說明供體的年齡、性別，供體必須符合國家對獻血員的要求，并提供測試的方法及符合條件的依據(jù)。供體必須經(jīng)過檢驗證明HBV抗原、抗HCV、抗HIV-1/2、梅毒抗體、細菌、霉菌均為陰性，必要時需說明供體的既往病史、家族史等臨床資料。對于那些需通過激活體內(nèi)免

4、疫功能發(fā)揮作用或需體細胞在體內(nèi)長期存活的體細胞治療項目，除ABO血型外，還必須對供體做HLA-I類和II類分型檢查，并證明與受體（病人）相匹配，同時提供檢測方法和依據(jù)。 若體細胞來源于動物，必須提供動物的來源，遺傳背景，健康證明（如重要病原體，包括人畜共患疾病的病原體），飼養(yǎng)條件，應用此類體細胞的必要性和安全性。 （3）細胞系 若采用細胞系進行體細胞治療，應按國家相關規(guī)定進行主細胞庫、種子細胞庫及生產(chǎn)細胞庫三級細胞庫的建立及管理。應詳細記述細胞的來源、鑒別標志、保存、預計使用壽命，在保存和復蘇條件下穩(wěn)定性的依據(jù)。生產(chǎn)細胞庫不應含有可能的致癌因子，不應含有感染性外源因子，如細菌、霉菌、支原體及病

5、毒。 2體細胞的采集 應對采集體細胞的技術方法的安全性、可行性、穩(wěn)定性進行充分論證，應提供體細胞采集技術的標準操作程序，應說明采集體細胞的地址/環(huán)境，所用的設備和設施、保存和運輸?shù)沫h(huán)節(jié)和條件，預防微生物及病毒等有害因子污染的方法，預防共用設備和設施可能帶來的交叉污染等措施。 3體細胞的分離 應詳細規(guī)定分離體細胞用的方法、材料及設備，應提供在此過程中所用的各種材料的資料，如果是購買的原材料，應有供應商/制造商提供的產(chǎn)品說明及分析合格證明。當應用單克隆抗體進行有關操作時，應參照國家藥品管理當局有關規(guī)定進行。 4體細胞的檢定 在體細胞采集及分離過程中的適當階段，應對體細胞進行質(zhì)控檢定，包括采集與分離

6、體細胞的收率、存活率、純度、均一性等。應詳細說明檢定體細胞所用的方法、材料及設備，并制定合格標準。 （三）體細胞的體外操作 1培養(yǎng)基 （1）所有成分應有足夠純度（例如水應符合注射用水標準），殘留的培養(yǎng)基或受者不應有明顯影響。每個培養(yǎng)細胞的部門應保證所用的各種成分的質(zhì)量都經(jīng)過鑒定，并制定標準規(guī)格。若用商業(yè)來源的培養(yǎng)基，應由廠商提供全部培養(yǎng)基成分資料。 （2）血清的使用 除能證明體細胞培養(yǎng)或激活需要血清外，應避免使用任何血清。不得使用同種異體人血清或血漿。如必須使用動物血清，應考慮每批血清都應對潛在的外源因子（包括人的病原體）進行檢查、篩選。例如，牛血清應進行病毒和支原體污染的檢查篩選等。 （3）

7、人血液成份的應用 若培養(yǎng)基中含有人的血液成份，如白蛋白及轉(zhuǎn)鐵蛋白，應說明其來源、批號、質(zhì)量檢定合格報告，應盡可能用已批準上市的產(chǎn)品。 （4）條件培養(yǎng)基的應用 在體細胞培養(yǎng)中使用細胞培養(yǎng)來源的條件培養(yǎng)基時，有可能增加了制劑的危險性及降低產(chǎn)品的一致性。因此，盡可能確定條件培養(yǎng)基的必要成份，以及嘗試用確定的試劑取代條件培養(yǎng)基。在應用條件培養(yǎng)基時應考慮以下幾點： 應詳細提供條件培養(yǎng)基的來源、加工及使用說明。 當用供者（人）細胞制備條件培養(yǎng)基時，應對供者按獻血員標準進行傳染因子的檢查。 當用自體細胞制備條件培養(yǎng)基時，應減少傳播病毒性疾病的危險，病毒在體外擴增的能力亦應考慮。 （5）抗生素的應用 培養(yǎng)基中

8、盡量避免使用內(nèi)酰胺類抗生素。若采用青霉素類抗生素，應做青霉素皮試，該細胞制劑應標明加用的抗生素，并不得用于已知對該藥過敏的患者。另外，應做不加抗生素的培養(yǎng)對照，以證明能夠保持無菌。 （6）其他成份 應充分說明體細胞培養(yǎng)和激活時所采用的有絲分裂原、抗體、細胞因子、化學物質(zhì)，以及培養(yǎng)物。應盡可能采用國家批準臨床應用的產(chǎn)品。如上述成份的生產(chǎn)廠家已獲國家批準臨床應用，可以引用該批件。如上述成份的生產(chǎn)廠家未獲國家批準臨床應用，應參照國家對相應產(chǎn)品的質(zhì)控要點，提供質(zhì)量標準，并對每批產(chǎn)品提供詳盡的質(zhì)量檢定報告。 （7）培養(yǎng)基的檢定 對每批制成的培養(yǎng)基（例如已加入血清及生長添加物等）應進行無菌試驗，以及對擬給

9、病人用的體外培養(yǎng)細胞的激活及/或支持生長試驗。 2生產(chǎn)過程 生產(chǎn)部門對制備工藝流程應有詳細的標準操作程序和適時修訂的程序。收獲時應保留細胞及培養(yǎng)基樣品，供檢定用。若細胞培養(yǎng)技術有改進，則應評估對細胞得率、生物學效應、均一性及純度的影響。 應敘述保證細胞批同一性和防止交叉污染的質(zhì)量控制系統(tǒng)，以及適用于長期培養(yǎng)時定期進行的和在體外培養(yǎng)后輸注前對所有培養(yǎng)物進行的質(zhì)量控制系統(tǒng)。 3質(zhì)量控制 應對所有成份分離、培養(yǎng)及最后處理細胞所用的器具進行質(zhì)量控制。各種成份都應進行同一性及污染物檢查。有生物活性的成份還應進行功能檢定。批記錄應予保存，該記錄應反映制備每批體細胞的所有步驟，記載每一成份的批號及所有檢定結

10、果。 （四）體細胞制劑的檢定與質(zhì)量控制 各批體細胞的檢定包括為驗證操作過程對最初數(shù)批體細胞所進行的檢定及在操作過程做任何改變后進行的檢定，以及確定安全性和生物學效應等對每批體細胞所進行的檢定，應依據(jù)實施方案制定合格標準。 1每批體細胞的檢定 （1）得率及存活率：于回輸前應進行體細胞得率及存活率檢定。 （2）每批細胞來源的確認：應注明供者的來源并加以標記或確定批號。 （3）無菌試驗：每批培養(yǎng)的體細胞在患者輸注前均應進行無菌試驗。建議在培養(yǎng)開始后34天起每間隔一定時間取培養(yǎng)液樣品，包括患者回輸前24小時取樣，按現(xiàn)行版中國藥典生物制品無菌試驗規(guī)程進行。在患者使用前，取培養(yǎng)液及/或沉淀物用丫啶橙染色或

11、革蘭染色，追加一次污染檢測。 進行長期培養(yǎng)的體細胞，應進行支原體檢查。對大多數(shù)自體體細胞產(chǎn)品而言，有效期很短，因此有些試驗（如支原體檢測）可能對制品的應用來說耗時太長，但每批制品的留樣檢測是必需的，其結果可以為制品的質(zhì)量控制提供完整資料。雖然單個病人應用的體細胞不會等到檢測完成后再回輸，但是如果留樣發(fā)現(xiàn)陽性結果或發(fā)現(xiàn)幾次陽性結果后，應及時對生產(chǎn)過程進行檢查。如果在體細胞制備的早期發(fā)現(xiàn)有污染的情況，應終止該批體細胞制品的繼續(xù)制備。如果某些檢測結果在制品應用時還無結果，應說明可獲得結果的時間。 （4）體細胞的純度與均一性 在體細胞回輸前，應證明其純度和均一性已達到可應用水平。對于經(jīng)過數(shù)代培養(yǎng)的體細

12、胞應進行細胞的鑒定及無污染檢查，以保證未被其他類型細胞污染或取代。 對于體細胞體外操作中所用的非人用成份應測定其成品中的含量，并制定相應的限量指標。 （5）生物學效應 如有可能，應盡量檢測每批體細胞的生物學效應，例如體細胞具有的某種生物學功能，分泌某種產(chǎn)物的能力，表達某種標志的水平等。 2體細胞制劑的檢定（申報臨床前完成） 檢定項目： （1）體細胞制品的得率和存活率： （2）體細胞制品的純度和均一性或特征性表面標志： （3）體細胞制品的生物學效應； （4）體細胞制品外源因子的檢測包括： 細菌 真菌 支原體 病毒 內(nèi)毒素 （5）體細胞制品其他添加成份殘余量的檢測（如牛血清蛋白、抗體、血清、抗生素

13、、固相微粒等）。 3體細胞制劑的制造及檢定過程，及原始記錄和中國藥品生物制品檢定所的復核檢定報告。 4體細胞制劑的穩(wěn)定性 根據(jù)穩(wěn)定性的實驗結果確定有效期，說明體細胞制劑的保存條件、保存液的成份與配方。如果體細胞在處理之前、處理當中或處理之后需由一地運到另一地，應說明運輸條件對保存體細胞存活率和功能的影響，應確保運輸過程中體細胞制品達至上述檢定標準。應提供運輸容器能適用運輸材料的合格證明。若體細胞制品經(jīng)凍存后繼續(xù)用于病人。應在凍融或再擴增后進行上述檢定，達到檢定標準。 （五）體細胞治療的臨床前試驗 1安全性評價 （1）生長因子依賴性細胞，對其生長行為必須予以監(jiān)測，若某細胞株在傳代過程中失去對該生

14、長因子的依賴，不能再予以使用。 （2）對同種異體細胞的移植，必須從免疫學方面提供其安全性依據(jù)。 （3）對異種細胞，必須提供該異種細胞在體內(nèi)存活的時間及安全性的依據(jù)。 （4）毒性試驗 盡可能模擬臨床回輸方式，高于臨床用量的相同組織類型的動物體細胞制品回輸入動物體內(nèi)，觀察其毒性反應、過敏反應、局部刺激反應。對特殊來源的體細胞，按具體情況制定毒性反應的評價方法。 （5）致癌試驗 對于某些長期培養(yǎng)的體細胞，應進行致癌性試驗。 體外試驗：軟瓊脂克隆形成試驗 體內(nèi)試驗：采用裸鼠試驗，按國家藥品管理當局有關細胞株檢定和質(zhì)量控制要求進行，應證明經(jīng)體外處理后已失去生長和增殖能力。 （6）對于體細胞終制品所用的附

15、加物，應視為體細胞制品的一部分，應做動物毒性試驗。 2有效性評價 （1）體細胞的表型應提供該類體細胞的形態(tài)學、表面標志等，該體細胞應具有預期的功能如分泌某種產(chǎn)物（或因子），可通過體外試驗加以檢測。 （2）體外試驗 檢測體細胞制品的生物學效應如細胞毒效應、免疫誘導/增強或抑制效應、造血細胞增殖能力等。 （3）體內(nèi)試驗 如果有可能以動物模型來進行，臨床前試驗應測定體細胞制品在體內(nèi)生物學功能及其治療效果。 若某種體細胞治療方法，因種屬特異性等原因無法用動物模型體內(nèi)試驗來證實其有效性，應做特別說明，并提供和引證有效性的其它依據(jù)。 （六）體細胞治療臨床試驗方案 1臨床試驗方案除參照國家有關臨床研究的規(guī)定外，必須包括所選用的病種、病人的年齡范圍、性別、疾病的發(fā)展階段（臨床分期）、試用的病例數(shù)、事前制定病例選擇與淘汰的標準。 2給藥的方式、劑量、時間及療程。如果通過特殊的手術條件導入治療制品，必須提供詳細的操作過程。 3評估療效的客觀標準，包括臨床指和實驗室檢測項目。 4評估毒副作用及其