小麥抗病性的鑒定

1、實驗 小麥抗病性的鑒定 I小麥抗條銹病的鑒定 、目的 學習和初步掌握小麥條銹病抗性鑒定技術(shù)。 二、內(nèi)容說明 銹病對小麥產(chǎn)量的影響很大，在某些地區(qū)甚至是限制小麥增產(chǎn)的主要因素。 其中條銹病(Puccinia striiformis)是小麥三種銹病中分布面最廣、危害最大的 病害。選育和栽培抗銹品種是防治小麥銹病危害的一項最基本、最有效的措施。 因此，從事小麥育種工作必須掌握對銹病抗性的鑒定方法。 銹病在自然條件下，并非每年各地都嚴重發(fā)生。因此，在進行抗銹病育種時, 除在發(fā)病的麥田中進行直接鑒定外， 還必須人工接種鑒定，如采用幼苗鑒定和成 株鑒定。幼苗鑒定一般在溫室中進行，于麥苗第一葉長達45cm時

2、接種病原菌, 等充分發(fā)病后進行鑒定。其優(yōu)點可在較短的時間內(nèi)測定大量材料的抗性，測定對 不同生理小種的抗性，還能防止本地沒有而外地有的新生理小種的傳播。由于小 麥受銹病危害主要是成株期，因此田間進行成株鑒定更能反應大田生產(chǎn)上的抗 性。本實驗采用成株期人工接種鑒定法。 三、材料儀器 1. 材料 供試小麥育種材料、感病對照品種、抗病對照品種；供試條銹 病菌種(選用致病力強、分布廣的不同生理小種)。 2. 儀器用具 試管、培養(yǎng)皿或燒杯、玻棒、注射器等。 四、方法步驟 1. 供試材料的種植把每個被鑒定材料種成一個小區(qū)，北方春季經(jīng)常干 旱，采用凹穴播種法，播種時灌水，提高保濕性，以利充分發(fā)病。在鑒定材料圃

3、 的四周和在鑒定區(qū)內(nèi)每隔10 20個小區(qū)播種高感品種作為誘發(fā)行。誘發(fā)行最好 用24個高感品種等量混合播種。 2. 接種時間接種條銹病的適宜時間，通常是在小麥拔節(jié)前后。 3. 米集抱子和配制抱子懸浮液 (1) 采集條銹菌抱子在溫室培養(yǎng)的發(fā)病植株上，按不同生理小種分別采 集新鮮抱子粉，將試管傾斜套進麥株病葉；再輕輕震動，使已成熟的抱子落于管 內(nèi)，達到要求量即可。 (2)抱子懸浮液的配制把采集來的新鮮抱子粉，在玻璃杯(或培養(yǎng)皿) 內(nèi)先用少量蒸餾水濕潤抱子粉，攪成糊狀，再加水稀釋，至抱子懸浮液透光呈桔 黃色即可。配制抱子懸浮液時，最好是分生理小種配，以便分別接種，減少小種 間相互干擾。如果采取混合接種

4、，則各小種的抱子粉事先應等量混合，而后配成 抱子懸浮液，現(xiàn)配現(xiàn)用。 4.接種方法一般可用的接種方法有涂抹、注射、 噴霧、噴粉等方法, 但最常用的是注射接種法。其方法是: (1)將配制好的抱子懸浮液吸入注射器，裝上針頭, 而后在感病誘發(fā)行植株 切勿刺穿，再稍稍回抽, 的第二可見(從上數(shù))葉片與葉鞘相接處將針頭傾斜刺入, 即行注射抱子液，以見到心葉上端冒出水珠為度。在誘發(fā)行接種，一般每隔1m 左右選取單莖35個予以注35針。 (2) 銹菌抱子一般多浮于液面，在注射時，必須注意震動。如氣候干旱，接 種前幾天最好先行灌水，以提高田間濕度，有利于銹病抱子萌發(fā)、侵染和發(fā)病。 (3) 接種應選擇晴天、無風或

5、微風，估計夜間有露的那天傍晚進行。為了提 高田間濕度，接種后和開始發(fā)病后，在誘發(fā)行上用清水噴霧，或澆水，保證良好 的誘發(fā)條件。 5.鑒定項目及抗性分極標準衡量小麥品種對銹病的抗性和發(fā)病程度, 常用以下三個指標，即反應型、普遍率及嚴重度。 (1)反應型 是指小麥植株受病菌侵染后的保衛(wèi)性反應?？梢杂眠^敏性壞 死的有無及強弱，夏抱子堆能否形成、生長量的大小、多少來判斷。優(yōu)點是能較 好地反映出品種免疫性的本質(zhì)。目測評定，其反應型可分為6級，其分級標準如 表 12-1 0 *12-1小*品種時反應型的分級標準 級別 抗性程度 1品種反應的癥狀 0 葉片健康*沒有病害癥狀 0 葉片上有點枯死斑利失反應.但

6、無夏抱子堆 1 離抗 葉片夏抱子堆很小且很少.抱子周m有W竦和枯死斑 2 中抗 S抱子堆小到中尊較分有枯死和失綠S應 3 1中 夏抱子堆中等大小較多*周組織無枯死反應怛有失竦現(xiàn)象 4 夏抱子堆大而多連成條紋.審逹試片*早期葉片R無枯死也無S綠理象 (2)普遍率 指病害發(fā)生的普遍程度，即發(fā)病葉片數(shù)占調(diào)查總?cè)~片數(shù)的百 分率。一般用目測估計法觀測記載。要求精確鑒定時，可根據(jù)被鑒定材料小區(qū)面 積的大小，可設(shè)點隨機選取3050片葉觀察記載，并按下式計算: (3)嚴重度 即病葉上抱子堆占葉面積的百分率，用以表示病害發(fā)生的嚴 重程度。理論上講，應將小區(qū)內(nèi)每一片葉都進行統(tǒng)計而后取其平均值。 但實際工 作中，往

7、往因人力不足，而僅采用目測估計法，將發(fā)病葉片總觀后得出結(jié)論。嚴 重度計算公式如下: 度(補皿普勰嚴叫 嚴重度分級標準目前還不統(tǒng)一，但多數(shù)采用7級分級標準（表12-2） 6.病情鑒定在正常情況下，接種后約經(jīng)兩星期即可發(fā)病，抗銹性的病 情鑒定時間是小麥乳熟期以后，田間銹病發(fā)展到高峰時進行。每個品種逐個進行 鑒定記載。鑒定小麥品種的抗銹性應以鑒定反應型為主， 并目測鑒定普遍率和嚴 重率。鑒定雜種后代只鑒定反應型。均按上述分級標準進行評定。 五、實驗作業(yè) 1. 采集條銹病菌新鮮抱子和配制其抱子懸浮液，并按分配任務進行注射 接種和做好接種后的田間管理工作。 2. 發(fā)病盛期對供鑒材料的抗病性進行鑒定，并對

8、抗性進行綜合評價分析。 3. 小麥條銹病發(fā)病條件是哪些？在人工接種時怎樣保證這些條件？接種鑒 定抗性過程中，容易出現(xiàn)哪些問題干擾鑒定結(jié)果 12-2小品種抗ft性嚴A度分級標準 級別 抱子堆占葉面積百分率 0 無抱子堆 1 抱予卓占葉面積徒 2 抱子塔占葉面積6%-10% 3 抱子堆占葉而積11%-25% 4 抱子堆占葉面積26%-40% 5 抱子堆占葉甌積41%-65% 6 子堆占叫面積66% n小麥抗赤霉病的鑒定 、目的 學習和初步掌握小麥赤霉病抗性鑒定技術(shù)。 二、內(nèi)容說明 小麥赤霉病(Gibbrella zeae)主要在淮河以南長江中下游小麥產(chǎn)區(qū)發(fā)生危害, 是該區(qū)的重要病害之一。在病害流行

9、年份，可引起嚴重減產(chǎn)和品質(zhì)變劣，并使受 害麥粒帶有致嘔毒素，對人畜有嚴重毒害作用。 小麥對赤霉病的抗性，至今尚未發(fā)現(xiàn)免疫和高抗的品種，但不同小麥品種的 耐病程度有明顯的差異。因此，選育抗病性較好的品種仍是重要的育種目標之一。 赤霉病是從小麥花器侵入，以穎片內(nèi)殘留的花粉囊為基物進行腐生和發(fā)育, 然后侵入到花的其它部位，甚至整個麥穗。小麥開花期間如果雨水多、相對濕度 在95鳩上、氣溫在20C左右，并有一定菌源時則適宜赤霉病生長而發(fā)病。 小麥 品種抗赤霉病性可分為抗侵入和抗擴展兩種類型。但迄今僅見到抗擴型的，所以 現(xiàn)今是鑒定小麥穗部抗赤霉病擴展的強弱。 小麥抗赤霉病的鑒定方法有自然誘發(fā)鑒定、室內(nèi)人工

10、離體接種鑒定、田間人 工接種鑒定等。 本實驗采用室內(nèi)人工離體接種鑒定和田間人工接種鑒定方法。 三、材料用具 1.材料 若干小麥品種和育種材料、感病對照品種、赤霉病菌菌種。 2.用具 三角瓶、高壓滅菌鍋、搪瓷盆、廣口瓶、燒懷、顯微鏡、載玻 片、蓋玻片、注射器。 四、方法步驟 (一) 室內(nèi)人工離體接種鑒定法 1.供鑒定材料的準備供鑒定的小麥材料要根據(jù)生育期的長短分期播 始花階 種，每個材料一個小區(qū)，設(shè)易感病對照小區(qū)。當供試材料進入抽穗 段，自植株最上一個莖節(jié)的下方剪取麥穗，每個材料約20穗左右，插在盛有清 水的廣口瓶中，離體水培備用。 2.供試菌種的準備 (1)菌種選擇赤霉病菌種宜選擇當?shù)刂虏×?/p>

11、的菌株。 (2)病菌培養(yǎng) 病菌培養(yǎng)采用麥粒培養(yǎng)基，先將麥粒用清水洗凈，倒入三 角瓶(約占2/3)，加水少量(麥粒與水之比為4:1)，塞上棉塞，再用牛皮紙包住 棉塞，在1.5磅咼壓消毒鍋中火菌30分鐘。冷卻后，在無菌操作條件下接種赤 霉病少許于麥粒上，置于25C恒溫箱中培養(yǎng)。待紅色菌絲長滿麥粒表層時，搖 動三角瓶，繼續(xù)培養(yǎng)，直至全部麥粒長滿菌絲后，倒入搪瓷盆內(nèi)，用蒸餾水洗去 菌絲，將麥粒平鋪于搪瓷盆中，蓋上兩層紗布保濕，以便形成子囊殼和子囊抱子。 3. 抱子懸浮液的配制將長滿子囊抱子殼和子囊抱子的麥粒用蒸餾水洗 下子囊抱子，經(jīng)兩層紗布過濾，然后取一滴菌液置100倍顯微鏡下觀察，每個視 野以152

12、0個抱子為宜，即可用于接種。 4. 定量定位單一花內(nèi)塞放浸菌液紙片接種或單花注射接種，但前者保 濕性好，工作簡便，效果可靠。 選擇麥穗中一個小穗的第一小花或第二小花，在單一小花內(nèi)塞放浸漬菌液紙 片接種或用注射器吸取配制好的抱子懸浮液，進行定量(0.5ml)注射接種。然后, 置于20C左右的保溫、保濕箱(或塑料袋)內(nèi)24小時，在20C左右的條件下光照 培養(yǎng)，經(jīng)常噴水保濕。 5. 病情鑒定和分級標準目前尚無統(tǒng)一方法，本實驗按6級分級標準進 行。 接種后8天左右，對接種的全部麥穗進行病情鑒定。小麥抗赤霉病的分級標 準是根據(jù)病原菌從一個接種小穗侵入后， 進一步侵入小穗軸、主穗軸的程度進行抗性鑒定，共分

13、6級，分級標準見表12-3。 （二）田間人工接種鑒定法此法基本上與室內(nèi)人工接種法相似，即在大 批待鑒定材料抽穗前57天，將長滿子囊殼和子囊抱子的麥粒均勻地撒在麥地 土表（或在開花期直接向待鑒材料麥穗噴灑病菌抱子懸浮液 ），每畝施用帶菌麥粒 3kg左右。如遇干旱，接種麥田須灌水，或用噴灌裝置，每天早晚噴水兩次，促 使發(fā)病。 當易感品種病害癥狀明顯表現(xiàn)時，根據(jù)發(fā)病小穗占整個麥穗面積的多少，將 病情分為5級（表12-4），進行病情鑒定。 12-3小赤內(nèi)人工ft種病1W分級梅準 級別 3 32 3.4 王6 3.8 4 5 發(fā) 情 況 棲喬h花不發(fā)辭 接種小花Xrt.不護到小軸 漫人小軸,S個小a發(fā)怛

14、不擴展到主紬 悝人小軸接特小的上、下小劇釈保接種小11以上的不闕 接種小fliw近1個小發(fā)搐 接種小近2個小發(fā)1 接韓小近3個小tt發(fā)嵌 近4亍小越發(fā) 接種小上的部位謂桔但墓部還有未發(fā)輔的小 擴至全瀾桔 =? Ml _ 表12Y小麥赤（田閻人工樓種病1分級標準 a別 岌購小tt占麥面積 0 無輸 t 發(fā)小占全 1皿以下 2 發(fā)癘小穗占全 1/4-1/2 1 發(fā)病小#占全 1/2-3/4 4 發(fā)小占全引4喙上 （三）病情計算按下列公式計算發(fā)病率和病情指數(shù) 發(fā)病率X 00*% 病悄指松腫 五、實驗作業(yè) 1.分組配制抱子懸浮液，進行小麥抗赤霉病性的接種鑒定。 2.根據(jù)鑒定結(jié)果評價分析不同品種的小麥赤

15、霉病的抗性。 沁園春雪 北國風光, 千里冰封, 里雪飄。 望長城內(nèi)外, 惟余莽莽; 大河 頓失滔滔。 將軍向?qū)?，性行淑均，曉暢軍事，試用于昔日，先帝稱之曰能”，是以眾議舉寵為督: 山舞銀蛇，原馳蠟象，欲與天公試 比高。 須晴日，看紅裝素裹，分外妖嬈。 江山如此多嬌，引無數(shù)英雄競折腰 惜秦皇漢武，略輸文采; 祖，稍遜風騷。 唐宗宋 一代天驕，成吉思汗, 大雕。 只識彎弓射 俱往矣，數(shù)風流人物, U .克 還看今朝。 出師表 兩漢：諸葛亮 此誠危急存亡之秋也。然侍衛(wèi)之臣 先帝創(chuàng)業(yè)未半而中道崩殂， 今天下三分，益州疲弊， 不懈于內(nèi)，忠志之士忘身于外者，蓋追先帝之殊遇，欲報之于陛下也。誠宜開張圣聽，以

16、光 先帝遺德，恢弘志士之氣，不宜妄自菲薄，引喻失義，以塞忠諫之路也。 宮中府中，俱為一體；陟罰臧否，不宜異同。若有作奸犯科及為忠善者，宜付有司論其 刑賞，以昭陛下平明之理；不宜偏私，使內(nèi)外異法也。 侍中、侍郎郭攸之、費祎、董允等，此皆良實，志慮忠純，是以先帝簡拔以遺陛下：愚 以為宮中之事，事無大小，悉以咨之，然后施行，必能裨補闕漏，有所廣益。 愚以為營中之事，悉以咨之，必能使行陣和睦，優(yōu)劣得所。 親賢臣，遠小人，此先漢所以興隆也； 親小人，遠賢臣，此后漢所以傾頹也。 先帝在時, 每與臣論此事，未嘗不嘆息痛恨于桓、 靈也。侍中、尚書、長史、參軍，此悉貞良死節(jié)之臣, 愿陛下親之、信之，則漢室之隆，可計日而待也U。 臣本布衣，躬耕于南陽，茍全性命于亂世，不求聞達于諸侯。先帝不以臣卑鄙，猥自枉 屈，三顧臣于草廬之中，咨臣以當世之事，由是感激，遂許先帝以驅(qū)馳。后值傾覆，受任于 敗軍之際，奉