生物化學名詞問答

1、名詞解釋1. 等電點聚焦：在一定pH梯度電泳場中，蛋白質遷移到其等電點pH處并停止移動的現象。2. Cloning：即無性繁殖，是使重組外源基因載體（如質粒）轉入宿主細胞，并隨著宿主細胞繁殖而不斷復制的過程。3次3. 外顯子：真核生物DNA轉錄并經過剪接后，被保留的RNA所對應的DNA序列。4. 積累反饋抑制：產物積累到一定濃度后對酶活性的抑制作用。5. 別構調節(jié)（Allosterie regulation）：通過酶的別構效應而實現對酶活性的調節(jié)。6. “Salting-in”of protein(蛋白質鹽溶)：在一定電解質濃度范圍內，蛋白質溶解度隨著電解質濃度增加而增加的現象。7. Allo

2、steric effect(別、變構效應)：是指變構劑接合酶的非活性位點（即變構點），導致酶或蛋白質構象變化，并進而影響酶或蛋白質的作用活性的現象。3次8. Structural genes(結構基因)：是一類能表達成蛋白質或RNA的基因，它與處于上游的操縱子和啟動子共同構成操縱子區(qū)域。9. PCR(Polymerase chain reaction聚合酶鏈式反應)：是以DNA聚合酶在體外擴增DNA片段技術，經歷DNA變性、退火、聚合酶催化DNA鏈的延伸等三個步驟周而復始的過程。3次10. Conformation(構象)：在分子中由于共價單鍵的旋轉以及鍵角有一定的柔性所表現出的原子或基團的不

3、同空間排布叫構象。構象的改變不涉及共價鍵的斷裂和重新組成，也沒有光學活性的變化。11. Subunit(亞基)：是指蛋白質四級結構中具有三級結構的球蛋白，是組成蛋白質四級結構最小的共價單位。它可以由一條肽鏈組成，也可以由幾條肽鏈通過二硫鍵鏈接在一起組成。亞基之間靠次級鍵連接。12. Holoenzyme(全酶)：是酶的一種，由酶蛋白與輔助因子（包括金屬離子及有機化合物）結合所形成的復合物，即全酶=酶蛋白+輔助因子。13. Glycolysis(糖酵解)：是指葡萄糖或糖原在無氧（或氧氣不足）的情況下經過一系列反應分解形成2分子丙酮酸并提供少量能量（凈生成2分子ATP）的過程。14. Operon

4、(操縱子)：是指原核生物在轉錄水平上控制基因表達的協調單位，它們有共同的控制區(qū)和調節(jié)系統，具體模型是由調節(jié)基因、啟動子、操縱基因以及在功能上彼此相關的幾個結構基因組成。15. Open reading frame(開放讀碼礦)：是指DNA或RNA序列中一段不含終止密碼子的連續(xù)的非重疊核苷酸密碼。16. Ligand(配體)：被受體識別并與之結合的生物活性分子稱為配體。包括激素、神經遞質、細胞粘著分子等內源性配體和藥物、毒素、抗原和病原體等外源性配體。配體可以是任何一種分子。2次17. Subunit of protein(蛋白質亞基)：具有四級結構的蛋白質分子中，每條具有三級結構的多肽鏈單位稱

5、為亞基或亞單位，該亞基即為蛋白質亞基。18. Active site(活性中心)：是指酶分子中直接與底物結合并催化底物反應的部位，通常處于或靠近酶分子的表面，只占酶分子很小部分。酶的活性中心是一個三維實體，具有柔性或可運動性。19. Coenzyme(輔酶)：是指與脫輔酶(酶蛋白)結合比較松弛的小分子有機物質，通過透析的方法可以與酶蛋白分開，如輔酶、輔酶。20. Hydrophobic interaction(疏水作用)：在水介質中球狀蛋白質的折疊總是傾向于把疏水殘基埋藏在分子的內部，這一現象被稱作疏水作用。它在穩(wěn)定蛋白質的三級結構方面有突出地位。21. Structural polysacc

6、harides(結構多糖)：某些多糖，如纖維素和幾丁質，可構成植物或動物骨架等細胞結構，來實行一定的功能即為結構多糖。22. Simple diffusion(單純擴散、簡單擴散)：不帶電荷和水溶性的小分子(如H2O、O2、CO2、尿素、乙醇等)以自由擴散的方式從膜的一側通過細胞質膜進入膜另一側的過程，其結果是分子由濃度高的一側向濃度低的一側轉運。被動擴散的一種，其過程不需要提供能量和載體。23. Motif(模體)：肽鏈折疊中形成的二級結構組成方式，有3種基本組合形式：、。蛋白質分子中的一些二級結構單元往往有規(guī)則地聚集在一起形成全-螺旋、全-折疊片或-螺旋與-片層混合的超二級結構的基本形式。

7、24. Quaternary structure of protein(蛋白質四級結構)：蛋白質的四級結構是指亞基的種類、數目以及各個亞基在寡聚蛋白中的空間排布和亞基之間的相互作用。有許多蛋白質是由兩個或兩個以上的具有獨立三級結構的亞基通過一些非共價鍵彼此締合而成的聚集體，這些亞基的結構可以是相同的也可以是不同的。締合形成聚集體的方式構成蛋白質的四級結構。25. Site-directed mutagenesis(定點誘變)：是指按照設計的要求，使基因的特定序列發(fā)生插入、刪除、置換和重組等變異，它是基因工程的一項關鍵技術。目前常用的方法有：在酶切位點插入、刪除和置換序列，用寡核核苷酸指導的誘變

8、和PCR誘變。26. Specific activity of enzyme(酶的比活力)：是指每mg酶蛋白具有的酶活力單位，一般用U/mg蛋白表示或用Katal/mg蛋白表示。它可以用來比較每單位質量酶蛋白的催化能力。27. Ribozyme(核酶)：是指具有(自身)催化剪接作用的RNA，它催化RNA自身內含子切除和外顯子的連接。按作用底物的不同可分為催化分子間和分子內的核酶。28. Neutral lipids(中性脂)：是指整個脂肪分子的偶極矩接近零,易溶于丙酮等極性小的有機溶劑,而不溶于水的脂類物質，是固、液態(tài)的?；视偷慕y稱。29. Gene expressiom(基因表達)：基因表

9、達是指細胞在生命過程中，把儲存在DNA順序中遺傳信息經過轉錄和翻譯，轉變成具有生物活性的蛋白質分子。30. Cofactor(輔因子)：是指全酶中脫輔酶所結合的一些對熱穩(wěn)定的非蛋白質小分子物質或金屬離子，根據其與脫輔酶結合的松緊程度不同可分為輔酶和輔基兩類。31. Hydrogen bonding(氫鍵)：是氫原子與兩個電負性強的原子(如F、O、N)相結合而形成的弱鍵。氫原子與一個電負性強的原子以共價結合后，還可以與另一個電負性強的原子產生靜電吸引作用，這樣的作用即為氫鍵。它是維持蛋白質二級結構穩(wěn)定的主要作用力，具有兩個特征：方向性和飽和性。32. Domain(結構域)：也指功能域，在較大的

10、蛋白質分子或亞基中，多肽鏈往往有兩個或兩個以上相對獨立的三維實體，締合而成三級結構，三維實體之間靠松散的肽鍵連接，這種相對獨立的三維實體稱為結構域。它是球狀蛋白的折疊單位。33. Super-secondary structure of protein(蛋白質超二級結構)：是指蛋白質二級結構單元-螺旋股和-折疊股，相互聚集形成有規(guī)律的更高一級的但又低于三級結構的結構?，F已知的超二級結構有三種基本組合形式：、。在蛋白質分子中特別是在球狀蛋白質分子中經常可以看到由若干相鄰的二級結構元件(主要是螺旋和折疊片)組合在一起，彼此相互作用，形成種類不多的、有規(guī)則的二級結構組合或二級結構串，在多蛋白質中充當

11、三級結構的構件，稱為超二級結構。34. Restiction enzyme mapping(限制酶譜)：描述限制性內切酶的酶切點的位置和距離信息的圖譜。限制性內切酶位點在DNA鏈上的定位，表示酶的特異識別序列在DNA鏈上出現的頻率和它們之間的相對位置。同一DNA用不同的限制酶進行切割從而獲得各種限制酶的切割位點，由此建立的位點圖譜有助于對DNA的結構分析。35. Specificity of enzyme(酶的專一性)：是指酶對催化反應和反應物有嚴格的選擇性，分為結構專一性和立體異構專一性。酶往往只能催化一種或一類反應，作用于一種或一類物質。36. snRNA(核內小RNA)：是真核生物轉錄后

12、加工過程中RNA剪接體的主要成分，參與mRNA前體的加工過程。細胞核內存在許多種類的小分子RNA，其大小在100300個核苷酸，稱為snRNA。37. Storage lipids(貯存脂質)：包括三酰甘油和蠟，是生物體內能量儲存的主要形式。38. Prothetic group(輔基)：是指以共價鍵和酶蛋白相結合的輔助因子，不能通過透析除去，需要經過一定的化學處理才能與酶蛋白分開，如丙酮酸氧化酶中的FAD，就屬于輔基。39. Singel-nucleotide polymorphism(單核苷酸多態(tài)性)：是指在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性，它是人類可遺傳的變異中最常

13、見的一種?；蛏弦粋€核苷酸的變異，可以引起DNA序列的多種變化。40. Carbon metabolism(碳代謝)：碳單位各成分從一種化合物轉移到另一化合物或相互轉變的代謝過程。41. Respiration(呼吸作用)：生物體內的有機物在細胞內經過一系列的氧化分解，將釋放出的電子交給NAD(P)+,FAD或FMN等電子載體，再經電子傳遞系統傳給外源電子受體從而生成水或其他還原型產物并釋放出能量的過程。42. DNA library(DNA文庫)：即某一特定來源DNA通過細胞-DNA克隆技術構建成含有所用DNA片段的重組DNA分子，并轉化至細菌內，構成DNA文庫?？煞譃榛蚪MDNA文庫和cD

14、NA文庫。43. Passive diffusion(被動擴散)：脂溶性物質從高濃度側向低濃度側，即順濃度梯度擴散通過有類脂層屏障的生物膜的方式。被動擴散包括促進擴散（協助擴散）和自由擴散，而促進擴散需要相應的載體。44. Polysccharide(多糖、多聚糖)：由許多單糖分子或其衍生物縮合而成的高聚物稱為多糖，它是一個分子多聚糖水解時能生成10個分子以上單糖的糖。分為同多糖和雜多糖。45. Genome(基因組)：是指存在于細胞或病毒中的所有基因，或特定生物體的整套(單倍體)遺傳物質的總和。46. Feedback regulation(反饋調節(jié))：指由受控部分發(fā)出的反饋信息返回到控制部

15、分，不斷糾正和調整控制部分對受控部分的影響的調節(jié)作用，在生物化學中通常指一個代謝反應的終產物或某些中間產物對生化反應關鍵酶的影響。47.增強子(enhancer)主要存在于真核生物基因組中，是一種順式作用元件，它能極大的促進啟動子的轉錄活性，其作用特點有:能在很遠距離對啟動子產生影響；無論位于啟動子上游還是下游都能發(fā)揮作用；其功能與序列取向無關；無生物種屬特異性；受發(fā)育和分化的影響。48.受體(receptor)是指位于細胞膜上、細胞質或細胞核中能與來自胞外的生物活性分子專一結合并將其帶來的信息傳遞給效應器，從而引起相應生物學效應的生物大分子。49.構型(configuration)原子在空間

16、相對分布或排列稱為分子的構型。50.不對稱碳原子(asymmetric carbon atom)指四個不同的原子或原子基團共價連接并因而失去對稱性的四面體碳，又稱手性碳原子、手性中心、不對稱中心。51.isoionic point(等離子點)在沒有其他鹽類干擾時，蛋白質子供體基團解離出來的質子數與質子受體基團結合的質子數相等時的pH。1.胰蛋白酶只專一水解賴氨酸或精氨酸羧基形成的肽鍵，胰凝乳蛋白酶專一水解由芳香氨基酸或帶有較大非極性側鏈的氨基酸羧基形成的肽鍵，彈性蛋白酶專一水解丙氨酸、甘氨酸及短脂肪鏈氨基酸羧基形成的肽鍵，胃蛋白酶水解芳香族或其他疏水氨基酸的羧基或氨基形成的肽鍵。蛇毒磷酸二酯酶

17、從多核苷酸鏈的3端開始，逐個水解下5-核苷酸。牛脾磷酸二酯酶則相反，從5端開始，逐個水解下3-核苷酸。2.糖肽鍵有N-糖肽鍵和O-糖肽鍵。N-糖肽鍵是指-構型的N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)異頭碳與天冬酰胺的-?；鵑原子共價連接。O-糖肽鍵主要是N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)與絲氨酸或蘇氨酸縮合形成的。N-糖肽鏈(N-聚糖)共同的結構花式為核心五糖，也稱三甘露糖基核心:Man 16(Man 13)Man 14GlcNAc 14GlcNAc。3.SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定相對分子質量。蛋白質顆粒在聚丙烯酰胺凝膠中電泳時，遷移率決定于蛋白質的靜電荷以及分子大小和性狀等。加入陰離子去污劑十二

18、烷基磺酸鈉和少量巰基乙醇，則蛋白質分子的電泳遷移率主要取決于它的相對分子質量，而與原來帶電荷和性狀無關。巰基乙醇可以打開二硫鍵，使單體蛋白或亞基多肽鏈處于伸展狀態(tài)，與SDS結合形成復合體，由于SDS所帶電荷遠遠超過蛋白質所帶電荷，因而掩蓋了不同蛋白質間電荷的差異。根據電泳遷移速率與分子量的關系方程lgMr=K1K2R(R為遷移速率K為常數)，即可的出蛋白質的分子量。4.三羧酸循環(huán)中的脫氫作用:丙酮酸脫氫作用:丙酮酸脫羧酶復合體E1催化，以TPP為輔基。首先帶負碳離子的TPP(發(fā)生在噻唑環(huán))進攻丙酮酸帶正電性的羰基碳形成丙酮酸-TPP，緊接著丙酮酸-TPP加成脫羧形成羥乙基-TPP，羥乙基氧化轉

19、變成乙?；瑫r轉移到E2的輔基硫辛酰胺上，E2將乙?；D移到CoA-SH分子上形成游離的乙酰-CoA。異檸檬酸脫氫作用。由異檸檬酸脫氫酶催化，它以NAD+為輔酶，異檸檬酸為-羥基，輔助因子NAD+作為氫受體使-羥酸氧化為-酮酸即草酰琥珀酸。位于異檸檬酸-碳原子上的羥基轉變?yōu)橥Ｍ男纬纱偈沽肃徑麮-C鍵的斷裂，從而引起脫羧-酮戊二酸脫氫作用。由-酮戊二酸脫氫酶催化，反應需要NAD+和CoA作為輔助因子。脫氫作用與丙酮酸脫氫機制相一致。琥珀酸脫氫作用。由琥珀酸脫氫酶催化，以FAD作為輔基，琥珀酸的兩個中間碳原子進行C-C鍵氧化各脫掉一個氫原子形成反式的丁烯二酸又稱為延胡羧酸，因其碳碳鍵氧化釋

20、放的能量不足以使脫下的電子轉移到NAD+上，因此FAD最適作為該反應的輔基。蘋果酸脫氫作用。由蘋果酸脫氫酶催化，以NAD+輔酶，蘋果酸的羥基被氧化形成羰基生成草酰乙酸，羥基脫下的氫負離子定向的轉移到NAD+。該反應在熱力學上不利為吸熱反應，但由于草酰乙酸與乙酰-CoA縮合反應是高度的放能反應，因此反應得以進行。三羧酸循環(huán)的調節(jié):其本身的制約系統調節(jié)。檸檬酸循環(huán)中有三種關鍵酶:檸檬酸合酶、異檸檬酸脫氫酶和-酮戊二酸脫氫酶。檸檬酸酸循環(huán)中的酶活性主要靠底物提供的情況推動，并受其生成產物濃度的抑制，最關鍵的底物是乙酰-CoA、草酰乙醛和產物NADH。ATP、ADP和Ca+對檸檬酸循環(huán)的調節(jié)。檸檬酸循

21、環(huán)是產能的主要途徑，ATP水解伴隨ADP濃度的增加，ADP是異檸檬酸脫氫酶的變構促進劑，從而增加該酶對底物的親和力。Ca+刺激糖原的降解、啟動肌肉收縮，間接的對檸檬酸循環(huán)起調節(jié)作用，它還對丙酮酸脫氫酶磷酸酶、異檸檬酸脫氫酶和-酮戊二酸脫氫酶起激活作用。檸檬酸循環(huán)的步驟:草酰乙酸與乙酰-CoA縮合形成檸檬酸，由檸檬酸合酶催化。檸檬酸異構化形成異檸檬酸，由烏頭酸酶催化。異檸檬酸氧化形成-酮戊二酸，由異檸檬酸脫氫酶催化，產生一分子NADN和二氧化碳。-酮戊二酸氧化脫羧形成琥珀酸-CoA，由-酮戊二酸脫氫酶催化，同時產生1分子NADH和CO2。琥珀酸-CoA轉化成琥珀酸并產生一個高能磷酸鍵GTP，由琥

22、珀酰-CoA合成酶催化。琥珀酸脫氫生成延胡索酸，由琥珀酸脫氫酶催化，同時產生1分子FADH2。延胡索酸水合形成L-蘋果酸，延胡索酸酶。L-蘋果酸脫氫形成草酰乙酸，由蘋果酸脫氫酶催化，產生一分子NADH。5.高等植物和藍細菌中以非循環(huán)光合磷酸化裂解水提供細胞合成還原力。由光合系統和光合系統串聯方式作用。光合系統中葉綠素分子P700吸收光子后被激活，釋放出一個高能電子傳遞給鐵氧還原蛋白(Fd)，使其被還原。還原的鐵氧還蛋白在Fd:NADP+還原酶的作用下，將NADP+還原為NADPH。用以還原P700的電子來源于光合系統。在光合系統中，葉綠素分子P680吸收光子后，釋放出一個高能電子，高能電子先傳

23、遞給輔酶Q，再傳給光合系統使P700還原。失去電子的P680靠水的光解產生的電子補充。高能電子從輔酶Q到光合系統的過程可推動ATP的合成?？偡磻匠倘缦? 2NADP+2ADP2Pi2H2O 2NADPH2H+2ATPO2光合細菌中只含有一個光合作用中心，以循環(huán)光合磷酸化生成ATP，它由循環(huán)電子流引起，無NADPH產生，也無O2釋放，因為它不涉及PS。6.雙向電泳是等電點聚焦電泳和SDS-PAGE的組合，即先進行等電點聚焦電泳(按照pI分離)，然后再進行SDS-PAGE(按照分子大小)，經染色得到的電泳圖是一個二維分布的蛋白質圖。SDS-PAGE基本操作步驟SDS-聚丙烯酰胺凝膠制備加樣電泳染

24、色觀察。7.CO2的固定途徑有卡爾文循環(huán)和還原性三羧酸循環(huán)。其中主要為卡爾文循環(huán)，參與其反應的最重要關鍵酶是核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶(ribulose-1,5-biphosphate簡寫為Rubisco/RuBP)，它是二氧化碳固定的受體，活性中心有Mg+，并可被光激活，此外果糖-1,6-二磷酸酶可以是Calvin循環(huán)中的限速步驟。葉綠體中CO2固定的調節(jié):葉綠體基質的pH改變還原力的產生Mg+從類囊體腔外流。當有可用的光能用以產生CO2固定所需的ATP和NADPH時循環(huán)就運行。糖酵解、三羧酸循環(huán)、氧化磷酸化、磷酸戊糖途徑以及己糖磷酸途徑可以和Calvin循環(huán)聯系。大致步驟可分為3個階段:

25、CO2的固定。在Rubisco羧化酶活性作用下CO2和它的受體結合生成不穩(wěn)定的中間物，然后裂解成2分子3-磷酸甘油酸。3-磷酸甘油酸還原。它被還原成丙糖磷酸，甘油醛-3-磷酸。RuBP在生。RuBP(核酮糖-1，5-二磷酸)是循環(huán)的起始物，CO2的受體，必須不斷再生才能維持循環(huán)的繼續(xù)。8.化學滲透假說認為電子傳遞的自由能驅動氫離子從線粒體基質跨過內膜進入到膜間隙，從而形成跨線粒體內膜的氫離子電化學梯度，這個梯度的電化學電勢(electrochemical potential)驅動ATP合成。1,3-二硝基苯酚是氧化磷酸化的解偶聯劑，在中性環(huán)境下以解離的形式存在不能透過膜，而在酸性環(huán)境下接受質子

26、同時將一個質子帶入膜內導致內膜對H+的通透性增加，破壞了跨膜質子梯度，使電子傳遞與ATP形成兩個過程分離。9. 構建表達載體的基本步驟 引物設計目的基因(CDS區(qū)）的克隆目的基因進行酶切質粒進行酶切線性化，電泳，膠回收純化模板與線性化質粒連接轉化到大腸桿菌DH5(感受態(tài)菌)。鑒定(PCR,測序,酶切)將表達載體導入表達菌株?；蚬こ滩僮鞑襟E:通過人工切割并分離或人工合成以獲得目的基因。改造作為載體的DNA，如質粒DNA。把外來的DNA片段與載體DNA在體外重組。重組的DNA分子引入受體細胞。目的克隆的篩選與鑒定，從大量細胞中篩選增殖的受體細胞，使外來基因在受體細胞正確表達。cDNA文庫構建基本

27、步驟:制備mRNA，合成cDNA，制備載體DNA，雙鏈cDNA的分子克隆，對構建的cDNA文庫進行鑒定，測定文庫包含的克隆數，抽查克隆質量和異質性，如果需要可適當擴增?？寺≥d體的宿主細胞要求:易于接受外源DNA，為感受態(tài)。宿主細胞沒有限制酶。宿主細胞沒有重組能力。應易于生長和篩選，克隆載體的選擇標志必須與之匹配。符合安全標準。10.異養(yǎng)生物電子傳遞鏈: 黃素蛋白中的FADH2 琥珀酸-Q還原酶(復合體)NADHNADH-Q還原酶(復合體)輔酶Q細胞色素還原酶(復合體(CytbCytc1)細胞色素c細胞色素氧化酶(復合體(Cytaa3)O2 。植物或藍細菌光合磷酸化電子傳遞鏈: 光 H+從基質釋

28、放到腔內 光 H2O錳串P680P680*,Pheo,PQA,PQBPQ細胞色素復合體b6f PC P700 P700*，A0，A1，Fe-SX，Fe-SA，Fe-SB Fd Fp(FAD) (詳見真題或下冊212頁)11.紫外分光光度計測蛋白質是否被核酸污染以及核酸是否被蛋白質污染:280 nm和260 nm的吸收差法。核酸對紫外光有很強的吸收，在280 nm處的吸收比蛋白質強10倍(每克)，但核酸在260 nm處的吸收更強，其吸收高峰在260 nm附近。核酸260 nm處的消光系數是280 nm處的2倍；而蛋白質則相反，其280 nm的紫外吸收值大于260 nm的吸收值。通常： 純蛋白質的

29、光吸收比值：A280/A260 1.8 如果比值小則說明受到核酸污染。純核酸的光吸收比值：A280/A260 0.5。純DNA的A260/A280比值為1.8，純RNA為2.0，如果比值低，表示受到蛋白(芳香族)或酚類物質的污染，需要純化樣品。12.蛋白質測序策略:測定蛋白質分子中多肽鏈的數目拆分蛋白質分子中的多肽鏈斷裂多肽鏈內的二硫鍵測定每一多肽鏈的氨基酸組成鑒定多肽鏈的N末端和C末端殘基斷裂多肽鏈成較小的肽段測定各個肽段的氨基酸順序確定肽段在多肽鏈中的順序，利用重疊肽重建完整多肽鏈的一級結構確定多肽鏈中的二硫鍵的位置。分離純化某一特定蛋白質的一般程序:前處理，把蛋白質從原來組織或細胞中以溶

30、解的狀態(tài)釋放出來，并保持原來天然狀態(tài)和生物活性，一般通過細胞破碎，方法有超聲波破碎、砂研磨、高壓擠壓或溶菌酶處理。粗分級分離，獲得提取液之后，選擇一套適當方法將所要的蛋白質與其他雜蛋白分離開，一般方法有鹽析、等電點沉淀和有機溶劑分級分離等。細分級分離，進一步純化，一般用層析法包括凝膠過濾、離子交換層析、吸附層析以及親和層析等。結晶，使蛋白質處于過飽和狀態(tài)，然后適當控制溫度、加鹽鹽析、加有機溶劑或調pH值等方法達到結晶條件。結晶中不發(fā)生變性，接入晶種可加速結晶過程，重結晶可進一步純化。蛋白質的純度鑒定通常采用分辨率高的物理化學方法，例如PAGE、等電點聚焦、毛細管電泳、沉降分析和HPLC等。如果

31、制品是純的，在這些分析譜上只呈現一個峰或一條帶。13.脂肪酸合成。乙酰-CoA是脂肪酸分子所有碳原子的唯一來源，它來自糖的氧化分解或氨基酸的分解。這些過程是在線粒體中進行的，但脂肪酸合成卻在細胞溶膠中，因此細胞必須把乙酰-CoA借助檸檬酸-丙酮酸循環(huán)自線粒體轉移到細胞溶膠中。脂肪酸對生物體有四種重要功能:是磷脂和糖脂的組成單元，這些分子又是生物膜的組成成分它與糖蛋白的蛋白質共價連接，經修飾的糖蛋白在脂肪酸殘基的引導下指向膜的靶標位置脂肪酸是燃料分子，是單位質量含能量最多的儲能物脂肪酸的某些衍生物擔當著激素及胞內信使的職能，所以必須合成脂肪酸。脂肪酸合成步驟:啟動:乙酰-CoA經乙酰-ACP轉化

32、為乙酰-合酶。裝載:丙二酰-CoA轉化為丙二酸單酰ACP。縮合:乙酰合酶與丙二酸單酰ACP縮合形成乙酰乙酰-ACP。還原:將乙酰乙酰-ACP還原為-羥丁酰-ACP。脫水:將-羥丁酰-ACP脫水為，-反式-丁烯酰-ACP。還原:將，-反式-丁烯酰-ACP還原生成丁酰-ACP。至此，每一循環(huán)脂肪鏈延長了兩個碳原子，如此反復循環(huán)進行，例如生成16個碳的軟軟脂酰-ACP。實行釋放:軟脂酰-ACP水解，生成軟脂酸。14.許多物質代謝最終都可形成乙酰-CoA，例如葡萄糖、丙酮酸、乙醛、乙酸及脂肪酸等。乙酰-CoA的產生途徑:糖酵解產生的丙酮酸在進入三羧酸循環(huán)之前，氧化脫羧生成乙酰-CoA。脂肪酸的-氧化一

33、次脫下兩個碳原子形成乙酰-CoA。氨基酸轉氨基生成丙酮酸進而形成乙酰-CoA，生酮氨基酸轉變?yōu)橐阴Ｒ阴?CoA形成乙酰-CoA，氨基酸直接形成乙酰-CoA。乙酰-CoA的去路:乙酰-CoA進入三羧酸循環(huán)徹底氧化分解產生能量，合成ATP。乙酰-CoA在胞質中參與脂肪酸的合成，作為膽固醇的前體生成膽固醇。乙酰-CoA轉移?；鶇⑴c氨基酸的合成。轉化為乙酰乙酸生成酮體，氧化供能。脂肪酸的-氧化:活化，脂肪酸在硫激酶(又稱脂酰輔酶A合酶)作用下形成脂酰-CoA。脂酰-CoA的氧化，羧基鄰位被脂酰-CoA脫氫酶作用，脫下2個氫轉化為反式2-烯酰-CoA，同時產生FADH2。水合，反式2-烯酰-CoA水合形

34、成3-羥脂酰-CoA，由烯酰-CoA水合酶催化。氧化，L-3-羥脂酰-CoA在L-3-羥脂酰-CoA脫氫酶作用下脫氫轉化為3-酮脂酰-CoA，并產生NADH。3-酮脂酰-CoA受第二個CoA作用發(fā)生硫解，斷裂為乙酰-CoA和一個縮短了2和碳原子的脂酰-CoA，由-酮硫解酶作用。縮短了的脂酰-CoA又進入下一輪的-氧化，直到全部變?yōu)橐阴?CoA。15.體外獲得克隆DNA方法，聚合酶鏈式反應(PCR)?；静襟E:選出將要擴增的DNA片段(人工分離或合成)設計DNA片段兩端的引物，并盡量減少可能產生的非特異產物。優(yōu)化反應體系，以便獲得更好的擴增效果。體系包括適量的模板、4種dNTP、TapDNA聚合

35、酶和適量Mg離子。選擇3個溫度進行熱循環(huán)。3個溫度分別為:變性94。C，4560秒；退火1min，溫度根據引物與模板的Tm值來決定，一般為兩引物中較低的Tm值減2，即退火的溫度約比引物變性溫度低23度；延伸，72。C，1min；熱循環(huán)2530周期，最后延伸10min。擴增完后，取出一定量反應產物，檢測擴增結果。體內獲得克隆DNA方法，重組噬菌體載體克隆DNA。獲得克隆的目的DNA片段，選擇噬菌體載體并制取噬菌體DNA，用限制酶切除去掉噬菌體DNA中復制和裝配非必須的DNA序列，將外源DNA連接到噬菌體DNA被切去部分的缺口處，形成重組DNA分子，重組DNA分子(含有cos位點)和外殼蛋白在體外

36、進行包裝形成成熟重組噬菌體，用重組噬菌體感染宿主細胞獲得增殖，分離裂解噬菌體，提純DNA，獲得目的克隆?？寺≥d體要求:具有自主復制能力，攜帶有易于篩選的選擇標記，含有多種限制酶單一識別序列，以便外源基因插入，載體應盡可能小，便于導入細胞和進行繁殖，使用安全。16.酶作用的調節(jié)或控制，包括酶活性的調節(jié)和酶含量的調節(jié)。酶的活性調節(jié)除了條件外的影響調節(jié)還包括別構調控、酶原的激活和可逆的共價修飾三種。別構調控是酶分子的非催化部位與某些化合物可逆的非共價結合后發(fā)生構象的變化進而影響酶的活性，典型的例子3-磷酸甘油醛脫氫酶。酶原的激活是體內合成出不具有活性的酶蛋白的前體，經過蛋白酶水解后構象發(fā)生變化形成酶

37、的活性部位，變成活性蛋白。典型的例子如消化系統中的酶原激活的胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶等，還有凝血機制中的凝血酶?？赡娴墓矁r修飾是通過共價調節(jié)酶對酶的多肽鏈上某些基團進行可逆的共價修飾，使酶處于活性與非活性的互變狀態(tài)，從而調節(jié)酶活性。例子如磷酸化酶、腺苷?；?、尿苷?；?、甲基化酶等。通過改變酶的活性進行調節(jié)。通過加入激活劑對酶活性的激活，加入抑制劑來對酶活性的抑制，改變反應條件如調節(jié)pH、溫度等來影響酶的活性。改變酶反應中反應物或者底物的濃度，使酶反應能夠趨向正或者負方向進行反應以此來調節(jié)酶作用。酶作用變化的表征，測定酶反應速度，酶的活力，酶的比活力，酶的Km值，酶的轉換數kcat等。測定方法用

38、米氏方程，或者通過雙倒數作圖法來確定Vmax、Km等參數，進而推算出其他的酶參數。17.瓊脂糖凝膠電泳分離DNA基本步驟:瓊脂糖凝膠的制備，稱取瓊脂糖，加入到0.5TBE溶液中加熱配成1%瓊脂糖凝膠，稍涼后加入幾滴EB倒入凝膠板中凝固。加樣，將DNA樣品加入緩沖液混勻后，用微量移液器依次加入到加樣孔中。電泳，電壓維持在5V/cm，當溴酚藍移動至凝膠陰極約3/4處時停止電泳。染色，用溴化乙錠染色。觀察，在254nm或300nm波長紫外燈下觀察，并照相記錄。(配制緩沖溶液，pH多在69之間，離子強度為0.020.05、制板，常用瓊脂濃度1%1.5%,與等體積預熱之60度的緩沖液混合，制成瓊脂板約為

39、3mm、點樣、電泳、固定和染色，70%酒精配制的2%醋酸溶液固定1520min，烘干)18.腎上腺素、胰高血糖素對糖原的代謝調節(jié)。哺乳動物在遇到危險時，通過大腦皮層產生的興奮，作用于腎上腺，使腎上腺素分泌增加，腎上腺素結合到專一性的-腎上腺素特異受體上觸發(fā)后續(xù)的環(huán)化酶活化。G蛋白與專一的受體偶聯而被活化，將信息傳遞給腺苷酸環(huán)化酶，然后環(huán)化酶催化ATP產生cAMP，再觸發(fā)一系列由cAMP介導的級聯反應。cAMP激活蛋白激酶，蛋白激酶又使磷酸化酶激酶磷酸化而活化，引起肝糖原和肌糖原的分解產生葡萄糖，葡萄糖進入血液提高血糖濃度，為機體提供充足的能量以應對危險的狀況。在饑餓時機體血糖降低可引起胰高血糖

40、素分泌增加，此時細胞內cAMP含量增加，促使有活性的a激酶增加。a激酶一方面使糖原合酶磷酸化失去活性，一方面通過磷酸化酶b激酶使磷酸化酶變成有活性的磷酸化酶a，最終結果是糖原合成減少，分解增加，使血糖升高。胰高糖素主要通過提高靶細胞內cAMP含量達到調節(jié)血糖濃度的目的。細胞內的cAMP可激活依賴cAMP的蛋白激酶，后者通過酶蛋白的共價修飾改變細胞內酶的活性，即激活糖原分解和糖異生的關鍵酶，促進肝糖原分解成血糖，促進糖異生作用。抑制糖原合成和糖氧化的關鍵酶，使血糖升高。低血糖、低氨基酸可刺激胰高血糖素釋放。胰高血糖素主要促進肝糖原的分解，級聯放大作用與腎上腺相同。18.組氨酸電離方程式：19.D

41、NA復制的基本活動包括:雙鏈的解開(解旋的前提下)；RNA引物的合成；DNA鏈的延伸；切除RNA引物，填補缺口，連接DNA片段；切除和修復錯配堿基。20.DNA的損傷修復系統有五種:錯配修復(mismatch repair)、直接修復(direct repair)、切除修復(excision repair)、重組修復(recombination repair)和易錯修復(error-prone repair)。錯配修復系統能夠識別錯配位點以及“新”“舊”鏈，將錯配新鏈切除并加以修復。光復活是直接修復的一種方式，它分解紫外線引起的嘧啶二聚體，但高等哺乳動物沒有。切除修復即是在一系列酶的作用下，將

42、DNA分子中受損傷部分切除掉，并以完整的那一條鏈為模板，合成出切去的部分，然后使DNA恢復正常結構的過程。從同源DNA的母鏈上將相應核苷酸序列片段移至子鏈缺口處，然后用再合成的序列來補上母鏈的空缺的修復稱為重組修復，又叫復制后修復。DNA損傷或抑制復制均能引起一系列復雜的誘導效應，稱為應急反應(SOS)。SOS可反應誘導產生缺乏校對功能的DNA聚合酶，進而導致高錯誤頻率的DNA修復，稱為易錯修復。22.糖異生作用是指以非糖物質作為前體合成葡萄糖的作用。非糖物質包括乳酸、丙酮酸、丙酸、甘油以及氨基酸等。不是糖酵解的逆反應，糖酵解有三步反應不可逆，己糖激酶催化葡萄糖和ATP形成G-6-磷酸和ADP

43、、磷酸果糖激酶催化果糖-6-磷酸和ATP形成果糖-1,6-二磷酸和ADP、由丙酮酸激酶催化的磷酸烯醇式丙酮酸和ADP生成丙酮酸和ATP。糖酵解采用迂回措施:一、丙酮酸通過草酰乙酸形成磷酸烯醇式丙酮酸。通過丙酮酸羧化酶催化消耗一分子ATP，以生物素為輔基，形成草酰乙酸；草酰乙酸在磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶催化下生成磷酸烯醇式丙酮酸。二、果糖-1,6-二磷酸在果糖-1,6-二磷酸激酶催化下其C1位的磷酸酯鍵水解形成果糖-6-磷酸。三、葡萄糖-6-磷酸在葡萄糖-6-磷酸激酶催化下水解為葡萄糖，需Ca離子協同作用。糖異生的調節(jié):葡萄糖、乳酸的濃度，和糖酵解有密切相互協調關系。磷酸果糖激酶和果糖-1,6-二

44、磷酸酶的調節(jié)。丙酮酸激酶、丙酮酸羧化酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶之間調節(jié)。1. 構建基因工程菌的基本過程是什么？答: 1.目的基因的獲取獲取目的基因是實施基因工程的第一步。目的基因的獲取方法主要有兩種：從自然界中已有的物種中分離出來 用人工的方法合成。2.PCR技術擴增目的基因3.基因表達載體的構建基因表達載體的組成：目的基因、啟動子、終止子、標記基因4.將目的基因導入受體菌5.目的基因的監(jiān)測與鑒定2. 怎樣設計一個表達載體？答: 大致步驟為:提取質粒-酶切-連接-導入-控制表達。 表達載體四部分：目的基因、啟動子、終止子、標記基因。常用細菌質粒進行構建，構建過程中運用限制性核酸內切酶切割出與目

45、的基因相合的末端（多為黏性末端，也有平末端），采用DNA連接酶連接，導入生物體實現表達。標記基因可幫助識別質粒并檢測是否成功整合到染色體DNA中。三種最常用的載體是細菌質粒、噬菌體和動植物病毒。必備條件 : 在宿主細胞中能保存下來并能大量復制，且對受體細胞無害，不影響受體細胞正常的生命活動有多個限制酶切點，而且每種酶的切點最好只有一個，如大腸桿菌pBR322就有多種限制酶的單一識別位點，可適于多種限制酶切割的DNA插入含有復制起始位點，能夠獨立復制；通過復制進行基因擴增，否則可能會使重組DNA丟失有一定的標記基因，便于進行篩選。如大腸桿菌的pBR322質粒攜帶氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因

46、，就可以作為篩選的標記基因。一般來說，天然運載體往往不能滿足上述要求，因此需要根據不同的目的和需要，對運載體進行人工改建?，F在所使用的質粒載體幾乎都是經過改建的。載體DNA分子大小應合適，以便操作。 基因克隆的載體類型：質粒載體，噬菌體載體，柯斯質粒載體，M13噬菌體載體，噬菌粒載體。3. 2-D電泳（雙向電泳）關鍵步驟:a. 樣品制備 (蛋白提取)(1) 細胞培養(yǎng)、處理和收集;(2) 將細胞在 IEF 裂解緩沖液中溶解;(3) 將樣品離心以去除不溶的細胞碎片和 DNA，提取上清，-80 保存。b. 蛋白質定量和上樣(1) 固相 PH 梯度干膠條 (Immobi-line PH Gradien

47、t ， IPG) 水化、等電聚焦;(2)IPG的平衡;(3)SDS-PAGE ;(4) 蛋白質檢測：考馬斯亮蘭染色或銀染色。c. 圖像分析及數據處理將染色后的凝膠放在 GS-710 光密度掃描儀上，掃描后的圖像用 PDQUEST 2D 軟件分析，選擇部分匹配的蛋白質斑點進行比較。4. 瓊脂糖凝膠電泳分離DNA基本步驟:1、安裝電泳槽。將有機玻璃的電泳凝膠床洗凈，晾干，用膠帶將兩端的開口封好，放在水平的工作臺上，插上樣品梳。2、瓊脂糖凝膠的制備3、灌膠。將冷卻到60的瓊脂糖溶液輕輕倒入電泳槽水平板上。4、待瓊脂糖膠凝固后，在電泳槽內加入電泳緩沖液，然后拔出梳子。5、 加樣。將DNA樣品與加樣緩沖

48、液按4：1混勻后，用微量移液器將混合液加到樣品槽中，每槽加10-20l，記錄樣品的點樣次序和加樣量。6、電泳。安裝好電極導線，點樣孔一端接負極，另一端接正極，打開電源，調電壓至3-5V/cm，電泳1-3hr，當溴酚藍移到距凝膠前沿1-2cm時，停止電泳。7、染色和觀察。取出凝膠，放在含有溴化乙錠的染色液中染色30min，即可在254nm的紫外燈下觀察，有橙紅色熒光條帶的位置，即為DNA條帶，或在紫外燈下照相記錄電泳圖譜。溴化乙錠是致癌劑，操作時要小心，必須戴手套。5. 蛋白質工程的主要步驟通常包括：（1）從生物體中分離純化目的蛋白；（2）測定其氨基酸序列；（3）借助核磁共振和X射線晶體衍射等手

49、段，盡可能地了解蛋白質的二維重組和三維晶體結構;（4）設計各種處理條件，了解蛋白質的結構變化，包括折疊與去折疊等對其活性與功能的影響；（5）設計編碼該蛋白的基因改造方案，如點突變；（6）分離、純化新蛋白，功能檢測后投入實際使用。英漢名詞上冊carbohydrate 碳水化合物 monosaccharide 單糖 oligosaccharide 寡糖 polysaccharide 多糖 homo/heteropolysaccharide 同/雜多糖 tetrose 丁糖 pentose 戊糖 hexose 己糖 heptose 庚糖 2 octose 辛糖isomerism 異構/同分異構 co

50、nstitution 構造 configuration 構型 chirality 手性 conformation 構象 optical activity 旋光性 asymmetric carbon atom 不對稱碳原子 chiral molecule 手性分子 3 enanthiomer 對映體 projection formula 投影式 perspective formula 透視式tartaric acid 酒石酸 erythrose 赤鮮糖 ribose 核糖 xylose 木糖 glucose 葡萄糖 fructose 果糖mannose 甘露糖 galactose 半乳糖 gly

51、ceraldehyde 甘油醛 7 epimer 差向異構體 mutarotation 變旋 anomer 異頭物 anomeric carbon atom 異頭碳原子 9 pyran 吡喃 furan 呋喃 angle strain 角張力 axial bond 直立鍵 12 aldonic acid 醛糖酸 reducing sugar 還原糖 16 meso compound 內消旋化合物 uronic acid 糖醛酸 sorbose 山梨糖 methylation 甲基化 glycosidic bond 糖苷鍵 19 orcinol 地衣酚 elimination 消去 pectin

52、ose 果膠糖/阿拉伯糖 lactone 內酯 28 glucosamine 葡糖胺 galactosamine 半乳糖胺 muramic acid 胞壁酸 sucrose 蔗糖 mycose 海藻糖 37 gelatinization 糊化 amylose/amylopectin 直/支鏈淀粉 glycogen 糖原 cellulose 纖維素 45 crystallite微晶/膠束 protozoa 原生動物 chitin 幾丁質/殼多糖 peptidoglycan 肽聚糖 51 teichoic acid 磷壁酸 lipopolysaccharide 脂多糖 glycoprotein 糖

53、蛋白 56 tissue 組織 lectin 凝集素 65 glycosaminoglycan 糖胺聚糖 hyaluronic acid 透明質酸 proreoglycan 蛋白聚糖 microheterogeneity 微不均一性 71 Sequencing 測序 infrared spectrum 紅外光譜 mass spectrometry 質譜法 compound lipid 復合脂質 derived lipid 衍生脂質 79 critical micelle concentration/cmc 臨界微團濃度 80 polar head/nonpolar tail 極性頭/非極性尾

54、saturated fatty acid 飽和脂肪酸 sodium dodecylsulfate,SDS 十二烷基硫酸鈉 hydrophobic/hydrophilic 親/疏水 emulsification 乳化 88 acylglycerol ?；视?triglyceride 甘油三酯 neutral fat 中性脂 91 ether linkage 醚鍵 saponification 皂化作用 94 autoxidation 自動氧化 iodine value 碘值 acid value 酸值 free radical 自由基 reactive oxygen 活性氧 97 antiox

55、idant 抗氧化劑 superoxide dismutase,SOD 超氧化物歧化酶 catalase 過氧化氫酶 glutathione peroxidase ,GSHPX 谷胱甘肽過氧化物酶 103 glycerophospholipid/glycerol phosphatide/phosphoglyceride 甘油磷脂/磷酸甘油脂 lecithin 卵磷脂 cephalin 腦磷脂 sphingomyelin 鞘磷脂 glycosphingolipid 鞘糖脂 sulfatide 硫苷脂 109 glycoglyceride 糖基甘油酯 terpene 萜 angular group

56、 角基 113 bile acid 膽汁酸 lipoprotein 脂蛋白 chylomicron remnant 乳糜微粒 Ala,A丙氨酸 Arg,R精氨酸 Asn,N天冬酰胺 Asp,D 天冬氨酸 Cys,C半胱氨酸 Gln,Q谷氨酰胺 Glu,E 谷氨酸 Gly,G甘氨酸 His,H組氨酸 Ile,I異亮氨酸 Leu,L 亮氨酸 Lys,K賴氨酸 Met,M甲硫氨酸 Phe,F苯丙氨酸 Pro,P脯氨酸 Ser,S 絲氨酸 Thr,T蘇氨酸 Trp,W色氨酸 Tyr,Y酪氨酸 Val,V 纈氨酸 histone 組蛋白 sarcosine 肌氨酸 129 donor 供體 dissoc

57、iation 解離 isoelectric point 等電點 133 dinitrophenyl amino acid ,DNP-amino 二硝基苯基氨基酸 137 racemate 消旋物 nuclear magnetic resonance,NMR 核磁共振 145 molar absorptivity 摩爾吸收系數 chromatography 色譜 partition 分配層析 conjugated protein 綴合蛋白 157 monomeric protein 單體蛋白 tertiary structure 三級結構 disulfide bond 二硫鍵 biuret reaction 雙縮脲反應 166 DNFB/FDNB 二硝基氟苯 PITC 苯異硫氰酸酯 carboxypeptidase 縮肽酶 trypsin 胰蛋白酶 chymotrypsin 糜蛋白酶 173 pepsin 胃蛋白酶 diagonal electrophoresis 對角線電泳 179 insulin 胰島素 invariant/variant residue 不變/