實驗2-溴磺酞鈉的藥代動力學(xué)參數(shù)估算

1、實驗二溴磺酞鈉(BSP)的藥代動力學(xué)參數(shù)估算Experiment 2. Estimation of pharmacokinetic parameters of Sodium bromsulphalein(BSP)教材：錢之玉 主編，藥理學(xué)實驗與指導(dǎo)第二版，中國醫(yī)藥科技出版社，2003年實驗內(nèi)容【目的】以溴磺酞鈉（BSP）為例，學(xué)習(xí)估算藥代動力學(xué)參數(shù)的基本方法 【原理】某些藥物，在動物體內(nèi)按一房室模型處置，靜脈注射后，血藥濃度-時間議程為一級動力學(xué)方程，即： 式中k為藥物清除速率常數(shù)，C0為t=0 時的血藥濃度。 上式經(jīng)對數(shù)變換得：即血藥濃度對時間t在半對數(shù)坐標(biāo)紙上呈直線。1、藥理作用 ：本品為

2、診斷用藥。經(jīng)靜脈注射后本品幾乎全部通過肝臟加以清除。當(dāng)肝功能異常時，血漿中磺溴酞鈉（BSP）清除速度減慢。定時抽取血樣，測定血液中BSP含量，觀察其清除速度即可反映肝功能狀況。2、溴磺酞鈉溶液對組織有刺激性，注射時切不可漏出靜脈外，否則可引起局部組織壞死。 有關(guān)藥動學(xué)參數(shù)的求算： 消除速率常數(shù)k=-2.303b（時間-1） 半衰期t1/2=0.693/k（時間） 表觀分布容積V=X0/C0（體積/體重） 消除率C1=kV=0.693V/t1/2（體積/時間/體重）實驗內(nèi)容【材料】家兔1只離心管，試管，吸管，注射器，靜脈插管，兔手術(shù)臺，722分光光度計2% 溴磺酞鈉溶液，肝素化生理鹽水（10u/

3、ml），草酸鉀，2.5N NaOH，0.01N HCl，1% 鹽酸普魯卡因?qū)嶒瀮?nèi)容Methods1. a rabbit weigh-fix-anesthesia with urethane2.Shear the hair in the groin on one side where throbbing can be seen, subdermal 3.Cut the skin 34cm - Separate the femoral vein - insert a venous cannula - fix it -make sure blood can be taken smoothly. 4.

4、Blood samples(1.5ml) are taken from femoral vein at 2，4，6，10，15，20min following iv 20mg/kg of BSP. The blood samples-into the tubes containing K2C2O4. 5 Every time before taking blood sample, give up about 0.2ml blood at first, and after sampling blood, inject the same capacity of Saline to rabbit t

5、o make up the blood for loss.6.Separate the plasma by centrifuging at 3000rpm for 5min.7.Transfer 0.5ml plasma from each sample to various dry tubes.8.Add 5.5ml of 0.01N HCl to each tube and shake it thoroughly.9.The optical densities AH+ are measured with colormeter (540nm). Distilled water serves

6、as a blank.10.After obtained the optical densities AH+，add one drop of 2.5N NaOH to each tube and shake it. Then measure optical densities AOH-.11.With the difference between two optical densities = AOH-AH+，the concentration of BSP in plasma is determined from the standard curve. BSP標(biāo)準(zhǔn)曲線 C=-0.255+16

7、.655A（ug/ml） = AOH - AH+，【方法與步驟】1. 取家兔1只，稱重，烏拉坦全麻，背位固定于手術(shù)臺上，在一側(cè)腹股溝部搏動處剪毛。（固定：背位固定，要綁緊。）方法與步驟 方法與步驟2. 縱切皮膚34cm，分離股靜脈，在靜脈下穿雙線，結(jié)扎遠(yuǎn)心端，作靜脈切口，插入與注射器相連的靜脈托管（內(nèi)充滿肝素化鹽水）,結(jié)扎固定，檢查取血是否順利（取血1.5ml ）。（靜脈血：紫紅色，色深；注意鈍性分離；肌肉分層時，若兔子掙扎，就滴一些普魯卡因；靜脈托管管口可以稍微剪斜一點，但是不能太尖，以免插破血管；結(jié)扎固定時一定要綁緊，防止兔子掙扎，管子脫離；向插管中打一些肝素化生理鹽水，檢查是否插入，再回

8、抽血，檢查取血是否順利，同時觀測一下取一次血需要的多長時間。）靜脈插管：靜脈于遠(yuǎn)心端結(jié)扎后靜脈塌陷呈細(xì)線狀，較難靜脈插管：靜脈于遠(yuǎn)心端結(jié)扎后靜脈塌陷呈細(xì)線狀，較難插管，因此可試用靜脈充盈插管法。即：在股靜脈近心端插管，因此可試用靜脈充盈插管法。即：在股靜脈近心端用血管夾夾?。ㄒ部捎镁€提起），活動肢體使股靜脈充盈，用血管夾夾住（也可用線提起），活動肢體使股靜脈充盈，剪口插入套針。剪口插入套針。3. 靜脈注射20mg/kg BSP，分別于注射后第2，4，6，10，15，20min由股靜脈取血1.52ml置于盛有草酸鉀試管中，輕輕搖動試管，使草酸鉀均勻地溶解于血液中。（注意：20mg/kg BSP單

9、位換算；每次取血量固定，記錄開始取血和結(jié)束取血時間點，t值取中間點。）4. 每次取血樣時，先舍去0.2ml左右血液，取后，補(bǔ)充等量生理鹽水。（每次抽完血一定要盡快補(bǔ)充肝素化生理鹽水，避免血液凝固堵塞插管和針頭。）方法與步驟5.將各試管離心（3000rpm,5min），分別取血漿0.5ml，轉(zhuǎn)移入另一試管中，加入0.01N HCl溶液5.5ml，混勻后在722分光光度計于波長540nm處測吸光度。（注意：試管標(biāo)號；離心時要配平。）6. 測定后，加入2.5N NaOH溶液1d，混勻后再進(jìn)行吸光度測定，計算吸光度差值，利用差值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出相應(yīng)的血藥濃度，利用lnct作直線回歸，求得斜率和截矩，利

10、用前面公式求出相應(yīng)的藥動學(xué)參數(shù)。方法與步驟 溴磺酞鈉在堿性溶液中呈紅色（BSP +本底 ）,酸性溶液中無色（本底）。 的計算可以排除血漿本體的干擾。7. 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：以蒸餾水配制濃度為200g/ml的BSP標(biāo)準(zhǔn)溶液，取7支試管，以1，2，37編號，按表1進(jìn)行操作。 利用吸光度差值對相應(yīng)的BSP濃度作圖即得標(biāo)準(zhǔn)曲線。 BSP標(biāo)準(zhǔn)曲線 C=-0.255+16.655A（ug/ml） = AOH- - AH+ 方法與步驟方法與步驟表1、 BSP標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制【注意事項】實驗過程中，動作要輕，注意采血器用生理鹽水吸洗，應(yīng)盡量避免樣品溶血，影響測定。每次取血樣時，應(yīng)先取0.2ml 血棄去，采血過程盡可能

11、輕快，確保血樣時間準(zhǔn)確。樣品離心前必須平衡，轉(zhuǎn)速適中?！痉椒ㄔu價】股靜脈取血較其他途徑如耳緣靜脈取血有迅速、方便且不易溶血等優(yōu)點。此法僅是一粗略估算藥動學(xué)參數(shù)的方法。實驗內(nèi)容Methods1. a rabbit weigh-fix-anesthesia with urethane2.Shear the hair in the groin on one side where throbbing can be seen, subdermal 3.Cut the skin 34cm - Separate the femoral vein - insert a venous cannula - fix

12、 it -make sure blood can be taken smoothly. 4.Blood samples(1.5ml) are taken from femoral vein at 2，4，6，10，15，20min following iv 20mg/kg of BSP. The blood samples-into the tubes containing K2C2O4. 5 Every time before taking blood sample, give up about 0.2ml blood at first, and after sampling blood,

13、inject the same capacity of Saline to rabbit to make up the blood for loss.6.Separate the plasma by centrifuging at 3000rpm for 5min.7.Transfer 0.5ml plasma from each sample to various dry tubes.8.Add 5.5ml of 0.01N HCl to each tube and shake it thoroughly.9.The optical densities AH+ are measured with colormeter (540nm). Distilled water serves as a blank.10.After obtained the optical densities AH+，add one drop o