臨床真菌學檢驗基本技術PPT學習教案

1、會計學1臨床真菌學檢驗基本技術臨床真菌學檢驗基本技術臨床真菌基礎總論臨床真菌基礎總論一、真菌的基本介紹一、真菌的基本介紹二、真菌分類及存在形式二、真菌分類及存在形式三、真菌的一般檢查三、真菌的一般檢查 一般鏡檢一般鏡檢 常規(guī)染色常規(guī)染色 培養(yǎng)及鑒定方式培養(yǎng)及鑒定方式四、真菌的致病性四、真菌的致病性五、真菌的防治原則五、真菌的防治原則第1頁/共24頁一、真菌的基本介紹一、真菌的基本介紹第2頁/共24頁二、真菌分類及存在形式二、真菌分類及存在形式A A、真菌分類從米奇里（、真菌分類從米奇里（P.A.MicheliP.A.Micheli，17291729）開始）開始，至今已有近，至今已有近28028

2、0年的歷史，這期間經(jīng)過世界上無數(shù)年的歷史，這期間經(jīng)過世界上無數(shù)真菌科學工作者的努力，使真菌分類的工作有了極真菌科學工作者的努力，使真菌分類的工作有了極大地發(fā)展。大地發(fā)展。B B、但是由于真菌分類存在著無數(shù)困難，現(xiàn)有的真菌、但是由于真菌分類存在著無數(shù)困難，現(xiàn)有的真菌分類系統(tǒng)還有待進一步發(fā)展與完善（尚未有一個大分類系統(tǒng)還有待進一步發(fā)展與完善（尚未有一個大家供認的系統(tǒng)）。家供認的系統(tǒng)）。 （1）、真菌的分類）、真菌的分類第3頁/共24頁1、Ainsworth（1973）分類系統(tǒng)）分類系統(tǒng) 特點：成立菌物界，分特點：成立菌物界，分2 2門，真菌門下分成門，真菌門下分成5 5個亞門；取個亞門；取消藻狀菌

3、綱，依據(jù)鞭毛的有無劃分成鞭毛菌亞門、接合消藻狀菌綱，依據(jù)鞭毛的有無劃分成鞭毛菌亞門、接合菌亞門。菌亞門。2、Alexopoulos & Mims （1979） 分類系統(tǒng)分類系統(tǒng)特點：成立菌物界，菌物界特點：成立菌物界，菌物界MyceteaeMyceteae、FungiFungi分分3 3個門；個門；真菌類依鞭毛的有無分真菌類依鞭毛的有無分2 2門。門。3、菌物分別歸屬藻界、真菌界、和原生生物界的分類系統(tǒng)、菌物分別歸屬藻界、真菌界、和原生生物界的分類系統(tǒng)特點：將藻界、真菌界、和原生生物界分開成三個特點：將藻界、真菌界、和原生生物界分開成三個獨立的界屬獨立的界屬二、真菌分類及存在形式二、真菌分類及

4、存在形式第4頁/共24頁與醫(yī)學有關的真菌有四個亞門與醫(yī)學有關的真菌有四個亞門F接合亞門：毛霉、根霉等接合亞門：毛霉、根霉等F子囊霉亞門：酵母菌屬、小孢子霉屬等子囊霉亞門：酵母菌屬、小孢子霉屬等F擔子霉亞門：新生隱球菌、靈芝、食用菌等擔子霉亞門：新生隱球菌、靈芝、食用菌等F半知霉亞門：假絲酵母菌屬、球孢子菌屬等半知霉亞門：假絲酵母菌屬、球孢子菌屬等最新的真菌分類最新的真菌分類接合菌門接合菌門子囊菌門子囊菌門擔子菌門擔子菌門壺菌門壺菌門第5頁/共24頁根據(jù)菌落形態(tài)分類：根據(jù)菌落形態(tài)分類：F酵母菌酵母菌F酵母樣菌酵母樣菌F霉菌霉菌F雙相真菌雙相真菌第6頁/共24頁二、真菌分類及存在形式二、真菌分類及

5、存在形式（2）、真菌的存在形式）、真菌的存在形式A、真菌的菌絲先端為生長點，通過頂端延長而生長。菌絲生長生、真菌的菌絲先端為生長點，通過頂端延長而生長。菌絲生長生出分枝，使其與營養(yǎng)基質(zhì)接觸面積增大，提高吸收力。菌絲內(nèi)原生質(zhì)出分枝，使其與營養(yǎng)基質(zhì)接觸面積增大，提高吸收力。菌絲內(nèi)原生質(zhì)從衰老部分流向幼嫩部分，使菌絲不斷伸長，這就是生長。從衰老部分流向幼嫩部分，使菌絲不斷伸長，這就是生長。B、在一定條件下由生長轉(zhuǎn)入發(fā)育階段即產(chǎn)生繁殖體，生長與發(fā)育、在一定條件下由生長轉(zhuǎn)入發(fā)育階段即產(chǎn)生繁殖體，生長與發(fā)育受環(huán)境控制，多數(shù)真菌在貧養(yǎng)和低溫條件下轉(zhuǎn)入有性階段，少數(shù)菌在受環(huán)境控制，多數(shù)真菌在貧養(yǎng)和低溫條件下轉(zhuǎn)

6、入有性階段，少數(shù)菌在高溫下轉(zhuǎn)入有性階段。還有些真菌在其不同的發(fā)育階段，必須在不同高溫下轉(zhuǎn)入有性階段。還有些真菌在其不同的發(fā)育階段，必須在不同的寄主植物上渡過，即轉(zhuǎn)主寄主（現(xiàn)象）的寄主植物上渡過，即轉(zhuǎn)主寄主（現(xiàn)象）。C、只要是專門生殖的細胞，正常情況下不需要兩兩結(jié)合就可以單、只要是專門生殖的細胞，正常情況下不需要兩兩結(jié)合就可以單個細胞發(fā)育成一個個體，這就是孢子。個細胞發(fā)育成一個個體，這就是孢子。 第7頁/共24頁菌絲的形態(tài)：菌絲的形態(tài)： 螺旋狀、球拍狀、結(jié)節(jié)狀、鹿角狀、梳狀等，螺旋狀、球拍狀、結(jié)節(jié)狀、鹿角狀、梳狀等，菌絲形態(tài)有助于鑒別真菌。菌絲形態(tài)有助于鑒別真菌。孢子的形態(tài)：孢子的形態(tài)：有性孢子

7、：同一個菌體或不同菌體上兩個細胞有性孢子：同一個菌體或不同菌體上兩個細胞融合成經(jīng)減數(shù)分裂形成。融合成經(jīng)減數(shù)分裂形成。無性孢子：細胞分化或出芽形成。形態(tài)有分生無性孢子：細胞分化或出芽形成。形態(tài)有分生孢子、葉狀孢子和孢子囊孢子。孢子、葉狀孢子和孢子囊孢子。第8頁/共24頁第9頁/共24頁第10頁/共24頁三、真菌的一般檢查三、真菌的一般檢查（1）、一般鏡）、一般鏡檢檢A、氫氧化鉀法、氫氧化鉀法 將標本置于在玻片上，加一滴將標本置于在玻片上，加一滴10%KOH浮載液，蓋上蓋玻浮載液，蓋上蓋玻片放置片放置510分鐘后或直接在火焰上快速通過分鐘后或直接在火焰上快速通過23次微加熱，輕壓次微加熱，輕壓蓋玻

8、片驅(qū)逐氣泡并將標本壓薄后置于顯微鏡下檢查。先在低倍鏡蓋玻片驅(qū)逐氣泡并將標本壓薄后置于顯微鏡下檢查。先在低倍鏡下觀察有無菌絲和孢子，然后用高倍鏡觀察孢子和菌絲的形態(tài)特下觀察有無菌絲和孢子，然后用高倍鏡觀察孢子和菌絲的形態(tài)特征、大小和排列等。對于角質(zhì)標本，必要時可在征、大小和排列等。對于角質(zhì)標本，必要時可在10%KOH溶液溶液中，加入終濃度為中，加入終濃度為40%二甲亞砜，促進其溶解。此法適用于皮屑二甲亞砜，促進其溶解。此法適用于皮屑、甲屑、毛發(fā)、痂皮、痰、組織、耵聹、糞便等標本的直接涂片、甲屑、毛發(fā)、痂皮、痰、組織、耵聹、糞便等標本的直接涂片檢查。檢查。第11頁/共24頁B、膠帶粘貼法、膠帶粘貼

9、法三、真菌的一般檢查三、真菌的一般檢查（1）、一般鏡檢）、一般鏡檢 用透明膠帶直接貼于取材部位，數(shù)分鐘后揭用透明膠帶直接貼于取材部位，數(shù)分鐘后揭下，充分展平后，直接置貼于加有一滴浮液的載下，充分展平后，直接置貼于加有一滴浮液的載玻片上此液可以是玻片上此液可以是10%20%的的KOH，也可以采，也可以采用乳酸酚棉藍染液（易于觀察）。該法常用于花用乳酸酚棉藍染液（易于觀察）。該法常用于花斑癬患處的直接檢查。斑癬患處的直接檢查。第12頁/共24頁三、真菌的一般檢查三、真菌的一般檢查（2）、常規(guī)染色）、常規(guī)染色 乳酸酚棉藍染色乳酸酚棉藍染色傳統(tǒng)染色法，酵母菌細胞、菌絲體和產(chǎn)孢結(jié)傳統(tǒng)染色法，酵母菌細胞、

10、菌絲體和產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)等皆可被染成亮藍色；背景為暗淡的藍色構(gòu)等皆可被染成亮藍色；背景為暗淡的藍色。 過碘酸過碘酸-雪夫染色雪夫染色（P.A.S）在尋找真菌孢子、鑒別真菌、觀看真菌結(jié)構(gòu)在尋找真菌孢子、鑒別真菌、觀看真菌結(jié)構(gòu)、等方面有意義、等方面有意義 其他染色法其他染色法六胺銀法、愛先藍（六胺銀法、愛先藍（alcian blue）法、）法、革蘭革蘭氏染色法氏染色法、以及特殊染色法、以及特殊染色法第13頁/共24頁 于潔凈載玻片上，滴1-2滴乳酸酚棉藍染色液，用解剖針從霉菌菌落的邊緣外取少量帶有孢子的菌絲置于染色液中，再細心地將菌絲挑散開，然后小心地蓋上蓋玻片(加熱或不加熱)，注意不要產(chǎn)生氣泡。置顯微鏡

11、下先用低倍鏡觀察，必要時再換高倍鏡。乳酸酚棉藍染色乳酸酚棉藍染色第14頁/共24頁 革蘭染色法革蘭染色法在鑒別細菌、選擇抗菌藥物、研究細菌致病在鑒別細菌、選擇抗菌藥物、研究細菌致病性等方面有意義性等方面有意義 （真菌的簡單染色也可以）（真菌的簡單染色也可以）所有的真菌、放線菌均為革蘭染色陽性，呈所有的真菌、放線菌均為革蘭染色陽性，呈紫黑色。適用于酵母菌、孢子絲菌、組織胞紫黑色。適用于酵母菌、孢子絲菌、組織胞漿菌、諾卡菌及放線菌等培養(yǎng)物的形態(tài)檢查漿菌、諾卡菌及放線菌等培養(yǎng)物的形態(tài)檢查。石膏樣小孢子菌石膏樣小孢子菌第15頁/共24頁第16頁/共24頁三、真菌的一般檢查三、真菌的一般檢查（3）、培養(yǎng)

12、及鑒定方式）、培養(yǎng)及鑒定方式營養(yǎng)營養(yǎng)-水、鹽、氮源、碳水、鹽、氮源、碳水化合物水化合物環(huán)境環(huán)境-弱酸性（弱酸性（pH 46）溫度（）溫度（2228），充分氧氣，充分氧氣對紫外線及一般消毒劑耐受性強對紫外線及一般消毒劑耐受性強對熱的抵抗力不強，對熱的抵抗力不強，60以上以上1小時即可殺死孢子及菌絲小時即可殺死孢子及菌絲在在1%3%石炭酸石炭酸2.5%碘酊、碘酊、0.1%升汞及升汞及10%甲醛中可被甲醛中可被滅活滅活用甲醛氣體熏蒸被真菌污染的衣用甲醛氣體熏蒸被真菌污染的衣物用具，可殺滅真菌菌絲及物用具，可殺滅真菌菌絲及其孢子其孢子第17頁/共24頁三、真菌的一般檢查三、真菌的一般檢查（3）、培養(yǎng)及

13、鑒定方式）、培養(yǎng)及鑒定方式沙保氏培養(yǎng)基沙保氏培養(yǎng)基血平板血平板柯馬佳等柯馬佳等常規(guī)培常規(guī)培養(yǎng)養(yǎng)鑒別鑒別第18頁/共24頁三、真菌的一般檢查三、真菌的一般檢查（3）、培養(yǎng)及鑒定方式）、培養(yǎng)及鑒定方式一、形態(tài)學鑒定1、致病真菌的鑒定、致病真菌的鑒定，需要光鏡，現(xiàn)在更，需要光鏡，現(xiàn)在更加上熒光顯微鏡和細加上熒光顯微鏡和細胞化學，還有各種染胞化學，還有各種染色法。色法。2、需要培養(yǎng)來鑒定、需要培養(yǎng)來鑒定菌種，選擇合適的培菌種，選擇合適的培養(yǎng)基培養(yǎng)鑒定菌種，養(yǎng)基培養(yǎng)鑒定菌種，是常用的方法。是常用的方法。3、現(xiàn)、現(xiàn) 代代 形形 態(tài)學技態(tài)學技術，如自動成像分析術，如自動成像分析、電子顆粒體積、分、電子顆粒體

14、積、分數(shù)幾何學分析形態(tài)學數(shù)幾何學分析形態(tài)學的特點。的特點。二、分子生物學鑒定1、表型、表型 分分 類類 受限受限，生理生化技術在絲，生理生化技術在絲狀真菌鑒定方面，或狀真菌鑒定方面，或是費時費事或是結(jié)果是費時費事或是結(jié)果不準。不準。2、PCR技術，可以技術，可以分析少量真菌細胞，分析少量真菌細胞，甚至單個真菌抱子。甚至單個真菌抱子。3、選擇通用寡核昔、選擇通用寡核昔酸對真菌種特異性引酸對真菌種特異性引物，測定其核昔酸序物，測定其核昔酸序列。列。三、其他鑒定1、次級代謝產(chǎn)物、次級代謝產(chǎn)物的測定：它是一的測定：它是一個與分了有關的個與分了有關的混合物，有特殊混合物，有特殊的和極罕見的化的和極罕見的

15、化學結(jié)構(gòu)。常見的學結(jié)構(gòu)。常見的是固醇、菇、類是固醇、菇、類堿、香豆素等，堿、香豆素等，某些是真菌毒素某些是真菌毒素。2、細胞壁組份的、細胞壁組份的測定等測定等第19頁/共24頁A、真菌的侵犯部位不同，其致病性也不相同、真菌的侵犯部位不同，其致病性也不相同&淺部真菌侵犯表皮角質(zhì)層、毛發(fā)和甲板淺部真菌侵犯表皮角質(zhì)層、毛發(fā)和甲板&深部真菌侵犯真皮及以下組織、粘膜和內(nèi)臟深部真菌侵犯真皮及以下組織、粘膜和內(nèi)臟。B、真菌的致病性表現(xiàn)、真菌的致病性表現(xiàn)1. 1. 淺部真菌感染（外源性真菌）淺部真菌感染（外源性真菌）: :手足癬、體癬、股癬、甲癬手足癬、體癬、股癬、甲癬2.2.條件致病性真菌感染（內(nèi)源性真菌條

16、件致病性真菌感染（內(nèi)源性真菌/ /機會致病性真菌）如：白假絲酵母菌（白色念珠菌）引起的鵝口瘡機會致病性真菌）如：白假絲酵母菌（白色念珠菌）引起的鵝口瘡3.3.深部真菌感染深部真菌感染: :新生（型）隱球菌：侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)引起慢性腦膜炎新生（型）隱球菌：侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)引起慢性腦膜炎4.4.真菌毒素的致病作用真菌毒素的致病作用: :急性中毒：毒蕈中毒，慢性真菌中毒：黃曲霉素、青霉素（霉變食物）急性中毒：毒蕈中毒，慢性真菌中毒：黃曲霉素、青霉素（霉變食物）5. 5. 真菌超敏反應性疾病真菌超敏反應性疾病: :敏感患者吸入真菌孢子，引起敏感患者吸入真菌孢子，引起型超敏反應醫(yī)學型超敏反應醫(yī)學 教育網(wǎng)搜集整理。如：尋痲疹、哮喘、變應性鼻炎等。教育網(wǎng)搜集整理。如：尋痲疹、哮喘、變應性鼻炎等。四、真菌的致病性四、真菌的致病性第20頁/共24頁五