土壤養(yǎng)分及酶活性測(cè)試方法資料

1、硝態(tài)氮的測(cè)定：雙波長分光光度法測(cè)定土壤硝態(tài)氮，土壤肥料，2006 ( 1)： 50 52,涂常青，溫欣榮。原理：利用硝酸鹽和亞硝酸鹽在203nm和230nm波長處有較強(qiáng)紫外吸收峰，利 用雙波長系數(shù)倍數(shù)法的公式：.A =A -kA，選擇合適波長時(shí)，從而消除亞硝酸 鹽、有機(jī)質(zhì)的影響。消除干擾后，硝酸鹽氮的含量與.爾呈線性關(guān)系，線性范圍為。2.0 mg/L，由此建立了測(cè)定土壤硝態(tài)氮的新方法。硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)比色液：稱取0.7220 g與105c烘箱中烘干2h干燥冷卻后的KNO；與小 燒杯中加入二次蒸鐳水溶解，定量轉(zhuǎn)入1000ml的容量瓶中，定容 榴勻，即為10ug/ml 的硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)液。稱取該溶液10

2、.00 ml于100ml容量瓶中，定容、搖勻，即為10ug/ml的硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)比色溶液。亞硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)比色液：稱取0.1232 g NaNOz于小燒杯中，加入二次蒸儲(chǔ)水，定量轉(zhuǎn)入250ml容量瓶中，定容、搖勻，即為100ug/ml亞硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)溶液。稱取該溶液10.00 ml于100ml容量瓶中，定容、搖勻，即為10ug/ ml亞硝酸鹽 氮標(biāo) 準(zhǔn)比色液。實(shí)驗(yàn)方法：1、k系數(shù)的確定：分別準(zhǔn)確移取10ug/ml硝酸鹽氮使用液2.00 ml、10ug /ml亞硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)使用液2.00 mH 土壤浸提液2.5 ml置于各自的25ml比色管中，用二次蒸鐳水定容、搖勻，用1cm 的石英比色皿，以二次蒸播

3、水作參比，在UV 紫外可見分光光度計(jì)上在190300 nm 范圍內(nèi)掃描，從而確定土壤樣品、硝酸鹽氮的最大吸收波長203nm，在230nm處吸 收較弱，而亞硝酸鹽氮在210 nm處有最大吸收，在230 nm吸收較弱。選取203nm、 230 nm為測(cè)量波長和參比波長測(cè)定土壤中硝態(tài)氮，從 而可消除樣品中主要干擾組分 亞硝酸鹽氮的干擾。據(jù)A203 - kA 230 = 0的公式計(jì)算，求得k =2.72。2、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：分別去 分ug去I硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)比色液0、0.25、0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 ml置于25ml比色管中，各管加入二次蒸儲(chǔ)水至刻度，搖勻，用UV-紫外可見分光光

4、度計(jì)在203nm和230nm處，用1 cm石英比色皿測(cè)定吸光度。用A20八2.72A230的計(jì) 算方法求得校正吸光度。標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y =0.5283x -0.0009r =0.9999( n =7)3、樣品測(cè)定：準(zhǔn)確稱取10g充分拌勻的鮮土壤，分別置于100 ml具塞三角瓶中，加入0.1 g CaSCU和50.00 ml二次蒸儲(chǔ)水，于振蕩器上振蕩10min。放置10min后，將懸 液的上部清夜用于濾紙過濾。吸取濾液1.0020.00 ml置于25ml比色管中，用水準(zhǔn) 確稀釋至刻度，分別在203 nm230 nm波長下測(cè)量吸光度。按下式計(jì)算土壤中硝 態(tài)氮含量(ug/kg) : w(NO3

5、- N) = 25 : D/m式中，為回歸方程算出的NO3-N含量，ug/ml ;25為比色測(cè)定液總體積，ml ;D為稀釋倍數(shù)；m為鮮土壤樣品質(zhì)量，g。鏤態(tài)氮的測(cè)定：2mol L4KCI浸提-靛酚藍(lán)比色法1、方法原理：用2mol L4KCI溶液浸提土壤 把吸附在土壤膠體上的NM及水溶性NH。浸提出來。 土壤浸出液中的鏤態(tài)氮在強(qiáng)堿性介質(zhì)中與次氯酸鹽和苯酚作用，生成水溶 性燃染料 靛酚藍(lán)，溶液的顏色很穩(wěn)定。在含氯0.050.5 ug范圍內(nèi)，吸光度與錢態(tài)氮含量成 正比，可用比色法測(cè)定。2、試齊U：(1) 2mol L4KCI溶液：稱取149.1 g KCI溶于水，稀釋至1 L ;(2) 苯酚溶液：稱

6、取苯酚(C6H50H，化學(xué)純)10g和硝基鐵氟化鉀(Na2Fe(CNhNO2A0)100 mg稀釋至1L ,此試劑不穩(wěn)定，須貯于棕色瓶中,在4c冰箱中保存；(3)次氯酸鈉堿性溶液:稱取NaOH 10g、磷酸氫二鈉(Na2Hp。4 7H2O )7.06 g、磷 酸鈉(NasPOql2H2。) 31.8 g和52.5 g I?次氯酸鈉(NaOCI，即含5%t效 氯的漂白 粉溶液)10ml溶于水，稀釋至1 L ,貯于棕色瓶中，在4七冰箱中保存；(4)掩蔽劑：將 400g I?酒石酸鉀鈉(KNaC4H4O6 4H2O )與 100g -1 的 EDTA二鈉鹽溶液等體積混合，每100 ml混合液中加入1

7、0mol LJ NaOH溶液0.5 ml ；(5)2.50 ug ml鏤態(tài)氮(NH4-N )標(biāo)準(zhǔn)液態(tài):稱取干燥的(NHRSCUO/TI7 g溶于水，洗入容量瓶后定容至1L，制備成鏤態(tài)氮(N ) 100ug mF1的貯存溶液；使用前將 其加水稀釋40倍，即配制成含鏤態(tài)氮(N ) 2.5 ug ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。3、分析步驟：(1)浸提：稱取相當(dāng)于20.00 g干土的新鮮土樣(若是風(fēng)干土，過10號(hào)篩)準(zhǔn)確到 0.01 g，置于200ml三角瓶中，加入KCI溶液100ml，塞緊瓶塞，在振蕩機(jī)上振蕩1h， 取出靜置，待土壤-氯化鉀懸濁液澄清后，吸取定量上層清液進(jìn)行分析。如不能在24h 進(jìn)行分析，用濾

8、紙過濾懸濁液，將濾液儲(chǔ)存在冰箱中備用。(2)比色 吸取土壤浸出液2ml10ml (含NH4-N2ug2.5ug )放入50ml容量瓶中， 用KCI溶液補(bǔ)充至10ml，然后加入苯酚溶液5ml和次氯酸鈉堿性溶液5ml，搖勻。在 20C左右的室溫下放置1 h后，加掩蔽劑1 ml以溶解可能產(chǎn)生的沉淀物，然后加水定 容至刻度，用1cm比色槽在625nm波長處進(jìn)行比色，讀取吸光度。(3)工作曲線：分別吸取 0、2.0、4.0、6.0、8.0 10.0 mlNH/-N 標(biāo)準(zhǔn)液于 50ml容量瓶中，各加10ml氯化鉀溶液，同(2)比色。(4)結(jié)果計(jì)算：土壤中4不含量59 1) =vtsm式中：，一顯色液鏤態(tài)氮

9、的質(zhì)量濃度(ug ml*)V一顯色液的體積(10ml)ts 一分取倍數(shù)m一樣品質(zhì)量(g)月尿酶測(cè)定(比色法)：(土壤微生物生態(tài)學(xué)及其實(shí)驗(yàn)技術(shù))1、方法原理：服酶廣泛存在于土壤中，它能酶促尿素分解成氨、二氧化碳和水。測(cè)定服酶的方法很 多，包括比色法、擴(kuò)散法、電極法等，其中比色法最為常用，現(xiàn)介紹苯酚-次氯酸鈉 比色法，該方法以尿素為基質(zhì)，根據(jù)酶促產(chǎn)物氨與苯酚-次氯酸鈉作用(在堿性溶液中及在亞硝基鐵氧化鈉催化作用下)生成藍(lán)色的靛酚，來分析版酶 活性。2、試劑配制：(1) pH 6.7檸檬酸鹽溶液：取368g檸檬酸于600ml蒸儲(chǔ)水中，另取295g KOH溶 于水，再將兩種溶液合并，用1 mol /

10、L NaOH將pH調(diào)至6.7，并用水稀釋至2L。(2)苯酚鈉溶液：稱取62.5 g苯酚溶于少量乙醇中，力口 2 ml甲醇和18.5 ml丙酮 后用乙醇稀釋至100ml (A液)，保存于冰箱中。稱取27g NaOH溶于100ml水中(B 液)，保存于冰箱中。使用前，取A、B兩液各20ml混合，并用蒸儲(chǔ)水稀釋至100ml 備用。(3)次氯酸鈉溶液：用水稀釋制劑至活性氯的濃度為0.9 %，溶液穩(wěn)定。(4) 10%尿素溶液：10g尿素溶于100ml水中。(5) N的標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱取0.4717 g硫酸鏤溶于水稀釋至1L ,則得1 ml含0.1 mg N的標(biāo)液，再將此液稀釋至10倍制成氨工作液(0.0

11、1 ug/L ).3、操作步驟：取5g風(fēng)干土置于50ml三角瓶中，加1 ml甲苯。15min后加10ml 10%尿素溶液和20ml pH =6.7檸檬酸鹽緩沖液。搖勻，37c恒溫箱中培養(yǎng)24h。過濾，取1 ml濾液 注入50ml容量瓶中，然后按配制標(biāo)準(zhǔn)曲線顯色方法進(jìn)行測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)曲線配制：分別取0、1、3、5、7、9、11、13ml氮工作液，移至50ml容量瓶 中，然后加蒸儲(chǔ)水至20ml，再加4ml苯酚鈉溶液和3ml次氯酸鈉溶液，隨加隨搖。20min后顯色、定容。1h內(nèi)在分光光度計(jì)上于波長578nm處比色，根據(jù)吸光值與氮 溶液濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。3、結(jié)果計(jì)算：以24h后1 g 土壤中NHa-N的質(zhì)

12、量（mg ）表示服酶活性（Ik）：Ure = a V n / m式中：a為由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的NH3-N濃度（mg/ml ）;V為顯色液體積（50 ml ）；n為分取倍數(shù)；m為烘干土質(zhì)量（g ） o磷酸酶測(cè)定（磷酸苯二鈉比色法）：（土壤微生物生態(tài)學(xué)及其實(shí)驗(yàn)技術(shù)） 1、方法原理：測(cè)定磷酸酶主要根據(jù)酶促作用生成的有機(jī)基團(tuán)量或無機(jī)磷量計(jì)算磷酸酶活性。前 一種通稱為有機(jī)基團(tuán)含量法，是目前較為常用的測(cè)定磷酸酶的方法，后一種稱為 無 機(jī)磷含量法。研究證明，磷酸酶有3種最適pH值：45、67和810，因此測(cè)定 酸性、中性和堿性反應(yīng)土壤的磷酸酶，要提供相應(yīng)的pH緩沖液才能測(cè)出該土壤的磷酸酶最大活性。測(cè)定磷酸酶常采

13、用的pH緩沖體系有乙酸鹽緩沖液（pH值=5.05.4 ）、檸檬酸鹽緩沖液911值=7.0 ）、三羥甲基氨基甲烷緩沖液（pH值=7.08.5、和硼酸緩沖液（pH值=910 ） O磷酸酶測(cè)定時(shí)常用的基質(zhì) 有 磷酸苯二鈉、酚猷磷酸鈉、甘油磷酸鈉、：或1蔡酚磷酸鈉、1 -硝基苯磷酸鈉等。現(xiàn) 介紹磷酸苯二鈉比色法。2、試劑配制：（1）甲苯（2）磷酸苯二鈉：稱取6.75 g磷酸苯二鈉（CeHsPOqNa?2H2。），用緩沖液稀釋 至1 L （1 ml 含 25 mg 酚）。（3） pH 9.0硼酸鹽緩沖液：A、0.05 M硼砂溶液：19.07 g硼砂（NazBqO? 10出0 ）溶于1000ml蒸儲(chǔ)水中；

14、B、0.2 M硼酸溶液：12.37 g硼酸（H3BO3）溶于1000ml蒸儲(chǔ)水中； 硼酸鹽緩沖液(pH 9.0) : 80ml A+20ml B混勻即得。(4)緩沖溶液配制：a、酸性磷酸酶：醋酸鹽緩沖液(pH 5.0)A、0.2 M醋酸鈉溶液：16.4 g無水醋酸鈉(C2HsOzNa )溶于1000ml蒸播水中或是27.2 g三水醋酸鈉(CzHsOzNa 3H2。)溶于1000ml蒸播水中。B、0.2 M醋酸溶液：11.55 ml醋酸定容于1000ml。7ml A +3ml B混合即得。b、堿性磷酸酶：硼酸鹽緩沖液(pH 10.0)A、硼砂液：19.072 g硼砂溶于1000ml蒸儲(chǔ)水中。B、

15、NaOH溶液：4g NaOH溶于1000ml蒸儲(chǔ)水中。50ml A +43ml B加水稀釋至200ml，混合即得。c、中性磷酸酶：檸檬酸鹽緩沖液(pH 7.0 )A、0.1 M檸檬酸溶液：21.01 g檸檬酸H2O (或是19.21 gC6H8。7)溶于1000ml蒸儲(chǔ) 水中。B、0.2 M磷酸氫二鈉：35.61 g磷酸氫二鈉2H2。(或是53.63 g磷酸氫二鈉7H2?；蚴?1.7 g磷酸氫二鈉12H2。)溶于1000ml蒸播水中。3.63 ml A +16.37 ml B 混合即得。(5) 2.5 %鐵氧化鉀：12.5 g鐵氧化鉀溶于500ml水。(6) 0.5 %的4氨基安替毗琳溶液：2

16、.5 g4-氨基安替毗琳溶于500ml水中。(7)酚原液：2g酚用蒸儲(chǔ)水定容至1 L (2mg/ml )，溶液在暗色中穩(wěn)定(8)酚工作液：取2.5 ml原液稀釋至100ml (0.05 mg酚/ml )。3、操作步驟：稱取5g風(fēng)干土于50ml三角瓶中，力口 1 ml甲苯，輕搖15min.再加入20ml磷酸苯二鈉(酸性磷酸酶用PH5.0的醋酸緩沖液，中性磷酸酶用PH 7.0的檸檬酸鹽緩沖 液，堿性磷酸酶用PH 10.0的硼酸鹽緩沖液），仔細(xì)搖勻后放入恒溫箱，在37P下 培養(yǎng)24h。用致密濾紙過濾，取1 ml濾液于100ml容量瓶中，加5ml PH 10.0硼酸鹽緩沖液，再 加入3ml 2.5 %

17、的鐵氧化鉀和3ml 0.5 %的4-氨基安替毗琳溶液，搖勻，這時(shí) 溶液呈粉 紅色，然后加水定容。待顏色穩(wěn)定時(shí)（2030min ），在波長570nm處測(cè)定各樣品 的吸光度。土壤的磷酸酶活性根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出酚的含量（為了消除土壤引起的誤差，每一土壤需做無基質(zhì)的對(duì)照，整個(gè)試驗(yàn)需做無土壤對(duì)照）。磷酸酶活性以每克土壤的酚毫克數(shù)表示（若用 P的毫克數(shù)表示，結(jié)果需乘0.32 ;若用P2O5的毫克數(shù)，結(jié)果需乘2.29 ）。標(biāo)準(zhǔn)曲線配制：分別向100ml容量瓶中注入0、1、3、5、7、9、11ml工作液并顯色 定容（分別相當(dāng)于0.05、0.15、0.25、0.35、0.45、0.55 mg酚），待顏色穩(wěn)定后，

18、比色繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。4、結(jié)果計(jì)算：以24h后1 g 土壤中釋出的酚的質(zhì)量（mg ）表示磷酸酶活性Pho。Pho=a V n/m式中：a為由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的酚濃度（mg/ml）；V為顯色液體積（50 ml ）； n為分取倍數(shù)；m為烘干土質(zhì)量（g）。過氧化氫酶的測(cè)定（容量法）：1、試劑配制：（1） 0.3% H2O2溶液：按 1:100 將 30% H2O2用水稀釋。（2） 3g/L硫酸：168ml濃HSCU定容于2L容量瓶。（3） 0.1 g/L高鎰酸鉀（1/5KMnCU）溶液：稱取化學(xué)純高鎰酸鉀3.161 g溶于1L無CO2蒸鐳水中，貯于棕色瓶中備用。（4）草酸鈉（標(biāo)定1/5 KMno 4）： 1

19、05110C烘至恒重，稱取0.2 g （準(zhǔn)至0.0001 g ）溶于100ml （8+92）硫酸溶液中。2、操作步驟：取2g風(fēng)干土，置于100ml三角瓶中，并注入40ml蒸儲(chǔ)水和5ml 0.3 % H2O2溶 液（同 時(shí)設(shè)置無土對(duì)照）。振蕩20min后，加入5ml 3g/L H2SO4，以穩(wěn)定未分解的H2O2，用 慢速濾紙過濾。吸取25ml濾液，用0.1 g/L高鎰酸鉀滴定至淡粉紅色終點(diǎn)。3結(jié)果計(jì)算：M=M-V2） T/gM :活性值；V :樣品消耗的0.1 g/L高鎰酸鉀溶液的ml數(shù)；Y :對(duì)照消耗的0.1 g/L高鎰酸鉀溶液的ml數(shù)；T : 0.1 g/L高鎰酸鉀滴定校正值；g :樣品重。

20、用于滴定土壤濾液所消耗的高鎰酸鉀量（毫升數(shù)）為B，用于滴定25ml原始的 過氧化 氫混合液所消耗的高鎰酸鉀量（毫升數(shù)）為A，（A.B） T即為過氧化氫酶活性，以20min 后1g 土壤的L高鎰酸鉀的毫升數(shù)表示。式中T為高鎰酸鉀滴定度的校正值（就 是最后換算成每克，所以還要測(cè)土壤含水量）。高鎰酸鉀溶液標(biāo)定：用配制好的高鎰酸鉀溶液（c（KMnO4）=0.1 mol/L ）滴定基準(zhǔn)草酸鈉溶液，近終點(diǎn)時(shí)加熱至65E，繼續(xù)滴定至溶液呈粉紅色保持30s，同時(shí)做空白試驗(yàn)。高鎰酸鉀溶液標(biāo)準(zhǔn)濃度計(jì)算：c（1/5KMnO4）=m/（VAV2） 0.06700式中：c（1 /5KMnC4）一高鎰酸鉀標(biāo)準(zhǔn)液之物質(zhì)的量

21、濃度， mol/L ；m一草酸鈉之質(zhì)量，g ：y一高鎰酸鉀的用量，ml ;V2空白試驗(yàn)用高鎰酸鉀的用量，ml ；0.06700 與1.00ml高鎰酸鉀=0.1 mol/L相當(dāng)?shù)囊钥吮硎镜牟菟?鈉的 質(zhì)量。硝酸還原酶活,性的測(cè)定：生態(tài)學(xué)常用試驗(yàn)研究方法與技術(shù)，土壤酶及其研究方 法1、方法原理：在硝酸還原酶和亞硝酸還原酶的作用下，土壤中硝態(tài)氮,可還原成氨，測(cè)定土壤中這些 酶的活性可了解土壤氮素轉(zhuǎn)化中脫氮作用的強(qiáng)度。另外，硝酸還原酶還參與土壤中 鐵的還原作用。測(cè)定土壤硝酸還原酶活性的原理是：硝酸鹽在硝酸還原酶、亞硝酸還原酶和羥基還原 酶的催化作用下轉(zhuǎn)化為氨，反應(yīng)前為硝態(tài)氮的變化反映出土壤硝酸還原酶的

22、活性，硝 態(tài)氮的變化可用酚二磺酸比色法測(cè)定。2、儀器設(shè)備：分光光度計(jì)、恒溫培養(yǎng)箱、100ml三角瓶、50ml容量瓶、瓷蒸發(fā)皿、水浴(100C),3、試劑配制：(1)硝酸鉀溶液：(KNC3)1g/100ml ： 10.0 g分析純KNO3溶于去離子水中 稀釋至1 L;(2)葡萄糖溶液XC6Hl206)=1g/100ml ： 10.0 g分析純葡萄糖溶于去離子水 中稀釋至1 L ;(3)碳酸鈣(CaC。)準(zhǔn)備適量；(4)鋁鉀磯(AIK (SO4)飽和溶液，準(zhǔn)備適量；(5) 酚二磺酸溶液：取3g重蒸酚與20.1 ml濃硫酸混合在沸水浴上回流加熱6h ；(6) NaOH溶液:(NaOH ) =10g/

23、100ml ： 50g分析純NaOH溶于去離子水中并稀釋至500 ml ；(7)硝酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液MKNC3)=0.1mg/ml ： 16.3025 g重結(jié)晶KNOa溶于去離子水中并定容至1 L，此溶液濃度為10g/100ml ,使用前將其稀釋至0.1 mg/ml。4、操作步驟:20mg CaCC)3 和取1.00g新鮮土壤(v2 mm )于100 ml減壓三角瓶中，加 1 ml KNO3溶液，混勻后加1 ml葡萄糖溶液，抽氣3min，輕搖三角瓶，置于30c恒溫 箱中培養(yǎng)24h，培養(yǎng)結(jié)束后加50ml去離子水和鋁鉀磯溶液，混勻后過濾。取20ml濾液于瓷蒸發(fā)皿上蒸干，加1ml酚二磺酸溶液溶解處理10m

24、in，再加 15ml去離子水，用10% NaOH調(diào)至微黃色，最后轉(zhuǎn)移至50 ml容量瓶中，定容 后于400500nm處比色。采用于180c加熱3h滅菌的土壤作對(duì)照。標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：吸取50.00 ml KNO3標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.1 mg/ml )于瓷蒸發(fā)皿中，同上在沸 水浴上蒸干，加入2ml酚二磺酸溶解處理10min，加去離子水定容至50ml，此時(shí)溶液中NO3 -N的含量為0.01 mg/ml.吸取此溶液540ml于50ml容量瓶中，用10% NaOH調(diào)至微黃色，定容后在分光光度計(jì)上于400500nm處比 色。5、結(jié)果計(jì)算：土壤硝酸還原酶活性mgNC)3f-N/(g 24h) = c V f /dv

25、et式中：c為樣品溶液中NO3-N，mg/ml ;V為待測(cè)液體積，取50 ml ;f為分取倍數(shù)；dvet為烘干土壤質(zhì)量，g。土壤速效磷的測(cè)定0.5 molNaHCd法1、方法原理：石灰性土壤由于大量游離碳酸鈣存在，不能用酸溶液來提取有效磷。一般用碳酸鹽 的堿溶液。由于碳酸根的同離子效應(yīng)，碳酸鹽的堿溶液降低碳酸鈣的溶解度，也就降 低了溶液中鈣的濃度，這樣就有利于磷酸鈣鹽的提取。同時(shí)由于碳酸鹽的堿溶液，也 降低了鋁和鐵離子的活性，有利于磷酸鋁和磷酸鐵的提取。此外，碳酸氫鈉堿溶液中 存在著0H 一、HCO3 一、C03?一等陰離子，有利于吸附態(tài)磷的置換，因此NaHCO3 不僅適用石灰性土壤，也適應(yīng)于

26、中性和酸性土壤中速效磷的提取。待測(cè)液中的磷用鋁睇抗試劑顯色，進(jìn)行比色測(cè)定。2、主要儀器：往復(fù)振蕩機(jī)、分光光度計(jì)或比色計(jì)。3、試齊！ :(1)0.5 mol L浸提液溶解 NaHCO342.0 g 于 800ml 水中，以 0.5 mol LJ NaOH溶液調(diào)節(jié)浸提液的pH至8.5。此溶液曝于空氣中可因失去CO2而使pH增高，可于 液面加一層礦物油保存之。此溶液貯存于塑料瓶中比在玻璃瓶中容易保存，若 貯存 超過1個(gè)月，應(yīng)檢查pH是否改變。(2)無磷活性炭：活性炭常含有磷，應(yīng)做空白試驗(yàn)，檢驗(yàn)有無磷存在。如含磷 較多，須先用2 mol L4 HCI浸泡過夜，用蒸鐳水沖洗多次后，在用0.5 mol L

27、JNaHCO3 浸泡過夜，在平瓷漏斗上抽氣過濾，每次用少量蒸儲(chǔ)水淋洗多次，并檢查到無磷為止。如含磷較少，則直接用NaHCd處理即可。(3)鋁睇抗試劑：A、5g I/酒石酸氧睇鉀溶液：取酒石酸氧睇鉀K (SbO) CHOqOB g,溶解于100ml 水中。B、3酸微-硫酸溶液:稱取鋁酸錢(NH4 ) 6MO7O244H2O10g，溶于450ml水 中， 緩慢地加入153ml濃硫酸，邊加邊攪。再將上述A溶液加入到B溶液中，最后加水至1L。充分搖勻，貯于棕色瓶中，此為 鋁睇混合液。臨用前(當(dāng)天)，稱取左旋抗壞血酸(。6出。5,化學(xué)純)1.5g，溶于100ml鋁睇混合液中，混勻，此即為鋁睇抗試劑。有效

28、期 24小時(shí)，如藏于冰箱中則有效期較長。此試劑中H2sd為5.5 mol (H，鋸酸鐵為10g，酒石酸氧睇鉀為0.5 g I?，抗壞血酸為15g L?。(4)磷標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取在105C烘箱中烘干的磷酸二氫鉀(KH2Po4，分析純)0.2195g，溶解在400ml水中，加濃硫酸5ml (加H 2s。4防長霉菌，可使溶于長期保存），轉(zhuǎn)入1 L容量瓶中，加水至刻度。此溶液為50ug ml JP標(biāo)準(zhǔn)溶液。吸取上述磷標(biāo)準(zhǔn)溶液25 ml，稀釋至250ml，即為5ug mlJ P標(biāo)準(zhǔn)溶液（此溶液不宜久存）。 4、操作步驟：稱取通過20目篩子的風(fēng)干土樣2.5 g（精確到0.001 g ）于150ml三角瓶

29、（或大試管） 中，加入0.5 mol LJ NaHCd溶液50ml，再加一勺無磷活性炭，塞緊瓶塞，在振蕩機(jī) 上振蕩30min，立即用無磷濾紙過濾，濾液承接于100ml三角瓶中吸取濾液1。ml （含磷量高時(shí)吸取2.55.0 ml，同時(shí)應(yīng)補(bǔ)加0.5 molNaHCOs溶 液至10ml ）于150ml三角瓶中，再用滴定管準(zhǔn)確加入蒸儲(chǔ)水35ml，然后移液管加入鋁睇抗試劑5ml搖勻 放置30min后，用880nm或700nm 波長進(jìn)行比色。以空白液的吸收值為0,讀出待測(cè)液的吸收值（A）。標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制： 分別準(zhǔn)確吸取5ug ml4 P磷標(biāo)準(zhǔn)溶液1、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml于150ml三

30、角瓶 中，再加入0.5 mol LJ NaHCOalOml，準(zhǔn)確加水使各瓶的總體積達(dá)到45ml，搖勻；最 后加入相睇抗試劑5ml，混勻顯色。同待測(cè)液一樣進(jìn)行比色，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。最后溶 液中磷的濃度分別為0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 ug ml P。5、結(jié)果計(jì)算：土壤中有效磷（P）含量（mg kg，）= 一*產(chǎn)1000m 103 k式中：一從工作曲線上查得P的質(zhì)量濃度,ugml ,；V 一顯色時(shí)定容體積，ml ;ts 為分取倍數(shù)（即浸提液總體積與顯色對(duì)吸取浸提液體積之比） m 一風(fēng)干土質(zhì)量，mg ;k將風(fēng)干土換算成烘干土質(zhì)量的系數(shù)；103將ug換算成mg ；1000換算成每kg含P

31、量土壤速效磷mg kg 4 P等級(jí)10局土壤速效鉀的測(cè)定一一 NHQAC浸提，火焰光度法1、方法原理：HMg+（n-6） NH4OAc+HOAc +治）NFUKNH4以NH4OAC作為浸提劑與土壤膠體上陽離子起交換作用如下:NH4OAC的干擾影響，NH4OAC浸出液常采用火焰光度計(jì)直接測(cè)定。為了抵消NH4土壤標(biāo)準(zhǔn)鉀溶液也需要期N用的我HQAc配制?；鹧婀舛确ǖ幕驹?。當(dāng)樣品溶液噴成霧狀以氣液溶膠形式進(jìn)入火焰后，溶劑蒸 發(fā)掉田翳癇普普在勰隼然螃火焰中被熔化、 蒸發(fā)為氣體分子繼續(xù)加熱即 又分解為中性原子（基態(tài)），更進(jìn)一步供給處于基態(tài)原子以足夠能量，即可使基態(tài)原子的一個(gè)外層電子移至更高的能級(jí)（激發(fā)

32、態(tài)），當(dāng)這種電子回到低能級(jí)時(shí)，即有特定波長的光發(fā)射出來，成為該元素的特征之一。例如，鉀原子線波長是766.4 nm、769.8 nm ;鈉原子線波長是589 nm。用單色器或干涉型濾光片把元素所發(fā)射的特定波長的光從其余輻射譜線中分離出來，直接照射到光電池或光電管上，把光能變?yōu)楣怆娏?，再由檢流計(jì)量出電流的強(qiáng)度。用火焰光度法進(jìn)行定 量分析時(shí)，若激發(fā)的條件(可燃?xì)怏w和壓縮氣體的供給速度，樣品溶液的流速，溶液中其他物質(zhì)的含量等)保持一定，則光電流的強(qiáng)度與被測(cè)元素的濃度成正比。 即可用下式表示之，即I二acb，由于用火焰作為激發(fā)光源時(shí)較為穩(wěn)定，式中a是個(gè) 常數(shù)，當(dāng)濃度很低時(shí)，自吸收現(xiàn)象可忽略不計(jì)，此時(shí)b

33、=1，于是譜線強(qiáng)度與試樣中欲測(cè)元素的濃度成正比關(guān)系：I二ac。把測(cè)得的強(qiáng)度與一種標(biāo)準(zhǔn)或一系列 標(biāo)準(zhǔn)的強(qiáng)度比較，即可直接確定待測(cè)元素的濃度而計(jì)算出未知溶液含鉀量。2、主要儀器：火焰光度計(jì)、往返式振蕩機(jī)3、試劑：(1 ) 1 mol L中性 NH4OAC ( pH 7.0 )溶液。稱取化學(xué)純 CH3COONH477.09 g加水稀釋，定容至近1 L。用HOAc或NH4OH調(diào)至pH 7.0，然后稀釋至1 L。具體方 法如下：取出1mol I? NHQAC溶液50ml，用溟百里酚藍(lán)作指示劑，以1:1 NH40H 或稀HOAc調(diào)至綠色即為pH 7.0 (也可以在酸度計(jì)上調(diào)節(jié))。根據(jù)50 ml所有NH40

34、H或HOAc的毫升數(shù)，算出所配溶液大概需要量，最后調(diào)至pH 7.0。(2)鉀的標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。稱取KCI (二級(jí)7 10C烘干2h ) 0.1907 g溶于ImolLNHqOAc溶液中，定容至1L，即為含100ug mK的NHQAC溶液。同時(shí)分別 準(zhǔn)確吸取此 10Oug ml JK 標(biāo)準(zhǔn)液 0、2.5、5,0、10.0、15.0、20.0、40.0 ml 放入 100 ml 容量瓶中、用 ImolLNFUOAc 溶液定容、即得 0、2.5、5、10、15、20、40ugml4K 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。4、操作步驟：稱取通過1 mm篩孔的風(fēng)干土 5.00 g于100 ml三角瓶或大試管中，加入1 mol

35、 L八中 性NHQAC溶液50ml，塞緊橡皮塞，振蕩30min ，用干的普通定性濾紙過濾。濾液 盛于小三角瓶中，同鉀標(biāo)準(zhǔn)系列溶液一起在火焰光度計(jì)上測(cè)定。 記錄其檢流計(jì)上的讀數(shù)，然后從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得其濃度。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：將配制的鉀標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，以濃度最大的一個(gè)定到火焰光度計(jì)上檢 流計(jì)為滿度（10。）然后從稀到濃依序進(jìn)行測(cè)定，記錄檢流計(jì)的讀數(shù)。以檢流計(jì)讀數(shù) 為縱坐標(biāo)，鉀（K ）的濃度ugmN為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。5結(jié)果計(jì)算：土壤速效鉀（mg kg J,K）=待測(cè)液（ug ml，K） vm式中：V加入浸提劑ml數(shù)；m烘干土樣品的質(zhì)量，g。1 ,溫度是影響緩控釋肥料養(yǎng)分釋放的主要因素。對(duì)于熱塑性樹

36、 脂包 膜尿素、熱塑性樹脂包膜復(fù)合肥、熱固性樹脂包膜復(fù)合肥、硫包 衣尿素、 異丁叉二服來說，溫度越高，養(yǎng)分釋放速率就越快，釋放期 就相對(duì)越短。 聚合物包膜控釋肥在水中的釋放曲線多為“ S”型，scu為“破裂式釋放，舊DU的釋放曲線呈倒“ L”型。在不同培養(yǎng)溫度條 件下氮素釋放率與時(shí)間的關(guān)系可用一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程N(yùn)t二11。（1七巧、Elovich方程N(yùn)t二a+blnt和拋物線方程N(yùn)t二a+b表征 在25c和40c時(shí)， 以一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程擬合效果最好。定量描述氮素養(yǎng)分釋放的動(dòng)力學(xué)方程 中以一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程更具有實(shí)效性。聚合物包膜復(fù)合肥的養(yǎng)分釋放規(guī)律為 氮素釋放速率最快，其次是鉀、磷素釋放速率較慢。2 .

37、包膜控釋肥料的養(yǎng)分釋放是由包膜內(nèi)外水蒸汽壓差引起的，其釋放速率常數(shù)k隨著水蒸汽壓差的增大而增大。蒸汽壓差越大，養(yǎng)分釋 放率越大，反之越小。在同一水蒸汽壓下，包膜肥料的養(yǎng)分釋放率隨著培 養(yǎng)時(shí)間的延長而增大；相同的培養(yǎng)時(shí)間，養(yǎng)分累積釋放率表 現(xiàn)為 H2OKH2P04飽和溶液,KCI飽和溶液。包膜控釋肥料膜內(nèi)外水蒸汽壓差 是控制養(yǎng)分釋放速率快慢的根本因素。3 . 土壤含水量對(duì)緩控釋肥料養(yǎng)分釋放速率有較大的影響。當(dāng)土 壤含水量在田間持水量之內(nèi)，隨著土壤含水量的增加，養(yǎng)分釋放加快。包 膜尿素在不同土壤含水量下擬合曲線的相關(guān)系數(shù)在0.97400.9772之間,標(biāo)準(zhǔn)誤在0.00150.0022之間，達(dá)極顯著水平（p =0.0001）。對(duì)于 包膜復(fù)合肥來說，供試樣品CRF1和CRF2在各培養(yǎng)時(shí)期內(nèi)氮素釋 放率 均隨著土壤含水量的增大而增大。對(duì)于硫包衣尿素來說，SCU在土