生物化學(xué)第四章酶PPT課件

1、 第第 四四 章章 酶酶化學(xué)（化學(xué)（enzymeenzyme) )學(xué)習(xí)目的與要求：學(xué)習(xí)目的與要求：1. 酶的酶的概念概念及發(fā)展及發(fā)展分類及命名分類及命名 5.酶作用的機(jī)制酶作用的機(jī)制2.酶催化作用的特點(diǎn)酶催化作用的特點(diǎn) 6.酶促反應(yīng)的速度及其影響因素酶促反應(yīng)的速度及其影響因素3.3.酶的化學(xué)本質(zhì)及組成酶的化學(xué)本質(zhì)及組成 7.酶的分離純化與酶活力測定酶的分離純化與酶活力測定4.4.酶結(jié)構(gòu)與其生物活性的關(guān)系酶結(jié)構(gòu)與其生物活性的關(guān)系 重點(diǎn)：重點(diǎn)：1.1.酶的化學(xué)本質(zhì)及組成酶的化學(xué)本質(zhì)及組成 4.酶促反應(yīng)的速度及其影響因素酶促反應(yīng)的速度及其影響因素2.2.酶結(jié)構(gòu)與其生物活性的關(guān)系酶結(jié)構(gòu)與其生物活性的關(guān)

2、系 5.酶的分離純化與酶活力測定酶的分離純化與酶活力測定3.酶作用的機(jī)制酶作用的機(jī)制難點(diǎn)：難點(diǎn)：1.酶作用的機(jī)制酶作用的機(jī)制 3.3.抑制劑對酶反應(yīng)的影響抑制劑對酶反應(yīng)的影響2.2.底物濃度對酶促反應(yīng)速度影響底物濃度對酶促反應(yīng)速度影響 4.4.酶活力測定酶活力測定第一節(jié)、酶的概念，分類及命名第一節(jié)、酶的概念，分類及命名一一. .酶的概念及發(fā)展酶的概念及發(fā)展 酶酶是一類由活性細(xì)胞產(chǎn)生的具有催化作用和高度專一是一類由活性細(xì)胞產(chǎn)生的具有催化作用和高度專一性的特殊性的特殊蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)。簡單說，酶是一類由活性細(xì)胞產(chǎn)生的。簡單說，酶是一類由活性細(xì)胞產(chǎn)生的生生物催化劑物催化劑。酶的概念酶的概念發(fā)展史發(fā)展史(

3、1)(1)酶是蛋白質(zhì)酶是蛋白質(zhì): : 1926 1926年年,james summer,james summer由刀豆制出脲酶結(jié)晶確立酶是蛋白質(zhì)的由刀豆制出脲酶結(jié)晶確立酶是蛋白質(zhì)的觀念，其具有蛋白質(zhì)的一切性質(zhì)。觀念，其具有蛋白質(zhì)的一切性質(zhì)。(2)(2)核酶的發(fā)現(xiàn)：核酶的發(fā)現(xiàn)： 1981198119821982年，年，thomas r.cechthomas r.cech實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)有催化活性的天然實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)有催化活性的天然rnarnaribozymeribozyme。 l19 rnal19 rna和核糖核酸酶和核糖核酸酶p p的的rnarna組分具有酶活性是兩個(gè)最著名的組分具有酶活性是兩個(gè)最著名的例子

4、。例子。 19951995年，發(fā)現(xiàn)年，發(fā)現(xiàn)dnadna的催化活性。的催化活性。(3)(3)抗體酶（抗體酶（abzymeabzyme）：）： 19861986年，年，richard lerrurrichard lerrur和和peter schaltzpeter schaltz運(yùn)用單克隆抗體技運(yùn)用單克隆抗體技術(shù)制備了具有酶活性的抗體（術(shù)制備了具有酶活性的抗體（catalytic antibodycatalytic antibody）。）。ch3chcoohohnad+h+ch3ccoohonadh二二. . 酶的分類酶的分類n氧化氧化- -還原酶催化氧化還原酶催化氧化- -還原反應(yīng)。還原反應(yīng)。n

5、主要包括脫氫酶主要包括脫氫酶(dehydrogenase)(dehydrogenase)和氧化酶和氧化酶(oxidase)(oxidase)。n如，乳酸如，乳酸(lactate)(lactate)脫氫酶催化乳酸的脫氫反應(yīng)。脫氫酶催化乳酸的脫氫反應(yīng)。1.1.氧化氧化- -還原酶還原酶 oxidoreductaseoxidoreductasech3chcoohnh2hoocch2ch2ccoohohoocch2ch2chcoohnh2ch3ccooho轉(zhuǎn)移酶催化基團(tuán)轉(zhuǎn)移反應(yīng)，即將一個(gè)底物分子的基團(tuán)或原子轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)移酶催化基團(tuán)轉(zhuǎn)移反應(yīng)，即將一個(gè)底物分子的基團(tuán)或原子轉(zhuǎn)移到另一個(gè)底物的分子上。移到另一個(gè)底物的

6、分子上。例如，例如， 谷丙轉(zhuǎn)氨酶催化的氨基轉(zhuǎn)移反應(yīng)。谷丙轉(zhuǎn)氨酶催化的氨基轉(zhuǎn)移反應(yīng)。2.2.轉(zhuǎn)移酶轉(zhuǎn)移酶 transferasetransferaseh2ocooch2ch3rrcoohch3ch2ohn水解酶催化底物的加水分解反應(yīng)。水解酶催化底物的加水分解反應(yīng)。n主要包括淀粉酶、蛋白酶、核酸酶及脂酶等。主要包括淀粉酶、蛋白酶、核酸酶及脂酶等。n例如，脂肪酶例如，脂肪酶(lipase)(lipase)催化的脂的水解反應(yīng)催化的脂的水解反應(yīng)3.3.水解酶水解酶 hydrolasehydrolasehoocch=chcoohh2ohoocch2chcoohohn裂合酶催化從底物分子中移去一個(gè)基團(tuán)或裂合

7、酶催化從底物分子中移去一個(gè)基團(tuán)或 原子形成雙鍵的反原子形成雙鍵的反應(yīng)及其逆反應(yīng)。應(yīng)及其逆反應(yīng)。n 主要包括醛縮酶、水化酶及脫氨酶等。主要包括醛縮酶、水化酶及脫氨酶等。n 例如，例如， 延胡索酸水合酶催化的反應(yīng)。延胡索酸水合酶催化的反應(yīng)。4. 裂解酶裂解酶 lyaselyaseoch2ohohohohohoch2ohch2ohohohoh異構(gòu)酶催化各種同分異構(gòu)體的相互轉(zhuǎn)化，即底物分子內(nèi)基團(tuán)或原異構(gòu)酶催化各種同分異構(gòu)體的相互轉(zhuǎn)化，即底物分子內(nèi)基團(tuán)或原子的重排過程。子的重排過程。例如，例如，6-6-磷酸葡萄糖異構(gòu)酶催化的反應(yīng)。磷酸葡萄糖異構(gòu)酶催化的反應(yīng)。5.異構(gòu)酶異構(gòu)酶 isomeraseisome

8、rasen合成酶，又稱為連接酶，能夠催化合成酶，又稱為連接酶，能夠催化c-cc-c、c-oc-o、c-n c-n 以及以及c-s c-s 鍵的鍵的形成反應(yīng)。這類反應(yīng)必須與形成反應(yīng)。這類反應(yīng)必須與atpatp分解反應(yīng)相互偶聯(lián)。分解反應(yīng)相互偶聯(lián)。 a + b + atp + h-o-h =a a + b + atp + h-o-h =a b + adp +pi b + adp +pi 例如，丙酮酸羧化酶催化的反應(yīng)例如，丙酮酸羧化酶催化的反應(yīng) 丙酮酸丙酮酸 + + coco2 2 草酰乙酸草酰乙酸6.6.合成酶合成酶 ligase or synthetaseligase or synthetase三

9、三. . 酶的命名酶的命名（1 1）根據(jù)其催化底物來命名；）根據(jù)其催化底物來命名；（2 2）根據(jù)所催化反應(yīng)的性質(zhì)來命名；）根據(jù)所催化反應(yīng)的性質(zhì)來命名；（3 3）結(jié)合上述兩個(gè)原則來命名；）結(jié)合上述兩個(gè)原則來命名；（4 4）有時(shí)在這些命名基礎(chǔ)上加上酶的來源或其它特點(diǎn)。）有時(shí)在這些命名基礎(chǔ)上加上酶的來源或其它特點(diǎn)。1.1.習(xí)慣命名法習(xí)慣命名法2.2.國際系統(tǒng)命名法國際系統(tǒng)命名法n系統(tǒng)名稱包括底物名稱、構(gòu)型、反應(yīng)性質(zhì)系統(tǒng)名稱包括底物名稱、構(gòu)型、反應(yīng)性質(zhì),2,2個(gè)底物，底物個(gè)底物，底物之間之間“ “ ：”，水解酶水解，水解酶水解2 2字可省略，最后加一個(gè)酶字。字可省略，最后加一個(gè)酶字。例如：例如：( (

10、習(xí)慣名稱習(xí)慣名稱: :谷丙轉(zhuǎn)氨酶谷丙轉(zhuǎn)氨酶) ) 系統(tǒng)名稱系統(tǒng)名稱:l-:l-丙氨酸丙氨酸 ： - -酮戊二酸氨基轉(zhuǎn)移酶酮戊二酸氨基轉(zhuǎn)移酶 酶催化的反應(yīng)酶催化的反應(yīng): : 谷氨酸谷氨酸 + + 丙酮酸丙酮酸 - -酮戊二酸酮戊二酸 + + 丙氨酸丙氨酸四四. .酶的編號酶的編號例如：例如： rnaset1-ec3148 ec - ec - 酶酶 3 - 3 - 水解酶水解酶 1 - 1 - 脂鍵脂鍵 4 - 4 - 磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵 8 - 8 - 編號（第編號（第8 8個(gè)）個(gè)）第二節(jié)、 酶催化作用的特點(diǎn)一.酶和一般催化劑的共性及酶催化作用特性酶和一般催化劑的共性及酶催化作用特性1.1.酶

11、和一般催化劑的酶和一般催化劑的共性共性：n加快反應(yīng)速度；加快反應(yīng)速度；n不改變平衡常數(shù)；不改變平衡常數(shù)；n自身不參與反應(yīng)。自身不參與反應(yīng)。2.2.酶催化作用酶催化作用特性特性：n條件溫和條件溫和：常溫、常壓、：常溫、常壓、ph=7ph=7；n高效率高效率：反應(yīng)速度與不加催化劑相比可提高：反應(yīng)速度與不加催化劑相比可提高10108 8 10102020，與加普通催化劑相比可提高，與加普通催化劑相比可提高10107 710101313；n專一性專一性：即酶只能對特定的一種或一類底物起作用。：即酶只能對特定的一種或一類底物起作用。n易變敏感性易變敏感性：易受各種因素的影響。：易受各種因素的影響。n酶的

12、活性調(diào)節(jié)控制酶的活性調(diào)節(jié)控制：受在活細(xì)胞內(nèi)受到精密嚴(yán)格的調(diào)節(jié)控制。：受在活細(xì)胞內(nèi)受到精密嚴(yán)格的調(diào)節(jié)控制。n酶分子代謝更新：酶分子代謝更新：二二. .專一性專一性1.1.絕對專一性絕對專一性有些酶只作用于一種底物，催化一個(gè)反應(yīng)，有些酶只作用于一種底物，催化一個(gè)反應(yīng)， 而不作用于任何其它物質(zhì)。而不作用于任何其它物質(zhì)。2.2.相對專一性相對專一性這類酶對結(jié)構(gòu)相近的一類底物都有作用。這類酶對結(jié)構(gòu)相近的一類底物都有作用。3.3.立體異構(gòu)專一性立體異構(gòu)專一性簇（基團(tuán)）專一性簇（基團(tuán)）專一性鍵專一性鍵專一性旋光異構(gòu)專一性。旋光異構(gòu)專一性。幾何異構(gòu)專一性幾何異構(gòu)專一性第三節(jié)、酶的化學(xué)本質(zhì)及組成第三節(jié)、酶的化學(xué)

13、本質(zhì)及組成一一. .酶的化學(xué)本質(zhì)酶的化學(xué)本質(zhì)1.1.由由基本組成單位氨基酸基本組成單位氨基酸2.2.具有具有蛋白質(zhì)的性質(zhì)蛋白質(zhì)的性質(zhì)- -兩性離解性質(zhì)等兩性離解性質(zhì)等3.3.具具有有雙縮脲反應(yīng)雙縮脲反應(yīng)二二. .酶的組成酶的組成全酶全酶(holoenzyme(holoenzyme）= = 酶蛋白酶蛋白 + + 輔因子輔因子單成份酶單成份酶：脲酶、蛋白酶、淀粉酶、核糖核酸酶等。：脲酶、蛋白酶、淀粉酶、核糖核酸酶等。（簡單蛋白質(zhì)簡單蛋白質(zhì)）雙成份酶雙成份酶（結(jié)合蛋白質(zhì)）（結(jié)合蛋白質(zhì)）酶酶 酶蛋白酶蛋白（apoenzymeapoenzyme） 輔因子輔因子（cofacter)cofacter) 輔酶

14、輔酶（coenzyme)coenzyme) 輔基輔基(prosthetic group)(prosthetic group)三三. .酶的輔因子酶的輔因子酶的輔因子是酶的對熱穩(wěn)定的非蛋白小分子物質(zhì)部分，酶的輔因子是酶的對熱穩(wěn)定的非蛋白小分子物質(zhì)部分，其主要作用是作為電子、原子或某些基團(tuán)的載體參與反其主要作用是作為電子、原子或某些基團(tuán)的載體參與反應(yīng)并促進(jìn)整個(gè)催化過程。應(yīng)并促進(jìn)整個(gè)催化過程。(1)(1)傳遞電子體：傳遞電子體：如如 卟啉鐵、卟啉鐵、鐵硫簇；鐵硫簇；(2)(2)傳遞氫（遞氫體）：傳遞氫（遞氫體）：如如 fmn/fadfmn/fad、nad/nadpnad/nadp、c c0 0q q

15、、硫辛酸；、硫辛酸；(3)(3)傳遞?；w：傳遞酰基體：如如 c c0 0a a、tpptpp、硫辛酸；、硫辛酸；(4)(4)傳遞一碳基團(tuán)：傳遞一碳基團(tuán)：如如 四氫葉酸；四氫葉酸；(5)(5)傳遞磷酸基：傳遞磷酸基：如如 atpatp，gtpgtp；(6)(6)其它作用：其它作用： 轉(zhuǎn)氨基，如轉(zhuǎn)氨基，如 v vb6 b6 ；傳遞傳遞coco2 2，如，如 生物素。生物素。第四節(jié)第四節(jié) 酶分子結(jié)構(gòu)與其生物活性的關(guān)系酶分子結(jié)構(gòu)與其生物活性的關(guān)系一.酶分子結(jié)構(gòu)酶分子結(jié)構(gòu)根據(jù)結(jié)構(gòu)不同酶可分為根據(jù)結(jié)構(gòu)不同酶可分為單體酶單體酶：只有單一的三級結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)構(gòu)成。：只有單一的三級結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)構(gòu)成。寡聚酶寡聚酶：由

16、多個(gè)（兩個(gè)以上）具有三級結(jié)構(gòu)的亞基聚合而成。：由多個(gè)（兩個(gè)以上）具有三級結(jié)構(gòu)的亞基聚合而成。多酶復(fù)合體多酶復(fù)合體：由幾個(gè)功能相關(guān)的酶嵌合而成的復(fù)合體。：由幾個(gè)功能相關(guān)的酶嵌合而成的復(fù)合體。二二. .活性中心活性中心活性中心：酶分子中直接和底物結(jié)合活性中心：酶分子中直接和底物結(jié)合并起催化反應(yīng)的空間局限（部位）。并起催化反應(yīng)的空間局限（部位）。催化部位催化部位( (catalytic site): ): 酶分子中促使酶分子中促使底物發(fā)生化學(xué)變化的底物發(fā)生化學(xué)變化的部位稱為催化部位。部位稱為催化部位。l通常將酶的結(jié)合部通常將酶的結(jié)合部位和催化部位總稱為位和催化部位總稱為酶的活性部位或活性酶的活性部位

17、或活性中心。中心。l結(jié)合部位決定酶的結(jié)合部位決定酶的專一性，專一性，l催化部位決定酶所催化部位決定酶所催化反應(yīng)的性質(zhì)。催化反應(yīng)的性質(zhì)。調(diào)控部位調(diào)控部位( (regulatory siteregulatory site):):酶分子中存在著一酶分子中存在著一些可以與其他分子發(fā)生某種程度的結(jié)合的部位，些可以與其他分子發(fā)生某種程度的結(jié)合的部位，從而引起酶分子空間構(gòu)象的變化，對酶起激活或從而引起酶分子空間構(gòu)象的變化，對酶起激活或抑制作用抑制作用三三. .必須基團(tuán)必須基團(tuán)酶表現(xiàn)催化活性不可缺少的基團(tuán)。酶表現(xiàn)催化活性不可缺少的基團(tuán)。親核性基團(tuán)：絲氨酸的羥基，半胱氨酸的巰基和組氨酸的咪親核性基團(tuán)：絲氨酸的羥

18、基，半胱氨酸的巰基和組氨酸的咪唑基。唑基。酸堿性基團(tuán)：門冬氨酸和谷氨酸的羧基，賴氨酸的氨基，酪酸堿性基團(tuán)：門冬氨酸和谷氨酸的羧基，賴氨酸的氨基，酪氨酸的酚羥基，組氨酸的咪唑基和半胱氨酸的巰基等。氨酸的酚羥基，組氨酸的咪唑基和半胱氨酸的巰基等。h2nchcch2ohoohohh2nchcch2ohoshshh2nchcch2ohonnhnnhh2nchcch2ohoch2cohoh2nchcch2ohocohocoohh2nchcch2ohoch2ch2ch2nh2nh2h2nchcch2ohoohoh第五節(jié)、酶作用的機(jī)制第五節(jié)、酶作用的機(jī)制一一. .酶催化作用與反應(yīng)活化能酶催化作用與反應(yīng)活化能

19、自自由由能能反應(yīng)進(jìn)程反應(yīng)進(jìn)程產(chǎn)物產(chǎn)物反應(yīng)物反應(yīng)物iiiiiii： 酶催化反應(yīng)活化能酶催化反應(yīng)活化能ii： 化學(xué)催化劑反應(yīng)活化能化學(xué)催化劑反應(yīng)活化能iii：無催化反應(yīng)活化能：無催化反應(yīng)活化能二二. .酶催化作用的中間產(chǎn)（絡(luò)合）物學(xué)說酶催化作用的中間產(chǎn)（絡(luò)合）物學(xué)說n在酶催化的反應(yīng)中，第一步是酶與底物形成酶在酶催化的反應(yīng)中，第一步是酶與底物形成酶底物中間復(fù)合物。當(dāng)?shù)孜锓肿釉诿缸饔孟掳l(fā)底物中間復(fù)合物。當(dāng)?shù)孜锓肿釉诿缸饔孟掳l(fā)生化學(xué)變化生化學(xué)變化, ,中間復(fù)合物再分解成產(chǎn)物和酶。中間復(fù)合物再分解成產(chǎn)物和酶。e + s = e-s e + s = e-s p + e p + en許多實(shí)驗(yàn)事實(shí)證明了許多實(shí)驗(yàn)

20、事實(shí)證明了e es s復(fù)合物的存在。復(fù)合物的存在。e es s復(fù)合物形成的速率與酶和底物的性質(zhì)有關(guān)。復(fù)合物形成的速率與酶和底物的性質(zhì)有關(guān)。三三. . 使酶具有高效性的機(jī)制使酶具有高效性的機(jī)制1.1.臨近定向效應(yīng)臨近定向效應(yīng)l在酶促反應(yīng)中，底物分子結(jié)合到酶的活性中心，一方面底物在酶促反應(yīng)中，底物分子結(jié)合到酶的活性中心，一方面底物在酶活性中心的有效濃度大大增加，有利于提高反應(yīng)速度；在酶活性中心的有效濃度大大增加，有利于提高反應(yīng)速度；l另一方面，由于活性中心的立體結(jié)構(gòu)和相關(guān)基團(tuán)的誘導(dǎo)和定另一方面，由于活性中心的立體結(jié)構(gòu)和相關(guān)基團(tuán)的誘導(dǎo)和定向作用，使底物分子中參與反應(yīng)的基團(tuán)相互接近，并被嚴(yán)格定向作用，

21、使底物分子中參與反應(yīng)的基團(tuán)相互接近，并被嚴(yán)格定向定位，使酶促反應(yīng)具有高效率和專一性特點(diǎn)向定位，使酶促反應(yīng)具有高效率和專一性特點(diǎn). .2.“2.“張力張力”和和“形變形變” 底物與酶結(jié)合誘導(dǎo)酶的分子構(gòu)象變化，變化的酶分子又使底物分底物與酶結(jié)合誘導(dǎo)酶的分子構(gòu)象變化，變化的酶分子又使底物分子的敏感鍵產(chǎn)生子的敏感鍵產(chǎn)生“張力張力”甚至甚至“形變形變” ” ，從而促使酶，從而促使酶底物中間底物中間產(chǎn)物進(jìn)入過渡態(tài)。產(chǎn)物進(jìn)入過渡態(tài)。3.3.酸堿催化酸堿催化l酸酸- -堿催化可分為狹義的酸堿催化可分為狹義的酸- -堿催化和廣義的酸堿催化和廣義的酸- -堿催化。酶參堿催化。酶參與的酸與的酸- -堿催化反應(yīng)一般都

22、是廣義的酸堿催化方式。堿催化反應(yīng)一般都是廣義的酸堿催化方式。l廣義酸堿催化是指通過質(zhì)子酸提供部分質(zhì)子廣義酸堿催化是指通過質(zhì)子酸提供部分質(zhì)子, ,或是通過質(zhì)子或是通過質(zhì)子堿接受部分質(zhì)子的作用，達(dá)到降低反應(yīng)活化能的過程。堿接受部分質(zhì)子的作用，達(dá)到降低反應(yīng)活化能的過程。l酶活性部位上的某些基團(tuán)可以作為良好的質(zhì)子供體或受體對酶活性部位上的某些基團(tuán)可以作為良好的質(zhì)子供體或受體對底物進(jìn)行酸堿催化。底物進(jìn)行酸堿催化。his his 殘基的咪唑基是酶的酸堿催化作用中最活潑的一個(gè)催化功能團(tuán)。殘基的咪唑基是酶的酸堿催化作用中最活潑的一個(gè)催化功能團(tuán)。-cooh, -nh3, -sh,+ohnhnh+-coo , -

23、nh2, -s , -.-o-nhn:4.4.共價(jià)催化共價(jià)催化l催化劑通過與底物形成反應(yīng)催化劑通過與底物形成反應(yīng)活性很高的共價(jià)過渡產(chǎn)物，使活性很高的共價(jià)過渡產(chǎn)物，使反應(yīng)活化能降低，從而提高反反應(yīng)活化能降低，從而提高反應(yīng)速度的過程，稱為共價(jià)催化。應(yīng)速度的過程，稱為共價(jià)催化。l酶中參與共價(jià)催化的基團(tuán)主酶中參與共價(jià)催化的基團(tuán)主要包括要包括 his his 的咪唑基，的咪唑基，cys cys 的巰基，的巰基，asp asp 的羧基，的羧基，ser ser 的羥基等。的羥基等。l某些輔酶，如焦磷酸硫胺素某些輔酶，如焦磷酸硫胺素和磷酸吡哆醛等也可以參與共和磷酸吡哆醛等也可以參與共價(jià)催化作用。價(jià)催化作用。四

24、四. .酶專一性的機(jī)制酶專一性的機(jī)制認(rèn)為整個(gè)酶分子的天然構(gòu)象是具有剛性結(jié)構(gòu)的，酶表面具有特認(rèn)為整個(gè)酶分子的天然構(gòu)象是具有剛性結(jié)構(gòu)的，酶表面具有特定的形狀。酶與底物的結(jié)合如同一把鑰匙對一把鎖一樣定的形狀。酶與底物的結(jié)合如同一把鑰匙對一把鎖一樣1.1.鎖鑰假說鎖鑰假說(lock and key hypothesis)(lock and key hypothesis)該學(xué)說認(rèn)為酶表面并沒有一種與底物互補(bǔ)的固定形該學(xué)說認(rèn)為酶表面并沒有一種與底物互補(bǔ)的固定形狀，而只是由于底物的誘導(dǎo)才形成了互補(bǔ)形狀狀，而只是由于底物的誘導(dǎo)才形成了互補(bǔ)形狀. .2.2.誘導(dǎo)契合假說（誘導(dǎo)契合假說（inducedinduce

25、dfit hypothesis)fit hypothesis)第六節(jié)、酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)第六節(jié)、酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)一一. .底物濃度對酶促反應(yīng)速度影響底物濃度對酶促反應(yīng)速度影響底物濃度底物濃度對酶促反應(yīng)速度影響對酶促反應(yīng)速度影響 在酶濃度，在酶濃度，phph，溫度等條件不，溫度等條件不變的情況下研究底物濃度和反應(yīng)變的情況下研究底物濃度和反應(yīng)速度的關(guān)系。如右圖所示：速度的關(guān)系。如右圖所示：n在低底物濃度時(shí)在低底物濃度時(shí), , 反應(yīng)速度與底反應(yīng)速度與底物濃度成正比，表現(xiàn)為物濃度成正比，表現(xiàn)為一級反應(yīng)一級反應(yīng)特征特征。n當(dāng)?shù)孜餄舛冗_(dá)到一定值時(shí)，底物當(dāng)?shù)孜餄舛冗_(dá)到一定值時(shí)，底物濃度增加，反應(yīng)速度增加，表現(xiàn)濃度

26、增加，反應(yīng)速度增加，表現(xiàn)為為混合級反應(yīng)特征混合級反應(yīng)特征n當(dāng)?shù)孜餄舛?，幾乎所有的酶都與當(dāng)?shù)孜餄舛?，幾乎所有的酶都與底物結(jié)合后，反應(yīng)速度達(dá)到最大底物結(jié)合后，反應(yīng)速度達(dá)到最大值（值（v vmaxmax），此時(shí)再增加底物濃），此時(shí)再增加底物濃度，反應(yīng)速度不再增加，表現(xiàn)為度，反應(yīng)速度不再增加，表現(xiàn)為零級反應(yīng)零級反應(yīng)。v=vmax skm + s二二.米氏方程米氏方程19131913年，德國化學(xué)家年，德國化學(xué)家michaelismichaelis和和mentenmenten根據(jù)根據(jù)中間產(chǎn)物學(xué)說中間產(chǎn)物學(xué)說對對酶促反映的動(dòng)力學(xué)進(jìn)行研究，推導(dǎo)出了表示整個(gè)反應(yīng)中底物濃酶促反映的動(dòng)力學(xué)進(jìn)行研究，推導(dǎo)出了表示整個(gè)

27、反應(yīng)中底物濃度和反應(yīng)速度關(guān)系的著名公式，稱為度和反應(yīng)速度關(guān)系的著名公式，稱為米氏方程米氏方程。k km m 米氏常數(shù)米氏常數(shù)v vmax max 最大反應(yīng)速度最大反應(yīng)速度三三.米氏方程的推導(dǎo)米氏方程的推導(dǎo)v=v m ax s k m + s判斷酶的最適底物判斷酶的最適底物kmkm最小的底物最小的底物計(jì)算一定速度下的底物濃度計(jì)算一定速度下的底物濃度v= 80% vmax v= 80% vmax 時(shí)，時(shí)， (s)=(s)=？ 由：由： 0.8 km + 0.2 (s)= (s), 0.8 km = 0.2 (s)0.8 km + 0.2 (s)= (s), 0.8 km = 0.2 (s) (s)

28、=4 km (s)=4 km 又又: v= 99% vmax , (s)= 99 km: v= 99% vmax , (s)= 99 km6.6.了解酶的底物在體內(nèi)的濃度水平了解酶的底物在體內(nèi)的濃度水平km (s)km (s)7.7.判斷反應(yīng)的方向判斷反應(yīng)的方向kmkm最小的反應(yīng)最小的反應(yīng)8.8.判斷抑制作用的類型判斷抑制作用的類型1 1 k km 1 1m 1 1 = = + + v v v vmax s max s v vmaxmax五五. .米氏常數(shù)米氏常數(shù)kmkm的測定的測定-4-202468100.00.20.40.60.81.01/s(1/mmol.l-1)1/v1/1/vmaxv

29、max斜率斜率= =km/vmaxkm/vmax-1/-1/kmkmv=v m ax s k m + s斜率斜率=-=-kmkm102030405060708090020406080100tem perature ocrelative activity (%)最適溫度第七節(jié)第七節(jié) 影響酶促反應(yīng)速度的因素影響酶促反應(yīng)速度的因素一一. .溫度對酶反應(yīng)的影響溫度對酶反應(yīng)的影響n一方面是溫度升高一方面是溫度升高, ,酶促反酶促反應(yīng)速度加快。應(yīng)速度加快。n另一方面另一方面, ,溫度升高溫度升高, ,酶的高酶的高級結(jié)構(gòu)將發(fā)生變化或變性，級結(jié)構(gòu)將發(fā)生變化或變性，導(dǎo)致酶活性降低甚至喪失。導(dǎo)致酶活性降低甚至喪失

30、。 n因此大多數(shù)酶都有一個(gè)因此大多數(shù)酶都有一個(gè)最適最適溫度溫度。 在最適溫度條件下在最適溫度條件下, ,反應(yīng)速度最大。反應(yīng)速度最大。二二.ph.ph對酶反應(yīng)的影響對酶反應(yīng)的影響n在一定的ph下, 酶具有最大的催化活性,通常稱此ph為最適ph。速度酶濃度三三. .酶濃度對酶反應(yīng)的影響酶濃度對酶反應(yīng)的影響在底物足夠過量而其它條件固定的情況下，并且反應(yīng)系在底物足夠過量而其它條件固定的情況下，并且反應(yīng)系統(tǒng)中不含有抑制酶活性的物質(zhì)及其他不利于酶發(fā)揮作用統(tǒng)中不含有抑制酶活性的物質(zhì)及其他不利于酶發(fā)揮作用的因素時(shí)，酶促反應(yīng)的速度和酶濃度成正比的因素時(shí)，酶促反應(yīng)的速度和酶濃度成正比四四. .激活劑對酶反應(yīng)的影響

31、激活劑對酶反應(yīng)的影響1.1.概念：凡是能提高酶活力的物質(zhì)概念：凡是能提高酶活力的物質(zhì)( (簡單化合物簡單化合物) )都稱為酶的都稱為酶的激活劑。激活劑。 （activator)activator)。2.2.成分：其中大部分是一些無機(jī)離子和小分子簡單有機(jī)物。成分：其中大部分是一些無機(jī)離子和小分子簡單有機(jī)物。 如：如：nana+ +、k k+ +、caca2+2+、mgmg2+2+、cucu2+2+、znzn2+2+、coco2+2+、crcr2+2+、fefe2+2+、 clcl- -、brbr- -、i i- -、cncn- -、nono3 3- -、popo4 4- - 、gsh gsh 、

32、vitcvitc 等；等；3.3.功能：功能：1 1）. .這些離子可與酶分子上的氨基酸側(cè)鏈基團(tuán)結(jié)合，這些離子可與酶分子上的氨基酸側(cè)鏈基團(tuán)結(jié)合， 可能是酶活性部位的組成部分，可能是酶活性部位的組成部分， 2 2）. .也可能作為輔酶或輔基的一個(gè)組成部分起作用；也可能作為輔酶或輔基的一個(gè)組成部分起作用；4.4.特點(diǎn)：特點(diǎn)：1 1）. .一般情況下，一種激活劑對某種酶是激活劑，而對另一般情況下，一種激活劑對某種酶是激活劑，而對另 一種酶則不一定是激活劑，可能發(fā)生抑制作用；一種酶則不一定是激活劑，可能發(fā)生抑制作用； 2 2）. .對于同一種酶，不同激活劑濃度會(huì)產(chǎn)生不同的作用。對于同一種酶，不同激活劑

33、濃度會(huì)產(chǎn)生不同的作用。 五五. .抑制劑對酶反應(yīng)的影響抑制劑對酶反應(yīng)的影響（一）（一）. .酶的抑制作用的概念酶的抑制作用的概念有些物質(zhì)能與酶分子上某些必須基團(tuán)結(jié)合（作用有些物質(zhì)能與酶分子上某些必須基團(tuán)結(jié)合（作用),),使酶的使酶的活性中心的化學(xué)性質(zhì)發(fā)生改變，導(dǎo)致酶活力下降或喪失，活性中心的化學(xué)性質(zhì)發(fā)生改變，導(dǎo)致酶活力下降或喪失，這種現(xiàn)象稱為這種現(xiàn)象稱為酶的抑制作用酶的抑制作用。n抑制劑：抑制劑： 能夠引起酶的抑制作用的化合物則稱為能夠引起酶的抑制作用的化合物則稱為抑制劑抑制劑 （inhibitor)inhibitor)。 n抑制作用抑制作用的的特點(diǎn)特點(diǎn)：酶的抑制劑一般具備兩個(gè)方面的：酶的抑制

34、劑一般具備兩個(gè)方面的特點(diǎn)特點(diǎn)：na.a.在化學(xué)結(jié)構(gòu)上與被抑制的底物分子或底物的過渡狀態(tài)相在化學(xué)結(jié)構(gòu)上與被抑制的底物分子或底物的過渡狀態(tài)相似。似。nb.b.能夠與酶的活性中心以非共價(jià)或共價(jià)的方式形成比較穩(wěn)能夠與酶的活性中心以非共價(jià)或共價(jià)的方式形成比較穩(wěn)定的復(fù)合體或結(jié)合物。定的復(fù)合體或結(jié)合物。（二）（二）. .抑制作用的類型抑制作用的類型1.1.不可逆抑制作用不可逆抑制作用抑制劑與酶反應(yīng)中心的抑制劑與酶反應(yīng)中心的活性基團(tuán)以共價(jià)形式結(jié)活性基團(tuán)以共價(jià)形式結(jié)合，引起酶的永久性失合，引起酶的永久性失活。如有機(jī)磷毒劑二異活。如有機(jī)磷毒劑二異丙基氟磷酸酯。丙基氟磷酸酯。 2.2.可逆抑制作用：可逆抑制作用：

35、抑制劑與酶蛋白以非共價(jià)方式結(jié)合，引起酶活性暫時(shí)性喪失。抑劑抑制劑與酶蛋白以非共價(jià)方式結(jié)合，引起酶活性暫時(shí)性喪失。抑劑可以通過透析等方法被除去，并且能部分或全部恢復(fù)酶的活性可以通過透析等方法被除去，并且能部分或全部恢復(fù)酶的活性根椐抑制劑與酶結(jié)合的情況，又可以分為三類：根椐抑制劑與酶結(jié)合的情況，又可以分為三類：（1）競爭性抑制：）競爭性抑制：概念：概念：某些抑制劑的化學(xué)結(jié)構(gòu)與底物相似，因而能與底物竟?fàn)幠承┮种苿┑幕瘜W(xué)結(jié)構(gòu)與底物相似，因而能與底物竟?fàn)幣c酶活性中心結(jié)合。當(dāng)抑制劑與活性中心結(jié)合后，底物被排斥與酶活性中心結(jié)合。當(dāng)抑制劑與活性中心結(jié)合后，底物被排斥在反應(yīng)中心之外，其結(jié)果是酶促反應(yīng)被抑制了。在

36、反應(yīng)中心之外，其結(jié)果是酶促反應(yīng)被抑制了。特點(diǎn)：特點(diǎn)：竟?fàn)幮砸种仆ǔ？梢酝ㄟ^增大底物濃度，即提高底物的竟?fàn)幮砸种仆ǔ？梢酝ㄟ^增大底物濃度，即提高底物的競爭能力來消除。競爭能力來消除。競爭性抑制可用下式表示：競爭性抑制可用下式表示：競爭性抑制作用的速度方程：競爭性抑制作用的速度方程：競爭性抑制作用的競爭性抑制作用的lineweaverlineweaverburkburk圖圖 ：（2）非競爭性抑制：）非競爭性抑制：概念：概念：酶可同時(shí)與底物及抑制劑結(jié)合，引起酶分子構(gòu)象變化，并導(dǎo)至酶可同時(shí)與底物及抑制劑結(jié)合，引起酶分子構(gòu)象變化，并導(dǎo)至酶活性下降。由于這類物質(zhì)并不是與底物競爭與活性中心的結(jié)合，所酶活性下

37、降。由于這類物質(zhì)并不是與底物競爭與活性中心的結(jié)合，所以稱為非競爭性抑制劑。以稱為非競爭性抑制劑。如某些金屬離子（如某些金屬離子（cu2+、ag+、hg2+）以及）以及edta等，通常能與酶分等，通常能與酶分子的調(diào)控部位中的子的調(diào)控部位中的-sh基團(tuán)作用，改變酶的空間構(gòu)象，引起非競爭性基團(tuán)作用，改變酶的空間構(gòu)象，引起非競爭性抑制。抑制。特點(diǎn)：特點(diǎn)：非竟?fàn)幮砸种撇荒芡ㄟ^增大底物濃度的方法來消除非竟?fàn)幮砸种撇荒芡ㄟ^增大底物濃度的方法來消除。非競爭性抑制可用下式表示：非競爭性抑制可用下式表示：非競爭性抑制作用的速度方程：非競爭性抑制作用的速度方程：非競爭性抑制作用的非競爭性抑制作用的lineweave

38、rlineweaverburkburk圖圖 ：（3 3）反競爭性抑制：）反競爭性抑制：概念：酶只有在與底物結(jié)合后，才能與抑制劑結(jié)合，概念：酶只有在與底物結(jié)合后，才能與抑制劑結(jié)合， 引起酶活性下降。引起酶活性下降。反競爭性抑制可用下式表示：反競爭性抑制可用下式表示：特點(diǎn)：特點(diǎn)：非竟?fàn)幮砸种撇荒芡ㄟ^增大底物濃度的方法來消除非竟?fàn)幮砸种撇荒芡ㄟ^增大底物濃度的方法來消除。反競爭性抑制作用的速度方程：反競爭性抑制作用的速度方程：反競爭性抑制作用的反競爭性抑制作用的lineweaverlineweaverburkburk圖圖 ：第八節(jié)、酶的分離純化與酶活力測定第八節(jié)、酶的分離純化與酶活力測定一一. .酶的

39、分離純化酶的分離純化1.1.基本原則基本原則 提取過程中避免酶變性而失去活性提取過程中避免酶變性而失去活性 防止強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、高溫和劇烈攪拌等防止強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、高溫和劇烈攪拌等 要求在低溫下操作要求在低溫下操作 加入的化學(xué)試劑不使酶變性加入的化學(xué)試劑不使酶變性 操作中加入緩沖溶液操作中加入緩沖溶液2.2.基本操作程序基本操作程序a.a.選材選材：微生物（微生物發(fā)酵物微生物（微生物發(fā)酵物: : 胞內(nèi)酶，胞外胞內(nèi)酶，胞外酶），動(dòng)物（動(dòng)物器臟：消化酶，血液：酶），動(dòng)物（動(dòng)物器臟：消化酶，血液：sodsod酶，尿酶，尿液：尿激酶等）液：尿激酶等）, ,植物（木瓜蛋白酶，菠蘿蛋白酶植物（木瓜蛋白酶，菠蘿蛋白

40、酶等）。等）。b.b.抽提抽提：加入提取液提取。胞內(nèi)酶先要進(jìn)行細(xì)胞破加入提取液提取。胞內(nèi)酶先要進(jìn)行細(xì)胞破碎（機(jī)械研磨，超聲波破碎，反復(fù)凍融或自溶等），碎（機(jī)械研磨，超聲波破碎，反復(fù)凍融或自溶等），c.c.分離分離：先進(jìn)行凈化處理（過濾，絮凝，離心脫先進(jìn)行凈化處理（過濾，絮凝，離心脫色），再采用沉淀法分離（鹽析法，有機(jī)溶劑沉淀色），再采用沉淀法分離（鹽析法，有機(jī)溶劑沉淀法，超離心等）。法，超離心等）。d.d.純化純化：可采用離子交換層析，凝膠過濾，液相色可采用離子交換層析，凝膠過濾，液相色譜，親和色譜和超濾等方法。譜，親和色譜和超濾等方法。3.3.酶的制劑形式酶的制劑形式a.a.固體固體：干燥（

41、冰凍升華，噴霧干燥，真空干燥）：干燥（冰凍升華，噴霧干燥，真空干燥）b.b.液體：液體：溶液溶液4.4.保存保存低溫下短期保存低溫下短期保存0-40-4（固體）（固體）-20-20-70-70（液體）（液體）二二. .酶活力的測定酶活力的測定1.1.酶活力概念酶活力概念酶活力酶活力：又稱為酶活性，一般把酶催化一定化學(xué)反應(yīng)的能力稱：又稱為酶活性，一般把酶催化一定化學(xué)反應(yīng)的能力稱為酶活力，通常以在一定條件下酶所催化的化學(xué)反應(yīng)速度來表為酶活力，通常以在一定條件下酶所催化的化學(xué)反應(yīng)速度來表示。酶活力可用單位時(shí)間內(nèi)單位體積中底物的減少量或產(chǎn)物的示。酶活力可用單位時(shí)間內(nèi)單位體積中底物的減少量或產(chǎn)物的增加量

42、表示，單位為增加量表示，單位為mol/minmol/min等。等。2.2.酶活力的表示方法酶活力的表示方法- -酶活力單位酶活力單位酶活力單位的基本定義為：酶活力單位的基本定義為： 規(guī)定條件（最適條件）下一定時(shí)間內(nèi)催化完成一定化學(xué)規(guī)定條件（最適條件）下一定時(shí)間內(nèi)催化完成一定化學(xué)反應(yīng)量所需的酶量。反應(yīng)量所需的酶量。據(jù)不同情況有幾種酶活力單位（據(jù)不同情況有幾種酶活力單位（activity unitactivity unit）或又稱酶）或又稱酶單位（單位（enzyme unitenzyme unit）國際單位國際單位u u（unitunit）：是以最佳條件或某一固定條件下每分鐘催化）：是以最佳條件或

43、某一固定條件下每分鐘催化生成生成1 1molmol產(chǎn)物所需要的酶量為一個(gè)酶活力單位。產(chǎn)物所需要的酶量為一個(gè)酶活力單位。“katal”“katal”單位：是指在一定條件下單位：是指在一定條件下1 1秒鐘內(nèi)轉(zhuǎn)化秒鐘內(nèi)轉(zhuǎn)化1mol1mol底物底物所所需的酶量。需的酶量。katkat和和u u的換算關(guān)系：的換算關(guān)系：1 kat=61 kat=610107 7u u，1u=16.671u=16.67n n katkat 以上的酶單位定義中，如果底物（以上的酶單位定義中，如果底物（s s）有一個(gè)以上可被作）有一個(gè)以上可被作用的化學(xué)鍵，則一個(gè)酶單位表示用的化學(xué)鍵，則一個(gè)酶單位表示1 1分鐘使分鐘使1mol1

44、mol有關(guān)基團(tuán)轉(zhuǎn)化有關(guān)基團(tuán)轉(zhuǎn)化的酶量。的酶量。 如果是如果是兩個(gè)相同的分子兩個(gè)相同的分子參加反應(yīng)，則每分鐘催化參加反應(yīng)，則每分鐘催化2mol2mol底底物物轉(zhuǎn)化的酶量稱為一個(gè)酶單位。轉(zhuǎn)化的酶量稱為一個(gè)酶單位。 在在“u”u”和和“kat”kat”酶活力單位的定義和應(yīng)用中，酶催化底物的酶活力單位的定義和應(yīng)用中，酶催化底物的分子量必須是已知的，否則將無法計(jì)算分子量必須是已知的，否則將無法計(jì)算。習(xí)慣單位習(xí)慣單位在實(shí)際使用中，不同酶有各自的規(guī)定，如：在實(shí)際使用中，不同酶有各自的規(guī)定，如：-淀粉酶活力單位：淀粉酶活力單位：每小時(shí)分解每小時(shí)分解1g1g可溶性淀粉的酶量為可溶性淀粉的酶量為一個(gè)酶單位。（一個(gè)

45、酶單位。（qb546-80qb546-80），也有規(guī)定每小時(shí)分解），也有規(guī)定每小時(shí)分解1ml2%1ml2%可溶性淀粉溶液為無色糊精的酶量為一個(gè)酶單位。顯然可溶性淀粉溶液為無色糊精的酶量為一個(gè)酶單位。顯然后者比前一個(gè)單位小。后者比前一個(gè)單位小。糖化酶活力單位：糖化酶活力單位：在規(guī)定條件下，每小時(shí)轉(zhuǎn)化可溶性在規(guī)定條件下，每小時(shí)轉(zhuǎn)化可溶性淀粉產(chǎn)生淀粉產(chǎn)生1mg1mg還原糖（以葡萄糖計(jì)）所需的酶量為一個(gè)酶還原糖（以葡萄糖計(jì)）所需的酶量為一個(gè)酶單位。單位。蛋白酶：蛋白酶：規(guī)定條件下，每分鐘分解底物酪蛋白產(chǎn)生規(guī)定條件下，每分鐘分解底物酪蛋白產(chǎn)生1g1g酪氨酸所需的酶量。酪氨酸所需的酶量。dnadna限制性

46、內(nèi)切酶：限制性內(nèi)切酶：推薦反應(yīng)條件下，一小時(shí)內(nèi)可完全推薦反應(yīng)條件下，一小時(shí)內(nèi)可完全消化消化1g1g純化的純化的dnadna所需的酶量。所需的酶量。比活力比活力: :指每指每mgmg酶蛋白質(zhì)酶蛋白質(zhì)/ /蛋白氮所含的酶活力單位數(shù)。蛋白氮所含的酶活力單位數(shù)。比活力比活力=u=u或或kat/mgkat/mg酶蛋白或蛋白氮酶蛋白或蛋白氮(u(u或或kat/mlkat/ml酶液酶液, ,或或u u或或kat/mgkat/mg酶制劑）酶制劑）比活力表示酶制劑的比活力表示酶制劑的純度純度的一個(gè)指標(biāo)。的一個(gè)指標(biāo)。4.4.內(nèi)內(nèi)(sec.)(sec.)每一每一或或或每或每molmol酶酶5.5.酶活力測定酶活力測

47、定酶活力測定就是測定一定量的酶，在單位時(shí)間內(nèi)產(chǎn)物酶活力測定就是測定一定量的酶，在單位時(shí)間內(nèi)產(chǎn)物(p)(p)的生成（增加）量或底物（的生成（增加）量或底物（s s）的消耗（減少）量。）的消耗（減少）量。即測定時(shí)確定三種量：即測定時(shí)確定三種量：加入一定量的酶；加入一定量的酶；一定時(shí)間間隔；一定時(shí)間間隔；物質(zhì)的增減量。物質(zhì)的增減量。1 1）. .測定酶活力常有以下幾種方法測定酶活力常有以下幾種方法u反應(yīng)計(jì)時(shí)法反應(yīng)計(jì)時(shí)法：反應(yīng)計(jì)時(shí)必須準(zhǔn)確。反應(yīng)體系必須預(yù)熱至規(guī)定溫度后，：反應(yīng)計(jì)時(shí)必須準(zhǔn)確。反應(yīng)體系必須預(yù)熱至規(guī)定溫度后，加入酶液并立即計(jì)時(shí)。反應(yīng)到時(shí)，要立即滅酶活性，終止反應(yīng)，并記加入酶液并立即計(jì)時(shí)。反應(yīng)

48、到時(shí)，要立即滅酶活性，終止反應(yīng)，并記錄終了時(shí)間。終止酶反應(yīng)。錄終了時(shí)間。終止酶反應(yīng)。u常使酶立刻變性最常用的方法：常使酶立刻變性最常用的方法：是加入三氯乙酸或過氯酸使酶蛋白沉淀。是加入三氯乙酸或過氯酸使酶蛋白沉淀。也可用也可用sdssds使酶變性，或迅速加熱使酶變性。使酶變性，或迅速加熱使酶變性。有些酶可用非變性法來停止反應(yīng)或用破壞其輔因子來停止反應(yīng)有些酶可用非變性法來停止反應(yīng)或用破壞其輔因子來停止反應(yīng) 。反應(yīng)量的測定反應(yīng)量的測定法：測底物減少量或產(chǎn)物生成量均可。在反應(yīng)過程法：測底物減少量或產(chǎn)物生成量均可。在反應(yīng)過程中產(chǎn)物是從無到有，變化量明顯，極利于測定，所以大都測定產(chǎn)中產(chǎn)物是從無到有，變化

49、量明顯，極利于測定，所以大都測定產(chǎn)物的生成量物的生成量2).2).酶活力測定的分析方法酶活力測定的分析方法具體物質(zhì)量的測定，據(jù)被測定物質(zhì)的物理化學(xué)性質(zhì)通過定量分具體物質(zhì)量的測定，據(jù)被測定物質(zhì)的物理化學(xué)性質(zhì)通過定量分析法測定。析法測定。常用的方法有：常用的方法有：光譜分析法光譜分析法：酶將產(chǎn)物轉(zhuǎn)變?yōu)椋ㄖ苯踊蜷g接）一個(gè)可用：酶將產(chǎn)物轉(zhuǎn)變?yōu)椋ㄖ苯踊蜷g接）一個(gè)可用分光光度法分光光度法或熒光光度法或熒光光度法測出的化合物。測出的化合物?；瘜W(xué)法化學(xué)法：利用化學(xué)反應(yīng)使產(chǎn)物變成一個(gè)可用某種物理方法測出的化：利用化學(xué)反應(yīng)使產(chǎn)物變成一個(gè)可用某種物理方法測出的化合物，然后再反過來算出酶的活性。合物，然后再反過來算出

50、酶的活性。 放射性化學(xué)法放射性化學(xué)法：用同位素標(biāo)記的底物，經(jīng)酶作用后生成含放射性的：用同位素標(biāo)記的底物，經(jīng)酶作用后生成含放射性的產(chǎn)物，在一定時(shí)間內(nèi)，生成的放射性產(chǎn)物量與酶活性成正比。產(chǎn)物，在一定時(shí)間內(nèi)，生成的放射性產(chǎn)物量與酶活性成正比。 多酶復(fù)合體多酶復(fù)合體由幾個(gè)功能相關(guān)的酶嵌合而成的復(fù)合體。由幾個(gè)功能相關(guān)的酶嵌合而成的復(fù)合體。催化同一化學(xué)反應(yīng)，結(jié)構(gòu)與性質(zhì)不同的一類酶催化同一化學(xué)反應(yīng)，結(jié)構(gòu)與性質(zhì)不同的一類酶如：人乳酸脫氫酶如：人乳酸脫氫酶ldhldh1 1 h h4 4 73 2 43 14 10 0 43 12 27.1 73 2 43 14 10 0 43 12 27.1ldhldh2 2 h h3 3m 24 4 44 34 25 0 44 49 34.7m 24 4 44 34 25 0 44 49 34.7ldhldh3 3 h h2 2m m2 2 3 11