熒光定量pcr技術(shù)簡要ppt課件

1、水解探針的MIXSYBR染料的MIX結(jié)合于雙鏈核酸的小溝處與雙鏈DNA結(jié)合后受激產(chǎn)生熒光在變性條件下雙鏈分開，熒光消逝背景強(qiáng)，非特異性較強(qiáng)SYBR染料法的擴(kuò)增曲線染料法的擴(kuò)增曲線Taqman探針類探針類水解探針-Roche cobas與ABI Taqman AnnealingElongationEnd of ElongationDenaturationFluoresceinLC Redfor sequence specific detection of DNA雜交探針檢測羅氏專利性技術(shù)雜交探針檢測羅氏專利性技術(shù)熒光染料的光學(xué)性質(zhì)ABI 7500 Real-Time PCR Systems 光學(xué)

2、原件u 規(guī)范曲線法u u 2 -Ct法u 相對定量 規(guī)范曲線法規(guī)范曲線法 LogX0與循環(huán)數(shù)呈線性關(guān)系，經(jīng)過知起始拷貝數(shù)的規(guī)范品可作出規(guī)范曲線，根據(jù)未知樣品Ct值，就可以在規(guī)范曲線上計(jì)算出未知樣品初始模板量。優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：無需作規(guī)范曲線無需作規(guī)范曲線 適用適用適宜于配對樣本的相對定量分析適宜于配對樣本的相對定量分析2 -Ct法校正值 =2 病人目的基因平均Ct值病人內(nèi)參基因平均Ct值正常人目的基因平均Ct值正常人內(nèi)參基因平均Ct值A(chǔ)BL擴(kuò)增曲線RnBCR/ABL1-P210擴(kuò)增曲線Rn報(bào)告舉例序號序號緩解分類緩解分類緩解指標(biāo)緩解指標(biāo)備注備注1完全血液學(xué)緩解（CHR）血細(xì)胞計(jì)數(shù)正常，白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)

3、正常，無髓外白血病表現(xiàn) 2主要細(xì)胞遺傳學(xué)緩解（MCyR）Ph 陽性細(xì)胞=(135)%分子學(xué)研究已證實(shí)不論變異、復(fù)雜或遮蔽的Ph易位，CML患者都具有和典型Ph易位相同的分子病理學(xué)基礎(chǔ)即bcr/abl基因重排,3完全細(xì)胞遺傳學(xué)緩解（CCyR）Ph 陽性細(xì)胞=0（費(fèi)城染色體傳陰）4主要分子學(xué)反應(yīng)（MMoR） Bcr-abl轉(zhuǎn)錄水平下降3個(gè)對數(shù)級以上;或BCR-ABL/ABL 0.1%慢性髓系白血病(CML)是一種血液系統(tǒng)的惡性腫瘤，以染色體異常t(9;22)(q34;q11)為特征，通過這種染色體易位激活了一種新的酪氨酸激酶BCR-ABL嵌合蛋白，此蛋白的產(chǎn)生成為此病發(fā)病的原因5完全分子學(xué)反應(yīng)（CMoR） Bcr-abl轉(zhuǎn)錄水平下降4個(gè)對數(shù)級以上， RT-PCR檢測BCR-ABL 為陰性CML緩解目的28mon;23% of Ph+ metaphases35mon,CCyR41mon,MMoR細(xì)胞遺傳+FG分子檢測監(jiān)測CML治療-舉例32mon;23% of Ph+ metaphasesPfaffl equation:if Eref=