血清肌酸激酶DGKC推薦方法測定.doc

1、血清肌酸激酶 (CK) DGKC推薦方法測定1. 實(shí)驗(yàn)原理德國臨床化學(xué)學(xué)會(DGKC)和國際臨床化學(xué)學(xué)會(IFCC) 推薦的連續(xù)監(jiān)測法。ADP+磷酸肌酸CK肌酸+ATPATP+葡萄糖己糖激酶(HK)ADP+葡萄糖 -6-磷酸+葡 萄 糖 -6-磷 酸 +NADP(G6P-DH)6- 磷 酸 葡 萄 糖 酸+NADPH+H+NADPH 在 340nm 處 有 特 異 吸 收 ，通 過 測 定 NADPH 生 成 速 率 計(jì) 算 出 CK 活 性 。2. 標(biāo) 本 ：2.1病人準(zhǔn)備：無特殊要求。2.2類型：血清，肝素或 EDTA血漿。3.標(biāo)本存放：穩(wěn)定性：28保存穩(wěn)定 7 天;1525保存穩(wěn)定 1

2、天;-20 保存穩(wěn)定 4 周（避光保存）。3 天內(nèi)的活性損失：28保存 24 小時或 1822保存 1小時至少損失 10%。4. 標(biāo)本運(yùn)輸：常溫條件下保存運(yùn)輸。5. 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)菌污染的標(biāo)本。6. 實(shí)驗(yàn)材料6.1試 劑 利 德 曼 CK 測 定 試 劑 盒 （ 試 劑 1 6 64ml試 劑 26 16ml ）6.1.1試劑組成：試劑 1（ R1） +試劑 2（ R2）：咪唑緩沖液pH6.7100mmol/L磷酸肌酸30mmol/L葡 萄 糖20mmol/LN-乙酰半胱氨酸（NAC）20mmol/LEDTA-Na 22mmol/LADP2mmol/LNADP2mmol/L二腺苷 -5-磷

3、酸10 mol/L6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6P-DH）1500U/L已糖激酶（HK）2500U/L6.1.2試劑準(zhǔn)備：試劑為即用式。6.1.3試劑穩(wěn)定性與貯存：試劑避光保存于 28，若無污染，可穩(wěn)定至失效期。試劑不可冰凍。6.1.4變質(zhì)指示：當(dāng)試劑有看得見的微生物生長，有濁度，或者未開蓋的液體有沉淀時，表明試劑已變質(zhì)，不能繼續(xù)使用。6.1.5注 意 事 項(xiàng) ：試 劑 中 含 疊 氮 鈉（ 0.95g/L ）為 防 腐 劑 。不 可 入 口 ！避 免 接觸皮膚及粘膜。應(yīng)采取必要的預(yù)防措施使用試劑。6.2校 準(zhǔn) 品 ： 使 用 DiaSys 公 司 提 供 的 TruCal U校準(zhǔn)品對自動分析儀進(jìn)

4、行校準(zhǔn)，具體參見生化檢驗(yàn)校準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SOP 文件。6.3質(zhì)控品：具體參見生化檢驗(yàn)校準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SOP 文件。7. 儀器：貝克曼 AU680 生化分析儀8. 操作步驟8.1項(xiàng)目基本參數(shù)：參見 AU680 生化分析儀項(xiàng)目測定參數(shù).SOP 文件8.2儀器操作步驟：參見 AU680 生化分析儀操作規(guī)程.SOP 文件9. 檢驗(yàn)結(jié)果的判斷與分析10.質(zhì)量控制：在每一批標(biāo)本中都應(yīng)把非定值血清水平 I 與 II質(zhì)控做為未知標(biāo)本進(jìn)行分析，以 2S 為質(zhì)控警告限，3S 為失控限，繪制質(zhì)控圖，判斷是否在控。質(zhì)控規(guī)則參見室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程.SOP 文件。11. 計(jì) 算 方 法 ： 以 TruCal U 復(fù) 合 校

5、 準(zhǔn) 品 CK 校 準(zhǔn) 值 校 準(zhǔn) 儀 器 后 ， 在 病 人 結(jié) 果可報(bào)告范圍內(nèi)，儀器直接報(bào)告可靠的檢測結(jié)果。不 使用校準(zhǔn)品進(jìn)行 CK活力檢測 ， 可 以 直 接 使 用A/min均 值 乘 以 計(jì) 算 因 子 得 到 結(jié) 果 ， 但 是 這 樣 所 得 結(jié) 果的 可 靠 性 不 如 使 用 校 準(zhǔn) 品 。計(jì) 算 CK 活 力 的 計(jì) 算 因 子 見 下 表 ：A/min因 子=CK 活 力U/L計(jì) 算 因 子 （ 37 ）：340nm4127334nm4207365nm472912. 參考值范圍1：（U/L ）成人：女性24 167男 性24 190參考值因性別、 年齡、飲食和地域的不同而

6、有所差別。根據(jù)好的實(shí)驗(yàn)室經(jīng)驗(yàn)，每個實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立自己的參考值。13. 臨床意義1、2：肌酸激酶（CK）主要由存在于肌肉中的同工酶（CK-M）和存在于腦中的同工酶（CK-B）組成。在血清中 CK 形式為 CK-MM，CK-MB，CK-BB 和巨酶等的二聚物。在心肌損傷或骨骼肌疾病時可以觀測到 CK活力的升高。CK和 CK-MB 一起檢測有助于心肌梗死的診斷和監(jiān)視。14. 操作性能14.1線 性 范 圍 1200U/L14.2 精密度：精密度的評估是根據(jù) NCCLS推薦的標(biāo)準(zhǔn)方法，AU680 批內(nèi)精密度小于 3%，總精密度小于 3%。用于分析的質(zhì)控血清和數(shù)據(jù)處理符合以上的NCCLS的規(guī)則。批內(nèi)精密度

7、xsCV批間精密度xsCVn=20(U/L)(U/L)(%)n=20(U/L)(U/L)(%)樣品 11593.182.00樣品 149.51.052.12樣品 22201.540.70樣品 21571.631.04樣品 35083.690.73樣品 32282.311.0114.3方 法 學(xué) 比 較 ： 本 公 司 的 試 劑 盒 (y)與 某 商 品 化 試 劑 盒 (x)，同時對 71 個樣品進(jìn)行 CK 活力檢測，將檢測結(jié)果作方法學(xué)比較，其統(tǒng)計(jì)結(jié)果如下：y=0.98x+0.02（ U/L ）； r=1.000 。14.4靈敏度：本試劑的檢測限為 5U/L。14.5病人結(jié)果可報(bào)告范圍：5-

8、1200U/L。16. 病危報(bào)警值的處理：無。17. 方法局限性17.1本法對 CK活力的線性上限為 1200U/L ，當(dāng)測定值超過上限時，應(yīng)將樣品用 9g/L 氯 化 鈉 溶 液 作 1+10 稀 釋 ， 重 新 測 定 ， 結(jié) 果 乘 以 11 。17.2干擾物質(zhì)：當(dāng)樣品中抗壞血酸濃度1704 mol/L，膽紅素濃度684mol/L ， 血 紅 蛋 白 2.00g/L ， 甘 油 三 酯 濃 度22.6mmol/L時沒有觀察到干 擾 。18. 補(bǔ)救措施：當(dāng)儀器發(fā)生故障時，迅速聯(lián)系儀器廠家進(jìn)行維修。19. 參考文獻(xiàn)1.SteinW. Creatinekinase(totalactivity)

9、，creatinekinaseisoenzymesandvariants.In:ThomasLed.Clinicallaboratorydiagnostics. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998.p.71-80.2.MossDW， HendersonAR. Clinicalenzymology.In:BurtisCA， AshwoodER.editors.TietzTextbookofClinicalChemistry.3rded.Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999. P.617-721

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