丹參飲口服液質(zhì)量控制標準鑒定研究

1、丹參飲口服液質(zhì)量控制標準鑒定研究 摘要：目的：探索丹參飲口服液的質(zhì)量標準鑒定方法。方法：采用薄層色譜法鑒別丹參，紫外-可見分光光度法和高效液相色譜法鑒別并測定丹參飲口服液中丹參素鈉的含量。色譜條件：inertsil ods-sp c18柱（250 mm4.6 mm，5 m），柱溫40，流動相甲醇-1%冰乙酸（1387），二元梯度洗脫，流速1.0 mlmin-1，檢測波長280 nm。結(jié)果：丹參飲口服液以及丹參藥材在薄層色譜中可獲得清晰的斑點。丹參素鈉紫外-可見光譜的最大吸收峰在282 nm。丹參素鈉在0.83 6.64 g線性關(guān)系良好，r=0.999 5；加樣回收率試驗（n=6）測得平均回收率

2、為97.22%，rsd為1.17%。結(jié)論：薄層色譜法鑒別丹參，紫外-可見光譜、hplc測定丹參飲口服液中丹參素鈉的含量，專屬性強、重現(xiàn)性好，簡便可靠。 關(guān)鍵詞：丹參飲口服液；丹參素鈉；薄層鑒別；紫外-可見光譜；高效液相色譜法 中圖分類號：r286文獻標識碼：a 文章編號：1007-2349（2013）01-0061-03 丹參飲口服液，本品處方來源于時方歌括卷下，由丹參、砂仁、檀香3味藥經(jīng)提取、濃縮制成的口服液，具有活血祛瘀、行氣止痛的功效1。臨床上常用于氣滯血瘀所致心胃諸痛等癥。2009年四川省藥品食品監(jiān)督管理局制定的四川省醫(yī)療機構(gòu)制劑研究技術(shù)要求中古代經(jīng)典名方目錄（第一批）已將丹參飲收錄其

3、中，本文初步建立丹參飲口服液的質(zhì)控項目，采用紫外-可見分光光度法，高效液相色譜法測定丹參飲口服液中丹參素鈉含量以及對丹參的薄層鑒別進行研究2。 1儀器與試藥 1.1儀器lc-20at高效液相色譜儀（日本島津）；zf-型三用紫外分析儀（上海佑科儀表有限公司）；tu-1901雙光束紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）；ja203h型電子天平（常州市幸運電子設(shè)備有限公司）；zq-1.2型脈動真空壓力蒸汽滅菌器（武漢市江漢醫(yī)療制藥設(shè)備有限公司）。 1.2試劑與試藥丹參素納對照品（批號110855-200809，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所）；丹參、檀香、砂仁藥材（購自瀘州百草堂中

4、藥飲片有限公司，經(jīng)瀘州醫(yī)學院附屬中醫(yī)醫(yī)院趙劍副主任中藥師鑒定為唇形科植物丹參（savia miltiorrhiza bge.） 的干燥根和根莖，檀香科檀香（santalum album l）樹干的心材，姜科多年生草本陽春砂（amomum villosum lour）的干燥成熟果實，均符合中國藥典2010年版一部該藥材項下規(guī)定）；丹參飲口服液（瀘州醫(yī)學院附屬中醫(yī)醫(yī)院，批號：20120306，20120307，20120308，規(guī)格20 ml/支）；甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。 2丹參的薄層鑒別 2.1溶液制備 2.1.1對照品溶液：取丹參素鈉對照品，加甲醇制成每毫升含2 mg的

5、溶液。 2.1.2對照藥材溶液：取丹參藥材l g加水煎煮，放冷至室溫后過濾，濾液用稀鹽酸調(diào)ph至2.0，用乙酸乙酯20 ml提取，提取液蒸干，殘渣用l ml甲醇溶解。 2.1.3供試品溶液：取丹參飲口服液20 ml，超聲處理30 min，用鹽酸調(diào)解ph至2.0，過濾，濾液用乙酸乙酯提取2次，每次20 ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1 ml使溶解。 2.1.4陰性樣品溶液：按處方（除丹參藥材外）與制法，制成陰性對照樣品。其余處理同供試品溶液。 2.2展開劑的選擇經(jīng)過初步試驗以及參考其他相關(guān)文獻報道3，選擇氯仿-丙酮-甲酸（1042）作為展開劑。 2.3薄層色譜鑒別照薄層色譜法（中國藥典2

6、010年版一部附錄 b）試驗4，吸取2.1四種溶液各10 l，分別點于同一硅膠g薄層板上，以氯仿-丙酮-甲酸（1042）為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸氣中熏至斑點顯色清晰，置紫外燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，且陰性樣品無干擾，結(jié)果見圖1。 3紫外-可見光譜測定丹參素鈉含量 3.1溶液制備 3.1.1對照品溶液的制備精密稱取丹參素鈉對照品0.0083 g，置25 ml棕色量瓶中，加入甲醇溶解并定容；準確吸取上述溶液2 ml，至25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得對照品溶液。 3.1.2供試品溶液的制備精密量取本品5

7、ml，蒸干，殘渣加甲醇使溶解，至50 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過；準確吸取續(xù)濾液5 ml，至100 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。 3.1.3陰性樣品溶液按處方（除丹參藥材外）與制法，制成陰性對照樣品。其余處理同供試品溶液。 3.2紫外-可見光譜的測定以3 ml甲醇溶液作為參比，用紫外-可見分光光度計進行基線校準，此后參照池不變，取3 ml對照品溶液于空置的樣品池中，對其紫外-可見光譜進行測定；紫外-可見分光光度計參數(shù)設(shè)定：掃描范圍210300 nm，橫坐標：/nm縱坐標：吸光度 a.對照品；b.供試品；c.陰性樣品 4hplc法測定丹參素鈉含量 4.1色譜條件

8、與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗色譜柱：inertsil ods-sp c18柱（250 mm4.6 mm，5 m），柱溫40 ，流動相甲醇-1%冰乙酸（1387），二元梯度洗脫，流速1.0 mlmin-1，檢測波長280 nm，進樣量10 l，理論塔板數(shù)按丹參素鈉計算應(yīng)不低于30007。 4.2溶液的制備 4.2.1對照品溶液的制備精密稱取丹參素鈉對照品0.0083 g，置25 ml棕色量瓶中，加入甲醇溶解并定容，即得0.332 mgml-1溶液。 4.2.2供試品溶液的制備精密吸取試驗樣品適量，用0.45 m微孔濾膜濾過，即得8。 4.3測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 l，注入液相色譜儀，

9、測定，即得，結(jié)果見圖3。本品每1 ml含丹參以丹參素鈉（c9h10o5na）計，不得少于0.15 mg。 4.4線性關(guān)系試驗取4.2.1項下對照品溶液2.5，5，10，15，20 l，按4.1項下色譜條件測定，記錄峰面積。以對照品量對色譜峰面積進行線性回歸，結(jié)果丹參素鈉的回歸方程為a=106c-649883，r2=0.9995（n=5），線性范圍為0.836.64 g。 4.5精密度試驗取濃度為0.166 mgml-1的丹參素鈉對照品溶液10 l連續(xù)測定5次，其峰面積均值1448746，rsd 1.32%。表明儀器精密度良好。 4.6穩(wěn)定性試驗取供試品溶液（20120306）10 l，分別在0

10、，1.5，3，6，9，12 h進樣，記錄峰面積，結(jié)果丹參素鈉峰面積平均值為1410746，rsd為3.23%。表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。 4.7重復(fù)性試驗取同一批號（20120306）樣品6份，按4.2.2方法制備，測定，結(jié)果丹參素鈉平均含量為0.18 mgg-1，rsd為1.04%，表明分析方法重復(fù)性良好。 4.8加樣回收試驗精密稱取同一批（20120306）樣品共6份，分別精密加入一定量的丹參素鈉對照品，按4.2.2項下制備供試品溶液，各取10 l進樣測定，計算加樣回收率。結(jié)果見表1。丹參素鈉平均回收率為97.22%，rsd為1.17%，表明本方法準確可靠。 丹參常用于治療婦科病、冠

11、心病、缺血性中風、動脈粥樣硬化等疾病，活性成分主要有脂溶性和水溶性兩類，脂溶性成分主要是丹參酮、隱丹參酮、丹參酮a等9。近10多年來國內(nèi)外對丹參及其同屬植物的脂溶性成分進行了大量的研究，僅從丹參中分離的二萜醌類化合物就有40多個，并且對其藥理也進行研究。然而中醫(yī)藥傳統(tǒng)上用其水煎劑，即丹參的水溶性部位，所以研究丹參的水溶性成分相對來說更有意義10。研究表明，其水溶性成分主要是丹參素、原兒茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸（a，b，c，d，e，f，g）等。丹參素在自然界中不穩(wěn)定，把其做成鈉鹽，功效和丹參素一樣11。因此，用薄層色譜法鑒別丹參，紫外-可見光譜、hplc測定丹參飲口服液中丹參素鈉的含量。本

12、文所建立的丹參素鈉hplc經(jīng)方法學考察其專屬性、重現(xiàn)性，簡便可靠，適用于丹參飲口服液質(zhì)量控制標準測定。 本試驗在用紫外-分光光度計法測定丹參素鈉含量時，丹參素鈉對照品用甲醇溶解，丹參飲口服液未進行蒸干，直接用甲醇進行稀釋定容，結(jié)果丹參飲口服液紫外-可見光譜最大吸收峰287 nm，偏離對照品丹參素鈉282 nm 5個單位，超出了正常范圍（280284 nm）。通過多次試驗，改為3.1.2供試品的處理方法，最大吸收峰284 nm，在一定程度上消除了中藥成方制劑成分復(fù)雜的干擾，重現(xiàn)性好，測定結(jié)果更準確。 丹參飲作為中醫(yī)藥傳統(tǒng)經(jīng)典古方，在臨床上具有良好的應(yīng)用基礎(chǔ)，通過現(xiàn)代制劑技術(shù)將其開發(fā)成新的院內(nèi)制劑

13、，以及進一步開發(fā)成國內(nèi)新藥，因而需要對丹參飲口服液的質(zhì)量進行控制，建立丹參飲口服液初步的質(zhì)量指標，體現(xiàn)中醫(yī)藥特色，為患者提供安全、有效、經(jīng)濟穩(wěn)定的中成藥。 參考文獻： 1蒲清榮，陳玉蘭，黃銳，等.丹參飲口服液水提取工藝研究j.藥物評價研究，2012，35（4）：270. 2曹珍，謝曉亮.丹參不同的鑒別方法j.時珍國醫(yī)國藥，2007，18（8）：1861. 3朱榮，朱斌.婦女痛經(jīng)丸質(zhì)量控制標準鑒定研究j.臨床合理用藥，2012，5（2b）：27. 4中華人民共和國藥典委員會.中國藥典m.一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010. 5劉省存，凡小慶，陳先亮，等.不同產(chǎn)地丹參的紫外光譜j.光譜實驗室，2011，28（2）：573. 6李化，于艷秋，楊濱.黃酮化合物與fe（）絡(luò)合反應(yīng)的動力學研究j.中國實驗方劑學雜，2010，16（17）：99. 7黃衍民，黃炳亮，張亞斌，等.高效液相色譜法測定丹紅注射液中丹參素鈉的含量j.中國醫(yī)院藥學雜志，2007，27（11）：1618. 8李海燕，李振國，宋漢敏，等.hplc測定冠心生脈口服液中丹參素鈉的含量j.中國實驗方劑學雜志，2010，16（12）：78. 9周靜，李惠芬，王洪志，等.丹參水溶性成分與脂溶性成分抑菌