HIV抗體質(zhì)控血清的制備和使用規(guī)程.doc

1、ics點擊此處添加中國標(biāo)準(zhǔn)文獻分類號sn中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)sn/t xxxxxxxxxhiv抗體質(zhì)控血清的制備和使用規(guī)程codes of making and using for quality control serum of hiv antibody點擊此處添加與國際標(biāo)準(zhǔn)一致性程度的標(biāo)識xxxx - xx - xx發(fā)布xxxx - xx - xx實施中 華 人 民 共 和 國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布sn/t xxxxxxxxx前言本標(biāo)準(zhǔn)按照gb/t 1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由國家認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督管理委員會提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中華人民共和國廣東出入境檢

2、驗檢疫局、中華人民共和國北京出入境檢驗檢疫局。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:呂潔毅、戴俊、王樹祥、丁國允、陳素英、盧林、何振毅。7hiv抗體質(zhì)控血清的制備和使用規(guī)程1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了hiv抗體質(zhì)控血清的制備、使用和保存方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于出入境檢驗檢疫機構(gòu)對hiv抗體質(zhì)控血清的制備和使用。2 規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。gb 19489 實驗室 生物安全通用要求jjf 1005-2005 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)常用術(shù)語和定義（iso guide 30:1992）jjf 1006-

3、1994 一級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)規(guī)范ws 293-2008 艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標(biāo)準(zhǔn)cnas-gl03 能力驗證樣品均勻性和穩(wěn)定性評價指南cnas-gl29 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品定值的一般原則和統(tǒng)計方法（iso guide 35:2006）消毒技術(shù)規(guī)范（2002年版） 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2009年修訂版）3 術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1質(zhì)控血清 quality control serum為了監(jiān)控檢測的重復(fù)性和穩(wěn)定性以及試劑盒批間和孔間差異，而由實驗室設(shè)置的一套外部對照血清，包括強陽性、弱陽性和陰性質(zhì)控血清。3.2均勻性 homogeneity 與物質(zhì)的一種或多種特性相關(guān)的具

4、有相同結(jié)構(gòu)或組成的狀態(tài)。通過測量取自不同包裝單元(如:瓶,包等)或取自同一包裝單元的、特定大小的樣品,測量結(jié)果落在規(guī)定不確定度范圍內(nèi),則可認(rèn)為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對指定的特性量是均勻的。jjf 1005-2005,定義3.103.3 瓶間均勻性 between-bottle homogeneity 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的特性在瓶與瓶之間的變異。 注：術(shù)語“瓶間均勻性”適用于其它類型的包裝（例如小瓶）和其它物理形狀及試片。 cnas-gl29,定義3.53.4 穩(wěn)定性 stability 在特定的時間范圍和貯存條件下,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的特性量值保持在規(guī)定范圍內(nèi)的能力。jjf 1005-2005,定義3.123.5開瓶穩(wěn)定性 b

5、ottle-unsealed stability包裝單元(如:瓶,包等)開封后在特定貯存條件下標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)特性的穩(wěn)定性。3.6長期穩(wěn)定性long-term stability 在標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)生產(chǎn)者規(guī)定貯存條件下標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)特性的穩(wěn)定性。cnas-gl29,定義3.113.7 s/co值 s/co value指elisa試驗測定得到的樣本的hiv抗體光密度值與試劑檢測的臨界值（cut off value）之比，是抗體反應(yīng)強度的指標(biāo)，在一定范圍內(nèi)s/co值越大，說明反應(yīng)強度越高。ws 293-2008,定義2.124 要求4.1 原料選擇原料選擇應(yīng)符合下列要求： 應(yīng)滿足適用性、代表性、以及容易復(fù)制的原則； 原

6、料的基體應(yīng)和使用的要求相一致或盡可能接近，即收集的原料（血清）應(yīng)清亮，無肉眼可見的溶血、黃疸、乳糜顆粒或其他雜質(zhì)； 應(yīng)具有高度穩(wěn)定性和適合檢測和試驗要求的特異性，不應(yīng)含有干擾使用目的的雜質(zhì)； 應(yīng)有足夠的數(shù)量，以滿足在有效期間使用的需要。4.2 質(zhì)控血清的外觀、裝量和質(zhì)量4.2.1 質(zhì)控血清應(yīng)清亮、均勻，無溶血、黃疸、乳糜顆粒和凝塊。4.2.2 質(zhì)控血清可按1年使用量配置，每瓶裝量應(yīng)不少于每次實驗的用量。4.2.3 質(zhì)控血清的質(zhì)量要求應(yīng)符合全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范第二章中9.1.2.1的規(guī)定。5 準(zhǔn)備5.1 器材 移液器、移液頭、移液管、刻度試管、帶蓋樣品杯、滅菌過濾器或注射器、0.2 m滅菌微孔

7、濾膜（聚醚砜膜-pes）、鑷子、吸球。5.2 儀器酶標(biāo)儀、洗板機、37 水浴箱、-20 以下非自動除霜低溫冰箱。6 制備程序6.1 原料的采集和處理6.1.1 原料采集主要包括： 正常人血清：從日常檢測樣品中收集感染性疾病血清學(xué)標(biāo)志物包括hiv-1/2抗體、hiv-1p24抗原、乙肝病毒表面抗原（hbsag）、丙肝病毒（hcv）抗體和梅毒螺旋體抗體均陰性的血清，或通過合法途徑購買正常人血清； 陽性參考品：收集日常檢測樣品中確證hiv抗體陽性、其他感染性疾病血清學(xué)標(biāo)志物（hbsag、hcv抗體、梅毒螺旋體抗體）均陰性的血清（僅艾滋病檢測確證實驗室可收集），或購買陽性對照質(zhì)控品（包括hiv抗體診斷

8、試劑盒內(nèi)提供的陽性對照、高濃度外部陽性對照質(zhì)控品）。6.1.2 原料預(yù)處理將正常人血清和陽性參考品進行56 、30 min滅活，3 000 r/min離心15 min，加入0.01硫柳汞作防腐劑。6.2 制備方法6.2.1 滅菌將實驗用的移液頭、移液管、刻度試管、樣品杯等進行滅菌備用。6.2.2 稀釋對陽性參考品進行系列的倍比稀釋并以elisa法檢測，根據(jù)實驗室內(nèi)部質(zhì)量控制要求確定質(zhì)控血清最終稀釋度，以正常人血清為稀釋液，將陽性參考品按最終稀釋度進行稀釋。6.2.3 除菌用0.2 m微孔濾膜過濾除菌。6.2.4 分裝按實驗室1周用量等量分裝，凍存于-20 以下非自動除霜低溫冰箱備用。6.2.5

9、 檢驗質(zhì)控血清分裝后應(yīng)進行均勻性檢驗（參見附錄a）；在規(guī)定的貯存條件下，可根據(jù)需要設(shè)定時間間隔進行穩(wěn)定性檢驗（參見附錄b）。7 生物安全及防護措施制備質(zhì)控血清的實驗室生物安全及防護措施按全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范中第八章的規(guī)定。8 質(zhì)控血清的使用 8.1 使用方法使用方法如下： 從冰箱取出質(zhì)控血清后待完全融化且平衡至室溫； 輕輕顛倒使其充分混勻； 加樣時按待測樣本對待，依試劑盒說明書進行操作； 取樣完畢，及時蓋上瓶蓋，放置2 8 貯存，1周后應(yīng)棄去，避免反復(fù)凍融。8.2 注意事項 注意事項包括: 質(zhì)控血清僅用于體外診斷試劑檢測時的質(zhì)量控制，不得用作校準(zhǔn)品； 每一次實驗應(yīng)使用質(zhì)控血清； 質(zhì)控血清都經(jīng)

10、過滅活處理，但仍應(yīng)按有潛在生物傳染性樣本對待； 使用時應(yīng)按第7章的要求做好防護，使用后應(yīng)立即蓋好瓶蓋，避免污染； 使用后應(yīng)按gb 19489和消毒技術(shù)規(guī)范相關(guān)規(guī)定對廢棄物進行處理。9 質(zhì)控血清的保存 質(zhì)控血清未開封在-20 以下密閉貯存穩(wěn)定1年； 質(zhì)控血清開瓶后在2 8 貯存穩(wěn)定1周。附錄a （規(guī)范性附錄）質(zhì)控血清均勻性檢驗a.1 方法a.1.1 確定抽取樣品量，按jjf 1006-1994中4.1和4.2的規(guī)定。a.1.2 確定取樣方式，按jjf 1006-1994中5.1和5.2的規(guī)定。a.1.3 按抽取數(shù)量抽取分裝好的質(zhì)控血清，按隨機次序進行elisa檢測，每瓶檢測1次，計算測定的s/c

11、o值的平均值（）、標(biāo)準(zhǔn)差（s1）；另用上述質(zhì)控血清中的1瓶連續(xù)檢測相同次數(shù)，計算s/co值的平均值（）、標(biāo)準(zhǔn)差（s2）。a.1.4 計算瓶間均勻性cv()，應(yīng)滿足cv20的要求（參見4.2.3）。a.2 統(tǒng)計指標(biāo)計算統(tǒng)計指標(biāo)計算見式（a.1）、（a.2）、（a.3）和（a.4）。(附錄a.1)(附錄a.2)(附錄a.3)(附錄a.4)當(dāng)s1s2時，令cv瓶間=0式中：平均值；n 測量次數(shù)；xi 指定參數(shù)第i 次測量值；s 標(biāo)準(zhǔn)差；cv變異系數(shù)。附錄b （資料性附錄）質(zhì)控血清穩(wěn)定性檢驗b.1 方法b.1.1 穩(wěn)定性檢驗的樣品應(yīng)從分裝成最小包裝單元的樣品中隨機抽取，抽取的樣品數(shù)對于總體樣品有足夠的

12、代表性。b.1.2 按抽取數(shù)量抽取分裝好的質(zhì)控血清，進行elisa檢測，計算測定的反應(yīng)od值（樣本od值-陰性od值）的平均值（）作為穩(wěn)定性檢驗中質(zhì)控血清的參考值。b.1.3 穩(wěn)定性檢驗應(yīng)包括開瓶（1周）穩(wěn)定性和長期（1年）穩(wěn)定性檢驗。 b.1.3.1 開瓶穩(wěn)定性：按抽取數(shù)量從-20 以下冰箱中抽取制備保存的質(zhì)控血清，在1周開瓶有效期內(nèi)每天進行elisa檢測直至到期后1天，測定反應(yīng)od值，求其平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（s）。b.1.3.2 長期穩(wěn)定性：采用倒計時方式，將檢測日期定為第 0 d，假如預(yù)定在某一溫度下保存時間為 n d，則在 0 d 前的第 n d 從-70 冰箱中按抽取數(shù)量抽取制備保存的質(zhì)控血清，置于特定溫度下，至 0 d 統(tǒng)一進行elisa檢測，測定反應(yīng)od值，求其平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（s）。具體設(shè)定條件為：-20 ，3、6、9、12、18個月。b.1.4 采用 t 檢驗法分析各時間點樣本平均值與參考值之間是否存在顯著性差異作為質(zhì)控血清穩(wěn)定的依據(jù)。b.2 統(tǒng)計指標(biāo)計算平均值（）計算見式（a.1）、標(biāo)準(zhǔn)差（s）計算見式（a.2）、t 檢驗法按cnas-gl03中5.2的規(guī)定。參考文獻1 ws/t 124-1999 臨床化學(xué)體外診斷試劑盒質(zhì)量檢驗總則s2 國家藥典