生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料課件

1、生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料第十一章第十一章 無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料微孔型微孔型 大孔型大孔型微孔微孔微孔微孔薄膜型薄膜型 表面多孔型表面多孔型離子交換層離子交換層惰性核惰性核惰性核惰性核離子交換劑硅膠層涂覆離子交換劑硅膠層涂覆生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料實(shí) 心 微 球全 孔 微 球灌 注 微 粒固 定 相 外 殼固 體核擴(kuò) 散 孔通 孔HPLCHPLC中常用的幾種微粒類型中常用的幾種微粒類型生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料硅膠硅膠可控孔徑玻璃可控孔徑玻璃其它：氧化鋁、氧化鋯、氧化鈦、其它：氧化鋁、氧化鋯、氧化鈦、碳和石

2、墨微球。碳和石墨微球。制備制備: :制成適宜的球形或無定形顆粒制成適宜的球形或無定形顆粒, ,化學(xué)鍵合或涂層法改性?；瘜W(xué)鍵合或涂層法改性。第一節(jié)第一節(jié) 無機(jī)基質(zhì)無機(jī)基質(zhì)生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料一一. .硅膠硅膠: :表面含豐富表面含豐富硅醇基或硅羥基硅醇基或硅羥基, , 可化學(xué)鍵合或改性可化學(xué)鍵合或改性; ; 表面存在大量物理吸附水表面存在大量物理吸附水, ,增加處理或修飾復(fù)雜性。增加處理或修飾復(fù)雜性。1.1.化學(xué)性質(zhì)化學(xué)性質(zhì): :多孔二氧化硅多孔二氧化硅 化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,pH,pH適應(yīng)范圍適應(yīng)范圍1-91-9，安全，安全pHpH范圍為范圍為2-82-8。晶型二氧化硅晶型

3、二氧化硅表面可能僅有自由硅羥基；表面可能僅有自由硅羥基；無定形硅膠無定形硅膠則有自由硅羥基、鄰位硅羥基、氫鍵結(jié)則有自由硅羥基、鄰位硅羥基、氫鍵結(jié)合水或物理吸附水。合水或物理吸附水。生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料SiOH自由硅羥基雙硅羥基OHSi締合硅羥基OHSi表面金屬內(nèi)部金屬（活化硅羥基）OHSiOHSiOHMMHPLC硅膠擔(dān)體的表面硅膠擔(dān)體的表面生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料 物理吸附水的去除物理吸附水的去除-是硅膠衍生反應(yīng)中不可或缺的一步是硅膠衍生反應(yīng)中不可或缺的一步。因?yàn)槲锢砦剿c硅羥基競(jìng)爭(zhēng)硅烷化試因?yàn)槲锢砦剿c硅羥基競(jìng)爭(zhēng)硅烷化試劑的反應(yīng)劑的反應(yīng), ,可能引起鍵合率的降

4、低和非可能引起鍵合率的降低和非特異性吸附的增加特異性吸附的增加, ,降低填料的性能。降低填料的性能。 一般通過一般通過加熱或真空下熱處理加熱或真空下熱處理去去除物理吸附水。除物理吸附水。生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料2.2. 物理性質(zhì)物理性質(zhì): : 顆粒的形狀大小、孔的結(jié)構(gòu)、孔徑及其顆粒的形狀大小、孔的結(jié)構(gòu)、孔徑及其分布、總孔容、比表面積、高機(jī)械強(qiáng)度分布、總孔容、比表面積、高機(jī)械強(qiáng)度生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料20468101214161820222426保留時(shí)間（min）1234123檢測(cè)器響應(yīng)A型硅膠Zorbax-ODS二甲基-C18B型硅膠Zorbax Rx-C18二甲基-

5、C181、多慮平 0.125ug2、去甲丙咪嗪 0.25ug3、阿米替林 0.25ug4、三甲丙咪嗪 0.25ug以以A A型與型與B B型硅膠擔(dān)體的色譜柱分離三環(huán)抗抑郁藥的比較型硅膠擔(dān)體的色譜柱分離三環(huán)抗抑郁藥的比較色譜柱：色譜柱：15150.46 cm0.46 cm；流動(dòng)相：乙腈；流動(dòng)相：乙腈-0.025M-0.025M磷酸鈉緩沖液（磷酸鈉緩沖液（3030：7070），p H2.5+p H2.5+三乙胺與三氟醋酸各三乙胺與三氟醋酸各0.2%0.2%；流速：；流速：1.0ml/min1.0ml/min；40400 0C C；254nm254nm檢測(cè)檢測(cè)；進(jìn)樣；進(jìn)樣5L5L。 A A型：純度不

6、高的酸性硅膠型：純度不高的酸性硅膠B B型：高純度的弱酸性硅膠型：高純度的弱酸性硅膠生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料3.3.多孔硅膠的制法多孔硅膠的制法: : 將水玻璃將水玻璃( (硅酸鈉水溶液硅酸鈉水溶液) )酸化酸化, ,形成形成SiOSiO2 2膠體溶液膠體溶液, ,以各種方法聚集成球形粒子以各種方法聚集成球形粒子, ,并并轉(zhuǎn)化成干膠轉(zhuǎn)化成干膠; ; 另外另外, ,也可利用正硅酸酯的縮聚和也可利用正硅酸酯的縮聚和SiOSiO2 2氣氣溶膠水溶液噴霧干燥法。溶膠水溶液噴霧干燥法。 粒度分布及雜質(zhì)的控制是難點(diǎn)！粒度分布及雜質(zhì)的控制是難點(diǎn)！生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料堆砌硅珠法堆砌

7、硅珠法 尿素、甲醛相分離聚合尿素、甲醛相分離聚合：將適宜濃度的硅溶：將適宜濃度的硅溶膠與一定比例的尿素和甲醛配成水溶液，攪拌均勻膠與一定比例的尿素和甲醛配成水溶液，攪拌均勻令其產(chǎn)生令其產(chǎn)生縮聚反應(yīng)縮聚反應(yīng)。待反應(yīng)進(jìn)行到一定程度后，便。待反應(yīng)進(jìn)行到一定程度后，便會(huì)產(chǎn)生會(huì)產(chǎn)生相分離相分離而從水溶液中而從水溶液中沉淀出沉淀出聚集硅微珠聚集硅微珠與與尿尿素甲醛樹脂素甲醛樹脂的的復(fù)合球復(fù)合球。將這種復(fù)合球收集、洗滌。將這種復(fù)合球收集、洗滌并在高溫爐中并在高溫爐中煅燒煅燒，令樹脂分解，令樹脂分解逸去逸去，剩下的就是，剩下的就是多孔硅膠微球，其直徑可以控制在多孔硅膠微球，其直徑可以控制在4 45 5m m或

8、或7 78 8m m之間。通過二次縮聚反應(yīng)，直徑可加大到之間。通過二次縮聚反應(yīng)，直徑可加大到1515m m。生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料二二. .可控孔徑玻璃可控孔徑玻璃: : 含含硼的硼的NaNa2 2O-BO-B2 2O O3 3-SiO-SiO2 2系玻璃系玻璃, ,熱處理時(shí)會(huì)熱處理時(shí)會(huì)相分離，生成相分離，生成溶于酸的溶于酸的NaNa2 2O-BO-B2 2O O3 3相相及及不溶不溶于酸的于酸的高硅相高硅相。以酸處理的方法，將酸可。以酸處理的方法，將酸可溶相浸析出來溶相浸析出來, ,剩下的高硅相就成了剩下的高硅相就成了可控?？煽夭ＡЯ?SiO(SiO2 2) )?？刂撇ＡУ慕M成

9、及處理?xiàng)l件可。控制玻璃的組成及處理?xiàng)l件可控制生成可控孔徑玻璃的孔徑、孔容及比控制生成可控孔徑玻璃的孔徑、孔容及比表面積。表面積。生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料1.1.化學(xué)性質(zhì)化學(xué)性質(zhì): : 表面具有游離硅羥基表面具有游離硅羥基, ,可以通過各種化學(xué)修可以通過各種化學(xué)修飾而得到不同官能團(tuán)的表面飾而得到不同官能團(tuán)的表面。 缺點(diǎn)缺點(diǎn)：游離硅羥基可能：游離硅羥基可能導(dǎo)致非特異性吸附導(dǎo)致非特異性吸附及蛋白質(zhì)失活及蛋白質(zhì)失活; ;適應(yīng)的適應(yīng)的pHpH范圍有一定的局限范圍有一定的局限; ;制造成本較高。制造成本較高。生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料2.2.物理特性物理特性: : 機(jī)械強(qiáng)度高機(jī)械強(qiáng)度

10、高, ,可耐受劇烈、反復(fù)的處可耐受劇烈、反復(fù)的處理和操作，耐壓力強(qiáng)。理和操作，耐壓力強(qiáng)。 孔徑分布窄而均勻?？讖椒植颊鶆?。生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料3.3.制造制造: : 采用普通玻璃制造工藝：采用普通玻璃制造工藝：精細(xì)選擇并精細(xì)選擇并控制適宜的相分離溫度與時(shí)間控制適宜的相分離溫度與時(shí)間?？住？讖揭话憧刂圃趶揭话憧刂圃?5nm25nm到到100nm100nm為宜。為宜。生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料三、其它三、其它氧化鋁：氧化鋁：主要是主要是AlAl2 2O O3 3, ,作為色譜固定相，作為色譜固定相，主要用于主要用于小分子有機(jī)物等的分離小分子有機(jī)物等的分離。限制其。限制

11、其應(yīng)用的因素在于其難以像應(yīng)用的因素在于其難以像SiOSiO2 2那樣通過鍵合那樣通過鍵合而得到適應(yīng)不同分離模式的固定相。而得到適應(yīng)不同分離模式的固定相。氧化鋯：氧化鋯：利用與硅膠鍵合相類似的方法，可利用與硅膠鍵合相類似的方法，可以對(duì)其進(jìn)行表面修飾。以對(duì)其進(jìn)行表面修飾。生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料第二節(jié)第二節(jié) 硅膠的化學(xué)修飾與改性硅膠的化學(xué)修飾與改性一、表面硅羥基的化學(xué)修飾（主要途一、表面硅羥基的化學(xué)修飾（主要途徑）：徑）：1 1、氯化反應(yīng)：、氯化反應(yīng)：可以將硅羥基轉(zhuǎn)化成硅氯基，可以將硅羥基轉(zhuǎn)化成硅氯基，硅氯基性質(zhì)活潑可以與各種化合物反應(yīng)而引硅氯基性質(zhì)活潑可以與各種化合物反應(yīng)而引入相應(yīng)的

12、基團(tuán)。這種方法引入的基團(tuán)是入相應(yīng)的基團(tuán)。這種方法引入的基團(tuán)是單分單分子層子層的，的，具有較好的傳質(zhì)能力和色譜性能具有較好的傳質(zhì)能力和色譜性能，但成本較高。但成本較高。生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料2 2、氯硅烷與硅羥基的反應(yīng)：、氯硅烷與硅羥基的反應(yīng)： 通過氯硅烷可以通過氯硅烷可以將各種烷基鏈引入硅將各種烷基鏈引入硅膠表面膠表面。氯硅烷包括一氯代型，二氯。氯硅烷包括一氯代型，二氯代型和三氯代型等。代型和三氯代型等。P231P231生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料3 3、通過烷氧基硅烷與硅羥基的反應(yīng)：、通過烷氧基硅烷與硅羥基的反應(yīng)： 烷氧基硅烷與硅膠進(jìn)行縮合反應(yīng)，使烷氧基硅烷與硅膠進(jìn)行縮

13、合反應(yīng)，使硅膠硅膠表面帶上環(huán)氧基或氨基等基團(tuán)表面帶上環(huán)氧基或氨基等基團(tuán)，在此基礎(chǔ)，在此基礎(chǔ)上可以很方便地進(jìn)一步進(jìn)行反應(yīng)或修飾。上可以很方便地進(jìn)一步進(jìn)行反應(yīng)或修飾。這一鍵合反應(yīng)可以在水相，也可以在有機(jī)這一鍵合反應(yīng)可以在水相，也可以在有機(jī)介質(zhì)中進(jìn)行。介質(zhì)中進(jìn)行。生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料Si-OHCl-Si(CH3)2RCl3SiR(Eto)3SiRa+cSi-O-Si(CH3)2RbSi-OHSi-OHSi-OHSi-OHSi-OSi-OSi-OSi-O+SiClRSi(OEt)R（a a）表面硅羥基與氯二甲基硅烷的反應(yīng)；）表面硅羥基與氯二甲基硅烷的

14、反應(yīng)；（b b）表面硅羥基與三官能團(tuán)硅烷的反應(yīng)；）表面硅羥基與三官能團(tuán)硅烷的反應(yīng)；（c c）表面硅羥基與三官能團(tuán)烷基硅烷的反應(yīng)）表面硅羥基與三官能團(tuán)烷基硅烷的反應(yīng)生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料A、縱向交聯(lián)B、橫向交聯(lián)C、單體（二甲基-取代）D、單體（空間保護(hù)）SiOOHSiSiSiSiSiOOHOSiOSiOHSiOHOSiSiOHOOHOHSiOSiSiSiSiSiOOSiOOOOOOOOOOSiSiSiSiSiSiSiSiOSiSiSiSiSiOHOOSiOHSiSiOHSiSiSiSiOHOSiSiSiOSiOH與硅膠擔(dān)體共價(jià)鍵合硅烷的各種類型與硅膠擔(dān)體共價(jià)鍵合硅烷的各種類型生物工

15、程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料二、包敷與涂層：二、包敷與涂層： 可通過不同的途徑制備穩(wěn)定的聚合物涂層可通過不同的途徑制備穩(wěn)定的聚合物涂層。常常將選擇的聚合物、寡聚物或單體以適宜溶劑將選擇的聚合物、寡聚物或單體以適宜溶劑制成溶液，均勻分布于無機(jī)基質(zhì)的全部表面上，制成溶液，均勻分布于無機(jī)基質(zhì)的全部表面上，蒸去溶劑后，令高聚物或單體聚合，形成致密蒸去溶劑后，令高聚物或單體聚合，形成致密的聚合物涂層。的聚合物涂層。1.1. 亦可亦可將將含雙鍵的聚合物含雙鍵的聚合物涂于硅膠表面，使其表涂于硅膠表面，使其表面帶上雙鍵，使其于面帶上雙鍵，使其于隨后涂敷上去的第二單體隨后涂敷上去的第二單體進(jìn)行共聚。進(jìn)行共聚。

16、還可以還可以將含有雙鍵的不飽和聚合物將含有雙鍵的不飽和聚合物涂于硅膠表面，以涂于硅膠表面，以自由基引發(fā)進(jìn)一步交聯(lián)自由基引發(fā)進(jìn)一步交聯(lián)，以，以獲得理化性質(zhì)更穩(wěn)定的涂層。獲得理化性質(zhì)更穩(wěn)定的涂層。生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料三、整體修飾：三、整體修飾： 指利用具有不同官能團(tuán)的指利用具有不同官能團(tuán)的鹵代硅烷鹵代硅烷或或烷氧基硅烷烷氧基硅烷的的水解、縮聚反應(yīng)水解、縮聚反應(yīng)，直接，直接制出空間交聯(lián)型、含不同制出空間交聯(lián)型、含不同R R基的硅膠。基的硅膠。生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料四、硅烷化試劑：四、硅烷化試劑： 氯硅烷：氯硅烷：容易和空氣中微量水反應(yīng)，容易和空氣中微量水反應(yīng)，放出放出H

17、ClHCl氣，對(duì)環(huán)境造成危害。氣，對(duì)環(huán)境造成危害。 烷氧基硅烷：烷氧基硅烷：對(duì)環(huán)境和人體的危害性對(duì)環(huán)境和人體的危害性小。廣泛應(yīng)用。小。廣泛應(yīng)用。生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料各類無機(jī)色譜填料各類無機(jī)色譜填料 正相色譜填料正相色譜填料 反相色譜填料反相色譜填料 凝膠過濾色譜填料凝膠過濾色譜填料 高效離子交換色譜填料高效離子交換色譜填料 高效親和色譜填料高效親和色譜填料 高效疏水色譜填料高效疏水色譜填料生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料第三節(jié)第三節(jié) 正相色譜填料正相色譜填料 液相色譜分正相和反相色譜液相色譜分正相和反相色譜（依據(jù)相間的相對(duì)極性依據(jù)相間的相對(duì)極性） 正相正相：固定相極性大于流

18、動(dòng)相極性，：固定相極性大于流動(dòng)相極性， 適用于非極性至中等極性的中小分子化合物適用于非極性至中等極性的中小分子化合物的分離，如脂溶性維生素、甾體激素、醫(yī)藥等的分離，如脂溶性維生素、甾體激素、醫(yī)藥等的分離分析。的分離分析。 反相反相：固定相極性小于流動(dòng)相極性。：固定相極性小于流動(dòng)相極性。生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料 正相色譜正相色譜液固吸附色譜液固吸附色譜柱填料：吸附劑，表面分布有活性吸附位點(diǎn)；柱填料：吸附劑，表面分布有活性吸附位點(diǎn)；競(jìng)爭(zhēng)吸附：溶劑溶質(zhì)分子，溶質(zhì)溶質(zhì)分子競(jìng)爭(zhēng)吸附：溶劑溶質(zhì)分子，溶質(zhì)溶質(zhì)分子 柱內(nèi)保留時(shí)間差異柱內(nèi)保留時(shí)間差異 物質(zhì)分離！物質(zhì)分離！生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效

19、色譜填料生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料1.1.硅膠硅膠 吸附色譜中吸附色譜中最常用最常用。但樣品呈堿性時(shí)，。但樣品呈堿性時(shí)，會(huì)造成嚴(yán)重吸附，溶質(zhì)峰拖尾或難以洗會(huì)造成嚴(yán)重吸附，溶質(zhì)峰拖尾或難以洗脫，脫，可選用可選用AlAl2 2O O3 3。 Al Al2 2O O3 3對(duì)于不飽和化合物，特別是芳香族對(duì)于不飽和化合物，特別是芳香族化合物多核芳烴的保留能力較強(qiáng)，芳香化合物多核芳烴的保留能力較強(qiáng)，芳香異構(gòu)體可得到良好分離。異構(gòu)體可得到良好分離。生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料 硅膠硅膠 100-200100-200目目 2.5KG 2.5KG 生產(chǎn)商生產(chǎn)商:Fisher :Fisher 產(chǎn)

20、品價(jià)格產(chǎn)品價(jià)格:4500:4500元（元（RMBRMB）生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料化學(xué)鍵合固定相：化學(xué)鍵合固定相：將各種不同有機(jī)基團(tuán)通過化學(xué)反應(yīng)鍵合到將各種不同有機(jī)基團(tuán)通過化學(xué)反應(yīng)鍵合到載體表面的一種方法載體表面的一種方法。它代替了固定液的。它代替了固定液的機(jī)械涂漬，它的出現(xiàn)是液相色譜法的一個(gè)機(jī)械涂漬，它的出現(xiàn)是液相色譜法的一個(gè)重大突破。它是目前應(yīng)用最廣泛的一種固重大突破。它是目前應(yīng)用最廣泛的一種固定相。據(jù)統(tǒng)計(jì)，約有定相。據(jù)統(tǒng)計(jì)，約有3/43/4以上的分離問題是以上的分離問題是在在化學(xué)鍵合固定相化學(xué)鍵合固定相上進(jìn)行的。上進(jìn)行的。 2.2.極性鍵合相填料極性鍵合相填料生物工程下游技術(shù)無

21、機(jī)基質(zhì)高效色譜填料 鍵合固定相類型：鍵合固定相類型： 用來制備鍵合固定相的載體，幾乎都用用來制備鍵合固定相的載體，幾乎都用硅膠硅膠。利用硅膠表面的。利用硅膠表面的硅醇基硅醇基(Si(Si一一OH)OH)與與有機(jī)分子有機(jī)分子可可成鍵成鍵, ,即可得到各種性能的固定相。一般分即可得到各種性能的固定相。一般分3 3類：類：（1 1）疏水基團(tuán)疏水基團(tuán) 如不同鏈長(zhǎng)的烷烴（如不同鏈長(zhǎng)的烷烴（C8C8和和C18C18）和苯）和苯基?；?。（2 2）極性基團(tuán)極性基團(tuán) 如氨丙基、氰乙基、醚和醇等。如氨丙基、氰乙基、醚和醇等。（3 3）離子交換基團(tuán)離子交換基團(tuán) 如作為陰離子交換基團(tuán)的胺基、如作為陰離子交換基團(tuán)的胺基

22、、季鍍鹽；作為陽(yáng)離子交換季鍍鹽；作為陽(yáng)離子交換 基團(tuán)的磺酸等?；鶊F(tuán)的磺酸等。生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料鍵合固定相成鍵類型鍵合固定相成鍵類型 a. a. 硅氧碳鍵型：硅氧碳鍵型： Si SiOOC C b. b. 硅氧硅碳鍵型：硅氧硅碳鍵型：Si SiOOSi Si C C 穩(wěn)定，耐水、耐光、耐有機(jī)溶劑，應(yīng)用最廣；穩(wěn)定，耐水、耐光、耐有機(jī)溶劑，應(yīng)用最廣； c. c. 硅碳鍵型：硅碳鍵型： Si SiC C d. d. 硅氮鍵型：硅氮鍵型： Si SiNN生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料鍵合固定相的制備鍵合固定相的制備（l l）硅酸酯（）硅酸酯（Si Si一一OROR）鍵合固定相）鍵

23、合固定相, , 最最先用于液相色譜。先用于液相色譜。用醇與硅醇基發(fā)生酯用醇與硅醇基發(fā)生酯化反應(yīng)化反應(yīng)： Si Si0H0HROHSiROHSiORORH H2 20 0 這類鍵合固定相的有機(jī)表面是一些單體這類鍵合固定相的有機(jī)表面是一些單體，具有良好的傳質(zhì)特性，具有良好的傳質(zhì)特性, ,但這些酯化過的但這些酯化過的硅膠填料易水解且受熱不穩(wěn)定，因此硅膠填料易水解且受熱不穩(wěn)定，因此僅僅適用于不含水或醇的流動(dòng)相適用于不含水或醇的流動(dòng)相。生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料 共價(jià)鍵鍵合固定相不易水解，并且熱穩(wěn)定共價(jià)鍵鍵合固定相不易水解，并且熱穩(wěn)定較硅酸酯好。缺點(diǎn)是格氏反應(yīng)不方便；較硅酸酯好。缺點(diǎn)是格氏反應(yīng)

24、不方便；當(dāng)使當(dāng)使用水溶液時(shí)，必須限制用水溶液時(shí)，必須限制pHpH在在4 48 8范圍內(nèi)范圍內(nèi)。OHSiSO Cl2ClSi+HgBrSiSiNHCH2CHNH2H2NCH2CH2NH2（2 2）Si SiC C或或Si Si一一NN共價(jià)鍵合固定相制備反應(yīng)如下：共價(jià)鍵合固定相制備反應(yīng)如下： 生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料（3）硅烷化（硅烷化（Si SiOOSi SiC C）鍵合固定相）鍵合固定相制備反應(yīng)如下：制備反應(yīng)如下： OHSiClSiR3+SiO(ROSiR3)SiR3+ HCl這類鍵合固定相具有熱穩(wěn)定好，不易吸這類鍵合固定相具有熱穩(wěn)定好，不易吸水，耐有機(jī)溶劑的優(yōu)點(diǎn)。水，耐有機(jī)溶劑的

25、優(yōu)點(diǎn)。能在能在7070以下，以下，PH=2PH=28 8范圍內(nèi)正常工作，應(yīng)用較廣泛范圍內(nèi)正常工作，應(yīng)用較廣泛。生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料第四節(jié)第四節(jié) 反相填料及色譜柱反相填料及色譜柱 非極性固定相，極性流動(dòng)相非極性固定相，極性流動(dòng)相 在色譜的應(yīng)用中，反相模式占在色譜的應(yīng)用中，反相模式占5757。生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料反相色譜填料的種類與性質(zhì)反相色譜填料的種類與性質(zhì) 品種繁多，性質(zhì)各異。品種繁多，性質(zhì)各異。 市場(chǎng)主流：市場(chǎng)主流：無機(jī)材料無機(jī)材料為基質(zhì)制備的填料為基質(zhì)制備的填料 在硅膠基質(zhì)的填料中，以在硅膠基質(zhì)的填料中，以鍵合有鍵合有C C1818、C C8 8、C C4

26、4及及C C3 3的球形、全多孔填料的球形、全多孔填料最常見。最常見。 參見參見P P239239：表：表11116 6；P P242242244244：表：表11117 7。生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料第五節(jié)第八節(jié)第五節(jié)第八節(jié) 其它色譜類型填料其它色譜類型填料自學(xué)！自學(xué)！請(qǐng)注意掌握幾個(gè)要點(diǎn)：請(qǐng)注意掌握幾個(gè)要點(diǎn)： 色譜的分離原理色譜的分離原理 色譜填料的種類與性能色譜填料的種類與性能 色譜填料的制備色譜填料的制備常見的色譜填料常見的色譜填料生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料第九節(jié)第九節(jié) 生化分離用色譜填料的新進(jìn)展生化分離用色譜填料的新進(jìn)展未來液相色譜的特點(diǎn)：兩極分化式發(fā)展未來液相色譜的特點(diǎn)：兩極分化式發(fā)展 適應(yīng)制備色譜需要：高適應(yīng)制備色譜需要：高效、高選擇性、高速、低成本效、高選擇性、高速、低成本液相色譜液相色譜 適應(yīng)分析色譜需要適應(yīng)分析色譜需要 ：高效、高選擇性、高通量、：高效、高選擇性、高通量、快速快速 生物工程下游技術(shù)無機(jī)基質(zhì)高效色譜填料主要體現(xiàn)：主要體現(xiàn)： 提高柱效提高柱效 提高選擇性提高選擇性 提高化學(xué)穩(wěn)定性提高化學(xué)穩(wěn)定性 提高分離