高中生物微生物的分離PPT學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1高中生物微生物的分離高中生物微生物的分離 自然界中不同種類的微生物混雜生活在一起，要研究某種微生物的特性，必須從混雜的微生物類群中分離它，使該微生物處于這種獲得純培養(yǎng)的方法稱為 純種：是微生物的某一個(gè)種或株，培養(yǎng)中純種：是微生物的某一個(gè)種或株，培養(yǎng)中的所有細(xì)胞有著共同的來源或僅是同一細(xì)的所有細(xì)胞有著共同的來源或僅是同一細(xì)胞的后代。胞的后代。 第1頁/共73頁待篩選分離微生物種類待篩選分離微生物種類培養(yǎng)基要求培養(yǎng)基要求導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞添加青霉素等抗生素添加青霉素等抗生素尿素分解菌尿素分解菌尿素是唯一氮源尿素是唯一氮源纖維素分解菌纖維素分解菌纖維素是唯一碳源

2、纖維素是唯一碳源酵母菌、霉菌等真菌酵母菌、霉菌等真菌添加青霉素添加青霉素金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌添加高濃度食鹽添加高濃度食鹽固氮菌固氮菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基不加氮源的無氮培養(yǎng)基自養(yǎng)型微生物自養(yǎng)型微生物不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基第2頁/共73頁第3頁/共73頁1 1尿素：尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，但是不能直接被農(nóng)作物尿素：尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，但是不能直接被農(nóng)作物吸收。只有當(dāng)土壤中的細(xì)菌將尿素分解成吸收。只有當(dāng)土壤中的細(xì)菌將尿素分解成 之后，植之后，植物才能利用其中的氮。土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因物才能利用其中的氮。土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗?/p>

3、們體內(nèi)能合成為它們體內(nèi)能合成 。2 2篩選菌株篩選菌株（1 1）實(shí)驗(yàn)室中微生物篩選的原理：人為提供有利于）實(shí)驗(yàn)室中微生物篩選的原理：人為提供有利于 生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度、生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度、pHpH等），同時(shí)抑制或阻止其他等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長。微生物生長。（2 2）選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生）選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時(shí)抑制和阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱作選擇長，同時(shí)抑制和阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。氨氨脲酶脲酶目的菌株目的菌株第4頁/共73頁第5頁/共73頁第6頁/共73頁第7

4、頁/共73頁牛肉膏蛋白胨選擇選擇多于多于第8頁/共73頁察顏色反應(yīng)。n4細(xì)菌的計(jì)數(shù)n當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取菌落數(shù)在的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。在同一稀釋度下，至少對(duì)3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出，并根據(jù)平板所對(duì)應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目。0.130300平均值平均值第9頁/共73頁D第10頁/共73頁第11頁/共73頁第12頁/共73頁第13頁/共73頁纖維纖維素酶素酶篩選篩選原理原理纖維素纖維素分解菌分解菌的的分離分離實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)操作操作纖維素分纖維素分解菌簡介解菌簡介第14頁/共73頁纖維素是地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì)。植物纖維素是地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì)。植物的根、莖、葉等器官都含有大量的纖

5、維素。其中的根、莖、葉等器官都含有大量的纖維素。其中棉花棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物。是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物。有些微生物能合成纖維素酶，通過對(duì)這些有些微生物能合成纖維素酶，通過對(duì)這些微生物的研究，使人們能夠利用秸稈等廢微生物的研究，使人們能夠利用秸稈等廢棄物生產(chǎn)酒精，用纖維素酶處理服裝面料等棄物生產(chǎn)酒精，用纖維素酶處理服裝面料等。何處尋找纖維素分解菌？第15頁/共73頁 纖維素的化學(xué)組成：只含纖維素的化學(xué)組成：只含C C、H H、O O三種三種元素，是一種多糖。纖維素產(chǎn)生于植物的光元素，是一種多糖。纖維素產(chǎn)生于植物的光合作用。纖維素的基本組成單位是葡萄糖，合作用。纖維素的

6、基本組成單位是葡萄糖，人體內(nèi)沒有纖維素酶，所以人體不能直接利人體內(nèi)沒有纖維素酶，所以人體不能直接利用纖維素作為能源物質(zhì)。但土壤中有分解纖用纖維素作為能源物質(zhì)。但土壤中有分解纖維素的微生物，最終把纖維素分解成維素的微生物，最終把纖維素分解成COCO2 2和和H H2 2O O釋放到無機(jī)環(huán)境中去。釋放到無機(jī)環(huán)境中去。第16頁/共73頁土壤取樣土壤取樣取樣環(huán)境取樣環(huán)境富含纖維素的環(huán)境中富含纖維素的環(huán)境中。 由于生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系，由于生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對(duì)提高，因此從這種土樣中獲的含量相對(duì)提高，因此從這種土樣中獲

7、得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境。得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境。原因原因第17頁/共73頁土壤取樣土壤取樣 實(shí)例：樹林中多年落葉形成的腐殖實(shí)例：樹林中多年落葉形成的腐殖土，多年積累的枯枝敗葉等。土，多年積累的枯枝敗葉等。 討論討論: :如果找不到合適的環(huán)境，可將如果找不到合適的環(huán)境，可將濾紙埋在土壤中，將濾紙埋在土壤中有什濾紙埋在土壤中，將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認(rèn)為濾紙應(yīng)埋進(jìn)土壤中多深？么作用？你認(rèn)為濾紙應(yīng)埋進(jìn)土壤中多深？ 將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對(duì)集中，實(shí)際上是人工設(shè)置纖維素菌相對(duì)集中，實(shí)際上是人工設(shè)置纖維素分解菌生存的適宜環(huán)境。一般應(yīng)將濾紙

8、分解菌生存的適宜環(huán)境。一般應(yīng)將濾紙埋于深約埋于深約10cm10cm左右的土壤中。左右的土壤中。第18頁/共73頁知識(shí)點(diǎn)一：纖維素分解菌簡介知識(shí)點(diǎn)一：纖維素分解菌簡介纖維素分解菌能夠產(chǎn)生纖維素酶，利用纖維素。纖維素分解菌能夠產(chǎn)生纖維素酶，利用纖維素。它的新陳代謝類型為異養(yǎng)需氧型。它的新陳代謝類型為異養(yǎng)需氧型。第19頁/共73頁知識(shí)點(diǎn)二：纖維素酶知識(shí)點(diǎn)二：纖維素酶第20頁/共73頁知識(shí)點(diǎn)三：纖維素分解菌的篩選原理知識(shí)點(diǎn)三：纖維素分解菌的篩選原理第21頁/共73頁土壤取樣土壤取樣選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)梯度稀釋梯度稀釋將樣品涂布到鑒別將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培纖維素分解菌的培養(yǎng)基上養(yǎng)基上挑選產(chǎn)生透挑選

9、產(chǎn)生透明圈的菌落明圈的菌落什么樣的環(huán)什么樣的環(huán)境取樣境取樣?選擇培養(yǎng)基的特點(diǎn)選擇培養(yǎng)基的特點(diǎn)? ?培養(yǎng)的目的培養(yǎng)的目的? ?鑒別培養(yǎng)基的特點(diǎn)鑒別培養(yǎng)基的特點(diǎn)? ?如何鑒別如何鑒別? ?挑選什么樣的挑選什么樣的菌落菌落? ?知識(shí)點(diǎn)四：實(shí)驗(yàn)操作知識(shí)點(diǎn)四：實(shí)驗(yàn)操作第22頁/共73頁實(shí)驗(yàn)流程操作中的注意事項(xiàng)土壤取樣選擇培養(yǎng)梯度稀釋將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上挑選產(chǎn)生透明圈的菌落纖維素分解菌大多分布在富含纖維素的環(huán)境中，也可以將富含纖維素的物質(zhì)埋在土壤中，經(jīng)過30天左右，再從已腐爛的物質(zhì)埋藏處篩選纖維素分解菌。在將樣品稀釋涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上之前，可以用選擇培養(yǎng)基增加纖維素分解菌的

10、濃度。培養(yǎng)時(shí)要在搖床上振蕩培養(yǎng)?？梢詤⒄丈弦徽n題樣品的稀釋方法進(jìn)行。常用的剛果紅染色法有兩種：一種是先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅染色；另一種是在倒平板時(shí)就加入剛果紅。經(jīng)過剛果紅鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)后，在產(chǎn)纖維素酶的菌落周圍會(huì)出現(xiàn)透明圈。可以用單細(xì)胞挑取法挑取纖維素分解菌。為確定得到的是纖維素分解菌，還需進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實(shí)驗(yàn)，通常有液體發(fā)酵和固體發(fā)酵兩種。實(shí)驗(yàn)流實(shí)驗(yàn)流程程第23頁/共73頁1.1.選擇培養(yǎng)的目的：選擇培養(yǎng)的目的：增加纖維素分解菌的濃度，以確保增加纖維素分解菌的濃度，以確保能夠從樣品中分離到所需要的微生物。能夠從樣品中分離到所需要的微生物。選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)2.2.制備選擇培養(yǎng)基制備選擇

11、培養(yǎng)基第24頁/共73頁組分含量提供的主要營養(yǎng)物質(zhì)纖維素粉5g碳源、能源NaNO31g無機(jī)鹽Na2HPO47H2O1.2gKH2PO40.9gMgSO47H2O0.5gKCl0.5g酵母膏0.5g生長因子、碳源、氮源水解酪素0.5g氮源、生長因子上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容至1 000 mL纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基第25頁/共73頁a.a.該配方是液體培養(yǎng)基還是固體培養(yǎng)基該配方是液體培養(yǎng)基還是固體培養(yǎng)基？為什么？為什么？b.b.這個(gè)培養(yǎng)基對(duì)微生物是否具有選擇作這個(gè)培養(yǎng)基對(duì)微生物是否具有選擇作用？如果具有，是如何進(jìn)行選擇的？用？如果具有，是如何進(jìn)行選擇的？是液體培養(yǎng)基，原

12、因是配方中無凝固劑是液體培養(yǎng)基，原因是配方中無凝固劑。有選擇作用，本配方中的碳源是纖維素，有選擇作用，本配方中的碳源是纖維素，所以能分解纖維素的微生物可以大量繁殖所以能分解纖維素的微生物可以大量繁殖。c.c.你能否設(shè)計(jì)一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，說明你能否設(shè)計(jì)一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，說明選擇培養(yǎng)基的作用選擇培養(yǎng)基的作用用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基與之對(duì)照。用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基與之對(duì)照。第26頁/共73頁3.3.操作方法操作方法：將土樣加入裝有將土樣加入裝有30ml選擇培養(yǎng)基的選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中，將錐形瓶固定在搖床上，在錐形瓶中，將錐形瓶固定在搖床上，在一定溫度下振蕩培養(yǎng)一定溫度下振蕩培養(yǎng)12天，直至培養(yǎng)天，直至培養(yǎng)液變渾濁

13、。也可重復(fù)選擇培養(yǎng)。液變渾濁。也可重復(fù)選擇培養(yǎng)。第27頁/共73頁思考：為什么選擇培養(yǎng)能夠思考：為什么選擇培養(yǎng)能夠“濃濃縮縮”所需的微生物？所需的微生物？在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物得到迅能夠適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的速繁殖，而那些不適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮濃縮”的作用。的作用。第28頁/共73頁梯度稀釋梯度稀釋按照課題按照課題1 1的稀釋操作方法，將的稀釋操作方法，將選擇培養(yǎng)后的培養(yǎng)基進(jìn)行等比稀釋，選擇培養(yǎng)后的培養(yǎng)基進(jìn)行等比稀釋，稀

14、釋最大倍數(shù)到稀釋最大倍數(shù)到10106 6。第29頁/共73頁將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上組分含量提供的主要營養(yǎng)物質(zhì)CMCNa510g碳源酵母膏1g碳源、氮源、生長因子KH2PO40.25g無機(jī)鹽瓊脂15g凝固劑土豆汁100mL碳源上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容至1000 mL鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基第30頁/共73頁將稀釋度為將稀釋度為10104 410106 6的菌懸液各取的菌懸液各取0.1ml0.1ml 涂布在培養(yǎng)基上，涂布在培養(yǎng)基上，3030倒置培養(yǎng)。倒置培養(yǎng)。2.涂布平板涂布平板第31頁/共73頁挑選產(chǎn)生透明圈的菌落挑選產(chǎn)生透明圈

15、的菌落 挑取產(chǎn)生明顯的透明圈的菌落，挑取產(chǎn)生明顯的透明圈的菌落，一般即為分解纖維素的菌落。一般即為分解纖維素的菌落。 接種到纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)接種到纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基上，在基上，在30300 0C C 37370 0C C培養(yǎng)，可獲得純培養(yǎng)，可獲得純培養(yǎng)。培養(yǎng)。第32頁/共73頁方法一：方法一：先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)。進(jìn)行顏色反應(yīng)。方法二：方法二：在倒平板時(shí)就加在倒平板時(shí)就加入剛果紅。入剛果紅。思考：這兩種方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)思考：這兩種方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)與不足？與不足？剛果紅染色法剛果紅染色法第33頁/共73頁方法一方法二過程長出菌落的培養(yǎng)基覆蓋

16、CR溶液(1mg/mL) 倒去CR溶液加入NaCl溶液(1mol/L) 倒掉NaCl溶液產(chǎn)生透明圈配制CR溶液(10mg/mL)滅菌按照1 mLCR溶液/200 mL培養(yǎng)基比例混勻倒平板培養(yǎng)產(chǎn)生透明圈缺點(diǎn)操作繁瑣，加入剛果紅會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜由于纖維素和瓊脂、土豆汁中都含淀粉類物質(zhì)，可能使產(chǎn)生淀粉酶的微生物也形成透明圈，即假陽性反應(yīng)。有些微生物具有降解色素的能力，它們?cè)陂L時(shí)間培養(yǎng)過程中會(huì)降解剛果紅形成明顯透明圈，與纖維素分解菌不易區(qū)分。兩種常用剛果紅兩種常用剛果紅(CR)(CR)染色法的比較染色法的比較第34頁/共73頁方法一方法二操作先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)。在倒平板時(shí)就加優(yōu)

17、點(diǎn)顯示出的顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用。優(yōu)點(diǎn)是操作簡便，不存在菌落混雜問題。兩種常用剛果紅兩種常用剛果紅(CR)(CR)染色法的比較染色法的比較第35頁/共73頁第36頁/共73頁特別提醒特別提醒:(1)纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，因培養(yǎng)纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，因培養(yǎng)基中無凝固劑，利用液體選擇培養(yǎng)基以增加纖維素分基中無凝固劑，利用液體選擇培養(yǎng)基以增加纖維素分解菌的濃度。解菌的濃度。(2)能產(chǎn)生纖維素酶的微生物能以纖維素作為碳源和能能產(chǎn)生纖維素酶的微生物能以纖維素作為碳源和能源，在培養(yǎng)基中正常生長，其他絕大多數(shù)生物不能正源，在培養(yǎng)基中正常生長，其他絕大多數(shù)生物不能正

18、常生長。常生長。(3)鑒別培養(yǎng)基因含有瓊脂，為固體培養(yǎng)基，剛果紅染鑒別培養(yǎng)基因含有瓊脂，為固體培養(yǎng)基，剛果紅染色法就是應(yīng)用此培養(yǎng)基。色法就是應(yīng)用此培養(yǎng)基。(4)為確定得到的菌是否是纖維素分解菌，還需進(jìn)行發(fā)為確定得到的菌是否是纖維素分解菌，還需進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實(shí)驗(yàn)。纖維素酶的發(fā)酵方法有液體發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實(shí)驗(yàn)。纖維素酶的發(fā)酵方法有液體發(fā)酵和固體發(fā)酵兩種。纖維素酶的測(cè)定方法，一般是對(duì)酵和固體發(fā)酵兩種。纖維素酶的測(cè)定方法，一般是對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定量測(cè)定。量測(cè)定。第37頁/共73頁思考：土壤中分解尿素和分解纖維素思考：土壤

19、中分解尿素和分解纖維素 的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)流程有的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)流程有 哪些異同？哪些異同？ 前者直接稀釋涂布在以尿素為唯一前者直接稀釋涂布在以尿素為唯一N N源的選源的選擇培養(yǎng)基上，直接分離得到目的菌落；后者先擇培養(yǎng)基上，直接分離得到目的菌落；后者先進(jìn)行選擇培養(yǎng)，使纖維素分解菌得到增殖后，進(jìn)行選擇培養(yǎng)，使纖維素分解菌得到增殖后，再將菌液稀釋涂布到鑒別培養(yǎng)基。再將菌液稀釋涂布到鑒別培養(yǎng)基。第38頁/共73頁第39頁/共73頁第40頁/共73頁第41頁/共73頁第42頁/共73頁1.1.研究分解纖維素的微生物，對(duì)于人們?cè)诠I(yè)生產(chǎn)研究分解纖維素的微生物，對(duì)于人們?cè)诠I(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用有著積極的

20、意義。請(qǐng)回答：中應(yīng)用有著積極的意義。請(qǐng)回答：(1)(1)分離纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣分離纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣梯度梯度稀釋稀釋將樣品接種到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上將樣品接種到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上挑選產(chǎn)生透明圈的菌落。上述實(shí)驗(yàn)中的培養(yǎng)基屬挑選產(chǎn)生透明圈的菌落。上述實(shí)驗(yàn)中的培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基，如果設(shè)計(jì)一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，可以將其于選擇培養(yǎng)基，如果設(shè)計(jì)一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，可以將其中的纖維素?fù)Q成中的纖維素?fù)Q成_，如果菌落數(shù)明顯多于選擇培，如果菌落數(shù)明顯多于選擇培養(yǎng)基，即可說明選擇培養(yǎng)基的作用。養(yǎng)基，即可說明選擇培養(yǎng)基的作用。A A尿素尿素 B B蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)C C葡萄糖葡萄糖 D D蔗

21、糖蔗糖C第43頁/共73頁(2)如何證明選擇培養(yǎng)基沒有被雜菌污染？如何證明選擇培養(yǎng)基沒有被雜菌污染？(3)在用平板計(jì)數(shù)法對(duì)分離的纖維素分解菌數(shù)目在用平板計(jì)數(shù)法對(duì)分離的纖維素分解菌數(shù)目統(tǒng)計(jì)時(shí)，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低統(tǒng)計(jì)時(shí)，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，這是因?yàn)椋?，這是因?yàn)椋?4)如果探究溫度對(duì)纖維素酶活性的影響，自變?nèi)绻骄繙囟葘?duì)纖維素酶活性的影響，自變量是量是 ，應(yīng)該保持，應(yīng)該保持 等不變。等不變。 選取未接種的培養(yǎng)基與接種樣品的培養(yǎng)基，同選取未接種的培養(yǎng)基與接種樣品的培養(yǎng)基，同時(shí)培養(yǎng)，如果在未接種的培養(yǎng)基培養(yǎng)過程中沒有時(shí)培養(yǎng)，如果在未接種的培養(yǎng)基培養(yǎng)過程中沒有菌落生長，說明

22、培養(yǎng)基沒有被雜菌污染。菌落生長，說明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染。 當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。的只是一個(gè)菌落。溫度溫度 纖維素酶的量、纖維素酶纖維素酶的量、纖維素酶的濃度、反應(yīng)時(shí)間、的濃度、反應(yīng)時(shí)間、pH(答對(duì)兩個(gè)即可答對(duì)兩個(gè)即可)第44頁/共73頁第45頁/共73頁第46頁/共73頁第47頁/共73頁第48頁/共73頁3.3.在微生物的實(shí)驗(yàn)室純化培養(yǎng)時(shí)，下列操作與殺滅細(xì)菌無關(guān)的是在微生物的實(shí)驗(yàn)室純化培養(yǎng)時(shí)，下列操作與殺滅細(xì)菌無關(guān)的是（）（）A.A.接種前用肥皂洗雙手，再用酒精擦拭雙手接種前用肥皂洗雙手，再用酒精擦拭雙手B.B.接種

23、前用火焰灼燒接種針（環(huán)）接種前用火焰灼燒接種針（環(huán)）C.C.培養(yǎng)基在培養(yǎng)基在5050左右擱置斜面左右擱置斜面D.D.在酒精燈的火焰旁完成倒平板的操作在酒精燈的火焰旁完成倒平板的操作【解析解析】培養(yǎng)基擱置斜面其實(shí)是增大接種面積，是在無菌處理后進(jìn)行的步驟，與殺滅細(xì)菌無關(guān)?！敬鸢复鸢浮緾第49頁/共73頁4.在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時(shí)抑在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基稱作制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基稱作 （ ）A鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基 B加富培養(yǎng)基加富培養(yǎng)基C選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基D基礎(chǔ)培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基【解析解析】基礎(chǔ)培養(yǎng)基是含

24、有一般微生物生長繁殖所需的基本營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基，例如牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基；加富培養(yǎng)基一般用來培養(yǎng)營養(yǎng)要求比較苛刻的異養(yǎng)型微生物；鑒別培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入某種特殊的化學(xué)物質(zhì)，微生物的代謝產(chǎn)物與特殊化學(xué)物質(zhì)發(fā)生特定化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生明顯特征變化；選擇培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入特殊營養(yǎng)物質(zhì)或化學(xué)物質(zhì)，抑制不需要微生物的生長，有利于所需微生物的生長。 C考題鏈接考題鏈接 土壤中分解尿素的細(xì)菌土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)的基本知識(shí)原理的分離與計(jì)數(shù)的基本知識(shí)原理第50頁/共73頁5.5.下列所述環(huán)境條件下的微生物，能正常生長繁殖的是下列所述環(huán)境條件下的微生物，能正常生長繁殖的是 （）（）A A在加入尿素和葡萄

25、糖的選擇培養(yǎng)基上的尿素細(xì)菌在加入尿素和葡萄糖的選擇培養(yǎng)基上的尿素細(xì)菌B B在人體表皮擦傷部位的破傷風(fēng)桿菌在人體表皮擦傷部位的破傷風(fēng)桿菌C C在新配制的植物礦質(zhì)培養(yǎng)液中的酵母菌在新配制的植物礦質(zhì)培養(yǎng)液中的酵母菌D D在滅菌后的動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液中的禽流感病毒在滅菌后的動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液中的禽流感病毒【解析解析】土壤中的尿素細(xì)菌能合成脲酶，能分解尿素，細(xì)菌為異養(yǎng)型生物，故培養(yǎng)基中加入了葡萄糖，這樣尿素細(xì)菌就能在這樣的選擇培養(yǎng)基上正常生長繁殖；破傷風(fēng)桿菌是一種厭氧型細(xì)菌，人體表皮擦傷部位是有氧的環(huán)境，因此，破傷風(fēng)桿菌不能正常生長繁殖；酵母菌是一種異養(yǎng)型生物，缺少有機(jī)碳不能正常生長繁殖；病毒只能寄生生活，寄生

26、在活細(xì)胞中才能正常生長增殖。 A第51頁/共73頁6.6.用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用，需要設(shè)置用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用，需要設(shè)置的對(duì)照是（）的對(duì)照是（）A A未接種的選擇培養(yǎng)基未接種的選擇培養(yǎng)基B B未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基C C接種了的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基接種了的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基D D接種了的選擇培養(yǎng)基接種了的選擇培養(yǎng)基【解析解析】將菌液稀釋相同的倍數(shù)，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，因此，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基可作為對(duì)照。對(duì)照實(shí)驗(yàn)應(yīng)遵循的原則之一是單一變量原則，所以應(yīng)與選擇培養(yǎng)基一樣接種、培養(yǎng)。D第52頁/共7

27、3頁7.下列關(guān)于纖維素酶的敘述中不正確的是（）下列關(guān)于纖維素酶的敘述中不正確的是（）A纖維素酶可將纖維素先分解為纖維二糖再分解為葡萄糖纖維素酶可將纖維素先分解為纖維二糖再分解為葡萄糖B纖維素酶含有纖維素酶含有C、H、O、N等化學(xué)元素等化學(xué)元素C用纖維素酶處理玉米根尖成熟區(qū)細(xì)胞后，將細(xì)胞放入用纖維素酶處理玉米根尖成熟區(qū)細(xì)胞后，將細(xì)胞放入0.3g/mL的蔗糖溶液中出現(xiàn)質(zhì)壁分離現(xiàn)象的蔗糖溶液中出現(xiàn)質(zhì)壁分離現(xiàn)象D纖維素酶是一種復(fù)合酶纖維素酶是一種復(fù)合酶【解析解析】纖維素酶是一種復(fù)合酶，至少包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。纖維素酶屬于蛋白質(zhì)

28、，含C、H、O、N等元素。植物細(xì)胞細(xì)胞壁的主要成分是纖維素，被纖維素酶處理后，細(xì)胞壁被去除，不能再發(fā)生質(zhì)壁分離現(xiàn)象。C考題鏈接考題鏈接 分離分解纖維素的微生分離分解纖維素的微生物的基本知識(shí)原理物的基本知識(shí)原理第53頁/共73頁8.8.分離纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)過程中操作有誤的是（）分離纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)過程中操作有誤的是（）A A經(jīng)選擇培養(yǎng)后將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的經(jīng)選擇培養(yǎng)后將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上培養(yǎng)基上B B富集培養(yǎng)這一步可省略，但培養(yǎng)的纖維素分解菌少富集培養(yǎng)這一步可省略，但培養(yǎng)的纖維素分解菌少C C經(jīng)稀釋培養(yǎng)后，用剛果紅染色經(jīng)稀釋培養(yǎng)后，用剛果紅染色D D對(duì)照組可用同樣

29、量的培養(yǎng)液涂布到不含纖維素的培對(duì)照組可用同樣量的培養(yǎng)液涂布到不含纖維素的培養(yǎng)基上養(yǎng)基上【解析解析】經(jīng)選擇培養(yǎng)后，再經(jīng)稀釋，才能將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上；富集培養(yǎng)可省略；經(jīng)稀釋培養(yǎng)后，用剛果紅染色；設(shè)置對(duì)照能證明經(jīng)富集培養(yǎng)的確得到了欲分離的微生物。A考題鏈接考題鏈接 分離分解纖維素的微生分離分解纖維素的微生 物的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)物的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)第54頁/共73頁9.9.在將樣品稀釋涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基之前一般先進(jìn)在將樣品稀釋涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基之前一般先進(jìn)行選擇培養(yǎng)，其主要目的是（）行選擇培養(yǎng)，其主要目的是（）A A完全除去其他微生物完全除去其他微生物B B沒有意義，去掉這

30、一步更好沒有意義，去掉這一步更好C C增加纖維素分解菌的濃度增加纖維素分解菌的濃度D D使纖維素分解菌充分長大使纖維素分解菌充分長大【解析解析】纖維素分解菌如果在所采集的土樣中含量少，稀釋涂布在鑒別培養(yǎng)基上后形成的菌落數(shù)少，不利于挑選所需菌落，通過選擇培養(yǎng)可以增加纖維素分解菌的濃度，以確保能夠從樣品中分離到所需要的微生物。第55頁/共73頁考題鏈接考題鏈接 微生物的分離和計(jì)數(shù)微生物的分離和計(jì)數(shù)(2)(2)材料用具：農(nóng)田的表層土壤、無氮培養(yǎng)基、牛肉膏材料用具：農(nóng)田的表層土壤、無氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、盛蛋白胨培養(yǎng)基、盛9 mL9 mL無菌水的試管、無菌吸管、無無菌水的試管、無菌吸管、無菌涂

31、布器、無菌培養(yǎng)皿、盛菌涂布器、無菌培養(yǎng)皿、盛90 mL90 mL無菌水的錐形瓶、恒無菌水的錐形瓶、恒溫箱。溫箱。第56頁/共73頁每個(gè)稀釋度下，無氮培養(yǎng)基一般應(yīng)至少涂布_個(gè)平板，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基涂布1個(gè)平板。3第57頁/共73頁原因_。30-3005107無氮培養(yǎng)基上能生存繁殖的僅是土壤中的固氮菌，無氮培養(yǎng)基上能生存繁殖的僅是土壤中的固氮菌，而牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上幾乎允許土壤中所有菌類生存而牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上幾乎允許土壤中所有菌類生存第58頁/共73頁【答案】(3)3303005107(4)無氮培養(yǎng)基上能生存繁殖的僅是土壤中的固氮菌，而牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上幾乎允許土壤中所有菌類生存第59頁

32、/共73頁D11.D第60頁/共73頁(3)也可以達(dá)到分離微生物的目的，如將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)，只能得到耐高溫的微生物。第61頁/共73頁 12.(2009寧夏理綜寧夏理綜)(1)在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件 外，還要考慮外，還要考慮_、_和滲透壓等條件。由于該細(xì)菌具和滲透壓等條件。由于該細(xì)菌具 有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、變異類型容易選擇、有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、變異類型容易選擇、_、_ 等優(yōu)點(diǎn)，因此常作為遺傳學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)材料。等優(yōu)點(diǎn)，因此常作為遺傳學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)材料。 (2)在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)在微生物培養(yǎng)操作過程中，

33、為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng) 器皿進(jìn)行器皿進(jìn)行_(消毒、滅菌消毒、滅菌)；操作者的雙手需進(jìn)行清洗和；操作者的雙手需進(jìn)行清洗和_； 靜止空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變靜止空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變 性，還能性，還能_。 (3)若用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)大腸桿菌活菌的個(gè)數(shù)，要想使所得估計(jì)若用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)大腸桿菌活菌的個(gè)數(shù)，要想使所得估計(jì) 值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測(cè)樣品值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測(cè)樣品 稀釋的稀釋的_。溫度溫度 酸堿度酸堿度 易培養(yǎng)易培養(yǎng) 生活周期短生活周期短 滅菌滅菌 消

34、毒消毒 損傷損傷DNA的結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)比例合適比例合適 第62頁/共73頁(4)通常，對(duì)獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對(duì)通常，對(duì)獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對(duì)細(xì)細(xì) 菌進(jìn)行初步的菌進(jìn)行初步的_。(5)培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染。對(duì)于固體培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染。對(duì)于固體培培 養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測(cè)方法是養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測(cè)方法是_ _。(6)若用大腸桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使用過的培養(yǎng)基及培養(yǎng)物必須經(jīng)過若用大腸桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使用過的培養(yǎng)基及培養(yǎng)物必須經(jīng)過_ 處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。鑒定鑒定

35、(或分類或分類) 將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是 否有菌落產(chǎn)生否有菌落產(chǎn)生滅菌滅菌 第63頁/共73頁解析：解析：(1)大腸桿菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、變異類型容易選擇、易培大腸桿菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、變異類型容易選擇、易培養(yǎng)、生活周期短等優(yōu)點(diǎn)，培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮溫養(yǎng)、生活周期短等優(yōu)點(diǎn)，培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮溫度、酸堿度和滲透壓等條件。度、酸堿度和滲透壓等條件。(2)滅菌是用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，所以對(duì)培養(yǎng)基滅菌是用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生

36、物，所以對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌；消毒是用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表和培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌；消毒是用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物，操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和消面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物，操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和消毒，紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能損傷毒，紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能損傷DNA的結(jié)構(gòu)。的結(jié)構(gòu)。(3)稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)，應(yīng)保證樣品稀釋的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)，應(yīng)保證樣品

37、稀釋的比例適合。的比例適合。第64頁/共73頁(4)對(duì)獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對(duì)細(xì)菌進(jìn)對(duì)獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步的鑒定。行初步的鑒定。(5)培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染。對(duì)于固體培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染。對(duì)于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測(cè)方法是將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測(cè)方法是將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。宜的時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。(6)因?yàn)橛械拇竽c桿菌會(huì)釋放一種強(qiáng)烈的毒素，并可能導(dǎo)致腸道出現(xiàn)嚴(yán)因?yàn)橛械拇竽c桿菌會(huì)釋放

38、一種強(qiáng)烈的毒素，并可能導(dǎo)致腸道出現(xiàn)嚴(yán)重癥狀，使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過滅菌處理后才能丟棄，重癥狀，使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過滅菌處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。第65頁/共73頁 13.(2010山東理綜，山東理綜，34)生物柴油是一種可再生的清潔能源，其應(yīng)用在生物柴油是一種可再生的清潔能源，其應(yīng)用在一一 定程度上能夠減緩人類對(duì)化石燃料的消耗?？茖W(xué)家發(fā)現(xiàn)，在微生物定程度上能夠減緩人類對(duì)化石燃料的消耗?？茖W(xué)家發(fā)現(xiàn)，在微生物M 產(chǎn)生的脂肪酶作用下，植物油與甲醇反應(yīng)能夠合成生物柴油產(chǎn)生的脂肪酶作用下，植物油與甲醇反應(yīng)能夠合成生物柴油(如下圖如下圖)。第66頁/共7

39、3頁(1)用于生產(chǎn)生物柴油的植物油不易揮發(fā)，宜選用用于生產(chǎn)生物柴油的植物油不易揮發(fā)，宜選用_、_方方法從油料作物中提取。法從油料作物中提取。(2)篩選產(chǎn)脂肪酶的微生物篩選產(chǎn)脂肪酶的微生物M時(shí)，選擇培養(yǎng)基中添加的植物油為微生物時(shí)，選擇培養(yǎng)基中添加的植物油為微生物生生長提供長提供_，培養(yǎng)基滅菌采用的最適方法是，培養(yǎng)基滅菌采用的最適方法是_法法。(3)測(cè)定培養(yǎng)液中微生物數(shù)量，可選用測(cè)定培養(yǎng)液中微生物數(shù)量，可選用_法直接計(jì)數(shù)；從法直接計(jì)數(shù)；從微微生物生物M分離提取的脂肪酶通常需要檢測(cè)分離提取的脂肪酶通常需要檢測(cè)_，以確，以確定定其應(yīng)用價(jià)值；為降低生物柴油生產(chǎn)成本，可利用其應(yīng)用價(jià)值；為降低生物柴油生產(chǎn)成

40、本，可利用_技術(shù)使脂肪酶能夠重復(fù)使用。技術(shù)使脂肪酶能夠重復(fù)使用。(4)若需克隆脂肪酶基因，可應(yīng)用耐熱若需克隆脂肪酶基因，可應(yīng)用耐熱DNA聚合酶催化的聚合酶催化的_技術(shù)。技術(shù)。壓榨壓榨 萃取萃取碳源碳源 高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌 顯微鏡直接計(jì)數(shù)顯微鏡直接計(jì)數(shù) 酶活性酶活性(或：酶活力或：酶活力) 固定化酶固定化酶(或：固定化或：固定化細(xì)胞細(xì)胞)PCR(或：多或：多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)) 第67頁/共73頁解析：解析：(1)因?yàn)橹参镉筒灰讚]發(fā)，不能選用蒸餾法，可以用壓榨法、萃因?yàn)橹参镉筒灰讚]發(fā)，不能選用蒸餾法，可以用壓榨法、萃取法從油料作物中提取。取法從油料作物

41、中提取。(2)微生物的生長需要水、碳源、氮源和無機(jī)微生物的生長需要水、碳源、氮源和無機(jī)鹽等，選擇培養(yǎng)基中添加的植物油為微生物生長提供碳源。分析灼燒鹽等，選擇培養(yǎng)基中添加的植物油為微生物生長提供碳源。分析灼燒滅滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌等實(shí)驗(yàn)室常用滅菌方法的特點(diǎn)可知，培菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌等實(shí)驗(yàn)室常用滅菌方法的特點(diǎn)可知，培養(yǎng)養(yǎng)基滅菌采用的最適方法是高壓蒸汽滅菌法?；鶞缇捎玫淖钸m方法是高壓蒸汽滅菌法。(3)測(cè)定培養(yǎng)液中微生物的測(cè)定培養(yǎng)液中微生物的數(shù)量，可選用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法直接計(jì)數(shù)。提取的脂肪酶在應(yīng)用于實(shí)數(shù)量，可選用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法直接計(jì)數(shù)。提取的脂肪酶在應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)驗(yàn)生產(chǎn)之前，要先檢測(cè)其活性，以確定其應(yīng)用價(jià)值。固定化酶技術(shù)可以生產(chǎn)之前，要先檢測(cè)其活性，以確定其應(yīng)用價(jià)值。固定化酶技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)酶的反復(fù)利用，降低了生產(chǎn)成本。實(shí)現(xiàn)酶的反復(fù)利用，降低了生產(chǎn)成本。(4)在應(yīng)用在應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增技術(shù)擴(kuò)增DNA片片段段時(shí)，時(shí)，DNA合成合成(延伸延伸)時(shí)溫度要控制在時(shí)溫度要控制在72，需要具有較強(qiáng)的耐熱性的，需要