微生物基礎(chǔ)知識(shí)

1、微生物的概述微生物的概念：微生物的概念：是指廣泛存在于自然界、 體形極小、具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)，且能在適宜的環(huán)境中生長(zhǎng)繁殖的一大類微小生物微生物的特點(diǎn)體形極小，需借助于顯微鏡或電子顯微鏡放大幾百或幾千倍才能看到分布廣泛，存在于土壤、空氣、動(dòng)植物體表，以及與外界相通的腔道肌內(nèi)或機(jī)體內(nèi)結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，多以單細(xì)胞、簡(jiǎn)單的多細(xì)胞或細(xì)胞群體的形式存在種類繁多，有病毒、細(xì)菌、立克次體、支原體、衣原體、螺旋體、放射菌、真菌變異性快，受外界環(huán)境劇烈變化時(shí)，一部分菌體會(huì)死亡，一部分菌體因變異會(huì)生存下來(lái)繁殖快，簡(jiǎn)單的二分裂進(jìn)行無(wú)性繁殖，一般2030分鐘分裂一次微生物的分類病 毒最簡(jiǎn)單的分類群。病毒含有所有生命物質(zhì)最基本的組

2、成部分 核酸微生物的分類物征：它們以一種或多種形式到處存在,細(xì)菌能以極快的速度繁殖 “二分裂法” 具有產(chǎn)生休眠狀態(tài)的能力 “假死狀態(tài)”孢子細(xì)菌形態(tài)： 球狀（球菌） 棒狀（桿菌） 螺旋狀（弧菌）陽(yáng)性菌： 細(xì)菌經(jīng)染色可以保留結(jié)晶紫，最大來(lái)源是人。陰性菌： 細(xì)菌染色后，當(dāng)用脫色劑處理時(shí)紫色就會(huì)褪去，不能與結(jié)晶紫牢固的結(jié)合； 陰性菌的最大來(lái)源是水。微生物的分類 革蘭氏染色反應(yīng)兩種形態(tài) 單細(xì)胞形態(tài)：酵母菌 以長(zhǎng)的支鏈形態(tài)存在：絲狀體真菌（能產(chǎn)生抗生產(chǎn)素的真菌）真菌產(chǎn)生的孢子比細(xì)菌的芽孢差。真 菌微生物的分類按環(huán)境條件分類溫度 嗜冷菌：無(wú)色桿菌屬，黃色桿菌屬，產(chǎn)鹼桿菌屬 嗜溫菌：埃希氏桿菌屬，沙門氏菌屬，

3、鏈球菌屬，金黃色葡萄球菌屬 嗜熱菌：芽孢桿菌屬，梭狀芽孢桿菌屬，乳酸桿菌屬注意：允許微生物生長(zhǎng)的溫度有很明顯的重疊部分。細(xì)菌在一特定溫度下不可能不生長(zhǎng)，但不是說(shuō)它們不可能存活。ph 嗜酸菌：鏈球菌屬，乳酸桿菌屬 嗜中性菌：埃希氏桿菌屬，芽孢桿菌屬 嗜鹼菌：弧菌按環(huán)境條件分類食物來(lái)源 自養(yǎng)型：具有能從簡(jiǎn)單的無(wú)機(jī)化合物合成所有生長(zhǎng)和繁殖所需營(yíng)養(yǎng)物的能力。 異養(yǎng)型：利用在其它生物代謝中形成的有機(jī)物。按環(huán)境條件分類藥品制造操作中分離所得的微生物，絕大多數(shù)是異養(yǎng)型。按對(duì)氧氣的需求分類 需氧菌 厭氧菌細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的特殊產(chǎn)物毒素： 內(nèi)毒素，細(xì)菌菌體分解后釋放的物質(zhì) 外毒素，細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖過(guò)程中釋放的物質(zhì)熱源

4、一種內(nèi)毒素（0.22 m 濾膜可除去） 藥品生產(chǎn)中微生物污染的途徑粒子帶入：人員說(shuō)話、體表脫落物、設(shè)備廠房散落、物料本身散發(fā)、物料包裝物的脫落水源帶入：作為原料或介質(zhì)，直接或間接導(dǎo)入污染源（工藝用水）原輔料、包裝材料、容器、垃圾、廢物等。藥物污染和變質(zhì)藥物被污染后的結(jié)果 有致病菌 有微生物的代謝物，如熱源 微生物的部數(shù)超過(guò)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求 在無(wú)菌制劑中有活的微生物存在 藥物受污染后質(zhì)量變化的表現(xiàn) 物理變化：外觀、顏色、氣味、硬度、粘度、澄明度等物理性狀的改變，發(fā)展下去可發(fā)生化學(xué)變化 化學(xué)變化：藥物中的某些成份（糖、蛋白質(zhì)、有機(jī)聚合物等）被微生物降解，而致酸敗或失效藥物污染和變質(zhì)外用藥受污染，可引起

5、局部感染，嚴(yán)重者可引起全身感染，如敗血癥?？诜幨芪廴究梢鹣栏腥?，嚴(yán)重者可引起其它器官的感染，如膽囊炎、腹膜炎。注射劑受污染可引起局部感染，大輸液可引起熱源反應(yīng)，嚴(yán)重可危及生命。受污染藥物對(duì)人體的危害防止微生物污染的措施加強(qiáng)藥品生產(chǎn)過(guò)程的衛(wèi)生管理 環(huán)境衛(wèi)生 工藝衛(wèi)生 個(gè)人衛(wèi)生微生物的應(yīng)用發(fā)酵 利用微生物菌體細(xì)胞中產(chǎn)生的酶，將有機(jī)物轉(zhuǎn)化成細(xì)胞（菌體）或其它有機(jī)物，從而得到人們所需要的藥物，如：抗生素、維生素、氨基酸、甾體激素、酶及酶制劑微生物的菌體制劑及酶制劑 中藥菌體有靈芝、冬蟲夏草、茯苓、銀耳等 藥用酵母、酵母片 活菌制劑：乳酸菌、雙歧桿菌等 消化酶、胃蛋白酶等消毒與滅菌消毒 指對(duì)微生

6、物繁殖體的致死作用，但不能殺滅芽孢等全部微生物選擇消毒劑的原則： 高效、無(wú)腐蝕、無(wú)特殊嗅味和顏色，不對(duì)設(shè)備、物料產(chǎn)生污染; 在有效濃度時(shí)易溶或混溶于水中，與其它消毒劑無(wú)配伍禁忌； 貯存過(guò)程中穩(wěn)定 價(jià)格便宜 名稱濃度濃度用途用途0.1%新潔爾新潔爾滅溶液滅溶液手部消毒（48小時(shí)用完）乙醇乙醇戊二醛戊二醛甲醛甲醛0.2%75%2%40%墻壁、地面、地漏、門窗、臺(tái)面、桌、椅等消毒直接接觸藥物的容器、用具、設(shè)備表面、天花、墻面及人手部的消毒（48小時(shí)用完）直接接觸藥物的容器、用具、設(shè)備表面、天花、墻面及人手部的消毒（24小時(shí)用完） 噴灑適用于空間的消毒煤酚皂煤酚皂溶液溶液手部消毒（72小時(shí)用完）1%5

7、%適用于潔凈區(qū)地面及地漏的消毒適用于潔凈區(qū)設(shè)備表面、回風(fēng)口、墻面、臺(tái)面及微生物檢查有霉菌生長(zhǎng)部位的消毒 （24小時(shí)內(nèi)用完）麝香草酚麝香草酚乙醇溶液乙醇溶液 5%常用的消毒劑影響消毒劑活性的因素溫度：消毒速度隨溫度升高而加快濃度：適宜的濃度能提高和保證消毒的效果酸堿度：酸堿度影響不同離子型消毒劑微生物種類和數(shù)量：差異性消毒環(huán)境：如存在有機(jī)物可影響消毒的效果其它物理化學(xué)因素：影響消毒劑分配系統(tǒng)與活性微生物的培養(yǎng)基本生長(zhǎng)需求 兩種最主要的元素： 碳：所有生命系統(tǒng)中合成各種復(fù)雜有機(jī)物的主要元素。 氮：合成蛋白質(zhì)骨架材料氨基酸所必須的。培養(yǎng)基無(wú)菌試驗(yàn)無(wú)菌無(wú)菌 沒(méi)有活體的存在，它是用生長(zhǎng)繁殖來(lái)證沒(méi)有活體的

8、存在，它是用生長(zhǎng)繁殖來(lái)證明的。因此，證明無(wú)菌最通常的方法是促進(jìn)生明的。因此，證明無(wú)菌最通常的方法是促進(jìn)生長(zhǎng)的試驗(yàn)。長(zhǎng)的試驗(yàn)。無(wú)菌試驗(yàn)方法是能夠促進(jìn)這類細(xì)菌的生長(zhǎng)。硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基（ftm）成成份份功功能能l-脫氧酸還原劑，維持厭氧環(huán)境氧化鈉離子來(lái)源和維持滲透壓葡萄糖碳源瓊脂促進(jìn)生長(zhǎng)，特別對(duì)厭氧菌酵母浸液碳源，氮源，必需的氨基酸來(lái)源（弱緩沖液）硫乙醇酸鈉維持厭氧環(huán)境的還原劑汞防腐劑的水溶化劑刃天青氧化還原指示劑（粉紅色表示有氧）在 30 35培養(yǎng)時(shí)，可供嗜中溫性細(xì)菌、嗜中性細(xì)菌、異養(yǎng)型細(xì)菌、兼性型細(xì)菌或厭氧菌的生長(zhǎng)用。大豆 酪蛋白水解液培養(yǎng)基無(wú)菌試驗(yàn)成成份份功功用用胰酶消化酪蛋白胨碳源、氮源

9、、基本氨基酸來(lái)源大豆的木瓜酶水解物碳源、氮源、基本氨基酸來(lái)源氧化鈉離子來(lái)源和維持滲透壓（等滲）磷酸鉀離子來(lái)源和緩沖劑葡萄糖碳源用于支持需氧菌的生長(zhǎng)。培養(yǎng) 培養(yǎng)時(shí)間定為7 14天 增加培養(yǎng)時(shí)間可補(bǔ)償條件不佳時(shí)的生長(zhǎng)速率 快速生長(zhǎng)取決于健康的細(xì)胞，只要修復(fù)了引起衰弱的傷害部份，這個(gè)細(xì)胞才能重新繁殖 接種培養(yǎng)14天，膜過(guò)濾培養(yǎng)7天 細(xì)胞集中在濾膜上，用無(wú)菌洗滌液洗滌，產(chǎn)品中的抑菌劑被除去 進(jìn)入培養(yǎng)基的細(xì)胞在有效利用營(yíng)養(yǎng)成分之前，必須適應(yīng)這一培養(yǎng)基無(wú)菌試驗(yàn)滅菌概念：是指殺滅或除去物體中所有微生物的繁殖體和芽孢的作用稱為滅菌。常用滅菌方法一、熱力滅菌：利用熱能使微生物的蛋白質(zhì)凝固變性而導(dǎo)致細(xì)菌死亡干熱滅

10、菌：火焰、燒灼、干烤、紅外線等 常用烘箱 ：用于耐高溫的物料、金屬、玻璃制品，滅芽孢效果好。濕熱滅菌：煮沸、流通蒸汽、高壓蒸汽等 常用高壓蒸汽滅菌器 ：穿透力強(qiáng)，用于耐熱及潮濕的物品干熱滅菌火焰滅菌：利用火焰高溫，使微生物及芽孢在極短的時(shí)間內(nèi)死亡，此法迅速、可靠、簡(jiǎn)便干熱空氣滅菌：用熱輻射和滅菌器內(nèi)空氣流動(dòng)傳遞熱量使微生物及芽孢死亡 135145 35小時(shí) 160170 24小時(shí) 180200 0.51小時(shí) 250 0.5小時(shí)或200以上45mim(熱原)遭破壞 主要是通過(guò)提高了溫度使細(xì)胞成分產(chǎn)生非特異性氧化而被破壞的細(xì)胞固有的水分起了重要的作用濕熱滅菌熱壓滅菌（高壓滅菌）：利用超過(guò)一個(gè)大氣壓

11、的飽和蒸汽的高性能穿透力以殺滅微生物，最可靠的方法之一 需完全排出高壓滅菌器內(nèi)的冷空氣 注意被滅菌物品能否耐高溫高壓 定期檢查滅菌箱內(nèi)的溫度、壓力 115 ，67kpa 30mim 121 ，97kpa 20mim 126 ，139kpa 15mim濕熱滅菌流通蒸汽滅菌 在常壓下用100 的流通蒸汽殺滅細(xì)菌 3060min煮沸滅菌 加熱至沸而殺滅細(xì)菌 3060min低溫間歇滅菌法：適用于必須熱壓滅菌但又不耐高溫的藥品二、輻射滅菌 以放射性同位素co60放射的 射線滅菌，射線可使有機(jī)化合物的分子直接電離，破壞微生物的正常代謝，導(dǎo)致微生物體內(nèi)的大分子化的分解。常用滅菌方法三、紫外線滅菌：用波長(zhǎng)20

12、0300nm（253.7nm處殺菌力最強(qiáng)）的紫外線進(jìn)行滅菌，微生物細(xì)胞中的核酸能吸收紫外線，紫外線干擾蛋白質(zhì)的合成，導(dǎo)致微生物死亡。 紫外滅菌燈平均壽命為2000小時(shí)，設(shè)計(jì)為0.4w/m2以上，被滅菌物品離光源不超過(guò)1.5米，一般滅菌30min1h常用滅菌方法四、環(huán)氧乙烷滅菌，利用其強(qiáng)氧化性，對(duì)微生物繁殖體、芽孢有強(qiáng)的滅菌作用常用滅菌方法五、臭氧滅菌：臭氧在常溫下不穩(wěn)定，很快自行分解成氧氣（o2）及氧原子（o），氧原子對(duì)微生物具有的氧化作用。常用滅菌方法六、過(guò)濾滅菌，利用細(xì)菌不能通過(guò)濾膜除去活的、死亡的微生物。常用微孔濾膜、濾棒等，一般選用孔徑為0.45、0.22m常用加壓或減壓過(guò)濾適用于不耐

13、熱藥液的除菌常用滅菌方法滅菌的驗(yàn)證生物指示劑 首先是選擇具有能抵抗滅菌工藝的生物指示劑 其次要考慮各種變量對(duì)滅菌生物指示劑的耐受力的影響 再次，要建立指示劑在滅菌過(guò)程中破壞的定量性質(zhì) 最后，對(duì)特定工藝要測(cè)定所需滅菌物質(zhì)實(shí)現(xiàn)無(wú)菌的可能性滅菌方法的驗(yàn)證是包括對(duì)證明該方法的可靠性和可預(yù)見性的一系列研究指示劑的特征對(duì)滅菌方法固有的耐受性對(duì)設(shè)定條件下的滅菌方法具有穩(wěn)定的和重復(fù)的耐受性滅菌方法處理后的有效回收率非致病性通常存在于待滅菌產(chǎn)品中的細(xì)菌特征滅菌驗(yàn)證相關(guān)概念d值 減少細(xì)菌總數(shù)90%所需的時(shí)間f值 在121時(shí)，殺滅懸浮液中所有孢子所需要的時(shí)間f0值 在任何一個(gè)給定溫度時(shí)，所需的相當(dāng)于在121的滅菌效

14、應(yīng)的時(shí)間 例如孢子數(shù)是106，121的d值是2分鐘，則f0是12z值 d值改變余數(shù)10時(shí)所需要的攝氏度數(shù)滅菌方法的選擇與產(chǎn)品本身的性質(zhì)有關(guān)任何危害產(chǎn)品安全和有效性的滅菌方法不能使用努力選用對(duì)成本有競(jìng)爭(zhēng)力的工藝步驟或單元操作消毒與滅菌的比較共同點(diǎn)：消毒與滅菌都用以殺滅微生物以控制其污染或防止污染。消毒與滅菌的比較不同點(diǎn)：消毒是不完全殺滅微生物，而滅菌是完全殺滅微生物消毒常用化學(xué)物質(zhì)，而滅菌方法用物理、化學(xué)方法檢查效果：消毒效果以消毒劑的性質(zhì)與效價(jià)來(lái)判定，而滅菌是用無(wú)菌檢查方法來(lái)判定消毒與滅菌的比較中藥霉變與防治一、霉菌生長(zhǎng)的外界條件1.營(yíng)養(yǎng)物 中藥中含有淀粉、糖等有機(jī)物2.溫濕度 霉菌最適宜生長(zhǎng)的溫度2040度、濕度為751003.光線 直射陽(yáng)光對(duì)霉菌有殺傷作用，但少量可見光和紫外線對(duì)霉菌有剌激其生長(zhǎng)