微生物基礎知識

1、微生物的概述微生物的概念：微生物的概念：是指廣泛存在于自然界、 體形極小、具有一定形態(tài)結構，且能在適宜的環(huán)境中生長繁殖的一大類微小生物微生物的特點體形極小，需借助于顯微鏡或電子顯微鏡放大幾百或幾千倍才能看到分布廣泛，存在于土壤、空氣、動植物體表，以及與外界相通的腔道肌內或機體內結構簡單，多以單細胞、簡單的多細胞或細胞群體的形式存在種類繁多，有病毒、細菌、立克次體、支原體、衣原體、螺旋體、放射菌、真菌變異性快，受外界環(huán)境劇烈變化時，一部分菌體會死亡，一部分菌體因變異會生存下來繁殖快，簡單的二分裂進行無性繁殖，一般2030分鐘分裂一次微生物的分類病 毒最簡單的分類群。病毒含有所有生命物質最基本的組

2、成部分 核酸微生物的分類物征：它們以一種或多種形式到處存在,細菌能以極快的速度繁殖 “二分裂法” 具有產(chǎn)生休眠狀態(tài)的能力 “假死狀態(tài)”孢子細菌形態(tài)： 球狀（球菌） 棒狀（桿菌） 螺旋狀（弧菌）陽性菌： 細菌經(jīng)染色可以保留結晶紫，最大來源是人。陰性菌： 細菌染色后，當用脫色劑處理時紫色就會褪去，不能與結晶紫牢固的結合； 陰性菌的最大來源是水。微生物的分類 革蘭氏染色反應兩種形態(tài) 單細胞形態(tài)：酵母菌 以長的支鏈形態(tài)存在：絲狀體真菌（能產(chǎn)生抗生產(chǎn)素的真菌）真菌產(chǎn)生的孢子比細菌的芽孢差。真 菌微生物的分類按環(huán)境條件分類溫度 嗜冷菌：無色桿菌屬，黃色桿菌屬，產(chǎn)鹼桿菌屬 嗜溫菌：埃希氏桿菌屬，沙門氏菌屬，

3、鏈球菌屬，金黃色葡萄球菌屬 嗜熱菌：芽孢桿菌屬，梭狀芽孢桿菌屬，乳酸桿菌屬注意：允許微生物生長的溫度有很明顯的重疊部分。細菌在一特定溫度下不可能不生長，但不是說它們不可能存活。ph 嗜酸菌：鏈球菌屬，乳酸桿菌屬 嗜中性菌：埃希氏桿菌屬，芽孢桿菌屬 嗜鹼菌：弧菌按環(huán)境條件分類食物來源 自養(yǎng)型：具有能從簡單的無機化合物合成所有生長和繁殖所需營養(yǎng)物的能力。 異養(yǎng)型：利用在其它生物代謝中形成的有機物。按環(huán)境條件分類藥品制造操作中分離所得的微生物，絕大多數(shù)是異養(yǎng)型。按對氧氣的需求分類 需氧菌 厭氧菌細菌生長繁殖的特殊產(chǎn)物毒素： 內毒素，細菌菌體分解后釋放的物質 外毒素，細菌生長繁殖過程中釋放的物質熱源

4、一種內毒素（0.22 m 濾膜可除去） 藥品生產(chǎn)中微生物污染的途徑粒子帶入：人員說話、體表脫落物、設備廠房散落、物料本身散發(fā)、物料包裝物的脫落水源帶入：作為原料或介質，直接或間接導入污染源（工藝用水）原輔料、包裝材料、容器、垃圾、廢物等。藥物污染和變質藥物被污染后的結果 有致病菌 有微生物的代謝物，如熱源 微生物的部數(shù)超過質量標準要求 在無菌制劑中有活的微生物存在 藥物受污染后質量變化的表現(xiàn) 物理變化：外觀、顏色、氣味、硬度、粘度、澄明度等物理性狀的改變，發(fā)展下去可發(fā)生化學變化 化學變化：藥物中的某些成份（糖、蛋白質、有機聚合物等）被微生物降解，而致酸敗或失效藥物污染和變質外用藥受污染，可引起

5、局部感染，嚴重者可引起全身感染，如敗血癥?？诜幨芪廴究梢鹣栏腥荆瑖乐卣呖梢鹌渌鞴俚母腥?，如膽囊炎、腹膜炎。注射劑受污染可引起局部感染，大輸液可引起熱源反應，嚴重可危及生命。受污染藥物對人體的危害防止微生物污染的措施加強藥品生產(chǎn)過程的衛(wèi)生管理 環(huán)境衛(wèi)生 工藝衛(wèi)生 個人衛(wèi)生微生物的應用發(fā)酵 利用微生物菌體細胞中產(chǎn)生的酶，將有機物轉化成細胞（菌體）或其它有機物，從而得到人們所需要的藥物，如：抗生素、維生素、氨基酸、甾體激素、酶及酶制劑微生物的菌體制劑及酶制劑 中藥菌體有靈芝、冬蟲夏草、茯苓、銀耳等 藥用酵母、酵母片 活菌制劑：乳酸菌、雙歧桿菌等 消化酶、胃蛋白酶等消毒與滅菌消毒 指對微生

6、物繁殖體的致死作用，但不能殺滅芽孢等全部微生物選擇消毒劑的原則： 高效、無腐蝕、無特殊嗅味和顏色，不對設備、物料產(chǎn)生污染; 在有效濃度時易溶或混溶于水中，與其它消毒劑無配伍禁忌； 貯存過程中穩(wěn)定 價格便宜 名稱濃度濃度用途用途0.1%新潔爾新潔爾滅溶液滅溶液手部消毒（48小時用完）乙醇乙醇戊二醛戊二醛甲醛甲醛0.2%75%2%40%墻壁、地面、地漏、門窗、臺面、桌、椅等消毒直接接觸藥物的容器、用具、設備表面、天花、墻面及人手部的消毒（48小時用完）直接接觸藥物的容器、用具、設備表面、天花、墻面及人手部的消毒（24小時用完） 噴灑適用于空間的消毒煤酚皂煤酚皂溶液溶液手部消毒（72小時用完）1%5

7、%適用于潔凈區(qū)地面及地漏的消毒適用于潔凈區(qū)設備表面、回風口、墻面、臺面及微生物檢查有霉菌生長部位的消毒 （24小時內用完）麝香草酚麝香草酚乙醇溶液乙醇溶液 5%常用的消毒劑影響消毒劑活性的因素溫度：消毒速度隨溫度升高而加快濃度：適宜的濃度能提高和保證消毒的效果酸堿度：酸堿度影響不同離子型消毒劑微生物種類和數(shù)量：差異性消毒環(huán)境：如存在有機物可影響消毒的效果其它物理化學因素：影響消毒劑分配系統(tǒng)與活性微生物的培養(yǎng)基本生長需求 兩種最主要的元素： 碳：所有生命系統(tǒng)中合成各種復雜有機物的主要元素。 氮：合成蛋白質骨架材料氨基酸所必須的。培養(yǎng)基無菌試驗無菌無菌 沒有活體的存在，它是用生長繁殖來證沒有活體的

8、存在，它是用生長繁殖來證明的。因此，證明無菌最通常的方法是促進生明的。因此，證明無菌最通常的方法是促進生長的試驗。長的試驗。無菌試驗方法是能夠促進這類細菌的生長。硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基（ftm）成成份份功功能能l-脫氧酸還原劑，維持厭氧環(huán)境氧化鈉離子來源和維持滲透壓葡萄糖碳源瓊脂促進生長，特別對厭氧菌酵母浸液碳源，氮源，必需的氨基酸來源（弱緩沖液）硫乙醇酸鈉維持厭氧環(huán)境的還原劑汞防腐劑的水溶化劑刃天青氧化還原指示劑（粉紅色表示有氧）在 30 35培養(yǎng)時，可供嗜中溫性細菌、嗜中性細菌、異養(yǎng)型細菌、兼性型細菌或厭氧菌的生長用。大豆 酪蛋白水解液培養(yǎng)基無菌試驗成成份份功功用用胰酶消化酪蛋白胨碳源、氮源

9、、基本氨基酸來源大豆的木瓜酶水解物碳源、氮源、基本氨基酸來源氧化鈉離子來源和維持滲透壓（等滲）磷酸鉀離子來源和緩沖劑葡萄糖碳源用于支持需氧菌的生長。培養(yǎng) 培養(yǎng)時間定為7 14天 增加培養(yǎng)時間可補償條件不佳時的生長速率 快速生長取決于健康的細胞，只要修復了引起衰弱的傷害部份，這個細胞才能重新繁殖 接種培養(yǎng)14天，膜過濾培養(yǎng)7天 細胞集中在濾膜上，用無菌洗滌液洗滌，產(chǎn)品中的抑菌劑被除去 進入培養(yǎng)基的細胞在有效利用營養(yǎng)成分之前，必須適應這一培養(yǎng)基無菌試驗滅菌概念：是指殺滅或除去物體中所有微生物的繁殖體和芽孢的作用稱為滅菌。常用滅菌方法一、熱力滅菌：利用熱能使微生物的蛋白質凝固變性而導致細菌死亡干熱滅

10、菌：火焰、燒灼、干烤、紅外線等 常用烘箱 ：用于耐高溫的物料、金屬、玻璃制品，滅芽孢效果好。濕熱滅菌：煮沸、流通蒸汽、高壓蒸汽等 常用高壓蒸汽滅菌器 ：穿透力強，用于耐熱及潮濕的物品干熱滅菌火焰滅菌：利用火焰高溫，使微生物及芽孢在極短的時間內死亡，此法迅速、可靠、簡便干熱空氣滅菌：用熱輻射和滅菌器內空氣流動傳遞熱量使微生物及芽孢死亡 135145 35小時 160170 24小時 180200 0.51小時 250 0.5小時或200以上45mim(熱原)遭破壞 主要是通過提高了溫度使細胞成分產(chǎn)生非特異性氧化而被破壞的細胞固有的水分起了重要的作用濕熱滅菌熱壓滅菌（高壓滅菌）：利用超過一個大氣壓

11、的飽和蒸汽的高性能穿透力以殺滅微生物，最可靠的方法之一 需完全排出高壓滅菌器內的冷空氣 注意被滅菌物品能否耐高溫高壓 定期檢查滅菌箱內的溫度、壓力 115 ，67kpa 30mim 121 ，97kpa 20mim 126 ，139kpa 15mim濕熱滅菌流通蒸汽滅菌 在常壓下用100 的流通蒸汽殺滅細菌 3060min煮沸滅菌 加熱至沸而殺滅細菌 3060min低溫間歇滅菌法：適用于必須熱壓滅菌但又不耐高溫的藥品二、輻射滅菌 以放射性同位素co60放射的 射線滅菌，射線可使有機化合物的分子直接電離，破壞微生物的正常代謝，導致微生物體內的大分子化的分解。常用滅菌方法三、紫外線滅菌：用波長20

12、0300nm（253.7nm處殺菌力最強）的紫外線進行滅菌，微生物細胞中的核酸能吸收紫外線，紫外線干擾蛋白質的合成，導致微生物死亡。 紫外滅菌燈平均壽命為2000小時，設計為0.4w/m2以上，被滅菌物品離光源不超過1.5米，一般滅菌30min1h常用滅菌方法四、環(huán)氧乙烷滅菌，利用其強氧化性，對微生物繁殖體、芽孢有強的滅菌作用常用滅菌方法五、臭氧滅菌：臭氧在常溫下不穩(wěn)定，很快自行分解成氧氣（o2）及氧原子（o），氧原子對微生物具有的氧化作用。常用滅菌方法六、過濾滅菌，利用細菌不能通過濾膜除去活的、死亡的微生物。常用微孔濾膜、濾棒等，一般選用孔徑為0.45、0.22m常用加壓或減壓過濾適用于不耐

13、熱藥液的除菌常用滅菌方法滅菌的驗證生物指示劑 首先是選擇具有能抵抗滅菌工藝的生物指示劑 其次要考慮各種變量對滅菌生物指示劑的耐受力的影響 再次，要建立指示劑在滅菌過程中破壞的定量性質 最后，對特定工藝要測定所需滅菌物質實現(xiàn)無菌的可能性滅菌方法的驗證是包括對證明該方法的可靠性和可預見性的一系列研究指示劑的特征對滅菌方法固有的耐受性對設定條件下的滅菌方法具有穩(wěn)定的和重復的耐受性滅菌方法處理后的有效回收率非致病性通常存在于待滅菌產(chǎn)品中的細菌特征滅菌驗證相關概念d值 減少細菌總數(shù)90%所需的時間f值 在121時，殺滅懸浮液中所有孢子所需要的時間f0值 在任何一個給定溫度時，所需的相當于在121的滅菌效

14、應的時間 例如孢子數(shù)是106，121的d值是2分鐘，則f0是12z值 d值改變余數(shù)10時所需要的攝氏度數(shù)滅菌方法的選擇與產(chǎn)品本身的性質有關任何危害產(chǎn)品安全和有效性的滅菌方法不能使用努力選用對成本有競爭力的工藝步驟或單元操作消毒與滅菌的比較共同點：消毒與滅菌都用以殺滅微生物以控制其污染或防止污染。消毒與滅菌的比較不同點：消毒是不完全殺滅微生物，而滅菌是完全殺滅微生物消毒常用化學物質，而滅菌方法用物理、化學方法檢查效果：消毒效果以消毒劑的性質與效價來判定，而滅菌是用無菌檢查方法來判定消毒與滅菌的比較中藥霉變與防治一、霉菌生長的外界條件1.營養(yǎng)物 中藥中含有淀粉、糖等有機物2.溫濕度 霉菌最適宜生長的溫度2040度、濕度為751003.光線 直射陽光對霉菌有殺傷作用，但少量可見光和紫外線對霉菌有剌激其生長