血型鑒定和亞型2009-9-20華信(1)

1、ABOABO血型和亞型檢查血型和亞型檢查北京佰利申公司市場部北京佰利申公司市場部張松張松2009-9-24 討論內容nABO血型及遺傳n血型試劑的現(xiàn)狀和發(fā)展nABO血型檢查和亞型診斷和案例nABO亞型輸血原則發(fā)現(xiàn)血型n1900年奧地利醫(yī)生Landsteiner發(fā)現(xiàn)了ABO血型系統(tǒng)，成為血型血清學的奠基人。1932年獲諾貝爾醫(yī)學獎。被國際醫(yī)學界稱為“血型之父”n血型血清學：應用血清學的方法研究血液中抗原、抗體及其反應的科學。血型與遺傳血型與遺傳n基因是遺傳的基本單位。n一個個體所帶的基因總和，稱為基因型,血型抗原通常是共顯性性狀。n血型血清學方法直接檢測出的基因產物，稱為表型。ABO血型的遺傳共

2、由3個等位基因IA，IB和i控制的，通常為共顯性。血型的遺傳是十分穩(wěn)定的，但也有一些特殊的情況血型的遺傳是十分穩(wěn)定的，但也有一些特殊的情況人類ABO系統(tǒng)血型表血型表型基因型抗原(在細胞膜上)抗體基因和產物AIAIA,IAiA（抗B）IA(9q34)N-乙酰半乳糖轉移酶BIBIB,IBiB（抗A)IB(9q34)半乳糖轉移酶ABIAIBAB-Oii-（抗A抗B）i(9q34)無相應產物血型系統(tǒng)血型系統(tǒng)n是指一系列等位基因產生的,可使用血清學方法或免疫學檢出化學上有關的抗原。血型在醫(yī)學、法醫(yī)學中的應用血型在醫(yī)學、法醫(yī)學中的應用n器官移植n輸血治療n疾病診斷（HDN等）n疾病相關n親子鑒定n個體識別

3、8ABOABO抗體抗體n性質：多數(shù)為IgM，或有少量IgG，IgAn天然抗體：沒有明顯抗原刺激而產生的抗體。n免疫抗體：通過輸血、妊娠等免疫刺激獲得的抗體nA型人抗BnB型人抗A多為IgMnO型人除具有抗A，抗B外，還有抗AB，為IgG，IgM或IgA混合物，IgG型抗A或抗B可通過胎盤。nB型人抗A效價高于A型人抗B效價nO型人抗A，抗B或抗AB效價高于B型或A型人相應抗A或抗B。n完全缺乏抗A、抗B者，0.01%。配血步入基因時代配血步入基因時代n為了預防輸血不良反應和挽救生命，歐州學者們正在呼吁用DNA檢測替代血清學方法來鑒定血型。n基因分型能更準確地完成供受者間的血型配型，從而防止同種

4、免疫和其它免疫相關的輸血反應。n100多年來血清學方法面臨挑戰(zhàn)。血型試劑的現(xiàn)狀與展望血型試劑的現(xiàn)狀與展望n抗A抗B血型定型試劑：中國生物制品規(guī)程2000版：能檢測A2、A2Bn2010版藥典（正在修訂）不能低于中檢所的標準品。nISBT對定型試劑要求，既不能“漏檢”A3、B3，理想的是能識別Ax、Bx，血凝效價至少在1：128。我國抗我國抗A A抗抗B B血型試劑標準血型試劑標準n特異性：抗-A，只凝集含A抗原紅細胞，包括A1、A2、A1B、A2B;可不凝集Ax、Bx細胞。n親和力：抗-A對A1細胞開始凝集的時間為15秒，對A2為30秒，對A2B為45秒；抗-B對B紅細胞為15秒。n效價：抗-

5、A1 1：128，抗-A2B1：16、抗-B 1：128正確檢查方法和高質量試劑缺一不可正確檢查方法和高質量試劑缺一不可n從理論到實際可以說明，不可能絕對避免亞型紅細胞“漏檢現(xiàn)象”。n應用高質量的血型試劑，應達到ISBT標準。n正確的血型檢定方法：輸血規(guī)范要求，即”供受”必須做正反定型，才能正確判斷血型。確保安全輸血。13ABOABO亞型亞型nA 亞型 1911年, von Dungern 發(fā)現(xiàn)A型有2種，A1， A2 nA2與A1有量的差別，A2抗原位點數(shù)比A1少得多，糖基轉移酶活性也低nA2與A1也有質的差別，1-8% A2有抗A1nA1細胞上有A及A1抗原nA2細胞上只有A抗原nA1，A

6、2亞型實際上是由H抗原結構造成的，H1，H2是非分支直鏈，而H3，H4為分支鏈，A1酶可將H1-4轉化為Aa-d，而A2酶只能轉化H1，H2為Aa，Ab，抗A1可能是針對Ac，Ad決定簇的。與抗與抗A A反應的相對凝集力反應的相對凝集力以及每個紅細胞上以及每個紅細胞上A A位點的密度位點的密度表現(xiàn)型凝集力抗原位點密度（每個紅細胞上的A位點X105）A1A2A3AxAendAm,AyAel100962631033101050010.5(7.9514.56)2.21(1.293.53)0.35(0.071.0)0.048(0.0140.10)0.035(0.0110.044)0.012(0.001

7、0.019)0.007(0.0010.014)亞型頻率分布亞型頻率分布獻血者檢測確定其它亞型66/440617份（除A214例，A2B35例）nA亞型22份nAxB11例，AelB3例，Ax3例，Ael2例，Amh2例，A31例nB亞型41份nBx11例，B39例，ABx7例，AB35例，Bel3例，Bm2例，ABel1例，ABend1例，ABm1例，Bend1例。nCisAB2例,nB(A)1例nB亞型多于A亞型。最常見亞型為AxB和Bx。有不規(guī)則抗體54例n引自中國輸血雜志2006，19（1）：25血源“漏檢”亞型nA3，B3漏檢：微孔板法，正反定型相符，忽略混合視野。nAxB漏檢:誤定為

8、B型，醫(yī)院配血次側不合退回。nBx漏檢：誤定為O型，輸注給O型，出現(xiàn)明顯輸血反應。nA亞型的不規(guī)則抗體通常很弱，屬冷抗體，配血很容易漏檢。n亞型受血者漏檢，又未查出抗體，很容易導致輸血反應。血型血型正定型試驗正定型試驗型物質型物質抗原數(shù)抗原數(shù)/細胞細胞（103）血清中血清中抗抗-A1抗抗A、抗、抗AB、抗、抗H、抗、抗A1A14+ 4+ W+ 4+A，H810-1170無無A24+ 4+ 3+ 0A，H240-2904%A32+mf 2+mf 4+ 0A，H35很少很少Ax0/w+ 1-2+ 4+ 0H4幾乎全部幾乎全部Am0/ 0/ 4+ 0A，H0.2-1.9無無AendWkmf Wkmf

9、 4+ 0H200(10%凝集凝集)無無Ael0 0 4+ 0H0.1-1.4經(jīng)常經(jīng)常A A亞型血清學反應特征亞型血清學反應特征主要A亞型：A1、A2亞型n抗原數(shù)和分泌物質量區(qū)別。n與抗A試劑血清均可直接凝集。n與抗A1試劑凝集：為A1、A1B紅細胞，占80%。n與抗A1試劑不凝集：為A2、A2B紅細胞，占20%。nA2、A2B紅細胞：10%,25%有抗A1抗體。nA2、A2B紅細胞：血樣中不含抗紅細胞：血樣中不含抗A1抗體，則不必用抗抗體，則不必用抗A1確定其亞型。確定其亞型。亞型有意外抗體n2007某院輸血科、男、輸血前檢查，不同試劑出現(xiàn)不同結果。n長春博德標清：-A（-）、-B（4+）。

10、n北京血站鑒定：A亞B。輔助檢查和吸收放散試驗輔助檢查和吸收放散試驗n進口試劑：-A(w+)、-B（4+）、-A1(-)、-H(2+w)、Ac(3+)、 Bc(-)、Oc(-)、自身(W+)n國產長春：-A(-)、-B（4+）n吸收試驗：抗-A（進口）+3洗病人紅細胞各6滴混勻，放4冰箱1小時（混勻/15分鐘）。n放散試驗：6洗吸收后紅細胞56/10分鐘，放散液+Ac離心3+（效價1：8）。n診斷：A亞B。n建議輸B型洗滌紅細胞或O型洗滌紅細胞比較安全。B亞型案例n2009年02月25日、某醫(yī)院正常體檢n血型檢測B孔雙群，經(jīng)正反定進一步確證，報告B型。亞型有意外抗體n2004年，某院、女、子宮

11、肌瘤、術前輸血科血型檢查。n戴安娜卡：正定：AB、反定：B，正反不符。n長春博德標清：正定：B、反定：B，正反相符。n對卡的血型結果提出疑問？n經(jīng)北京血站鑒定：A亞B、血清中有抗A1抗體。n報告發(fā)回數(shù)天后，用戶回電質疑：其夫是B型，能生出O型孩子嗎？n答案：？亞型有意外抗體n2008某院、男、輸血前檢查，漏檢弱A，會誤判B型。n北京血站鑒定：B（A）型、血清中有抗A1抗體。n并做基因檢查（其基因型應為B（A）/O型）。n家系調查：待查。亞型有意外抗體順式遺傳和順式遺傳和B(A)n順式AB指從父母的一方同時得到A和B基因，在一條染色體上，而另一條染色體上是從父母中另一方來的O基因。nB（A）血型

12、是一種罕見的ABO亞型，其A和B抗原的傳遞呈順式遺傳方式，同cisAB血型有相似之處。ncisAB和B（A）表型的抗原含量各有偏重（其基因型應為B（A）/O型）。n注意的是：n含有不規(guī)則抗體的cisAB型、B（A）型，不宜作為普通供血者。n若為受血者，除輸同型的cisAB型、B（A）型外，還可輸O型洗滌紅細胞及AB型血漿。正反定型不一致，則需要附加試劑進一步鑒定n正定型中增加抗-A1、抗-H、抗-AB。n抗-AB用來確認弱A、弱B抗原。n抗A1用于鑒定A亞型。n抗-H用于鑒定亞型及孟買型。n反定型試驗中增加O細胞，用于鑒定是否存在ABO系統(tǒng)以外的同種抗體對定型的影響。n吸收試驗、放散試驗證實抗

13、原存在。ABO以外的同種抗體對定型的影響n影響反定型的血型抗體，抗-M抗體多見n試管法用O細胞與病人血漿離心看結果有凝集，即ABO以外抗體Am 亞型及家系調查n正定型：抗A(-)抗B (-)抗A1 (-)抗AB (w+)n反定型： Ac (-) Bc (3+) Oc (-)自身(-)n血型物質測定：A、H物質n吸收放散：證實：An家系：其父A 其母O ，子代:2個Am 2個An推斷其父血型基因是A/Am,其母血型基因是O/OA3型特征：n與抗-A試劑血清出現(xiàn)混合視野n與抗-AB試劑血清出現(xiàn)混合視野n與抗A1不凝集n與抗-H反應n偶爾血清中有抗-A1抗體。n分泌型有A和H物質。血站對亞型結果判斷

14、n血站對某些血型鑒定結果為：“暫定”或“初定”疑問：由于病人有過輸血或治療。某些疾病或治療影響抗體減弱或抗原生成、減弱。一般亞型可以用抗A1檢查，若陰性可以定為亞型。但新生兒本身抗原就弱，用抗A1確定亞型時，最好用正常的新生兒紅細胞用抗A1對照后，再確定結果（保證抗A1抗體的準確性）。Ax型特征：填空n與抗-A試劑血清出現(xiàn)（）n與抗-AB試劑血清出現(xiàn)（）n與抗A1試劑血清（）n與抗-H試劑血清反應（）n其血清中是否有抗-A1抗體（）。n分泌型有A（）H（）物質。n簡述吸收放散試驗？n如何輸血？Oh(孟買）型特征：n血型檢定：正定：-A（-）、-B（-）、-AB（-）、-H（-)， 反定：Ac+

15、、Bc+、Oc+n抗篩：(+）、（+）、（+）、自身（-）n鑒別Oh型、O型？nOh型輸血？總結：亞型鑒定試驗n紅細胞與抗A及抗A1的凝集強度。n紅細胞與抗AB的凝集強度。n紅細胞上H抗原活性強弱n血清中是否存在抗A1抗體。n分泌型人唾液中A及H物質的存在。n吸收放散試驗證明A抗原的存在。n家系調查nDNA臨床輸血技術規(guī)范n2000 184號衛(wèi)生部關于臨床輸血技術規(guī)范n第十五條第十五條 輸血科（血庫）要逐項核對輸血申請單、受血者和供血輸血科（血庫）要逐項核對輸血申請單、受血者和供血者血樣，復查受血者和供血者者血樣，復查受血者和供血者ABOABO血型（正、反定型血型（正、反定型) )n除新生兒外

16、，除新生兒外，ABOABO血型檢測必須做正反定型血型檢測必須做正反定型nABOABO正反定型不一致時正反定型不一致時重復試驗，排除技術原因重復試驗，排除技術原因詢問患者病史，包括診斷、輸血史等詢問患者病史，包括診斷、輸血史等不可根據(jù)自己經(jīng)驗，隨意下結論不可根據(jù)自己經(jīng)驗，隨意下結論臨床輸血技術規(guī)范輸血前檢查“三保險”nABO血型：相合99.4%，nRHD：相合99.8%n抗體篩查：相合99.94%n交叉配血：相合99.95%疑難血型/配血，緊急輸血怎么辦？n輸血前檢查（血型、抗篩、配血）與常規(guī)血液血檢查不同，如：Hb、WBC、PT可直接報結果。n血型報告是綜合分析結果（診斷？）不是直接報告結果。

17、n如：正定（AB)、反定（O）直接結果幾分鐘可報告。n分析結果（到底是什么血型） ？n許多補充試驗幾小時 幾天外送。n輸血科與醫(yī)生溝通：血型報告O/A/B?相當于臨床診斷休克/原因待查（？）疑似非典。n政策依據(jù)臨床技術規(guī)范第10條，對稀有血型患者（疑難必稀有）輸血原則：自身輸血、同型輸血、配合型輸血。n配合性輸血（沒有要求供受同型），不必為糾纏血型而耽誤輸血搶救。疑難血型/配血，緊急輸血怎么辦？例：血液病、亞型（疑難）血型：A? O? 進一步確定血型：吸收、放散、血型物質、抗-H、家系、DNA 需要4h-幾天。若緊急搶救。患者：當“O”處理。 真是O，輸O細胞，安全。 真是A，輸O細胞，安全。例:AIHA,正定：AB型，反定：O型。 血型：AB? O? 患者：當“O”處理。 真是“O”輸O細胞，安全。 真是“AB”輸O細胞，安全。疑難血型/配血，緊急輸血怎么辦？n其它血型不容易判斷，照此辦理。n注意：n這種情況下，必須做抗體篩選和兩種方法配血。n遇到疑難血型，輸血科和臨床應該理解溝通，提供選擇解決方案： 等待4h-3天（自己做）外送幾天？（血型鑒定清楚再輸血）。 上述緊急辦法，立即配血/緊急搶救。