食品中大腸菌群的測定ppt課件

1、大腸菌群的概念大腸菌群的概念 大腸菌群系指一群需氧及兼性厭氧，在大腸菌群系指一群需氧及兼性厭氧，在3737能分解乳糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣的革蘭氏陰性能分解乳糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。無芽胞桿菌。大腸菌群的組成大腸菌群的組成 大腸埃希氏菌屬、檸檬酸桿菌屬、產(chǎn)氣大腸埃希氏菌屬、檸檬酸桿菌屬、產(chǎn)氣克雷伯氏菌屬和陰溝腸桿菌?？死撞暇鷮俸完帨夏c桿菌。1 1、糞便污染的目的菌：、糞便污染的目的菌：大腸菌群或大腸桿菌大腸菌群或大腸桿菌2 2、以大腸菌群作為糞便目的菌緣由、以大腸菌群作為糞便目的菌緣由1 1在糞便中數(shù)量最大；在糞便中數(shù)量最大；2 2在外環(huán)境中存活的時間與致病菌大體一在外環(huán)境中存活的時間與致病

2、菌大體一樣；樣；3 3檢測方法簡便容易。檢測方法簡便容易。3、大腸菌群的測定意義、大腸菌群的測定意義1判別食品中否遭到糞便污染。判別食品中否遭到糞便污染。2有利于控制腸道傳染病的發(fā)生和流行。有利于控制腸道傳染病的發(fā)生和流行。3有利于控制食品在消費加工、運輸、有利于控制食品在消費加工、運輸、保管等過程中的衛(wèi)生情況。保管等過程中的衛(wèi)生情況。1.1.形狀與染色：革蘭氏染色陰性，無芽胞桿形狀與染色：革蘭氏染色陰性，無芽胞桿菌。菌。2.2.發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣 3.3.培育特性：在瓊脂上的典型菌落培育特性：在瓊脂上的典型菌落: :呈呈深紫黑色或中心深紫色，圓形，稍凸起，深紫黑色或中心深紫色，

3、圓形，稍凸起，邊緣整齊，外表光滑，常有金屬光澤；邊緣整齊，外表光滑，常有金屬光澤； 在麥康凱瓊脂上的典型菌落在麥康凱瓊脂上的典型菌落: :呈桃紅色或呈桃紅色或中心桃紅、圓形，扁平，光滑潮濕。中心桃紅、圓形，扁平，光滑潮濕。糖發(fā)酵實驗糖發(fā)酵實驗大腸桿菌革蘭氏染色鏡下照片大腸桿菌在伊紅美藍瓊脂平板上的特征麥康凱瓊脂平板照片乳糖發(fā)酵法國標法LTSE快速檢驗法疏水網(wǎng)膜法其他快速檢驗法1 1、檢樣稀釋、檢樣稀釋以無菌操作將檢樣以無菌操作將檢樣25g25g或或25ml25ml放放于含有于含有225ml225ml滅菌生理鹽水的滅菌玻璃滅菌生理鹽水的滅菌玻璃瓶內(nèi)瓶內(nèi)預(yù)置適當數(shù)量的玻璃珠瓶內(nèi)瓶內(nèi)預(yù)置適當數(shù)量的玻

4、璃珠或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做成成1 1：1010的均勻稀釋液。固體檢樣參與的均勻稀釋液。固體檢樣參與稀釋液后最好用無菌均質(zhì)器，以稀釋液后最好用無菌均質(zhì)器，以800r/min800r/min1000r/min1000r/min的速度處置的速度處置1min1min，做成做成1 1：1010的稀釋液。的稀釋液。1 1、檢樣稀釋、檢樣稀釋用用1ml1ml滅菌吸管汲取滅菌吸管汲取1 1：1010稀釋液稀釋液1ml1ml，沿管壁徐徐注入注入含有，沿管壁徐徐注入注入含有9ml9ml滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，振搖滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，振搖混勻，做成混勻，做成1 1：1001

5、00的稀釋液。的稀釋液。換用換用1 1支支1ml1ml滅菌吸管，按上述操滅菌吸管，按上述操作依次作作依次作1010倍遞增稀釋液，每遞倍遞增稀釋液，每遞增稀釋一次即換用增稀釋一次即換用1 1支支10ml10ml吸管。吸管。2.2.乳糖發(fā)酵實驗乳糖發(fā)酵實驗根據(jù)食品衛(wèi)生要求或?qū)z驗樣品污染情況估根據(jù)食品衛(wèi)生要求或?qū)z驗樣品污染情況估計，選擇三個稀釋度，每個稀釋度接種計，選擇三個稀釋度，每個稀釋度接種3 3管。管。將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，接將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，接種量在種量在1ml1ml以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管；以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管；1ml1ml及及1ml1ml以下者

6、，用單料乳糖發(fā)酵管。每以下者，用單料乳糖發(fā)酵管。每一個稀釋度接種一個稀釋度接種3 3管，置管，置36361 1恒溫恒溫箱內(nèi)，培育箱內(nèi)，培育24242 2h h，如一切乳糖膽鹽，如一切乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，那么可報告為大腸菌群發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，那么可報告為大腸菌群陰性，如有產(chǎn)生者，那么按以下程續(xù)進展。陰性，如有產(chǎn)生者，那么按以下程續(xù)進展。乳糖膽鹽發(fā)酵管乳糖膽鹽發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣景象產(chǎn)酸產(chǎn)氣景象大腸菌群陽性反響大腸菌群陽性反響3.3.分別培育分別培育將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍瓊脂將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍瓊脂EMBEMB平板上，置平板上，置36361 1恒溫箱內(nèi)，恒溫箱內(nèi)，培育培育18h2

7、4h18h24h，然后取出，察看菌落形狀并，然后取出，察看菌落形狀并作革蘭氏染色鏡檢和復(fù)發(fā)酵實驗證明實作革蘭氏染色鏡檢和復(fù)發(fā)酵實驗證明實驗。驗。大腸菌群可疑菌落的特點大腸菌群可疑菌落的特點 紫黑色、有金屬光澤；紫黑色、有金屬光澤； 紫黑色、不帶或略帶光澤；紫黑色、不帶或略帶光澤； 淡紫黑色、中心較深的菌落。淡紫黑色、中心較深的菌落。4.4.證明實驗證明實驗?zāi)康脑谟谧C明從乳糖初酵管實驗呈陽性反響的目的在于證明從乳糖初酵管實驗呈陽性反響的試管內(nèi)分別到的革蘭氏陰性無芽胞桿菌，確試管內(nèi)分別到的革蘭氏陰性無芽胞桿菌，確能發(fā)酵乳糖產(chǎn)生氣體。能發(fā)酵乳糖產(chǎn)生氣體。在上述的平板上，挑取可疑大腸菌群在上述的平板上

8、，挑取可疑大腸菌群1212個進個進展革蘭氏染色，鏡檢為革蘭氏陰性無芽孢桿展革蘭氏染色，鏡檢為革蘭氏陰性無芽孢桿菌時，挑取該菌落的另一部分接種乳糖發(fā)酵菌時，挑取該菌落的另一部分接種乳糖發(fā)酵管，置管，置36361 1 恒溫箱內(nèi)培育恒溫箱內(nèi)培育24242 2h h，察看產(chǎn)氣情況。，察看產(chǎn)氣情況。凡乳糖發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，證明有大腸菌群存在，凡乳糖發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，證明有大腸菌群存在，即報告為大腸菌群陽性；否那么報告為陰性。即報告為大腸菌群陽性；否那么報告為陰性。1.1.詳細記錄實驗景象，繪制實驗結(jié)果表詳細記錄實驗景象，繪制實驗結(jié)果表2.2.報告報告 根據(jù)證明大腸桿菌的陽性管數(shù)，查根據(jù)證明大腸桿菌的陽性管數(shù)

9、，查MPNMPN檢檢索表見教材表索表見教材表7 73 3，報告每，報告每100g(ml)100g(ml)樣品大腸菌群的最能夠數(shù)，即樣品大腸菌群的最能夠數(shù)，即MPNMPN值。值。1.1.程序程序 大腸菌群的國標檢驗法采用三步法：乳大腸菌群的國標檢驗法采用三步法：乳糖膽鹽發(fā)酵實驗糖膽鹽發(fā)酵實驗分別培育分別培育證明實驗證明實驗( (乳乳糖發(fā)酵實驗糖發(fā)酵實驗) )。初發(fā)酵管陽性，經(jīng)過后兩步。初發(fā)酵管陽性，經(jīng)過后兩步能夠為陰性。假設(shè)只做一步，能夠會產(chǎn)生能夠為陰性。假設(shè)只做一步，能夠會產(chǎn)生較大誤差。較大誤差。2.2.挑取菌落挑取菌落 挑選菌落進展證明實驗時，在熟習(xí)菌落挑選菌落進展證明實驗時，在熟習(xí)菌落特征

10、的根底上一定要挑取典型菌落，假設(shè)特征的根底上一定要挑取典型菌落，假設(shè)沒有典型菌落要多挑幾個非典型菌落進展沒有典型菌落要多挑幾個非典型菌落進展接種，以免出現(xiàn)假陰性。接種，以免出現(xiàn)假陰性。3.3.產(chǎn)氣量產(chǎn)氣量 對產(chǎn)酸但未看到氣泡的乳糖發(fā)酵，用手對產(chǎn)酸但未看到氣泡的乳糖發(fā)酵，用手輕打動試管，如有氣泡沿管壁上浮，應(yīng)思輕打動試管，如有氣泡沿管壁上浮，應(yīng)思索能夠有氣體產(chǎn)生，應(yīng)作進一步實驗。索能夠有氣體產(chǎn)生，應(yīng)作進一步實驗。4.MPN4.MPN檢索表檢索表 在查閱檢索表時，應(yīng)留意：在查閱檢索表時，應(yīng)留意：1 1 MPN MPN檢索表中只提供了檢索表中只提供了3 3個稀釋度，個稀釋度，即即1 1，0.10.1，0.01ml0.01mlg g；假設(shè)改用；假設(shè)改用1010，1 1，0.1 ml0.1 mlg g時，那么表內(nèi)數(shù)字相應(yīng)降低或時，那么表內(nèi)數(shù)字相應(yīng)降低或者添加者添加1010倍。其他類推。倍。其他類推。4.MPN檢索表2 MPN檢索表第一欄陽性管數(shù)下面列出的ml g是指原樣品包括液體和固體的量，并非稀釋后的量，對固體樣品更應(yīng)留意。假設(shè)固體樣品1g經(jīng)10倍稀釋后，雖參與1