M蛋白的鑒定及實驗分析.doc

1、M蛋白的鑒定及實驗分析【關(guān)鍵詞】 M 蛋白；免疫球蛋白；分析Identify and Experimental Analysis of M ProteinKey words:M protein; Immune globin; AnalysisM 蛋白 ( 骨髓瘤蛋白 ) 細(xì)胞大量增殖產(chǎn)生的具有相同氨基酸順序和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的免疫球蛋白 (Ig) 分子或其片段 , 臨床上常見于多發(fā)性骨髓瘤 (MM)、原發(fā)性巨球蛋白血癥、 重鏈病 、原發(fā)性淀粉樣變性、 意義未明的單克隆丙種球蛋白血癥等淋巴細(xì)胞或漿細(xì)胞克隆增殖性疾病 1。M蛋白是單克隆免疫球蛋白的縮寫 , 也稱副蛋白、骨髓瘤蛋白、M 成份。對此病只有采

2、取較好實驗室方式與正確實驗分析相結(jié)合，才能為臨床提供靠得住依據(jù)。1 血清區(qū)帶電泳技術(shù)是臨床實驗室對蛋白質(zhì)進行的一種剖析技術(shù)。它能夠?qū)ρ寤蚱渌w液中異樣蛋白質(zhì)進行挑選。它是以區(qū)帶電泳為基礎(chǔ)在一種適合的支持介質(zhì)瓊脂糖上進行的電泳。 血清蛋白質(zhì)在給定的pH條件下要緊依照其所帶電荷數(shù)將其分離成各類片段。正常人血清的區(qū)帶電泳結(jié)果和掃描圖像從左至右的 5 個區(qū)帶依次為白蛋白及一、二、和球蛋白區(qū)。有時在慢電泳時球蛋白可分為 1 球蛋白和 2 球蛋白。白蛋白區(qū)的成份包括白蛋白、 前白蛋白和部份 1 脂蛋白 ; 1 區(qū)包括 1 抗胰酶蛋白、 1 脂蛋白、 c 球蛋白 ; 2 區(qū)包括觸珠蛋白、銅藍(lán)蛋白、2 巨球

3、蛋白等 ; 1 區(qū)包括轉(zhuǎn)鐵蛋白、 補體 3、Ig 、血結(jié)素等; 2 區(qū)包括 3、 Ig ; 區(qū)包括 Ig 、 Ig 、 CRP等。多克隆免疫球蛋白增殖性疾病各類 Ig 均增加 , 相應(yīng)的其他區(qū)帶會減少 , 肝炎和系統(tǒng)性紅斑狼瘡等 , 由于和區(qū)大量增殖隙消失 , 成為 橋 , 亦稱 聯(lián) , 掃描時消失峰。多見于肝硬化、慢性, 致使兩區(qū)之間的間, 顯現(xiàn)一高而寬的免疫缺點癥時會顯現(xiàn)無峰或低峰。蛋白血癥特點是區(qū)帶窄而濃, 掃描峰高而尖 , 基底部窄 , 在區(qū)高與寬的比例 2, 區(qū)那么 1( 正常時小于此比例 ), 其他區(qū)帶明顯減少。蛋白量少時常被其他蛋白掩蓋可用稀釋血清的方式解決, 在進行血清區(qū)帶電泳

4、時, 有時會顯現(xiàn)假性蛋白條帶 , 現(xiàn)在那么需要進行免疫電泳和免疫固定檢測以資甄別。顯現(xiàn)假性蛋白條帶的情形包括: 當(dāng)血液凝固不完全 , 血清中含有纖維蛋白原；血管內(nèi)溶血時血清內(nèi)血紅蛋白結(jié)合珠蛋白含量增高 ; 缺鐵性貧血時血清轉(zhuǎn)鐵蛋白濃度升高；某些應(yīng)急狀態(tài)下球蛋白濃度增加及先本性高脂蛋白血癥; 雙白蛋白血癥、白蛋白變異、白蛋白結(jié)合青霉素等藥物后電泳行為改變。2 免疫球蛋白檢測正常人產(chǎn)生免疫球蛋白的漿細(xì)胞是多克隆性質(zhì)合成的免疫球蛋白除 5 種不同重鏈外， 還只有和輕鏈，而且 / 比是恒定 2，M 蛋白疾病是骨髓中異樣漿細(xì)胞極度增生所引發(fā)的一種惡性疾病, 初期可無臨床病癥 , 起病緩慢 , 有的病例臨

5、床表現(xiàn)極不典型, 易引發(fā)漏診和誤診。因此血清免疫球蛋白也是M蛋白綜合診斷的標(biāo)準(zhǔn)之一。Ig 定量經(jīng)常使用方式有單向 ( 環(huán)狀 ) 免疫擴散法、速度散射濁度測定法、火箭免疫電泳法。其中以速度散射濁度測定法最為準(zhǔn)確, 且采納自動化方式使操作方便，速度散射比濁法定量檢測Ig 的意義在于確信蛋白所屬 Ig 類別及數(shù)量，速度動態(tài)散射比濁法是抗原抗體結(jié)合反映在每一個單位時刻內(nèi)的速度 , 持續(xù)測定各單位時刻的反映速度即為動態(tài)觀看 , 該法具有速度快、靈敏度高、精準(zhǔn)度高、穩(wěn)固性好的優(yōu)勢。一樣M蛋白所屬 Ig 含量均顯著升高，其他類Ig 那么正常或顯著降低。3 尿本周氏蛋白本 周氏蛋白是單克隆游離免疫球蛋白輕鏈

6、, 它是或輕鏈的合成超過重鏈時輕鏈游離于血清中 , 分子量為 45KD,容易從尿中排出本 周氏蛋白 , 多來源于骨髓漿細(xì)胞的惡性增生 , 是由于合成紊亂 , 在生成和分泌完整的免疫球蛋白分子時的過量輕鏈。 本 周氏蛋白又稱凝溶蛋白 , 具有特殊的熱沉淀性質(zhì) , 在 pH 的條件下 , 加熱至 5060 時顯現(xiàn)沉淀 , 繼續(xù)加熱至 90后又從頭溶解 , 再冷卻時又可顯現(xiàn)沉淀。過去檢測方式中 , 是利用本 周氏蛋白的這種特殊的熱沉淀性質(zhì)檢測尿本 周氏蛋白的。這種方式由于存在特異性和靈敏度差的缺點 , 其結(jié)果也受諸多因素的阻礙 : 例如沉淀轉(zhuǎn)變需要肉眼觀看 , 由于操作進程中人為阻礙因素較多 , 靈

7、敏度較低 , 常致使判定有誤差 ; 尿液混濁、尿液中含有過量的其他蛋白和實驗進程中受溫度轉(zhuǎn)變等可阻礙其結(jié)果。本實驗?zāi)軌蚩闯?, 熱沉淀反映法應(yīng)再也不作為本 周氏蛋白的挑選。同時也不能確信輕鏈的型別。4 免疫固定免疫固定電泳是抗原在載體上電泳后直接用抗血清作用于蛋白,進行抗原抗體反映 , 使抗原在電泳位置上被固定。免疫固定后的區(qū)帶,應(yīng)為單一免疫復(fù)合物沉淀帶 , 依照抗血清的不同 , 可判定未知蛋白為何種成份。在研究蛋白時 , 免疫固定電泳至少要應(yīng)用 6 種抗血清 , 一是抗全血清抗體 , 其他 5 類別離為、 、和的抗血清。 免疫固定電泳不只對分型成心義 , 同時還可對患者進行初期診斷 , 優(yōu)于骨髓細(xì)胞檢查 , 因為骨髓細(xì)胞形態(tài)檢查往往要在患者中晚期多部位多次骨穿 , 并要瘤細(xì)胞 >10%才可診斷 , 而免疫固定電泳可彌補這方面的不足 3。在實際工作中 , 往往需要結(jié)合幾種不同的方式和技術(shù)結(jié)合，能夠使絕大部份的蛋白血癥患者取得明確診斷。值得一提的是 , 要對 M 蛋白陽性的患者做出正確的診斷 , 還應(yīng)將蛋白鑒定的結(jié)果與臨床資料相結(jié)合?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1Robert P,Kathy h,Judyc，et of kappa and Lambalightchaindyrate nepbeloetry J.Chinchem,1986 ，32(6):1141.2陸慧琦，屠小卿