第九章吸光光度法

1、分析化學(xué)教研室吸光光度法(absorption photometry)是基于物質(zhì)對(duì)光的而建立起來(lái)的分析方法1、定義、定義2、范疇、范疇3、特點(diǎn)、特點(diǎn)比色法、紫外-可見吸光光度法和紅外光譜法等d) 應(yīng)用范圍廣c) 準(zhǔn)確度較高b) 儀器設(shè)備簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)單、快速a) 靈敏度高 可見吸光光度法（分光光度法、光度法）主要測(cè)定對(duì)象為金屬離子31% 10 %45 10 % 10 %；2% 5% 1% 2%；一、光的基本性質(zhì)一、光的基本性質(zhì)ehvhc1. 可見光是電磁波的一種，具有波粒二象性2. 波長(zhǎng)與能量成反比；與頻率成正比關(guān)系3. 單色光：是指單一波長(zhǎng)的光，通常意義的單色光是指某一波長(zhǎng)范圍的光4. 復(fù)合光

2、：由不同單色光組成的光346.63 10hj s波譜名稱波譜名稱波長(zhǎng)范圍波長(zhǎng)范圍分析方法分析方法躍遷能級(jí)類型躍遷能級(jí)類型g射線0.0050.17nm中子活化分析等 核能級(jí)x射線0.110nmx射線光譜分析射線光譜分析內(nèi)層電子能級(jí)遠(yuǎn)紫外10200nm真空紫外光譜法近紫外200400nm紫外光譜法紫外光譜法原子及分子價(jià)電子或成鍵電子能級(jí)400750nm比色、可見吸光比色、可見吸光光譜法光譜法(光度法光度法)近紅外0.752.5mm紅外光譜法分子振動(dòng)能級(jí)中紅外2.550mm紅外光譜法紅外光譜法電電 磁磁 波波 譜譜綠500580白光紫400450青藍(lán)480490橙600650青490500紅6507

3、50黃580600藍(lán)450480光的互補(bǔ)色示意圖二、物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收二、物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收（一）物質(zhì)對(duì)光產(chǎn)生選（一）物質(zhì)對(duì)光產(chǎn)生選 擇性吸收的原因擇性吸收的原因 eeee分子內(nèi)能電子位能振動(dòng)能轉(zhuǎn)動(dòng)能s2分子能級(jí)示意圖分子能級(jí)示意圖 eev3v2v1r3r2r1s1s0 ev er（二）物質(zhì)的顏色與（二）物質(zhì)的顏色與 光吸收的關(guān)系光吸收的關(guān)系 物質(zhì)對(duì)可見光的選擇性吸收是不同的物質(zhì)具有不同顏色的原因1（1 1）轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)間的能量差）轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)間的能量差eer r：0.0050.0050.050ev0.050ev，躍遷，躍遷產(chǎn)生吸收光譜位于遠(yuǎn)紅外區(qū)。遠(yuǎn)紅外光譜或分子轉(zhuǎn)動(dòng)光譜；產(chǎn)生吸收光譜位于遠(yuǎn)紅外

4、區(qū)。遠(yuǎn)紅外光譜或分子轉(zhuǎn)動(dòng)光譜；1（2 2）振動(dòng)能級(jí)的能量差）振動(dòng)能級(jí)的能量差e ev v約為：約為：0.050.05evev，躍遷產(chǎn)，躍遷產(chǎn)生的吸收光譜位于紅外區(qū)，紅外光譜或分子振動(dòng)光譜；生的吸收光譜位于紅外區(qū)，紅外光譜或分子振動(dòng)光譜；1（3 3）電子能級(jí)的能量差）電子能級(jí)的能量差eee e較大較大1 120ev20ev。電子躍遷產(chǎn)生。電子躍遷產(chǎn)生的吸收光譜在紫外的吸收光譜在紫外可見光區(qū)，紫外可見光區(qū)，紫外可見光譜或分子的電可見光譜或分子的電子光譜子光譜 討討 論論1 （4 4）吸收光譜的波長(zhǎng)分布是由產(chǎn)生譜帶的躍遷能級(jí)間的）吸收光譜的波長(zhǎng)分布是由產(chǎn)生譜帶的躍遷能級(jí)間的能量差所決定，反映了分子內(nèi)

5、部能級(jí)分布狀況，是物質(zhì)定性能量差所決定，反映了分子內(nèi)部能級(jí)分布狀況，是物質(zhì)定性的依據(jù)。的依據(jù)。1 （5 5）吸收譜帶強(qiáng)度與分子偶極矩變化、躍遷幾率有關(guān)，吸收譜帶強(qiáng)度與分子偶極矩變化、躍遷幾率有關(guān)，也提供分子結(jié)構(gòu)的信息。通常將在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)得的摩也提供分子結(jié)構(gòu)的信息。通常將在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)得的摩爾吸光系數(shù)爾吸光系數(shù)maxmax也作為定性的依據(jù)。也作為定性的依據(jù)。不同物質(zhì)的不同物質(zhì)的maxmax有時(shí)可有時(shí)可能相同，但能相同，但maxmax不一定相同不一定相同；1 （6 6）吸收譜帶強(qiáng)度與該物質(zhì)分子吸收的光子數(shù)成正比，）吸收譜帶強(qiáng)度與該物質(zhì)分子吸收的光子數(shù)成正比，定量分析的依據(jù)。定量分析的依據(jù)

6、。討討 論論（三）吸收曲線（吸收光譜）（三）吸收曲線（吸收光譜）max525nm1. 吸收光譜能準(zhǔn)確地描述物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收的情況2. 最大吸收波長(zhǎng)3. 定性依據(jù)：不同物質(zhì)因分子結(jié)構(gòu)不同而具有不同的特征吸收曲線4. 定量依據(jù)：同波長(zhǎng)下吸光度隨濃度增大而增大5. 一般情況下選擇最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定動(dòng)畫動(dòng)畫 （1 1）同一種物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)光的吸光度不）同一種物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)光的吸光度不同。吸光度最大處對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)稱為同。吸光度最大處對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)稱為最大吸收波長(zhǎng)最大吸收波長(zhǎng)maxmax （2 2）不同濃度的同一種物質(zhì)，其吸收曲）不同濃度的同一種物質(zhì)，其吸收曲線形狀相似線形狀相似maxmax不變。而對(duì)于不同

7、物質(zhì)，它們不變。而對(duì)于不同物質(zhì)，它們的吸收曲線形狀和的吸收曲線形狀和maxmax則不同。則不同。 （3 3）吸收曲線可以提供物質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息，并作為物質(zhì)定性分析的依吸收曲線可以提供物質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息，并作為物質(zhì)定性分析的依據(jù)之一。據(jù)之一。 （4 4）不同濃度的同一種物質(zhì)，在某一定波長(zhǎng)下吸光度不同濃度的同一種物質(zhì)，在某一定波長(zhǎng)下吸光度 a a 有差異，有差異，在在maxmax處吸光度處吸光度a a 的差異最大。此特性可作為物質(zhì)定量分析的依據(jù)。的差異最大。此特性可作為物質(zhì)定量分析的依據(jù)。 （5 5）在在maxmax處吸光度隨濃度變化的幅度最大，所以測(cè)定最靈敏。處吸光度隨濃度變化的幅度最大，所以測(cè)定最靈敏

8、。吸收曲線是定量分析中選擇入射光波長(zhǎng)的重要依據(jù)。吸收曲線是定量分析中選擇入射光波長(zhǎng)的重要依據(jù)。吸收曲線討論：吸收曲線討論：一、朗伯比爾定律一、朗伯比爾定律布格(bouguer)朗伯(lambert)（朗伯定律）比爾(beer)（比爾定律）1ak b2ak cakbc朗伯比爾定律朗伯比爾定律動(dòng)畫動(dòng)畫, adn設(shè)：吸光質(zhì)點(diǎn)的截面積為每層有個(gè)吸光質(zhì)點(diǎn)1()idiidik ids 1k iadnc設(shè)：吸光物質(zhì)的濃度為236.02 10dncsdb2k cdb020tibidik cdbi（一）朗伯比爾定律的推導(dǎo)（一）朗伯比爾定律的推導(dǎo)0itiiididbb2316.02 10dik ascdbi動(dòng)畫動(dòng)

9、畫20lntik cbi02lg0.434tik cbikcb01lglgtiait1lgakbct朗伯比爾定律的物理意義：朗伯比爾定律的物理意義：當(dāng)一束平行光垂直通過(guò)當(dāng)一束平行光垂直通過(guò)某一非散射的吸光物質(zhì)時(shí)，其吸光度（某一非散射的吸光物質(zhì)時(shí)，其吸光度（a）與吸光）與吸光物質(zhì)的濃度（物質(zhì)的濃度（c）及光程長(zhǎng)度（）及光程長(zhǎng)度（b）成正比關(guān)系）成正比關(guān)系 朗伯比爾定律是光的吸收的基本定律，適用于所有的電磁輻射和所有的吸光物質(zhì)0lgtiai0titi朗伯比爾定律成立的前提：朗伯比爾定律成立的前提：1. 入射光為平行單色光且垂直入射吸光物質(zhì)對(duì)光的吸收具有加和性吸光物質(zhì)對(duì)光的吸收具有加和性12naaa

10、a4. 輻射與吸光物質(zhì)間的作用僅限于光的吸收過(guò)程，無(wú)熒光和光化學(xué)現(xiàn)象發(fā)生3. 吸光物質(zhì)間無(wú)相互作用2. 吸光物質(zhì)為均勻非散射體系（二）吸收系數(shù)和桑德爾靈敏度（二）吸收系數(shù)和桑德爾靈敏度1、吸收系數(shù)、吸收系數(shù)（1）吸收系數(shù)aaabc1: : b cmc g l（2）摩爾吸收系數(shù)abc1: : b cmc mol lama常用于化合物組成不明，m 尚不清楚的情況11: a l gcm應(yīng)用更為廣泛11:l molcm 當(dāng)吸光物質(zhì)的濃度為當(dāng)吸光物質(zhì)的濃度為1mol/l,吸收層厚度為吸收層厚度為1cm時(shí)，吸光物質(zhì)對(duì)某波長(zhǎng)光的吸光度時(shí)，吸光物質(zhì)對(duì)某波長(zhǎng)光的吸光度abc 摩爾吸光系數(shù)的大小與入射光的波長(zhǎng)、吸

11、光物質(zhì)的性質(zhì)、溶劑、溫度等因素有關(guān)，實(shí)際上還受溶液的組成、儀器靈敏度的影響摩爾吸光系數(shù)的物理意義摩爾吸光系數(shù)的物理意義a bc2、對(duì)于同一種物質(zhì)，其它條件一定時(shí)，摩爾吸光系數(shù)取決于入射光的波長(zhǎng)。maxmax411max10 l molcm一般情況下的方法較靈敏3115452.2 10 l molcm1、測(cè)試條件一定時(shí)，摩爾吸光系數(shù)的大小取決于物質(zhì)的性質(zhì)，它是物質(zhì)對(duì)某一波長(zhǎng)光吸收的能力的量度abca丁二銅肟鎳丁二銅肟鎳酒石酸鐵酒石酸鐵2、桑德爾、桑德爾sandell系數(shù)（系數(shù)（s） 當(dāng)光度儀器的檢測(cè)極限為a0.001時(shí)，單位截面積光程內(nèi)所能檢測(cè)出的吸光物質(zhì)的最低質(zhì)量，其單位為mgcm-20.00

12、1abc0.001bc3210molcmmolcmlsbcm311061030.00110m310bcmsm3210gcm 對(duì)于比較靈敏的顯色反應(yīng)，桑德爾系數(shù)一般為：0.010.001 mgcm-2例：10-1用鄰二氮菲分光光度法測(cè)鐵。已知溶液種fe2+的濃度為500 mgl-1，液層厚度為2cm，在508nm處測(cè)得的透射比為0.645。計(jì)算吸光系數(shù)、摩爾吸光系數(shù)、桑德爾靈敏度（mfe=55.85g/mol）解：14115005.00 10cg lg lm（）lglg0.6450.190at 21140.1901.90 102 5.00 10aal gcmbc4615.00 1028.95 1

13、055.85cmol l（）41160.1901.06 102 8.95 10al molcmbc32455.8535.27 101.06 10msg cmm（）負(fù)偏離負(fù)偏離 0 1.0 2.0 3.0 4.0 c(mmol/l)a0.800.600.400.200.00axcx（三）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及其應(yīng)用（三）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及其應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)曲線工作曲線工作曲線xxcababc 在實(shí)際操作中，應(yīng)注意調(diào)整在實(shí)際操作中，應(yīng)注意調(diào)整cx的大小，使其的大小，使其對(duì)應(yīng)的對(duì)應(yīng)的ax處于標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍之內(nèi)處于標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍之內(nèi)正偏離正偏離二、引起朗伯比爾定律偏離的因素二、引起朗伯比爾定律

14、偏離的因素（一）物理因素（一）物理因素1、非單色光引起的偏離、非單色光引起的偏離1對(duì)于011111lgiabci1110110bcii2對(duì)于022212lgiabci2120210bcii120102010211120102lglg1010bcbciiiiaiiii總01020102lg10bciiabcii總（）12若 12（1）相差較小1212（2）相差較大1212（3）相差較大122、選擇適當(dāng)?shù)娜肷洳ㄩL(zhǎng)：一般為最大吸收波長(zhǎng)處1、在光度分析中，應(yīng)采用性能較好的單色器以獲得波長(zhǎng)范圍較窄的入射光abcd2、非平行入射光引起的偏離、非平行入射光引起的偏離3、介質(zhì)不均勻引起的偏離、介質(zhì)不均勻引起的

15、偏離（二）化學(xué)因素（二）化學(xué)因素1、溶液濃度過(guò)高引起的偏離、溶液濃度過(guò)高引起的偏離 導(dǎo)致光程長(zhǎng)度增加，實(shí)際吸光度大于理論吸光度，引起正偏離 介質(zhì)不均勻（混濁或膠體）將產(chǎn)生散射現(xiàn)象，使透射比較小，實(shí)測(cè)的吸光度偏高，產(chǎn)生正偏離 濃度過(guò)高，吸光質(zhì)點(diǎn)間的平均距離減小，由于相互作用而使吸光物質(zhì)的電荷分布發(fā)生變化，從而改變物質(zhì)的吸光能力，即改變物質(zhì)的摩爾吸光系數(shù)2、化學(xué)反應(yīng)引起的偏離、化學(xué)反應(yīng)引起的偏離 高濃度的電解質(zhì)溶液對(duì)低濃度的吸光物質(zhì)有時(shí)也會(huì)產(chǎn)生類似影響，應(yīng)盡量避免(1)ab mrbc 要消除解離度不同引起的偏離，就必須控制解離度不變，一般解決方法為：加入過(guò)量的顯色劑并保持溶液中游離顯色劑的濃度恒定

16、。mc1c2c3c4rrrr22272422cr oh ocrohmax350nm1bcm若22722274 2k cr occr ocro2227422274cr ocroacr ocromax375nm22242742272(2)crocr ocroccr o222742cr ocro選擇適當(dāng)波長(zhǎng)使：另外，控制溶液為強(qiáng)酸性，抑制平衡右移，也可以使吸光度于濃度服從朗伯比爾定律1、物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收、物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收吸光光度法的特點(diǎn)；物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收產(chǎn)生的原因；定性、定量分析分析的依據(jù)2、光吸收的基本定律、光吸收的基本定律3、的繪制與應(yīng)用的繪制與應(yīng)用4、偏離朗伯比爾定律的原因、偏離朗

17、伯比爾定律的原因01lglgtiait1lgabct本節(jié)學(xué)習(xí)重點(diǎn)本節(jié)學(xué)習(xí)重點(diǎn)1、物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收、物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收吸光光度法的特點(diǎn)、物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收產(chǎn)生的原因、吸收曲線、定量分析定性分析的依據(jù)2、光吸收的基本定律、光吸收的基本定律3、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與應(yīng)用、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與應(yīng)用4、偏離朗伯比爾定律的原因、偏離朗伯比爾定律的原因01lglgtiait1lgabct特點(diǎn)：設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便、靈敏度高，準(zhǔn)確度差1.1.目視比色法目視比色法觀察方向觀察方向空白空白c1c2c3c42. 2. 光電比色法光電比色法光電比色計(jì)結(jié)構(gòu)示意圖光電比色計(jì)結(jié)構(gòu)示意圖通過(guò)濾光片得一窄范圍的光通過(guò)濾光片得一窄范

18、圍的光(20(2050nm50nm) )一、分光光度計(jì)的基本部件一、分光光度計(jì)的基本部件（一）光源（一）光源 分光光度計(jì)一般由光源、單色器（分光系統(tǒng)）、吸收池、檢測(cè)系統(tǒng)和信號(hào)顯示系統(tǒng)五部分組成 光源應(yīng)能提供足夠發(fā)射強(qiáng)度、穩(wěn)定且波長(zhǎng)連續(xù)變化的復(fù)合光，同時(shí)反射光的強(qiáng)度還應(yīng)不隨波長(zhǎng)的變化而明顯改變氙燈氫燈鎢燈鎢燈：4002500nm氫燈：185375nm氙燈：200800nm動(dòng)畫動(dòng)畫（二）單色器（分光系統(tǒng)）（二）單色器（分光系統(tǒng)）作用作用：從光源發(fā)出的復(fù)合光中分出所需要的單色光組成：組成：入射狹縫、準(zhǔn)直鏡、色散元件（棱鏡或光柵）、聚焦鏡、出射狹縫入射狹縫入射狹縫準(zhǔn)直透鏡準(zhǔn)直透鏡棱鏡棱鏡聚焦透鏡聚焦透

19、鏡 出射狹縫出射狹縫白光白光紅紅紫紫12800 600 500400棱鏡：棱鏡：依據(jù)不同波長(zhǎng)光通過(guò)棱鏡時(shí)折射率不同。 玻璃3603200nm, 石英2004000 nm光柵：光柵：利用光通過(guò)光柵時(shí)發(fā)生衍射和干涉現(xiàn)象而分光 在鍍鋁的玻璃表面刻有數(shù)量很大的等寬度等間距條痕(600、1200、2400/mm ) 特點(diǎn)：特點(diǎn)：波長(zhǎng)范圍寬, 色散均勻,分辨性能好, 使用方便光柵衍射示意圖光柵衍射示意圖出出射射狹狹縫縫光屏光屏透透鏡鏡平面透平面透射光柵射光柵1. 平面透射光柵平面透射光柵2. 反射光柵（廣泛使用）反射光柵（廣泛使用）（三）吸收池（三）吸收池（四）檢測(cè)系統(tǒng)（四）檢測(cè)系統(tǒng)可見光區(qū)：光學(xué)玻璃池；

20、紫外區(qū)：石英池可見光區(qū)：光學(xué)玻璃池；紫外區(qū)：石英池用于盛待測(cè)及參比溶液（0.5、1、2、3cm）利用光電效應(yīng)，將光能轉(zhuǎn)換成電流訊號(hào)硒光電池，光電管，光電倍增管硒光電池，光電管，光電倍增管適用于300-800 nm, 在500-600 nm范圍最靈敏。較長(zhǎng)時(shí)間連續(xù)使用會(huì)產(chǎn)生“疲勞”現(xiàn)象紅敏管（陰極：銀和氧化銫）紅敏管（陰極：銀和氧化銫） 625-1000 nm藍(lán)敏管（陰極：銻銫）藍(lán)敏管（陰極：銻銫） 200-625 nm使用波長(zhǎng)范圍：使用波長(zhǎng)范圍：160-700 nm1個(gè)光子可產(chǎn)生個(gè)光子可產(chǎn)生106107個(gè)個(gè)電子電子（五）信號(hào)顯示系統(tǒng)（五）信號(hào)顯示系統(tǒng) 早期的分光光度計(jì)：指針式系統(tǒng) 如：檢流計(jì)（

21、72型）、微安表（721型） 、電位計(jì)（751型） 現(xiàn)代的分光光度計(jì)：數(shù)字電壓表、函數(shù)記錄儀、示波器及數(shù)字處理臺(tái)等010203040506070809010000.10.20.30.40.50.60.70.81.01.5二、吸光度的檢測(cè)原理二、吸光度的檢測(cè)原理 分光光度計(jì)實(shí)際上測(cè)得的是光電流或電壓，通過(guò)轉(zhuǎn)換器將測(cè)得的電流或電壓轉(zhuǎn)換為對(duì)應(yīng)的吸光度a1.調(diào)節(jié)檢測(cè)器零點(diǎn)，即儀器的機(jī)械零點(diǎn)：a=2.應(yīng)用不含待測(cè)組分的參比溶液調(diào)節(jié)吸光零點(diǎn)：a=03.待測(cè)組分吸光度的測(cè)定：ax測(cè)定步驟：測(cè)定步驟：三、分光光度計(jì)的類型三、分光光度計(jì)的類型根據(jù)波長(zhǎng)分：根據(jù)波長(zhǎng)分：可見分光光度計(jì)、紫外可見分光光度計(jì)、紅外分光光

22、度計(jì)根據(jù)結(jié)構(gòu)分：根據(jù)結(jié)構(gòu)分：?jiǎn)喂馐止夤舛扔?jì)、雙光束分光光度計(jì)、雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、價(jià)格低廉、適用于固定波長(zhǎng)下的定量分析缺定：缺定：由于光源和檢測(cè)系統(tǒng)的不穩(wěn)定會(huì)產(chǎn)生誤差；無(wú)法進(jìn)行吸收光譜的自動(dòng)掃描；不適用于經(jīng)常變更測(cè)量波長(zhǎng)的定性分析單光束單光束單色器單色器吸收池吸收池rs光源光源檢測(cè)器檢測(cè)器光源光源單色器單色器sr檢測(cè)器檢測(cè)器雙光束雙光束優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：參比和試液的測(cè)量幾乎同時(shí)進(jìn)行，補(bǔ)償了因光源和檢測(cè)系統(tǒng)的不穩(wěn)定而造成的影響；具有較高的測(cè)量精密度和準(zhǔn)確度；測(cè)量便捷；自動(dòng)掃描吸收光譜缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：價(jià)格較昂貴雙波長(zhǎng)雙波長(zhǎng)光源光源單色器單色器單色器單色器吸收池吸收池檢測(cè)器檢測(cè)器1212纖

23、維光度計(jì)纖維光度計(jì)一、顯色反應(yīng)及其條件的選擇一、顯色反應(yīng)及其條件的選擇（一）（一）顯色反應(yīng)和顯色劑顯色反應(yīng)和顯色劑顯色反應(yīng)：顯色反應(yīng)：在分光光度分析中，將試樣中被測(cè)組分轉(zhuǎn)變成有色化合物的反應(yīng)顯色劑：顯色劑：與被測(cè)組分反應(yīng)使之生成有色物質(zhì)的試劑顯色反應(yīng)可分為：和氧化還原反應(yīng)1、顯色反應(yīng)顯色反應(yīng)24()mnmno淺粉（紫紅）2()fe淺綠鄰氮二菲亞鐵（橙紅）1. 選擇性要好：選擇性要好：一種顯色劑最好只與一種被測(cè)組分起顯色反應(yīng)，這樣干擾就少?；蛘吒蓴_離子容易被消除、或者顯色劑與被測(cè)組分和干擾離子生成的有色化合物的吸收峰相隔較遠(yuǎn)2. 靈敏度要高：靈敏度要高：靈敏度高的顯色反應(yīng)對(duì)于微量組分的測(cè)定尤為重

24、要。但應(yīng)注意：靈敏度高的顯色反應(yīng)，并不一定選擇性就好；對(duì)于高含量的組分不一定要選用靈敏度高的顯色反應(yīng)3. 對(duì)比度要大：對(duì)比度要大：即如果顯色劑有顏色，則有色化合物與顯色劑的最大吸收波長(zhǎng)的差別要大，一般要求在60nm以上2、顯色劑顯色劑缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：多數(shù)無(wú)機(jī)顯色劑與金屬離子形成的絡(luò)合物的穩(wěn)定性差、靈敏度和選擇性都不高（1）無(wú)機(jī)顯色劑無(wú)機(jī)顯色劑硫氰酸鹽硫氰酸鹽（測(cè)鐵、鉬、鎢、鈮）鉬酸銨鉬酸銨（測(cè)硅、磷、釩）氨水氨水（測(cè)銅、鈷、鎳）過(guò)氧化氫過(guò)氧化氫（測(cè)鈦、釩、鈮）5. 顯色反應(yīng)的條件要易于控制顯色反應(yīng)的條件要易于控制4. 有色化合物的組成要恒定有色化合物的組成要恒定,化學(xué)性質(zhì)要穩(wěn)定化學(xué)性質(zhì)要穩(wěn)定優(yōu)點(diǎn)：

25、優(yōu)點(diǎn)：有機(jī)顯色劑與金屬離子形成穩(wěn)定的、具有特征顏色的鰲合物，靈敏度和選擇性靈敏度和選擇性都較高（2）有機(jī)顯色劑有機(jī)顯色劑提高靈敏度的方法：提高靈敏度的方法：增大有機(jī)顯色分子的共軛體系和在顯色分子中引入取代基nnco生色團(tuán)nh2ohx助色團(tuán)常用的有機(jī)顯色劑：鄰二氮菲、雙硫腙、二甲酚橙、偶氮胂iii、鉻天青s等（二）顯色反應(yīng)條件的選擇（二）顯色反應(yīng)條件的選擇1、顯色劑的用量顯色劑的用量()mrmr被測(cè)離子（顯色劑）（有色化合物）caocaocaophao2ph1ph2、溶液的酸度溶液的酸度（1）對(duì)被測(cè)物質(zhì)存在狀態(tài)的影響（2）對(duì)顯色劑濃度和顏色的影響（3）對(duì)絡(luò)合物組成和顏色的影響mrmr1nnh r

26、hrhrnh3feohso3hcooh4 1:1 ()ph 紫紅色49 1:2 ()ph 棕褐色9 1:3 ()ph 黃色2copadat7 ph 紅色1.0/ hmol l藍(lán)綠色（吡啶偶氮（吡啶偶氮+ +氨基甲苯）氨基甲苯）25100t /mina3、時(shí)間和溫度時(shí)間和溫度1004mno10min30 s硅鉬酸法測(cè)硅 時(shí)間包括和，溫度對(duì)二者均產(chǎn)生影響mrmr4、有機(jī)溶劑和表面活性劑有機(jī)溶劑和表面活性劑 的加入可以提高顯色反應(yīng)的靈敏度，增加有色化合物的穩(wěn)定性。其作用原理一方面是膠束增溶，另一方面是可形成含有表面活性劑的多元絡(luò)合物。 可以降低有色絡(luò)合物的解離度，從而提高顯色反應(yīng)的靈敏度；此外，有機(jī)

27、溶劑還可以影響反應(yīng)速率，絡(luò)合物的顏色、溶解度及組成等 合適的有機(jī)溶解和表面活性劑及其用量均通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定5、共存離子的干擾及消除、共存離子的干擾及消除顯色條件下，共存離子發(fā)生水解、析出沉淀，導(dǎo)致溶液混濁無(wú)法測(cè)定共存離子本身有顏色或與顯色劑反應(yīng)生成有色化合物，并在測(cè)量條件下有吸收，導(dǎo)致結(jié)果偏高knrkmr，amrnrrmax:0mr（） mrmr1. 控制溶液的酸度2. 加入掩蔽劑3. 將二元絡(luò)合體系改為三元絡(luò)合體系；選擇適當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng)和參比溶液來(lái)消除干擾；干擾組分分離2235(,)hclpadabconicr 掩蔽劑的顏色(r)以及它與干擾離子反應(yīng)產(chǎn)物的顏色(nr)不應(yīng)干擾被測(cè)組分(mr)的測(cè)定2

28、336()fscncofefef 332()alfefe 抗壞血酸鉻天氰s二、吸光光度法的測(cè)量誤差及測(cè)量條件的選擇二、吸光光度法的測(cè)量誤差及測(cè)量條件的選擇（一）（一）儀器測(cè)量誤差儀器測(cè)量誤差(0.001 0.01)tc c 0.434lnatbc 0.434lntcb0.434 dtdcbt0.434100%100%100%lnlnrdcdtdtectttt0.005dt ret1086420204060800.70.40.20.1at/%|er| %r0.434lg(0.005)ctecttt 儀器度數(shù)范圍儀器度數(shù)范圍：:15%70%t:0.150.80a儀器最小誤差：儀器最小誤差：10.3

29、68te0.434a ln0dttdtln10t 10.368telg0.434at （二）測(cè)量條件的選擇（二）測(cè)量條件的選擇 1、測(cè)量波長(zhǎng)的選擇測(cè)量波長(zhǎng)的選擇原則：吸收最大、干擾最小原則：吸收最大、干擾最小a釷釷- -偶氮砷偶氮砷iiiiii 515655絡(luò)合物絡(luò)合物試劑試劑a鈷鈷- -亞硝基紅鹽亞硝基紅鹽 415500試試劑劑絡(luò)合物絡(luò)合物b、如果溶液已顯色，則可通過(guò)改變比色皿的厚度來(lái)調(diào)節(jié)吸光度大小2、吸光度范圍的控制吸光度范圍的控制a：0.150.80；t：15%70%a、計(jì)算而且控制試樣的稱出量，含量高時(shí)，少取樣，或稀釋試液；含量低時(shí)，可多取樣，或萃取富集c、選擇適當(dāng)?shù)膮⒈热芤?、參比溶

30、液的選擇參比溶液的選擇 參比溶液用來(lái)調(diào)節(jié)工作零點(diǎn)，以消除由于吸收池和溶液中某些共存物質(zhì)對(duì)光的吸收、反射或散射所造成的誤差rrmra425rmr4250.224250.480.000.22+0.480.70rmr測(cè)定條件下干擾物質(zhì)參比溶液組成1 無(wú)蒸餾水2 r或其它試劑r或其他試劑3 r和其它試劑；nr試樣+ml+r+其它試劑在測(cè)量條件下對(duì)吸光度有影響的物質(zhì)（除了被測(cè)組分mr外）kio3氧化法顯色法測(cè) mn2+ (co2+粉紅)1、做標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)： 蒸餾水參比2、測(cè)樣時(shí)：試液參比（不加顯色劑）鉻天氰s測(cè)al3+(ni2+,cr3+)試樣+(alf63-)+鉻天氰s+其它試劑2、吸光光度法分析條件的

31、選擇、吸光光度法分析條件的選擇a、顯色反應(yīng)條件的選擇：、顯色反應(yīng)條件的選擇：顯色劑的用量、酸度、顯色時(shí)間和溫度、溶劑和表面活性劑1、吸光光度法的儀器基本構(gòu)造、各部分的作用、吸光光度法的儀器基本構(gòu)造、各部分的作用 及測(cè)量原理及測(cè)量原理復(fù)復(fù) 習(xí)習(xí) 與與 回回 顧顧2、吸光光度法分析條件的選擇、吸光光度法分析條件的選擇a、顯色反應(yīng)條件的選擇：、顯色反應(yīng)條件的選擇：顯色劑的用量、酸度、顯色時(shí)間和溫度、溶劑和表面活性劑1、吸光光度法的儀器基本構(gòu)造、各部分的作、吸光光度法的儀器基本構(gòu)造、各部分的作用及測(cè)量原理用及測(cè)量原理一、定量分析一、定量分析（一）（一）單組分的測(cè)定單組分的測(cè)定1、一般方法一般方法 吸光光度法可應(yīng)用于定性分析、和物質(zhì)的某些物理化學(xué)常數(shù)的測(cè)量。 0 1.0 2.0 3.0 4.0 c(mmol/l)a0.800.600.400.200.00axcxmc1c2c3c4rrrrcxr2、示差分光光度法示差分光光度法1.001.300.00scxclgsssatbc lgxxxatbc lglgxssxxsaattbcbc1lglgsxsxsxtaaabcbcb ctt10%5%100%50%xsccc xstttxsaaa0.30 普通法：普通法： cs的的t=10%；cx的的t=5% 示差法：示差法： cs 做參比，調(diào)做參比，