論文-酒精對(duì)小白鼠肝臟的損傷及其機(jī)理研究

1、課外學(xué)術(shù)科技作品競賽論 文作品名稱： 酒精對(duì)小白鼠肝臟的損傷及其機(jī)理研究 摘 要 目的:對(duì)酒精對(duì)小白鼠肝臟的損傷及其可能的影響機(jī)理進(jìn)行研究.方法:用體重為18-22g的小白鼠40只,隨機(jī)分為四組第，1，2，3組分別用10%,30%和50%的酒精灌，每天一次；第4組為對(duì)照組，用0.9%的生理鹽水進(jìn)行灌胃，每天一次持，續(xù)5wk。每周測量和記錄一次各組小白鼠的體重，觀察和記錄小白鼠的精神狀態(tài)， 同時(shí)測量小白鼠的血清ALT、AST的含量。5wk后，處死小白鼠，取每只小白鼠相同部位的肝臟，觀察其形態(tài)。結(jié)果:(1)各組小鼠平均體重均有增加，第1組增加最多，第3組增加最少;(2) 第1，4組小白鼠食欲正常，

2、精神狀態(tài)好，第2，3組小白鼠有醉酒現(xiàn)象;(3)光鏡下實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝臟脂肪沉積，肝細(xì)胞病理損傷及肝組織炎癥反應(yīng)程度加重，纖維化不明顯;(4) ALT，AST水平升高。結(jié)論:酒精可以導(dǎo)致肝細(xì)胞物質(zhì)代謝障礙，使肝細(xì)胞變性，壞死。關(guān)鍵詞:酒精 灌胃 肝細(xì)胞病理損傷 肝細(xì)胞變性1. 實(shí)驗(yàn)材料1.1 藥物與試劑NaH2PO4 .2H2O 24g ，Na2HPO4 .12H2O 240g ，丙酮酸鈉 176mg, 酮戊二酸 240mg，DL丙氨酸8mg，2,4二硝基苯肼160mg，NaOH，純鹽酸，DL門冬氨酸12mg，酒精。1.2儀器分光光度計(jì)，燒杯，100ml容量瓶2個(gè)，1000ml容量瓶2個(gè)水浴鍋，量筒，

3、冰箱。1.3 動(dòng)物40只體重為18-22g的wister小白鼠2. 實(shí)驗(yàn)2.1 取材從南華生命科學(xué)院購買小白鼠40只2.2 酒精灌胃處理將40只體重為18-20g的小白鼠,隨機(jī)分為四組，將四組小白鼠先適應(yīng)性地喂養(yǎng)1wk，隨后將第1，2，3組分別用10%,30%和50%的酒精灌胃, 每天一次；第4組為對(duì)照組，用0.9%的生理鹽水進(jìn)行灌胃，每天一次，持續(xù)5wk。2.3 測體重及記錄精神狀態(tài)每周測量和記錄一次各組小白鼠的體重，觀察和記錄小白鼠的精神狀態(tài)。2.4 賴氏法檢測小鼠血清ALT，AST含量2.4.1 ALT含量測定2.4.1.1試劑配制1）0.1mol/L磷酸緩沖液（PH7.4）稱取NaH2

4、PO4 .2H2O 2.96495g ，Na2HPO4 .12H2O 29.0142g ，溶解，定容到1000ml。2） 20umol/L 丙酮酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液稱取22mg丙酮酸鈉溶解于0.1mol/L磷酸緩沖液（PH7.4）100ml中，現(xiàn)配先用。3）ALT基質(zhì)液稱取酮戊二酸29.2mg，DL丙氨酸1.78mg溶解于30ml 0.1mol/L磷酸緩沖液中（PH7.4），溶解后校正PH至7.4，再用PH7.4的磷酸緩沖液定容至100ml。置冰箱中保存?zhèn)溆茫杀４嬉恢埽?）0.02% 2,4二硝基苯肼溶液稱取20mg 2,4二硝基苯肼先溶解于10ml純鹽酸中，電爐加熱助溶，待全部溶解后，稀釋至100

5、ml，過濾后盛于棕色瓶中，置冰箱中備用。5）1mol/L NaOH溶液稱取4g NaOH溶解于蒸餾瓶后，定容到100ml。6）0.4 mol/L NaOH溶液稱取16g NaOH溶解，定容到1000ml。2.4.1.2 實(shí)驗(yàn)方法1） ALT曲線的制作（1）將測定所用試劑除NaOH溶液外全部置于水浴箱中，預(yù)溫37然后使用，取6支試管按表1進(jìn)行配制。表1 ALT標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 管號(hào) 試劑（ml） 01234520umol/L 丙酮酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液0.000.050.100.150.200.25ALT基質(zhì)液0.500.450.400.350.300.250.1mol/L磷酸緩沖液0.010.010.010

6、.010.010.01混勻，將各管置37水浴中保溫60min2,4二硝基苯肼0.50.50.50.50.50.5混勻，將各管置37水浴中保溫20min0.4 mol/L NaOH溶液555555混勻，將各管置37水浴中保溫10min（2）冷卻后以0為對(duì)照用分光光度計(jì)比色測定吸光值OD520nm。（3）以丙酮酸含量為縱坐標(biāo)，吸光值OD520nm為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2）小鼠肝組織ALT含量的測定（1）將測定所用試劑除NaOH溶液外全部置于水浴箱中，預(yù)溫至然后使用，取2支試管按表2進(jìn)行配制。表2 ALT含量測定 管號(hào)試劑（ml）01樣品0.100.10ALT基質(zhì)液0.50混勻，將各管置37水浴中保

7、溫60minALT基質(zhì)液0.502,4二硝基苯肼0.50.5混勻，將各管置37水浴中保溫20min0.4 mol/L NaOH溶液55混勻，將各管置37水浴中保溫10min（2） 冷卻后以0為對(duì)照用分光光度計(jì)比色測定吸光值OD520nm。 （3）在標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出樣品丙酮酸的生成量。2.4.2 AST含量測定 2.4.2.1試劑配制1）0.1mol/L磷酸緩沖液（PH7.4）稱取NaH2PO4 .2H2O 2.96495g ，Na2HPO4.12H2O 29.0142g ，溶解，定容到100ml。2） 20umol/L 丙酮酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液稱取22mg丙酮酸鈉溶解于0.1mol/L磷酸緩沖液（PH7.

8、4）100ml中，現(xiàn)配先用。3）AST基質(zhì)液稱取酮戊二酸29.2mg，DL門冬氨酸2.66g，置于小燒杯中，加入NaOH溶解，后校正PH至7.4，再用PH7.4的磷酸緩沖液定容至100ml。置冰箱中保存?zhèn)溆茫杀４嬉恢埽?）0.02% 2,4二硝基苯肼溶液稱取20mg2,4二硝基苯肼先溶解于10ml純鹽酸中，電爐加熱助溶，待全部溶解后，稀釋至100ml，過濾后盛于棕色瓶中，置冰箱中備用。5）1mol/L NaOH溶液稱取4g NaOH溶解于蒸餾瓶后，定容到100ml。6）0.4 mol/L NaOH溶液稱取16g NaOH溶解，定容到1000ml。2.4.2.2實(shí)驗(yàn)方法1）ALT曲線的制作（

9、1）將測定所用試劑除NaOH溶液外全部置于水浴箱中，預(yù)溫37然后使用，取6支試管按表3進(jìn)行配制。表3 ALT標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作試劑（ml）01234520umol/L 丙酮酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液0.000.050.100.150.200.25AST基質(zhì)液0.500.450.400.350.300.250.1mol/L磷酸緩沖液0.010.010.010.010.010.01混勻，將各管置37水浴中保溫60min2,4二硝基苯肼0.50.50.50.50.50.5混勻，將各管置37水浴中保溫20min0.4 mol/L NaOH溶液555555混勻，將各管置37水浴中保溫10min（2）冷卻后以0為對(duì)照用分光光

10、度計(jì)比色測定吸光值OD520nm。（3）以丙酮酸含量為縱坐標(biāo)，吸光值OD520nm為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2）樣品AST測定測定方法同AST含量的測定。2.5 結(jié)果 2.5.1 小白鼠的體重變化 體重 (g) 實(shí)驗(yàn)前實(shí)驗(yàn)后第一周第二周第三周第四周第1組19.2519.5720.1421.1622.24第2組19.3719.5219.9620.8321.69第3組19.3419.4319.8820.5721.15第4組19.4219.5220.0520.5621.032.5.2 精神狀態(tài) 小白鼠在適應(yīng)期間都比較緊張,四處躁動(dòng)實(shí)。驗(yàn)開始后，灌酒后的實(shí)驗(yàn)組的小白鼠都表現(xiàn)的非常興奮，四處亂躥第，3組的小

11、白鼠有醉酒現(xiàn)象，而且隨著灌酒時(shí)間的增長小，鼠的醉酒時(shí)間越來越長。2.5.3 小白鼠的ALT和AST的含量 ALT的含量 ALT含量 (u/L)實(shí)驗(yàn)前實(shí)驗(yàn)后第一周第二周第三周第四周第1組52.2057.4558.3759.0859.96第2組50.2356.8758.2659.6260.88第3組52.3562.0465.1367.4269.98第4組54.0053.9654.8855.0054.72 AST的含量 AST含 量 (u/L)實(shí)驗(yàn)前實(shí)驗(yàn)后第一周第二周第三周第四周第1組189.50194.32196.56195.87197.06第2組192.27199.58204.36206.962

12、09.71第3組196.46208.04216.00222.62228.27第4組187.96187.50188.07186.99188.372.5.4 肝組織鏡檢 對(duì)照組的肝臟組織正常，三組實(shí)驗(yàn)組的肝臟都出現(xiàn)不同程度的炎癥。其中第3組的炎癥最嚴(yán)重，肝臟明顯的出現(xiàn)脂肪沉積現(xiàn)象，肝細(xì)胞病理性損傷，但是肝臟纖維化不明顯。3論文結(jié)果 長期飲酒對(duì)小白鼠的體重，精神狀態(tài)，血液中ALT,AST的含量和肝臟都會(huì)有一定的影響。特別是灌酒后小白鼠的精神狀態(tài)會(huì)處在一個(gè)興奮的狀態(tài)，并且灌酒時(shí)間越長，這種持續(xù)興奮的狀態(tài)也延續(xù)的越長。隨著灌酒的時(shí)間長短和酒精的濃度不同，肝臟的損傷程度及炎癥程度也不一樣。時(shí)間越長，對(duì)肝臟

13、的損傷越嚴(yán)重。另外，小白鼠血液中的ALT和AST含量也隨灌酒歷史的增長而在不短升高。參考文獻(xiàn)1 丁霞 .酒精性肝損傷動(dòng)物模型研究近況(綜述) ，北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)1998年第05期2 黃娟娟 李兵 曹力波等.酒精對(duì)HVB轉(zhuǎn)基因小鼠肝臟的損傷作用及其機(jī)制，中國藥理學(xué)通報(bào)2010，3：26（3）3723 酗酒者增多酒精性肝病ALD發(fā)病率悄然上升 ， 百姓健康新聞網(wǎng)2010-04-264 厲有名 陳衛(wèi)星 虞朝輝等. 浙江省酒精性肝病流行病學(xué)調(diào)查概況，中華肝臟病雜志 2003 ，11 ：164-1665 魯小蘭 陶明 羅金燕等.飲酒與肝病流行病調(diào)查，中華肝臟病雜志 2002 ，10；467-4686 厲有名 . 中國酒精性肝病研究現(xiàn)狀，現(xiàn)代消化及介入診療2007年04期7 戴水奇,黃順