色譜分析總復(fù)習(xí)

1、一、名詞解釋1capacity fact：容量因子，也稱分配容量或容量比，用k表示。其定義為：一定溫度與壓力下兩相達(dá)平衡后，溶質(zhì)在固定相和流動(dòng)相中分配量（質(zhì)量或摩爾數(shù)）之比. 2分配系數(shù)：K,一定溫度與壓力下兩相達(dá)平衡后，組分在固定相和流動(dòng)相中濃度的比值;3extra-column effect：柱外效應(yīng)，即除柱內(nèi)多種因素產(chǎn)生的色譜峰擴(kuò)張外，其它產(chǎn)生峰擴(kuò)張的因素之和：進(jìn)樣系統(tǒng)，系統(tǒng)連接管，檢測(cè)器及其它柱外因素引起的峰擴(kuò)張。4gradient elution：梯度洗脫，在HPLC分析中，控制流動(dòng)相組成或洗脫強(qiáng)度隨時(shí)間的改變而改變，以使極性差異較大的多個(gè)組分均能分離,同時(shí)譜峰間隔較均勻，分析時(shí)間盡

2、量短。5HPSEC：高效體積排阻色譜法,即以多孔性填料為固定相，依據(jù)樣品組分分子體積大小的差別進(jìn)行分離的液相色譜方法。常用于肽和蛋白質(zhì)的分子量分布測(cè)定及多步分離純化程序中。其填料一般有硅膠基質(zhì)和合成高聚物基質(zhì)以及高交聯(lián)多糖型凝膠三種。6ODS：十八烷基鍵合硅膠，又稱C18. 典型的反相色譜柱，表面鍵和的基團(tuán)為非極性羥基，適于分離弱極性，中等極性，較強(qiáng)極性及可電離的酸堿性有機(jī)物。7基線：在正常操作條件下，僅有流動(dòng)相通過檢測(cè)器系統(tǒng)時(shí)所產(chǎn)生的連續(xù)的響應(yīng)信號(hào)，一般是一條直線; 8峰面積：色譜曲線與基線間所包圍的面積; 9半峰寬：亦稱半寬度,半峰寬度,指色譜峰高一半處的寬度10標(biāo)準(zhǔn)偏差：正態(tài)分布曲線x=

3、1時(shí)（拐點(diǎn)）的峰寬之半。正常峰寬的拐點(diǎn)在峰高的0.607倍處。標(biāo)準(zhǔn)偏差的大小說明組分在流出色譜柱過程中的分散程度。小，分散程度小、峰形瘦、柱效高；反之，大，峰形胖、柱效低。 11死時(shí)間t0:流動(dòng)相流過色譜柱所需時(shí)間(不保留組分流過色譜柱所需時(shí)間) 12調(diào)整保留時(shí)間:tR=tR-t0，指扣除死時(shí)間后的保留時(shí)間。13保留時(shí)間tR進(jìn)樣開始到某個(gè)組分在柱后出現(xiàn)濃度極大值的時(shí)間。 14相對(duì)保留值:(用或表示,也稱分離因子)兩個(gè)組分調(diào)整保留值之比=tR2/tR1=VR2/ VR2; 15分離度: 相鄰兩峰的保留時(shí)間之差與平均峰寬的比值，也叫分辨率，表示相鄰兩峰的分離程度。16色譜柱效：每米柱長(zhǎng)具有的理論塔

4、板數(shù)定義為色譜柱效，它是衡量色譜柱分離效能高低的一種量度。1.在進(jìn)行HPLC分析時(shí)，為防止分析柱污染，應(yīng)采取哪些措施？1）加一個(gè)保護(hù)柱（預(yù)柱），其固定相性質(zhì)應(yīng)與分離柱一樣或相近。2）樣品要盡量?jī)艋?，如沉淀蛋白，去除色素和無機(jī)鹽等。3). 樣品分析結(jié)束后,應(yīng)及時(shí)用適當(dāng)溶劑清洗色譜柱.2.乙醇的沸點(diǎn)為78.3，丁酮的沸點(diǎn)為79.6，在氣相色譜柱上是否一定是乙醇先出峰，丁酮后出峰，為什么？不一定.因?yàn)楸Ａ糁党c樣品組分的沸點(diǎn)有關(guān)外，還與樣品及固定相的極性有關(guān)。乙醇（bp 78）和丁酮（bp 80）二個(gè)組分在非極性柱上，因?yàn)榻M分出峰的順序由蒸汽壓決定，沸點(diǎn)高的保留時(shí)間長(zhǎng)，所以乙醇先出峰，丁酮后出峰；在

5、極性柱上，沸點(diǎn)和分子之間作用力同時(shí)作用，在強(qiáng)極性柱上分子間的作用力其主要作用，按極性大小出峰，乙醇的極性比丁酮大，所以丁酮先出峰，乙醇后出峰。4.電噴霧離子化的原理是什么?離子化過程分哪三步？原理：在噴針針頭與施加電壓的電極之間形成強(qiáng)電場(chǎng)，該電場(chǎng)使液滴帶電，帶電的溶液在電場(chǎng)的作用下向帶相反電荷的電極運(yùn)動(dòng)，并形成帶電的液滴。由于小液滴的分散比表面積增大，在電場(chǎng)中迅速蒸發(fā)，結(jié)果是帶點(diǎn)液滴表面單位面積的場(chǎng)強(qiáng)極高，從而產(chǎn)生液滴的“爆裂”。重復(fù)此過程，最終產(chǎn)生分子離子。ESI離子化可分為一下三個(gè)步驟：1）形成帶電液滴：在ESI高壓電極處施以正的高電壓，小液滴從毛細(xì)管高速噴出而帶有過量的正電荷，從而產(chǎn)生電

6、化學(xué)反應(yīng)，通過溶劑組分氧化而去掉負(fù)離子或通過毛細(xì)管自身的氧化而增加正離子，當(dāng)在ESI高電壓極處施以負(fù)的高壓，小液滴從毛細(xì)管高速噴出而帶有過量的負(fù)電荷；2）溶劑蒸發(fā)和小液滴破裂：隨著溶劑蒸發(fā)，液滴半徑縮小，液滴表面電荷斥力增大，達(dá)到一定半徑時(shí)，克服表面張力而裂解，重復(fù)此過程形成非常小的液滴；3）形成氣相離子：對(duì)于半徑=10nm液滴，電荷的斥力作用導(dǎo)致離子從液滴表面蒸發(fā)而不是液滴的分裂9、HPLC與GC比較，其特點(diǎn)？分析對(duì)象及范圍：GC分析只限于氣體和低沸點(diǎn)的穩(wěn)定化合物，而這些物質(zhì)只占有機(jī)物總數(shù)的20%；HPLC可以分析較高沸點(diǎn)、較高分子量的、穩(wěn)定或不穩(wěn)定化合物，這類物質(zhì)占有機(jī)物總數(shù)的80%。流動(dòng)

7、相的作用：GC采用的流動(dòng)相為有限的幾種“惰性”氣體，只起運(yùn)載作用，與組分之間基本沒有作用；HPLC采用的流動(dòng)相為液體或各種液體的混合，可供選擇的條件自由度較大。它除了起運(yùn)載作用外，還可與組分作用，并與固定相對(duì)組分的作用產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)，即流動(dòng)相對(duì)分離的貢獻(xiàn)很大，可通過流動(dòng)相組成來控制和改進(jìn)分離。操作溫度：GC需高溫；HPLC常常在室溫下進(jìn)行。10、UVD紫外,FLD熒光,RID示差折光,ELSD蒸發(fā)光散射-這些檢測(cè)器哪些是通用型的檢測(cè)器？哪些是選擇性檢測(cè)器？哪些可與梯度洗脫兼容？哪些不兼容？UVD紫外: 由于不是所有化合物都有UV吸收，因此不是通用檢測(cè)器;與梯度洗脫兼容FLD熒光: 許多有機(jī)化合物，特

8、別是芳香族化合物、被一定強(qiáng)度和波長(zhǎng)的紫外光照射激發(fā)后，發(fā)射出較激發(fā)光波長(zhǎng)要長(zhǎng)的熒光。ELSD蒸發(fā)光散射：適合于無紫外吸收、無電活性和不發(fā)熒光的且揮發(fā)性較小的樣品組分的檢測(cè)。 RID示差折光：是一種通用型檢測(cè)器,只要被測(cè)組分與流動(dòng)相的折光率有差別就可使用。與梯度洗脫不兼容,價(jià)格較高。RID，ELSD是通用型檢測(cè)器。UVD,FLD,是選擇性檢測(cè)器。UVD, FLD, ELSD與梯度洗脫兼容。RID與梯度洗脫不兼容。11、氣相色譜分析中樣品的衍生化處理的目的及作用?待試樣品在適當(dāng)條件下與所選試劑作用使其轉(zhuǎn)化成為滿足色譜分析要求的衍生物后再進(jìn)行色譜分析。目的：（1）增加試樣的揮發(fā)性和穩(wěn)定性，從而擴(kuò)大氣

9、相色譜的應(yīng)用范圍（2）改善分離效果，改進(jìn)組分吸咐特性。（3）幫助未知物定性，增加檢測(cè)靈敏度和增加定量可靠性12、請(qǐng)簡(jiǎn)述氣相色譜法分析油脂的脂肪酸組成樣品前處理過程?取約35滴植物油樣品于20ml試管中，加入0.5mol/L的NaOH甲醇溶液2ml，60水浴中加熱至油珠完全溶解（約30min），冷卻后加入25%BF3甲醇溶液2ml，60水浴酯化20min，冷卻后加入2ml正已烷，振搖，加入2ml飽和NaCl溶液振搖，離心取上層有機(jī)相于一只干燥試管中并加入少量無水硫酸鈉以除去微量的水，供分析使用。13、什么樣的反相柱不會(huì)發(fā)生“疏水塌陷”？對(duì)于硅膠基質(zhì)填料上的反相鍵合相-內(nèi)嵌極性基團(tuán)的反相鍵合相，極

10、性基團(tuán)增加了表面水的濃度即改善與水的浸潤(rùn)性；如果硅膠表面未濕潤(rùn)，那么有效的色譜表面積會(huì)減少95%，被分析物的保留時(shí)間會(huì)顯著降低，即“疏水塌陷”。保留時(shí)間與填料表面積及配體（內(nèi)嵌極性基團(tuán)）有關(guān)。注意：幾乎所有的表面積都在孔內(nèi)！14、流動(dòng)相脫氣的目的？有哪幾種脫氣方式？流動(dòng)相脫氣的目的 使色譜泵的輸液準(zhǔn)確：輸液量均勻準(zhǔn)確，并且脈動(dòng)減小；保留時(shí)間及色譜峰面積的重現(xiàn)性提高 提高檢測(cè)的性能： 防止氣泡引起的尖峰；基線穩(wěn)定，信噪比增加；溶劑的紫外吸收本底降低 保護(hù)色譜柱：減少死體積；防止填料的氧化在線脫氣裝置用于脫去溶解在流動(dòng)相中的氣體，流動(dòng)相先經(jīng)過脫氣裝置再輸送到色譜柱。脫氣不好時(shí)有氣泡，導(dǎo)致流動(dòng)相流速

11、不穩(wěn)定，造成基線漂移，噪音增加。除在線脫氣裝置外，目前也有采用離線超聲脫氣、真空脫氣、氦氣脫氣等方式。 五應(yīng)用題1.離子抑制色譜技術(shù)在食品分析中應(yīng)用較廣，請(qǐng)舉出一實(shí)例說明其技術(shù)的原理，并寫出色譜條件和樣品處理方法。紅葡萄酒中酚類化合物樣品預(yù)處理：將25L紅葡萄酒樣品通過聚酰胺柱（25917mmi.d.）,用5Polgamid-6(Serva)裝填，并先用pH2.5的酸性水平衡），以100L蒸餾水淋洗，再用150L30的甲醇（酸化至PH2.5）洗脫，洗脫液真空濃縮至5L左右，并用15甲醇定容至10L。色譜柱：ODS柱（125mm4mmI.D.,），室溫流動(dòng)相：體積比為85:15的水甲醇（用HCl

12、O3調(diào)PH2.5）流 速：1.0ml/min 檢 測(cè)：UV-280nm 樣 品：紅葡萄酒原理: 多酚、有機(jī)酸。pH2-3,酸性條件下，電離受到抑制，保留值增大，就可以得到分離，不在酸性條件下，陰離子狀態(tài)不保留，流出色譜柱，就不能分離。2. 請(qǐng)簡(jiǎn)述檢測(cè)果酒或黃酒中的中性酚和酸性酚的樣品處理方法和色譜條件(選用什么色譜柱和流動(dòng)相及檢測(cè)器?檢測(cè)波長(zhǎng)大致多少nm。 預(yù)處理: (1) 去除大分子,蛋白,用乙醇沉淀(2)中性酚或酸性酚:中性條件下用液液萃取(乙醚,乙酸乙酯萃取) 。酸性條件下,也可用乙醚,乙酸乙酯. 或固相萃取法.色譜條件：C18柱 流動(dòng)相：乙腈:水:三氟乙酸 紫外檢測(cè)器 檢測(cè)波長(zhǎng)270-

13、280nm 稱取一定量的酚類物質(zhì)，溶于少量水，在棕色容量瓶中定容至10 mL，濃度分別為：兒茶素52.0 mg/L，綠原酸40.0 mg/L，咖啡酸44.0 mg/L，表兒茶素44.0 mg/L，香豆酸60.0 mg/L，阿魏酸44.0 mg/L，搖勻，放入冰箱4C避光儲(chǔ)存?zhèn)溆?。配制?biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)，采用逐級(jí)稀釋法配成一系列濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。 取25 mL原料用1 mol/L NaOH溶液調(diào)pH值至7.0，加入25 mL乙酸乙酯，用混合搖床震蕩10 min，然后轉(zhuǎn)移到分液漏斗中分離，水相再用25 mL乙酸乙酯萃取1次，合并酯相為中性酚。水相再用6 mol/L 的HCl溶液調(diào)pH值至2.0，再分別用

14、25 mL乙酸乙酯萃取2次，合并酯相為酸性酚。將中性酚和酸性酚合并后濃縮至干，殘?jiān)苡谒?，并在棕色容量瓶中定容?5 mL，用0.22 m濾膜過濾，濾液于冰箱4儲(chǔ)存待測(cè)。 色譜柱：Eclipse XDB C8 (150 mm4.6 mm id，5 m)，流動(dòng)相：A為甲醇；B為1乙酸水溶液 (V/V)；梯度洗脫程序：溶劑A在40 min 內(nèi)由5上升到 30，然后變?yōu)?00，并維持 5 min，最后再返回到初始狀態(tài)。柱溫：30；流速：1.0 mL/min光電二極管陣列檢測(cè)器；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm；進(jìn)樣量：20 L。3.請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)出測(cè)定某一多糖樣品的分子量分布或單糖組成的色譜分析方法（包括樣品處理方

15、法和色譜條件）。高效液相色譜法測(cè)定果汁的糖類組分含量1）、標(biāo)準(zhǔn)溶液系列配制分別準(zhǔn)確稱取各種糖標(biāo)準(zhǔn)品100mg左右于10ml容量瓶中，用超純水溶解定容搖勻后，即得10mg/左右的標(biāo)準(zhǔn)溶液，再以此逐級(jí)稀釋成8mg/m, 6mg/m, 4mg/m, 2mg/m,1mg/m的標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，均經(jīng)0.45m微孔膜過濾，濾液供進(jìn)樣用。2）、樣品處理準(zhǔn)確量取3ml果汁至10ml容量瓶中用無水乙醇定容至刻度，離心后取上清液在熱水浴條件下用氮?dú)鈱⒁掖即等?，再用水定容，并?.45um有機(jī)相微孔膜過濾，濾液顏色若較深，再用Sep-Pak C18固相萃取小柱處理去除色素等雜質(zhì)，處理后的樣液上機(jī)測(cè)定。3）、上機(jī)測(cè)定色譜

16、柱：Sugarpak1,6.5mmid300mm流動(dòng)相：純水檢測(cè)器靈酸敏度：4柱溫：85流速：0.4ml/min進(jìn)樣體積：10L4.分析多糖或多肽的分子量分布應(yīng)采用何種色譜分離模式?請(qǐng)簡(jiǎn)述該色譜模式的基本原理.高效凝膠過濾色譜（HPGFC）分析基本原理：按分子體積大小洗脫，凝膠色譜柱的選擇主要取決于被分離樣品的性質(zhì)和糖組分分子量大小，以凝膠過濾色譜分析多糖的流動(dòng)相一般為鹽溶液。用多個(gè)不同分子量的標(biāo)準(zhǔn)品作分子校正曲線(分子量對(duì)數(shù)對(duì)保留時(shí)間或保留體積作圖，一般為線性)，其分子量測(cè)定結(jié)果是一相對(duì)值，不是絕對(duì)分子量。 6、計(jì)算題 : 若在一個(gè)色譜圖上,測(cè)得tr=5.37cm,tm=0.52cm,w=1

17、.32cm,假定柱長(zhǎng)為1m,計(jì)算:(1)理論塔板數(shù)和有效理論塔板數(shù).（2）塔板高度及有效塔板高度（3）分配比 （1）265，216（2）3.77mm,4.63mm（3）9.3注：N=5.54( )2=16( )2 根據(jù)色譜柱長(zhǎng)L和理論塔板數(shù)N，可求出每個(gè)塔板高度 H=L/N Neff=16( )2 =5.54 ( )2 TR=TR-TM Heff= k=(tr-tm/)tm7、三聚氰胺的化學(xué)結(jié)構(gòu)如下，請(qǐng)據(jù)此結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和本課程所學(xué)知識(shí)，選擇一種可用于三聚氰胺檢測(cè)的HPLC分離模式，并說明理由。答：從結(jié)構(gòu)式可以看出三聚氰胺是非極性有機(jī)化合物，呈弱堿性，容易結(jié)合H+形成帶正電的陽(yáng)離子，在以水-甲醇或水

18、-乙腈為流動(dòng)相的反相柱（C18）上保留時(shí)間比較短，由于雜質(zhì)的影響還會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的拖尾現(xiàn)象。若在流動(dòng)相中加入庚烷磺酸鈉試劑，則可以與樣品中的陽(yáng)離子形成離子對(duì)，使其成為電中性分子，利于延長(zhǎng)樣品的保留時(shí)間，分離效果會(huì)得到提高。因而可選擇分離模式為反相離子對(duì)色譜對(duì)其進(jìn)行分離。8、對(duì)于單糖和低聚糖的HPLC測(cè)定，有多種柱系統(tǒng)（包括色譜柱和流動(dòng)相）可供選擇，請(qǐng)簡(jiǎn)述其中兩種柱系統(tǒng)的組成，并說明其分離機(jī)制（即分離模式）分離柱流動(dòng)相分離模式氨基鍵合相C18耐堿性柱環(huán)糊精鍵合相石墨化碳柱乙腈水或乙腈甲醇水稀NaOH溶液（Ph11）乙腈-水（0.1%甲酸）215%乙醇，含1mmol/lNaOH正相分配反相色譜正相色譜

19、吸附，反相分配陽(yáng)離子交換柱（Ca2+、Ag+、Pb2+、K+型或或H+型）水或稀酸（pH2）空間排阻，配位交換15、HPLC主要分為哪幾種類型？答：正相色譜、反相色譜、凝膠色譜、離子凝膠色譜、手性色譜、親和色譜按分離機(jī)理可以將HPLC分為五類：分配色譜基于被分離組分在兩相中的分配系數(shù)不同(根據(jù)固定相和流動(dòng)相相對(duì)極性的差別,又可分為正相色譜和反相色譜)；吸附色譜基于被分離組分對(duì)活性的固定相表面吸附力的不同；離子交換色譜利用不同離子與固定相上的相反電荷離子間作用力大小的不同進(jìn)行分離；體積排阻色譜利用固定相孔徑的不同，把被分離的組分按分子大小分開的一種色譜分離方法；親和色譜依據(jù)生物分子與固定相上鍵合

20、的配位體之間存在的特異性親和作用能力的差別，而實(shí)現(xiàn)對(duì)具有生物活性的物質(zhì)進(jìn)行分離16、簡(jiǎn)述正相色譜和反向色譜的特點(diǎn)（包括：固定相和流動(dòng)相的相對(duì)極性，不同極性化合物的出峰順序，流動(dòng)相極性大小與洗脫強(qiáng)度的關(guān)系）。答：正相色譜：固定相極性較強(qiáng)，流動(dòng)相極性較弱；樣品極性越強(qiáng)出峰越晚；流動(dòng)相極性越強(qiáng)，洗脫強(qiáng)度越大反向色譜：固定相極性較弱，流動(dòng)相極性較強(qiáng)；樣品極性越強(qiáng)出峰越早；流動(dòng)相極性越強(qiáng)，洗脫強(qiáng)度越小。17、對(duì)于HPLC,影響分離度的k、N三要素分別與哪些色譜條件有關(guān)?k 與流動(dòng)相組成(主要是溶劑比例、pH等)、固定相的性質(zhì)和用量及柱溫有關(guān)。由流動(dòng)相組成(特別是有機(jī)溶劑種類和pH值等)、固定相的性質(zhì)及柱

21、溫等因素決定。N（或H）由板高方程各項(xiàng)參數(shù)決定，一般隨色譜柱長(zhǎng)、填料粒徑、填充均勻度、流速和溫度等操作條件的變化而變。18請(qǐng)簡(jiǎn)述氣相色譜氣路系統(tǒng)中的“隔膜吹掃氣”和“尾吹氣”的作用。答：隔膜吹掃氣是通過進(jìn)樣器隔墊下面將隔墊(即密封墊)因高溫產(chǎn)生的揮發(fā)物帶去機(jī)外所用的氣體,可以防止對(duì)分析結(jié)果的影響，可以減少峰的拖尾，但流量太大時(shí)，峰面積會(huì)變小。尾吹氣是從色譜柱出口直接進(jìn)入檢測(cè)器的一路氣體，又叫補(bǔ)充氣或輔助氣。其作用是減少FID入口至檢測(cè)器的死體積，縮短氣體的停留時(shí)間，從而消除檢測(cè)器的死體積的柱外效應(yīng)。3.何謂反相離子對(duì)色譜？影響其保留值的因素主要有哪些？離子對(duì)試劑的鏈長(zhǎng)和有機(jī)溶劑的比例如何影響保

22、留值？答：反向離子對(duì)色譜是將與被分析離子帶相反電荷的離子(配對(duì)離子或反離子)加到流動(dòng)相中，與溶質(zhì)離子結(jié)合形成弱極性離子對(duì)，此離子對(duì)在流動(dòng)相中不易離解而迅速轉(zhuǎn)移到鍵合相中，進(jìn)而在固定相和流動(dòng)相間進(jìn)行分配，最終實(shí)現(xiàn)分離的一種反向色譜模式。如三聚氰胺的分離，三聚氰胺是弱堿性有機(jī)物，在溶液中主要以陽(yáng)離子存在，在以水-甲醇或水-乙腈為流動(dòng)相的反相柱（C18）上保留時(shí)間比較短，由于雜質(zhì)的影響還會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的拖尾現(xiàn)象。若在流動(dòng)相中加入庚烷磺酸鈉試劑，則可以與樣品中的陽(yáng)離子形成離子對(duì)，使其成為電中性分子，這樣樣品的保留時(shí)間會(huì)增大，分離效果會(huì)得到提高。影響因素：1)介質(zhì)：反相過程常用的介質(zhì)上以水為主體的緩沖溶液，

23、其中pH值影響最大，PH則更加陰離子的保留增加，陽(yáng)離子則相反。另外，緩沖液中離子類型和濃度也是重要選擇性參數(shù)。 2)對(duì)離子濃度：增加反離子的濃度可增加保留，但這種關(guān)系并非是線性的3)有機(jī)改性劑：以水為主體的流動(dòng)相中通常增加極性有機(jī)溶劑，如甲醇，乙腈等做改進(jìn)劑，有機(jī)溶劑的加入改善了締和分子在兩相中的分配4)溫度：它影響容量因子和離子化平衡的PK值離子對(duì)試劑的鏈長(zhǎng)越短，其穩(wěn)定性就越差。鏈長(zhǎng)不同，形成離子對(duì)的能力不同。有機(jī)溶劑的加入會(huì)影響原有緩沖溶液的PH值，另外對(duì)肽的離子化程度和締和分子在兩相中的分配起改善作用。比例，影響離子對(duì)的強(qiáng)度。5. 理論塔板數(shù)和有效理論塔板數(shù)的計(jì)算公式？?jī)烧叩膮^(qū)別？ 兩者

24、的區(qū)別：由于在色譜柱中存在著死體積（在組分的保留時(shí)間中包括了死時(shí)間），因此，從分配平衡理論計(jì)算出來的理論塔板數(shù)n并不能完全反映柱效，利用扣除死體積（或扣除死時(shí)間）后的調(diào)整保留體積（時(shí)間）計(jì)算的有效理論塔板數(shù)neff能更真實(shí)地反映柱效。6、速率理論方程 ，其中H,A,B,及u各表示什么意思？H塔板高度;A渦流擴(kuò)散項(xiàng)，指固定相填充不均勻引起的擴(kuò)散;B-縱向分子擴(kuò)散項(xiàng)，分子沿色譜柱軸向擴(kuò)散引起的色譜譜帶展寬;C-傳質(zhì)阻力項(xiàng)，指組分在流動(dòng)相和固定相之間傳質(zhì)的阻力，由于溶質(zhì)分子與固定相、流動(dòng)相分子間相互作用，阻礙溶質(zhì)分子快速傳遞實(shí)現(xiàn)分布平衡，導(dǎo)致有限傳質(zhì)速率的分子間作用力稱為傳質(zhì)阻力，固定相傳質(zhì)阻力+流

25、動(dòng)相傳質(zhì)阻力; u流動(dòng)相流動(dòng)的線速度.7、B = 2 r Dm，其中Dm表示什么？在GC還是HPLC中可以忽略B？為什么？Dm組分在流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)。HPLC中可以忽略，縱向分子擴(kuò)散顯著存在于GC中.由于組分在液相中的擴(kuò)散系數(shù)只有氣體中的1/105，因此在液相色譜中B可以忽略。(該擴(kuò)散是由濃度梯度造成的。組分從柱入口加入，其濃度分布的構(gòu)型呈“塞子”狀。隨著流動(dòng)相向前推進(jìn)，由于存在濃度梯度，“塞子”必然自發(fā)地向前和向后擴(kuò)散，造成譜帶展寬)8、在UPLC超高效液相色譜（Ultra Performance LC）中，為什么高流速仍能得到很高的柱效？ 從van Deemter曲線可以看出，u對(duì)縱向擴(kuò)

26、散項(xiàng)（B/u）和傳質(zhì)阻力項(xiàng)(Cu)的影響不一致，H先隨u的增加而降低，達(dá)到最小值后隨著u的增加而增加。由于UPLC系統(tǒng)采用1.7m顆粒，即顆粒度非常小，理論塔板高達(dá)不會(huì)隨著線性流速的增加而明顯增加，柱長(zhǎng)可以比用5m顆粒時(shí)縮短3倍而保持柱效不變，而且使分離在高3倍的流速下進(jìn)行，結(jié)果使分離過程快了多倍而分離度保持不變。9、何為反相離子抑制色譜的分離模式？舉例說明。答：在反相色譜法中，通過調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值，抑制樣品組分的解離，增加它在固定相中的溶解度，以達(dá)到分離有機(jī)弱酸、弱堿的目的，這種技術(shù)稱為離子抑制色譜法。以葡萄酒中酚類物質(zhì)的測(cè)定為例，由于酚類物質(zhì)均有弱酸性，極性較強(qiáng)，在水和甲醇中有較大溶解度

27、。因此，在甲醇/水為流動(dòng)相并且pH=7時(shí)，多數(shù)組份保留時(shí)間很短，無法完全分離。若采用離子抑制色譜法可較好的分離。樣品處理：將25mL紅葡萄酒樣品通過聚酰胺柱（259mm17mmid,用5Polgamid-6(Serva)裝填，并先用pH2.5的酸性水平衡），以100L蒸餾水淋洗，再用150mL30的甲醇（酸化至PH2.5）洗脫，洗脫液真空濃縮至5L左右，并用15甲醇定容至10L。 色譜柱：ODS柱（125mm4mmiD）流動(dòng)相：體積比為85:15的水甲醇（用HClO3調(diào)PH2.5）流速為1L/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm。10.液相色譜分析雞精中的肌苷酸和鳥苷酸含量采用反相高效液相色譜，按分子

28、極性大小，使雞精中各種組分同時(shí)得到分離，利用紫外檢測(cè)器測(cè)定肌苷酸鈉和鳥苷酸鈉組分含量。1).標(biāo)準(zhǔn)溶液系列配制分別準(zhǔn)確稱取肌苷酸鈉和鳥苷酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品20mg左右于100ml容量瓶中，用超純水溶解定容搖勻后，即得0.2mg/左右的標(biāo)準(zhǔn)溶液，再以此逐級(jí)稀釋成0.1mg/m, 0.05mg/m, 0.01mg/m, 0.005mg/m,0.001mg/m的標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，均經(jīng)0.45m微孔膜過濾，濾液供進(jìn)樣用。2).樣品處理準(zhǔn)確稱取200mg左右雞精至10ml容量瓶中用3ml水溶解，然后用無水乙醇定容至刻度，充分搖勻，靜置，過濾后取3ml濾液用N2吹至0.5ml以下，再用水定容至3ml，搖勻后用0.45u

29、m有機(jī)相微孔膜過濾，濾液再用 C18固相萃取小柱處理去除色素等弱極性雜質(zhì)，處理后的樣液上機(jī)測(cè)定。3).色譜條件色譜柱：Diamosil C18, 4.6mmid250mm，5um流動(dòng)相：甲醇：0.05H3PO4溶液 5：95檢測(cè)：254nm，DAD柱溫：30流速：1.0ml/min進(jìn)樣體積：5L4).上機(jī)測(cè)定4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線制作將不同濃度的系列標(biāo)準(zhǔn)品分別上機(jī)進(jìn)樣分析，以峰面積為橫坐標(biāo)（x），濃度為縱坐標(biāo)（y）作線性回歸，得到肌苷酸鈉和鳥苷酸鈉的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程、相關(guān)系數(shù)及線性范圍。4.2樣品測(cè)定將三個(gè)平行樣品溶液分別進(jìn)樣，每個(gè)樣均重復(fù)進(jìn)樣3次取其峰面積平均值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程或單點(diǎn)校正計(jì)算含量。11.

30、請(qǐng)簡(jiǎn)述分析果汁中葡萄糖、果糖及蔗糖的色譜條件與樣品處理方法，并說明樣品處理的主要步驟的目的答：色譜條件：色譜柱：Sugarpak1,6.5mmid300mm 流動(dòng)相：純水 檢測(cè)器靈酸敏度：4 柱溫：85 流速：0.4ml/min 進(jìn)樣體積：10L樣品處理方法：(1)準(zhǔn)確量取3ml果汁至10ml容量瓶中用無水乙醇定容至刻度，目的是提取果汁中的葡萄糖、果糖及蔗糖，沉淀蛋白質(zhì)和大分子糖。(2)離心，取上清液在熱水浴條件下用氮?dú)鈱⒁掖即等?，用水定容至刻度。除去乙醇，以防HPLC分析時(shí)影響糖的分離。(3)用0.45um有機(jī)相微孔膜過濾，濾液顏色若較深，再用Sep-Pak C18固相萃取小柱處理去除色素等

31、雜質(zhì)。目的是除去蛋白質(zhì)和大分子糖沉淀，消除色度對(duì)分析的影響。(4)處理后的樣液上機(jī)測(cè)定12、HPLC測(cè)定茶多酚中兒茶素含量（實(shí)驗(yàn)2）所使用的是什么色譜分離模式？流動(dòng)相中為何要加酸？對(duì)于普通硅膠基質(zhì)鍵合相C18柱，pH最低不能小于多少？離子抑制色譜法，選用Zorbax SBC18色譜柱，以甲醇水三氟醋酸（或醋酸）為流動(dòng)相。在流動(dòng)相中加入酸，目的是改變流動(dòng)相的pH值，抑制溶質(zhì)電離，使溶質(zhì)在色譜過程中以中性分子保留。對(duì)于普通硅膠基質(zhì)鍵合相C18柱，pH最低不能小于2。梯度洗脫是在一個(gè)分析周期內(nèi)程序控制流動(dòng)相的組成，如溶劑的極性、離子強(qiáng)度和pH值等，用于分析組分?jǐn)?shù)目多、性質(zhì)差異較大的復(fù)雜樣品。采用梯度

32、洗脫可以縮短分析時(shí)間，提高分離度，改善峰形，提高檢測(cè)靈敏度，但是常常引起基線漂移和降低重現(xiàn)性。 梯度洗脫有兩種實(shí)現(xiàn)方式：低壓梯度（外梯度）和高壓梯度（內(nèi)梯度）。 兩種溶劑組成的梯度洗脫可按任意程度混合，即有多種洗脫曲線：線性梯度、凹形梯度、凸形梯度和階梯形梯度。線性梯度最常用，尤其適合于在反相柱上進(jìn)行梯度洗脫。 在進(jìn)行梯度洗脫時(shí)，由于多種溶劑混合，而且組成不斷變化，因此帶來一些特殊問題，必須充分重視： 要注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動(dòng)相。有些溶劑在一定比例內(nèi)混溶，超出范圍后就不互溶，使用時(shí)更要引起注意。當(dāng)有機(jī)溶劑和緩沖液混合時(shí)，還可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時(shí)需特別

33、小心。 梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高，以保證良好的重現(xiàn)性。進(jìn)行樣品分析前必須進(jìn)行空白梯度洗脫，以辨認(rèn)溶劑雜質(zhì)峰，因?yàn)槿跞軇┲械碾s質(zhì)富集在色譜柱頭后會(huì)被強(qiáng)溶劑洗脫下來。用于梯度洗脫的溶劑需徹底脫氣，以防止混合時(shí)產(chǎn)生氣泡。 混合溶劑的粘度常隨組成而變化，因而在梯度洗脫時(shí)常出現(xiàn)壓力的變化。例如甲醇和水粘度都較小，當(dāng)二者以相近比例混合時(shí)粘度增大很多，此時(shí)的柱壓大約是甲醇或水為流動(dòng)相時(shí)的兩倍。因此要注意防止梯度洗脫過程中壓力超過輸液泵或色譜柱能承受的最大壓力。 每次梯度洗脫之后必須對(duì)色譜柱進(jìn)行再生處理，使其恢復(fù)到初始狀態(tài)。需讓1030倍柱容積的初始流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱，使固定相與初始流動(dòng)相達(dá)到完全平衡。1

34、. 色譜法按分離原理分類, 可分為吸附色譜，分配色譜，排阻色譜和離子交換色譜。2. 所采用流動(dòng)相的密度與液體接近, 粘度又與氣體接近的色譜方法稱超臨界流體色譜法。3. 1956年范德姆特提出色譜速率理論方程。其方程簡(jiǎn)式表示為HABuCu 4. 分離非極性組分, 可選擇非極性固定液, 組分分子與固定液分子之間的作用力主要為色散力5. 目前常用的色譜柱有填充柱和空心毛細(xì)管柱兩種。6.根據(jù)范氏方程，試簡(jiǎn)要分析要實(shí)現(xiàn)色譜快速分析應(yīng)注意哪些操作條件？ 答:要兼顧到提高柱效和加快分析速度兩個(gè)方面。提高載氣流速可加快分析速度，抑制分子擴(kuò)散 (B/u)，但將使傳質(zhì)阻力增加 ( Cg+ Cs) 為此，可采用降低

35、固定液用量，減少液層厚度 df，同時(shí)應(yīng)用輕質(zhì)載氣提高 Dg來減少氣相傳質(zhì)阻力等措施。因此，結(jié)論是：選用輕質(zhì)載氣，減少固定液用量，提高載氣流速。7.試預(yù)測(cè)下列操作對(duì)色譜峰形的影響, 并簡(jiǎn)要說明原因。 (1) 進(jìn)樣時(shí)間超過 10 s (2) 氣化溫度太低，以致試樣不能瞬間氣化 (3) 加大載氣流速很多 (4) 柱長(zhǎng)增加一倍 答: 1. 譜峰變寬,柱外分子擴(kuò)散加劇。 2. 譜峰變寬，柱外分子擴(kuò)散加劇。 3. 峰形變窄，保留時(shí)間縮短。 4. 峰形變寬,增加0.4倍，保留時(shí)間增加。8.試預(yù)測(cè)下列實(shí)驗(yàn)條件對(duì)色譜峰寬的影響, 并簡(jiǎn)要說明原因. (1) 柱溫增加(2) 相比減小(3) 分配比增加(4) 試樣量

36、減小很多 答: (1) 峰寬減小，因?yàn)榉峙湎禂?shù)減小。 (2) 峰寬增加，傳質(zhì)阻力增加。 (3) 峰寬增加，傳質(zhì)阻力增加。 (4) 峰寬減小，柱外初始帶寬減小。第一章1.由俄國(guó)植物學(xué)家茨維特創(chuàng)立的色譜法, 應(yīng)該是屬于(4)液-固色譜 2.什么叫氣-固色譜法? 氣-固色譜法是流動(dòng)相為氣體, 固定相為固體吸附劑。分離原理是利用組分與固體吸劑的吸附與脫附能力不同進(jìn)行分離。可適用于氣體及低沸點(diǎn)烴類3.什么叫氣-液色譜法? 氣-液色譜法是流動(dòng)相為氣體, 固定相為液體。分離原理是利用組分與固定液的溶解揮發(fā)能力不同進(jìn)行分離?？蛇m用于在固定液中有一定溶解度的試樣。4.試比較氣相色譜法與高效液相色譜法的優(yōu)缺點(diǎn)。H

37、PLC法不受試樣揮發(fā)度和熱穩(wěn)定性的限制, 更適合于分析生物大分子、離子型化合物、熱不穩(wěn)定的天然產(chǎn)物和其它高分子化合物。另外HPLC的流動(dòng)相不僅有使試樣沿柱向前移動(dòng)的作用, 且可與被測(cè)組分分子發(fā)生相互作用, 使選擇條件增加一個(gè)。 但相對(duì)而言, GC法分析速度較快, 方法靈敏度較高、方便且耗資較低。第二章1.色譜圖上的色譜峰流出曲線可說明什么問題？ 解：可說明（1）根據(jù)色譜峰的數(shù)目，可判斷樣品中所含組分的最少個(gè)數(shù)。（2）根據(jù)峰的保留值進(jìn)行定性分析。（3）根據(jù)峰的面積或高度進(jìn)行定量分析。（4）根據(jù)峰的保留值和區(qū)域?qū)挾?，判斷色譜柱的分離效能。（5）根據(jù)兩峰間的距離，可評(píng)價(jià)固定相及流動(dòng)相選擇是否合適。2

38、. 反映色譜柱柱型特性的參數(shù)是：C.相比 3.什么叫死時(shí)間？用什么樣的樣品測(cè)定？ 解： 不被固定相吸附或溶解的組分，從進(jìn)樣開始到柱后出現(xiàn)最大值所需要的時(shí)間。通常對(duì)于熱導(dǎo)池檢測(cè)器用空氣作為測(cè)試樣品，對(duì)于氫火焰離子化檢測(cè)器，常用甲烷（CH4）作為測(cè)試樣4.對(duì)某一組分來說，一定柱長(zhǎng)下，色譜峰的寬或窄主要決定于組分在色譜柱中的B. 擴(kuò)散速度5.指出下列哪些參數(shù)改變會(huì)引起相對(duì)保留值增加？為什么？C.降低柱溫6.色譜法按固定相的固定方式分類, 除柱色譜法以外, 還有紙色譜和薄層色譜。7.某一色譜柱從理論上計(jì)算得到的理論塔板數(shù)n 很大，塔板高度H很小，但實(shí)際上分離效果卻很差，試分析原因。 解：n是通過保留值

39、來計(jì)算的，沒有考慮到死時(shí)間的影響，實(shí)際上tm對(duì)峰的影響很大，特別是K3時(shí)，扣除死時(shí)間算出的neff，有效塔板高度Heff很大，因而實(shí)際分離效能很差。 第三章1.為什么要測(cè)定定量校正因子？ 解：由于組分的峰面積不等于其重量或百分含量，也就是說，在同一類型的檢測(cè)器上，重量或濃度相同的不同種物質(zhì)產(chǎn)生的信號(hào)是不一樣的；在不同類型的檢測(cè)器上，同一種物質(zhì)產(chǎn)生的信號(hào)也是不一樣的，因此，為了使產(chǎn)生的響應(yīng)信號(hào)能定量代表物質(zhì)的含量，就要測(cè)定校正因子。 2.測(cè)苯二甲酸混合物中間苯二甲酸含量，稱取樣品0.3578g,內(nèi)標(biāo)物癸二酸0.1029g，將樣品及內(nèi)標(biāo)物甲酯化后進(jìn)行氣相色譜分析，測(cè)得間苯二甲酸二甲酯的峰面積為23

40、.7單位，癸二酸二甲酯的峰面積為24.5單位，已知這兩種酯的重量校正因子分別為0.77和1.00，求間苯二甲酸的含量 解：查出癸二酸分子量為202，癸二酸二甲酯為230，間苯二甲酸分子量為166，間苯二甲酸甲酯分子量為194。 先計(jì)算間苯二甲酸二甲酯的量（m1）：第四章1.在氣相色譜分析中為了測(cè)定下面組分，宜選用哪種檢測(cè)器？為什么？（1）蔬菜中含氯農(nóng)藥殘留量；（2）測(cè)定有機(jī)溶劑中微量水；（3）痕量苯和二甲苯的異構(gòu)體；（4）碑酒中微量硫化物 解（1）蔬菜中含氯農(nóng)藥殘留量選用電子捕獲檢測(cè)器，因?yàn)楦鶕?jù)檢測(cè)機(jī)理電子捕獲檢測(cè)器對(duì)含有電負(fù)性化合物有高的靈敏度。殘留農(nóng)藥是含有電負(fù)性化合物，選用電子捕獲檢測(cè)器

41、檢測(cè)。（2）有機(jī)溶劑中的微量水選用熱導(dǎo)池檢測(cè)器檢測(cè)，因?yàn)闊釋?dǎo)池檢測(cè)器是通用型檢測(cè)器，只要有導(dǎo)熱能力的組分均可測(cè)定，故可測(cè)定微量水。而氣相色譜其它幾種檢測(cè)器如氫焰、電子捕獲、火焰光度檢測(cè)器根據(jù)檢測(cè)機(jī)理均不能測(cè)定水。（3）痕量苯和二甲苯的異構(gòu)體可用氫火焰離子化檢測(cè)器，因?yàn)闅浠鹧骐x子化檢測(cè)器對(duì)含C、H元素的有機(jī)化物有高的響應(yīng)信號(hào)，特別適合。（4）啤酒中微量硫化物選用火焰光度檢測(cè)器，因?yàn)榛鹧婀舛葯z測(cè)器是只對(duì)硫、磷有響應(yīng)信號(hào)，且靈敏度特高，故為首選。 2.相對(duì)保留值和保留指數(shù)都是表示某組分的相對(duì)保留能力的大小，二者不同的是什么？解：相對(duì)保留值和保留指數(shù)二者不同的是，相對(duì)保留值以任意選定的單個(gè)化合物作為參

42、比標(biāo)準(zhǔn)，而保留指數(shù)則以正構(gòu)烷烴系列作為參比標(biāo)準(zhǔn)，把物質(zhì)的保留行為用兩個(gè)緊靠近它的兩個(gè)正構(gòu)烷烴來標(biāo)定。3.已知苯的沸點(diǎn)為80.1，環(huán)已烷的沸點(diǎn)為80.8，采用非極性固定液能分離開嗎？采用中等極性或更強(qiáng)極性的固定液能分離開嗎？為什么？解：苯和環(huán)已烷的沸點(diǎn)很相近，若采用非極性固定液（SE30，液體石臘）是很難將它們分離的。但苯比環(huán)已烷容易極化，如果用中等極性的鄰苯二甲酸二壬酯固定液（DNP），使苯產(chǎn)生誘導(dǎo)偶極，此時(shí)苯的保留時(shí)間是環(huán)已烷的1.5倍，能將苯與環(huán)已烷很好分離。苯后出峰，若選用強(qiáng)極性的b，b氧二丙腈固定液，則苯的保留時(shí)間是環(huán)已烷的6.3倍，很容易分離。4.對(duì)于永久性氣體的分離為什么常采用氣固

43、色譜？答：盡管氣液色譜應(yīng)用面廣，但是H2、O2、N2、Ar2等永久性氣體在氣液色譜柱上，不能得到分離，由于它們?cè)诠潭ㄒ荷系娜芙舛榷紭O小，使分配系數(shù)幾乎一樣，沒有差別，即固定液對(duì)永久性氣體無選擇性，而固體吸附劑對(duì)永久性氣體有好的吸附能力，使得永久性氣體組分在氣固色譜中有較大的分配系數(shù)，彼此可分離5.推薦兩種分離脂肪酸甲酯的固定相，丁二酸二乙二醇聚酯（DEGS）和丁二酸新戊二醇聚酯（NGPS），對(duì)于分離飽和與不飽和脂肪酸甲酯，哪一種固定液更好呢？ 固定液 x y z u s DEGS 496 746 590 837 835 NPGS 272 469 366 559 472答：對(duì)于飽和與不飽和脂肪酸

44、甲酯的分離，我們必須考慮有高的z值使其對(duì)酯基有好的保留外，還要從不飽和度的分離考慮柱子的選擇，要選擇x值高的固定液，因?yàn)閤值是表示芳烴和烯烴物質(zhì)在固定液上的滯留程度， x值越高，說明烯烴物質(zhì)在該固定液上的滯留時(shí)間長(zhǎng)，從上面兩組數(shù)據(jù)可看出，DEGS的x與z均比NPGS高得多，因而選用DEGS固定液，分離效果更好些。6.試對(duì)下列試樣設(shè)計(jì)氣相色譜分析操作條件：（1）丙酮中微量水的測(cè)定；（2）超純氮中微量氧的測(cè)定；（3）蔬菜中含有機(jī)磷農(nóng)藥的測(cè)定；（4）微量苯、甲苯、二甲苯異構(gòu)體的測(cè)定。答：（1）采用氣固色譜法，高分子多孔微球（GDX）為固定相，氫氣為流動(dòng)相，熱導(dǎo)池檢測(cè)器。（2）采用氣固色譜法，5A分子

45、篩為固定相，氫氣為流動(dòng)相，熱導(dǎo)池檢測(cè)器。（3）采用氣液色譜法，OV210為固定相，氮?dú)鉃榱鲃?dòng)相，火焰光度檢測(cè)器。（4）采用氣液色譜法，鄰苯二甲酸二壬酯有機(jī)皂土為固定相，氮?dú)鉃榱鲃?dòng)相，氫火焰離子化檢測(cè)器。 7.對(duì)色譜固定液有何要求？固定液有哪些分類法？答：1. 選擇性好，對(duì)各組分的分配系數(shù)有較大的差別。 2. 在使用條件下蒸氣壓低，否則固定液流失引起噪聲及柱壽命短、保留值重現(xiàn)性差。 3. 操作溫度下呈液態(tài)，粘度小，凝固點(diǎn)低。 4. 熱穩(wěn)定性和化學(xué)穩(wěn)定性好。在高溫下不分解，不與載體發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。 5. 對(duì)載體具有一定的浸潤(rùn)能力，能形成均勻的液膜。 固定液的分類方法主要有，按固定液的相對(duì)極性、按固定

46、液的特征常數(shù)及按固定液的化學(xué)結(jié)構(gòu)和所含官能團(tuán)等分類方法。第五章1.采用相同固定液的毛細(xì)管柱和填充柱上分離同一樣品，欲達(dá)到相同的分離度，為什么毛細(xì)管柱比填充柱要求更高的理論塔板數(shù)？解：毛細(xì)管柱與填充柱的本質(zhì)差別之一是毛細(xì)管柱的相比遠(yuǎn)高于填充柱的相比，填充柱的相比值b一般是440，而毛細(xì)管柱在501500之間，所以，當(dāng)ris、K一定時(shí)，在一定溫度下，分離相同的物質(zhì)，達(dá)到相同的分離度，毛細(xì)管柱所需的理論塔板數(shù)比填充柱多。 第六章1.高效液相色譜是如何實(shí)現(xiàn)高效、快速、靈敏的？答：氣相色譜理論和技術(shù)上的成就為液相色譜的發(fā)展創(chuàng)造條件，從它的高效、高速和高靈敏度得到啟發(fā)，采用510mm微粒固定相以提高柱效，

47、采用高壓泵加快液體流動(dòng)相的流速；設(shè)計(jì)高靈敏度、死體積小的紫外、熒光等檢測(cè)器，提高檢測(cè)靈敏度，克服經(jīng)典液相色譜的缺點(diǎn)，從而達(dá)到高效、快速、靈敏。2.什么叫離子色譜？解：在低交換容量的分離柱上，分離樣品離子，而在高效換容量的抑制柱上，通過化學(xué)反應(yīng)，把具有高電導(dǎo)的流動(dòng)相轉(zhuǎn)變?yōu)榈碗妼?dǎo)的流動(dòng)相，這樣就可以在電導(dǎo)檢測(cè)器上對(duì)被分離樣品離子進(jìn)行高靈敏度的檢測(cè)。這種采用分離柱、抑制柱和電導(dǎo)相結(jié)合的離子交換色譜稱為離子色譜。3.為了測(cè)定鄰氨基苯酚中微量雜質(zhì)苯胺，現(xiàn)有下列固定相：硅膠、ODS鍵合相，下列流動(dòng)相：水甲醇、異丙醚已烷，應(yīng)先用哪種固定相、流動(dòng)相？為什么？解：鄰氨基苯酚中微量雜質(zhì)苯胺測(cè)定，為了良好分離，應(yīng)讓苯胺先出峰，由于苯胺的極性小于鄰氨基苯酚，因此采用正相色譜法，應(yīng)選硅膠為固定相，異丙醚已烷為流動(dòng)相。4.何謂梯度淋洗，適用于哪些樣品的分析？與程序升溫有什么不同？ 解：梯度淋洗就是在分離過程中，讓流動(dòng)相的組成、極性、pH值等按一定程序連續(xù)變化。使樣品中各組分能在最佳的K下出峰。使保留