電泳圖譜的圖像分析及蛋白質(zhì)消化技術(shù)

1、回顧functional analysisstate 1state 22depmfms/mslc-ms/msdatabase searchdifferential analysis?第四章第四章 電泳圖譜的圖像分析及電泳圖譜的圖像分析及蛋白質(zhì)消化技術(shù)蛋白質(zhì)消化技術(shù) 蛋白質(zhì)表達(dá)譜蛋白質(zhì)表達(dá)譜l使用2d凝膠的比較蛋白質(zhì)組學(xué) 比較蛋白質(zhì)組學(xué)最常用的方法是用兩個(gè)樣品進(jìn)行2d-sds-page，比較蛋白質(zhì)點(diǎn)的圖型。 研究人員已進(jìn)行了大量工作來開發(fā)分析2d凝膠蛋白質(zhì)點(diǎn)圖型分析軟件工具。此外，也開發(fā)出保存這些信息的大批數(shù)據(jù)庫。雙向電泳分析軟件雙向電泳分析軟件limagemaster 2delite （mel

2、anietm）lpdquest 6 0 l英國公司nonlinearn dyanamics ltd的progenesisl德國decodon gmbh的delta 2d等l圖像分析的基礎(chǔ)： 使用文件掃描儀，但最好使用ccd獲得圖型。程序首先評(píng)估凝膠的“特征”，他是指與凝膠本底相比顯現(xiàn)的重要不同?！疤卣鳌毕喈?dāng)于凝膠上的蛋白質(zhì)點(diǎn)?？梢酝ㄟ^光密度（od）、大小和體積（整個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)面積上的od）來鑒定特征。這些鑒定參數(shù)是一塊凝膠中或多塊凝膠之間特征比較的基礎(chǔ)。第一節(jié)第一節(jié) 電泳圖譜的圖像分析電泳圖譜的圖像分析掌握：掌握：蛋白電泳圖像分析系統(tǒng)熟悉：熟悉：使用pdquest軟件進(jìn)行蛋白質(zhì)點(diǎn)的自動(dòng)檢測(cè)，匹配

3、 和分析了解：了解：二維電泳蛋白譜數(shù)據(jù)庫電泳圖譜的圖像分析簡介what can we get from image analysis?雙向凝膠電泳技術(shù)是目前蛋白質(zhì)組研究的主雙向凝膠電泳技術(shù)是目前蛋白質(zhì)組研究的主要技術(shù)之一要技術(shù)之一, , 雙向電泳根據(jù)雙向電泳根據(jù)等電點(diǎn)和分子量等電點(diǎn)和分子量可一次性分離數(shù)千種蛋白質(zhì)，經(jīng)染色后蛋白可一次性分離數(shù)千種蛋白質(zhì)，經(jīng)染色后蛋白質(zhì)再質(zhì)再pagepage上可形成密度不同、分布不均的上可形成密度不同、分布不均的復(fù)雜點(diǎn)圖譜。復(fù)雜點(diǎn)圖譜。如何有效的對(duì)雙向凝膠電泳圖像分析，如何如何有效的對(duì)雙向凝膠電泳圖像分析，如何對(duì)圖譜上的蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)、定量、比較、對(duì)圖譜上的蛋白

4、質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)、定量、比較、分析和歸類，挖掘有價(jià)值的蛋白質(zhì)點(diǎn)的信息分析和歸類，挖掘有價(jià)值的蛋白質(zhì)點(diǎn)的信息是雙向電泳分析軟件所要解決的問題。是雙向電泳分析軟件所要解決的問題。凝膠的圖像處理分析及細(xì)胞蛋白凝膠的圖像處理分析及細(xì)胞蛋白譜的建立譜的建立 典型流程典型流程l凝膠圖像的掃描：凝膠圖像的掃描：l圖像加工：圖像加工：l斑點(diǎn)檢測(cè)和定量：斑點(diǎn)檢測(cè)和定量：l凝膠配比：凝膠配比：l數(shù)據(jù)分析：數(shù)據(jù)分析：l數(shù)據(jù)呈遞（數(shù)據(jù)呈遞（report）l2-de數(shù)據(jù)庫的建立：數(shù)據(jù)庫的建立：pdquest 軟件簡介軟件簡介pdquestpdquest軟件是顯示（軟件是顯示（imagingimaging）、分析）、分析（a

5、nalyzinganalyzing）雙向電泳圖譜數(shù)據(jù)庫查詢的一）雙向電泳圖譜數(shù)據(jù)庫查詢的一個(gè)軟件包個(gè)軟件包硬件：硬件：一定的電腦配置,pentirm 166處理器，64m內(nèi)存，3g硬盤，1024*768分辨率 ，256色，sci接口，windows操作系統(tǒng)軟件：軟件： pdquest雙向凝膠圖像分析軟件，bio-rad laboratory,hercules,capdquest 軟件的使用軟件的使用以以pdquest 2-dpdquest 2-d分析軟件為例將雙向電泳分分析軟件為例將雙向電泳分析的基本實(shí)驗(yàn)過程做一簡單介紹。析的基本實(shí)驗(yàn)過程做一簡單介紹。pdquest 軟件軟件pdquest 2

6、-d分析軟件系統(tǒng)和其他分析軟件系統(tǒng)和其他2-d分析分析軟件軟件系統(tǒng)一樣，包括：系統(tǒng)一樣，包括：一一 圖象采集與加工：圖象采集與加工：二二 斑點(diǎn)檢測(cè)斑點(diǎn)檢測(cè)三三 斑點(diǎn)匹配斑點(diǎn)匹配四四 數(shù)據(jù)分析及輸出數(shù)據(jù)分析及輸出pdquest 軟件的使用http:/ 圖象采集與加工 (editing images)1、掃描：凝膠染色后用掃描儀掃描，透射模式，全彩凝膠染色后用掃描儀掃描，透射模式，全彩rgb,rgb,分辨率為分辨率為400dpi-800dpi400dpi-800dpi，盡量排除氣泡，文件以，盡量排除氣泡，文件以tifftiff格式格式保存。保存。2、圖片加工：l在在pdquest 2-dpdque

7、st 2-d分析軟件中打開以分析軟件中打開以tifftiff格式保存的文件可格式保存的文件可以以。（單擊“打開文件”圖標(biāo)和“file”菜單并選擇“openopen”命令，選擇保存2-d圖象文件的磁盤、路徑和文件名，雙擊文件名或單擊“open”以打開2-d圖象文件，此時(shí)tiff格式保存的文件會(huì)自動(dòng)另外創(chuàng)建一個(gè)為pdquest 2-d分析軟件自定義的文件格式2d scan2d scan。）l單擊工具欄上的單擊工具欄上的control thecontrol the image displayimage display 圖標(biāo)，圖標(biāo)，會(huì)出現(xiàn)一個(gè)對(duì)話框，通過改變此對(duì)話框的會(huì)出現(xiàn)一個(gè)對(duì)話框，通過改變此對(duì)話框

8、的high high 和和lowlow的值的值以改變明亮度。以改變明亮度。l用工具欄的用工具欄的crop可以切割掉凝膠邊緣沒有蛋白可以切割掉凝膠邊緣沒有蛋白質(zhì)點(diǎn)的部分，以減少分析的復(fù)雜性，但要注意對(duì)質(zhì)點(diǎn)的部分，以減少分析的復(fù)雜性，但要注意對(duì)你要分析的多塊凝膠圖像最好是切割成同樣大小。你要分析的多塊凝膠圖像最好是切割成同樣大小。（在操作時(shí)先選擇其中的一個(gè)凝膠圖象并選定要（在操作時(shí)先選擇其中的一個(gè)凝膠圖象并選定要切割的區(qū)域，然后在切割的區(qū)域，然后在imageadvance cropsave imageadvance cropsave crop settingscrop settings下保存下保存

9、cropcrop的設(shè)定條件并輸入保存的的設(shè)定條件并輸入保存的名稱，其他的圖象切割時(shí)在名稱，其他的圖象切割時(shí)在imageadvance imageadvance cropload crop settingscropload crop settings中選定先前保存的名稱即中選定先前保存的名稱即可可 ）圖象采集與加工后就要進(jìn)行斑點(diǎn)檢測(cè)，圖象采集與加工后就要進(jìn)行斑點(diǎn)檢測(cè)，pdquest 2-d分析軟件通過一個(gè)稱之為分析軟件通過一個(gè)稱之為“蛋白質(zhì)斑點(diǎn)檢測(cè)向?qū)Вǖ鞍踪|(zhì)斑點(diǎn)檢測(cè)向?qū)В╯pot identification wizard）”的程序來實(shí)現(xiàn)的。的程序來實(shí)現(xiàn)的。二 、斑點(diǎn)檢測(cè) (spots det

10、ection)l單擊“spot”菜單，選擇“spot identification wizard”程序。l該程序首先需人工設(shè)定檢測(cè)參數(shù)需人工設(shè)定檢測(cè)參數(shù)如最小斑點(diǎn)、最弱斑點(diǎn)、最大斑點(diǎn)和背景值,然后程序進(jìn)行自動(dòng)檢測(cè)并可調(diào)節(jié)檢測(cè)的靈敏度，若檢測(cè)效果不理想，該步驟可反復(fù)進(jìn)行。程序允許人工調(diào)節(jié)脫尾（streaks）、背景、斑點(diǎn)（speckles）和其他一些選項(xiàng)等。l這些參數(shù)設(shè)好后單擊find spot centers,其結(jié)果在凝膠圖象會(huì)顯示檢測(cè)到的斑點(diǎn)會(huì)用“ 字（spot crosshairs）”表示，檢測(cè)的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)應(yīng)盡量與肉眼觀測(cè)的相符。檢測(cè)的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)應(yīng)盡量與肉眼觀測(cè)的相符。l在paramete

11、r set 項(xiàng)輸入保存的名稱，蛋白質(zhì)斑點(diǎn)的參數(shù)可被保存，并能用保存的參數(shù)自動(dòng)檢測(cè)所有2-d凝膠中蛋白質(zhì)斑點(diǎn)，單擊process all gels，會(huì)出現(xiàn)一個(gè)auto-detect spots窗口，其中可以選擇需要進(jìn)行斑點(diǎn)檢測(cè)的凝膠圖象（這些凝膠圖像需事先打開）。l蛋白質(zhì)斑點(diǎn)檢測(cè)完了之后，軟件會(huì)自動(dòng)創(chuàng)建另外兩種格式分別為gel image 和和gel spot。l由于在進(jìn)行斑點(diǎn)檢測(cè)時(shí)會(huì)錯(cuò)誤的識(shí)別一些蛋白質(zhì)斑點(diǎn)，比如將一些污染的非蛋白質(zhì)點(diǎn)識(shí)別為蛋白質(zhì)點(diǎn)、將本來是一個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)識(shí)別為兩個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)或者反之。所以在匹配之前最好進(jìn)行處理，同時(shí)將gel scan 、gel image 和gel spot圖打開

12、，然后單擊edit spot tool，出現(xiàn)一個(gè)對(duì)話框，此對(duì)話框中有增加斑點(diǎn)（make a spot at cursor）, 刪除斑點(diǎn)（remove spot at cursor）,合并斑點(diǎn)（combine spot in box）等圖標(biāo)，可根據(jù)你的目的而選擇其中一個(gè)圖標(biāo)進(jìn)行相應(yīng)的斑點(diǎn)處理。這些處理只能在gel image圖象中處理，但相應(yīng)的在gel spot圖象中會(huì)同時(shí)得到顯示。u蛋白質(zhì)斑點(diǎn)檢測(cè)完了之后，為了比較和分析不同凝膠中蛋白質(zhì)斑點(diǎn)的改變，pdquest 可以建立一個(gè)建立一個(gè)matchset。單擊matchcreat matchset, 出現(xiàn)一個(gè)matchset的對(duì)話框，輸入文件名稱，

13、保存路徑，選擇（select）或上載（load）gel spot 圖像的文件名，然后單擊creat, 出現(xiàn)一對(duì)話框，選擇其中的一個(gè)圖象做為參考圖象（standard member）, 整個(gè)matchset用單個(gè)窗口（signal window）來表示，其中的亞窗口（subwindow）分別用來表示參考圖像（用ref來表示）和成員膠（member gel）圖像。三 、斑點(diǎn)匹配(matching spots)matchset 建成后，接著便是建成后，接著便是設(shè)立標(biāo)志點(diǎn)（landmark）,它的它的作用是對(duì)整個(gè)凝膠上蛋白質(zhì)斑點(diǎn)進(jìn)行排列（作用是對(duì)整個(gè)凝膠上蛋白質(zhì)斑點(diǎn)進(jìn)行排列（align）與定位）與定位

14、（position）以便進(jìn)行匹配（）以便進(jìn)行匹配（match）。）。單擊工具欄中的單擊工具欄中的match tools圖標(biāo)會(huì)出現(xiàn)一個(gè)窗口，其中有圖標(biāo)會(huì)出現(xiàn)一個(gè)窗口，其中有 landmark, unlandmark, match gel, match all gels等斑點(diǎn)匹配的等斑點(diǎn)匹配的工具工具, 在在match菜單中也有這些工具。菜單中也有這些工具。標(biāo)志點(diǎn)應(yīng)選擇分辨良好，且所有成員膠上均出現(xiàn)的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)，標(biāo)志點(diǎn)應(yīng)選擇分辨良好，且所有成員膠上均出現(xiàn)的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)，并盡量避開蛋白質(zhì)斑點(diǎn)聚集的地方，最好在不同的放大倍數(shù)下并盡量避開蛋白質(zhì)斑點(diǎn)聚集的地方，最好在不同的放大倍數(shù)下確定該蛋白質(zhì)斑點(diǎn)為所有成

15、員膠上同一個(gè)蛋白質(zhì)斑點(diǎn)。至少要確定該蛋白質(zhì)斑點(diǎn)為所有成員膠上同一個(gè)蛋白質(zhì)斑點(diǎn)。至少要設(shè)立兩個(gè)標(biāo)志點(diǎn)后便可利用設(shè)立兩個(gè)標(biāo)志點(diǎn)后便可利用pdquest的自動(dòng)匹配功能來完成的自動(dòng)匹配功能來完成不同凝膠上的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)的匹配了。不同凝膠上的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)的匹配了。一般設(shè)立的landmark斑點(diǎn)個(gè)數(shù)為總斑點(diǎn)的10%左右，要用肉眼檢查每一個(gè)應(yīng)該能匹配上的斑點(diǎn)是否匹配上了。u對(duì)錯(cuò)誤匹配的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)或沒有識(shí)別到的匹配可進(jìn)行手工方式編輯。在這里也可以進(jìn)行編輯斑點(diǎn)功能，單擊viewinterchange all images, 這樣所有的成員膠和參考膠有g(shù)el spot 狀態(tài)下變成了gel image, 而在gel i

16、mage 狀態(tài)下可進(jìn)行edit spot tools 以編輯蛋白質(zhì)斑點(diǎn)以編輯蛋白質(zhì)斑點(diǎn)。四 、數(shù)據(jù)分析及輸出（analysis and report）為了分析蛋白質(zhì)斑點(diǎn)之間差異表達(dá)，pdquest提供了多個(gè)分析程序，包括蛋白質(zhì)斑點(diǎn)量量(quantity)分析分析，散點(diǎn)圖工具（satter plot tool） ,量的柱狀圖分析（graph）等在內(nèi)的多種分析程序。量的分析量的分析打開matchset，單擊databaseanalysiscreate analysis set, 然后再單擊參考圖，就會(huì)出現(xiàn)一個(gè)對(duì)話框, 輸入名字（name）, type有多種選項(xiàng),要做量的比較就選quantitati

17、ve。比較（compare）形式有兩種，一種是gel, 可以單個(gè)的膠兩兩互相比較(只能是成員膠和參考膠進(jìn)行比較)，另一種是group，可以將同一樣品的多塊膠做為一組（這在database replicate groupcreate group下可以創(chuàng)建組），然后再組之間兩兩比較。然后再選擇a 和b，分別表示兩塊膠或者是兩組膠。replicate group在select spots which are 中可以選擇increased, increased or decreased 或者是decreased 等，激活選項(xiàng)后可以輸入倍數(shù)關(guān)系, 默認(rèn)的是2 times, 可以輸入其他數(shù)值， 如3 ti

18、mes。參數(shù)設(shè)好后就單擊go, 在參考膠上就會(huì)出現(xiàn)黃色圈標(biāo)記的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)，如果你選擇是increased ba 2 times, 那么這些黃色圈黃色圈標(biāo)記的標(biāo)記的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)即為在量上b大于a 兩倍的蛋白質(zhì)點(diǎn).為了矯正銀染對(duì)蛋白質(zhì)點(diǎn)定量分析的影響，所有點(diǎn)的含量通過單個(gè)點(diǎn)的光密度值比膠上所有點(diǎn)光密度質(zhì)而正?；╪ormalize）, 單擊editnormalize, 出現(xiàn)一對(duì)話框，選擇左上角enable normalize，下面的窗口被激活，歸一化歸一化 normalization散點(diǎn)圖工具散點(diǎn)圖工具 scatter plot單擊reports 下的scatter plot，會(huì)出現(xiàn)散點(diǎn)圖分析的對(duì)話

19、框，可以選擇x, y軸，分別代表一塊膠，markers 下可以選擇倍數(shù)，下面的散點(diǎn)圖即顯示了兩個(gè)2-d膠圖像中蛋白質(zhì)點(diǎn)之間的相關(guān)性，上面會(huì)顯示二者的相關(guān)系數(shù)，在reports scatter plots 下可以將所有的凝膠圖之間的相關(guān)圖都打印出來。量化柱狀圖量化柱狀圖 graphs單擊reportsmore graphspage graphs, 在有邊會(huì)出現(xiàn)一對(duì)話框，顯示所有蛋白質(zhì)點(diǎn)在不同膠上的量化柱狀圖，如果要顯示所要分析的蛋白質(zhì)點(diǎn)的量化柱狀圖，則在對(duì)話框的input下選擇analysis set, 出現(xiàn)一對(duì)話框，然后選擇分析的名稱即可。在reportsquantity graphs下可輸出

20、所有的蛋白質(zhì)點(diǎn)（all match spots）或者是特定分析的蛋白質(zhì)點(diǎn)（specificd analysis set）在不同膠上的量化柱狀圖。應(yīng)用材料：無腔眼金魚胚胎正常眼金魚胚胎差異點(diǎn)：差異點(diǎn)：2d gel databaseslbiobase biobase 角質(zhì)形成細(xì)胞角質(zhì)形成細(xì)胞, ,膀胱癌等膀胱癌等 ( (丹麥丹麥center for genome research) center for genome research) http:/biobase.dk/cgi-bin/celishttp:/biobase.dk/cgi-bin/celisleco2dbase eco2dbase

21、大腸桿菌大腸桿菌 ( (在在ncbincbi庫中庫中) ) /respository/eco2dbase/respository/eco2dbaselheart-2dpage heart-2dpage 人心肌人心肌 ( (德國柏林德國柏林) ) http:/www.chemie.fu-berlin.de/user/pleiss http:/www.chemie.fu-berlin.de/user/pleisslhsc-2dpage hsc-2dpage 人類心臟人類心臟 ( (英國英國harefield, he

22、art science center) harefield, heart science center) http:/www.harefield.nthames.nhs.uk/nhli/protein/index.htmlhttp:/www.harefield.nthames.nhs.uk/nhli/protein/index.htmlllsb lsb 人類人類, ,小鼠和大鼠肝臟等小鼠和大鼠肝臟等 ( (美國美國large scale biology) large scale biology) http:/.2dmaps/patterns.htmlhttp:/.2dmaps/patterns

23、.htmllquestref52 questref52 細(xì)胞細(xì)胞, ,大鼠胚胎大鼠胚胎, ,酵母酵母 ( (美國美國cold spring harbor lab) cold spring harbor lab) //lswiss-2dpage swiss-2dpage 十個(gè)人類圖譜十個(gè)人類圖譜, ,包括包括: : 肝肝, , 漿細(xì)胞漿細(xì)胞, , 紅細(xì)胞紅細(xì)胞, , 血小板血小板, , 以及酵以及酵母母, , 大腸桿菌大腸桿菌 ( (瑞士日內(nèi)瓦瑞士日內(nèi)瓦, university hospital)2-de, univer

24、sity hospital)2-de數(shù)據(jù)庫數(shù)據(jù)庫http:/expasy.hcuge.ch/ch2d/ch2d-top.htmlhttp:/expasy.hcuge.ch/ch2d/ch2d-top.htmllyeast yeast s. cerevisiae, s. pombes. cerevisiae, s. pombe等等 ( (瑞典瑞典goteborg university) goteborg university) http:/yeast-2dpage.gmm.gu.se/ http:/yeast-2dpage.gmm.gu.se/lyeast yeast s. cerevisiae

25、 (s. cerevisiae (美國美國proteome inc.) proteome inc.) http:/ 蛋白質(zhì)消化技術(shù)蛋白質(zhì)消化技術(shù)一、為什么需要消化蛋白質(zhì)？、為什么需要消化蛋白質(zhì)？l在討論分離和消化方法之前，讓我們先考慮復(fù)雜蛋白質(zhì)混合物的問題。ms儀器能夠從相對(duì)復(fù)雜的混合物樣品中獲得肽數(shù)據(jù)。然而，當(dāng)樣品混合物的復(fù)雜程度降低時(shí)，ms能鑒定很多的肽片段。為什么蛋白質(zhì)組學(xué)不簡單地測(cè)定完整蛋白質(zhì)的質(zhì)量？為什么蛋白質(zhì)組學(xué)不簡單地測(cè)定完整蛋白質(zhì)的質(zhì)量？ms儀器較少對(duì)完整蛋白質(zhì)進(jìn)行質(zhì)量測(cè)定的主要的三個(gè)原儀器較少對(duì)完整蛋白質(zhì)進(jìn)行質(zhì)量測(cè)定的主要的三個(gè)原因：因： 盡管ms儀器已經(jīng)相當(dāng)完善，但是儀器所

26、進(jìn)行的測(cè)定仍然會(huì)發(fā)生錯(cuò)誤。蛋白質(zhì)的質(zhì)量越大，絕對(duì)誤差越大 不是所有的蛋白質(zhì)都能進(jìn)行完整蛋白質(zhì)的質(zhì)量測(cè)定。ms對(duì)大分子蛋白質(zhì)和疏水蛋白質(zhì)很難進(jìn)行質(zhì)量測(cè)定 完整蛋白質(zhì)質(zhì)量測(cè)定的靈敏度遠(yuǎn)低于肽質(zhì)量測(cè)定和肽串聯(lián)ms分析的靈敏度。 從從msms分析得到的肽段數(shù)據(jù)可直接分析得到的肽段數(shù)據(jù)可直接與蛋白質(zhì)和核苷酸序列數(shù)據(jù)庫中與蛋白質(zhì)和核苷酸序列數(shù)據(jù)庫中的蛋白質(zhì)序列進(jìn)行比較。通過肽的蛋白質(zhì)序列進(jìn)行比較。通過肽msms數(shù)據(jù)與數(shù)據(jù)庫信息的比較以鑒數(shù)據(jù)與數(shù)據(jù)庫信息的比較以鑒定蛋白質(zhì)。定蛋白質(zhì)。 某些某些蛋白質(zhì)水解酶蛋白質(zhì)水解酶在特定位點(diǎn)將在特定位點(diǎn)將蛋白質(zhì)切割成肽蛋白質(zhì)切割成肽 。這一節(jié)討論可。這一節(jié)討論可切割蛋白質(zhì)

27、產(chǎn)生肽提供切割蛋白質(zhì)產(chǎn)生肽提供msms分析所分析所用的酶及其方法用的酶及其方法 二、消化可以達(dá)到什么目的？二、消化可以達(dá)到什么目的？l理想的消化方法是在某些特定的氨基酸殘基上切割蛋白質(zhì)，產(chǎn)生最合適于ms分析的片段。6-20氨基酸的肽段對(duì)ms分析和數(shù)據(jù)庫比較理想。l一般短于6氨基酸的肽太短，不能在數(shù)據(jù)庫檢索中產(chǎn)生唯一的序列匹配。l另一方面，在串聯(lián)ms分析中，很難從長于20個(gè)氨基酸的肽段上獲得序列信息。l因而蛋白質(zhì)消化的目標(biāo)是盡可能多的獲得合適長度的肽段供ms分析。3. 蛋白酶介紹蛋白酶介紹l胰蛋白酶lglu-c（v8蛋白酶）l溴化氰胰蛋白酶胰蛋白酶l胰蛋白酶是蛋白質(zhì)組學(xué)分析中常用的蛋白酶 。胰蛋白酶在賴氨酸和精氨酸殘基位點(diǎn)切割蛋白質(zhì)。