抗原抗體及其結(jié)合反應(yīng)行業(yè)嚴(yán)選

1、第二章 抗原和抗體及其結(jié)合反應(yīng)醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院免疫教研室醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院免疫教研室1一類特制 教 學(xué) 目 的l掌握：抗原抗體結(jié)合力、抗原抗體結(jié)合反應(yīng)特點(diǎn)l熟悉：影響抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的因素2一類特制第一節(jié) 抗原l一、抗原的特性l免疫原性、免疫反應(yīng)性l特異性l二、用于免疫測(cè)定的抗原分類l天然、合成多肽、基因重組3一類特制第二節(jié) 抗體l一、抗體的特性l特異性、多樣性、免疫原性l二、用于免疫測(cè)定的抗體分類l多克隆、單克隆、基因工程l三、抗體產(chǎn)生的規(guī)律l初次應(yīng)答、再次應(yīng)答4一類特制第三節(jié) 抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的原理抗原抗體反應(yīng):指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)?？乖砦慌c抗體高變區(qū)間的結(jié)構(gòu)互補(bǔ)抗原表位與抗

2、體高變區(qū)的緊密接觸抗原抗體之間的結(jié)合力親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體物質(zhì)基礎(chǔ)5一類特制一、抗原抗體結(jié)合力靜電引力范德華引力氫鍵疏水作用力抗原抗體結(jié)合力示意圖6一類特制.靜電引力（electrostatic forces）抗原和抗體分子帶有相反電荷的氨基和羧基基團(tuán)之間相互吸引的力。又稱為庫(kù)倫引力7一類特制2.范德華引力（vonder waals forces） 抗原和抗體相互接近時(shí)，由于分子的極化作用而出現(xiàn)的引力。 范德華引力靜電引力8一類特制3.氫鍵結(jié)合力供氫體上的氫原子與受氫體原子間的引力供氫體：羧基、氨基和羥基 受氫體：羧基氧、羧基碳和肽鍵9一類特制4.疏水作用力（疏水鍵） 兩個(gè)疏水基團(tuán)在水溶液中

3、相接觸時(shí)，由于對(duì)水分子排斥而趨向聚集力。10一類特制二、抗原抗體的親和力和親合力抗原抗體親和力示意圖11一類特制抗原抗體親合力示意圖抗原抗體親合力示意圖12一類特制三、液相中抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)抗原抗體復(fù)合物 (疏水膠體)可見反應(yīng)電解質(zhì) 抗原 (親水膠體)抗體13一類特制四、固相表面抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)1. 抗原抗體結(jié)合反應(yīng)時(shí)間2. 反應(yīng)體積3. 解離速度4. 固相化抗原或抗體的構(gòu)象14一類特制第四節(jié) 抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的特點(diǎn)特異性 可逆性比例性 階段性15一類特制 親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體示意圖親水膠體疏水膠體可見反應(yīng)16一類特制一、特異性抗原抗體反應(yīng)特異性示意圖17一類特制特異性示意圖特異性示意圖

4、18一類特制交叉反應(yīng)（交叉反應(yīng)（cross reactionscross reactions）抗原抗體交叉反應(yīng)示意圖抗原抗體交叉反應(yīng)示意圖19一類特制二、可逆性可逆性：抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合成復(fù)合物后，在一定條件下又可解離為游離抗原與抗體的特性影響因素： 抗體對(duì)相應(yīng)抗原的親合力 環(huán)境因素對(duì)復(fù)合物的影響20一類特制【ag】+【ab】 【ag-ab】 解離后抗原抗體仍保持原有特性。 一定條件：低ph、高濃度鹽等。ab121一類特制比例性：抗原與抗體發(fā)生可見反應(yīng)需遵循一定的量比關(guān)系最適比： 沉淀物最多時(shí)的抗原抗體的濃度比或量比等價(jià)帶: 抗原與抗體分子比例合適范圍前 帶： 抗體過量后 帶： 抗原過量三、比

5、例性22一類特制 抗原抗體反應(yīng)比例性示意圖抗原抗體反應(yīng)比例性示意圖23一類特制四、階 段 性第一階段：特異性結(jié)合階段第二階段：反應(yīng)可見階段24一類特制第五節(jié) 影響抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的因素抗原抗體本身因素反應(yīng)基質(zhì)因素 實(shí)驗(yàn)環(huán)境因素25一類特制一、抗原抗體本身因素抗原:理化性狀、表位種類和數(shù)目抗體:來源、特異性、親和性、效價(jià)26一類特制來源r型ab：等價(jià)帶寬， 易出現(xiàn)可見反應(yīng)。h型ab：等價(jià)帶窄，易出現(xiàn)前帶或后帶mcab: 不宜用于凝集和沉淀反應(yīng)。濃度：是相對(duì)ag而言，比例要合適，故實(shí)驗(yàn)前需滴定，以求最適ag與ab比例。特異性與親和力：關(guān)鍵因素，選擇特異性與親 和力高的ab。27一類特制二、反應(yīng)基質(zhì)

6、因素非特異性因素，如蛋白、鹽、藥物等28一類特制三、實(shí)驗(yàn)環(huán)境因素電解質(zhì): 0.85%生理鹽水或緩沖液酸堿度: ph 68溫 度: 37最適29一類特制(一）電解質(zhì)作用：中和膠體表面電荷，破壞水化層，使ag-ab聚集。常用：0.85%nacl溶液，緩沖液、ca2+、mg2+等。30一類特制（二）酸堿度 抗原抗體反應(yīng)中一般以ph6-8為宜，有補(bǔ)體參與的反應(yīng)最適ph為7.2-7.4 酸凝集：當(dāng)ph為3左右時(shí)，接近細(xì)菌ag的等電點(diǎn)，可出現(xiàn)非特異性凝集。 31一類特制（三）溫度 最適溫度為37或室溫18-25為宜。若溫度高于56，可導(dǎo)致已結(jié)合了的抗原抗體復(fù)合物解離，甚至分子變性。32一類特制 抗原抗體反

7、應(yīng)類型反應(yīng)類型實(shí)驗(yàn)技術(shù)結(jié)果判斷凝集反應(yīng)直接凝集試驗(yàn)觀察凝集現(xiàn)象間接凝集試驗(yàn)同上抗球蛋白試驗(yàn)同上沉淀反應(yīng)液相沉淀試驗(yàn)觀察沉淀，檢測(cè)濁度免疫電泳技術(shù)觀察掃描沉淀峰、沉淀弧補(bǔ)體參與的反應(yīng)補(bǔ)體溶血試驗(yàn)觀察測(cè)定溶血現(xiàn)象補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)同上33一類特制反應(yīng)類型實(shí)驗(yàn)技術(shù)結(jié)果判斷中和反應(yīng)病毒中和試驗(yàn)檢測(cè)病毒感染性毒素中和試驗(yàn)檢測(cè)外毒素毒性標(biāo)記免疫反應(yīng)熒光免疫技術(shù)檢測(cè)熒光現(xiàn)象放射免疫技術(shù)檢測(cè)放射性強(qiáng)度酶免疫技術(shù)檢測(cè)酶底物顯色發(fā)光免疫技術(shù)檢測(cè)發(fā)光強(qiáng)度金免疫技術(shù)檢測(cè)金顆粒沉淀34一類特制標(biāo)記免疫技術(shù) 用熒光物質(zhì)、放射性核素、酶或化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等標(biāo)記抗原或抗體，進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)后，通過檢測(cè)標(biāo)記物對(duì)抗原或抗體進(jìn)行定性、定位或定量分析35一類特制思 考 題1抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的原理？ 2抗原抗體的結(jié)合力有哪些？3抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的特點(diǎn)