生物制藥課件(十五章)1

1、第十五章第十五章 酶類藥物酶類藥物 第一節(jié)第一節(jié) 酶類藥物的原料來源酶類藥物的原料來源 一、原料選擇一、原料選擇選用原料應注意以下幾點注意以下幾點:（1）不同酶的用料選擇：哪里有，含量高，選哪。）不同酶的用料選擇：哪里有，含量高，選哪。（2）注意不同生長發(fā)育情況及營養(yǎng)狀況）注意不同生長發(fā)育情況及營養(yǎng)狀況, 用微生物用微生物制酶，故需測其活力來決定取酶階段。用動物器官用動物器官提取酶，則與動物年齡及飼養(yǎng)條件有關。（3）從原料來源是否豐富考慮）從原料來源是否豐富考慮；（4）從簡化提純步驟著手）從簡化提純步驟著手 （5）如用動物組織作原料）如用動物組織作原料，則此動物宰殺后應立即宰殺后應立即取材。取

2、材。 從動物或植物中提取酶受到原料的限制限制，隨著酶應用日益廣泛和需求量的增加，工業(yè)生產的重點已逐漸轉向微生物微生物。用微生物發(fā)酵法生產藥用酶藥用酶，不受季節(jié)季節(jié)、氣候氣候和地域地域的限制，生產周期短周期短，產量高產量高，成本低，能大規(guī)模生產。二、微生物酶制劑高產菌株的選育二、微生物酶制劑高產菌株的選育 菌種菌種是工業(yè)發(fā)酵生產酶制劑的重要條件。與增加品增加品種種、縮短生產周期周期、改進發(fā)酵和提煉工藝條件酵和提煉工藝條件等密切相關。優(yōu)良菌種的獲得有三條途徑：優(yōu)良菌種的獲得有三條途徑：是從自然界分離篩選分離篩選：是用物理域化學方法處理、誘變誘變；是用基因重組基因重組與細胞融合技術細胞融合技術。因此

3、微生物的分離分離篩選篩選是一切工作的基礎。三、微生物酶制劑生產的發(fā)酵技術三、微生物酶制劑生產的發(fā)酵技術 首先要合理選擇培養(yǎng)方法培養(yǎng)方法、培養(yǎng)基培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度培養(yǎng)溫度、pH和通氣量通氣量等。還要研究酶的分離提純技術和制備工藝。（）原料）原料 利用微生物生產酶制劑的主要原料為碳源碳源和氮源氮源，此外還有無機鹽無機鹽、生長因素生長因素和產酶促進劑產酶促進劑等。 如果添加少量某種物質就能明顯增加酶的產量時，這類物質通稱為產酶促進劑產酶促進劑。它們大多屬于酶的誘導誘導物物或表面活性劑表面活性劑。1、固體培養(yǎng)法、固體培養(yǎng)法 固體培養(yǎng)法亦稱麩曲培養(yǎng)法麩曲培養(yǎng)法 ，該法是利用麩皮麩皮或米糠或米糠為主要原料，

4、另外視需要添加其它谷糠、豆餅等，加水拌成含水適度含水適度的半固態(tài)物料半固態(tài)物料作為培養(yǎng)基 。2、液體培養(yǎng)法、液體培養(yǎng)法 液體培養(yǎng)法是利用液體培養(yǎng)進行微生物的生長繁殖和產酶。根據通氣（供氧）方法的不同，又分為液液體表面培養(yǎng)體表面培養(yǎng)和液體深層培養(yǎng)液體深層培養(yǎng)兩種。 3、影響酶產生的一些因素、影響酶產生的一些因素 菌種菌種的產酶性能性能是決定決定發(fā)酵效果的重要因素，但是發(fā)酵工藝條件對產酶的影響也是十分明顯的。（1）溫度）溫度 一般發(fā)酵溫度比種子培養(yǎng)時略高些略高些，這樣對產酶有利。（2）pH 可用糖或淀粉調節(jié)，pH低則可用氨來調節(jié)。（3）通氣（供氧）通氣（供氧）臨界氧濃度 。氧必須是溶解于培養(yǎng)基中的

5、氧 。（4）攪拌）攪拌 增加液體湍流速度增加液體湍流速度 ，減少氣泡周圍液膜減少氣泡周圍液膜厚度厚度 。有利于促進細胞的新陳代謝有利于促進細胞的新陳代謝。（5）泡沫和消沫劑）泡沫和消沫劑 由于培養(yǎng)基中蛋白質分子排在氣泡表面形成一層吸附膜，吸附膜，聚集成泡沫層泡沫層之故 。（6）添加誘導劑和抑制劑）添加誘導劑和抑制劑 誘導酶誘導酶的合成，誘導酶是該酶作用底物或者是其類似物類似物。抑制劑促進酶的形成 。加入適量表面活性劑表面活性劑 。第二節(jié)酶類藥物的提取和純化第二節(jié)酶類藥物的提取和純化一、生物材料的預處理一、生物材料的預處理（一）動物材料的預處理（一）動物材料的預處理1、機械處理、機械處理 用絞肉

6、機絞，一般細胞并不破碎 。有的酶必須細胞必須細胞破碎破碎后才能有效地提取，在實驗室常用的是玻璃勻漿玻璃勻漿器和組織搗碎器。器和組織搗碎器。 2、反復凍融、反復凍融 冷到冷到-10左右左右，再緩慢溶解至室溫，如此反復多次。由于細胞中冰晶的形成，及剩下液體中鹽濃度的增高剩下液體中鹽濃度的增高，能使細胞中顆粒及整個細胞破碎，從而使某些酶釋放酶釋放出來出來。3、丙酮粉、丙酮粉 組織經丙酮迅速脫水干燥制成丙酮粉丙酮粉，不僅可減減少酶的變性少酶的變性，同時因細胞結構成份的破碎細胞結構成份的破碎使蛋白質蛋白質與脂質結合與脂質結合的某些化學鍵打開化學鍵打開，促使某些結合酶結合酶釋放到溶液中，常用的方法是將組織

7、糜或勻漿懸浮于0.0lmolL，pH6.5的磷酸緩沖液的磷酸緩沖液中，在0下下一邊攪拌，一邊徐徐倒入10倍體積的-15無水丙酮無水丙酮內，10分鐘后，離心過濾取其沉淀物，反復用冷丙酮洗幾次，真空干燥即得丙酮粉。丙酮粉在低溫下可保存數年丙酮粉在低溫下可保存數年。（二）微生物的預處理（二）微生物的預處理 要是酶是胞外酶胞外酶，則可除去菌體后再直接從發(fā)酵液中吸附提取酶吸附提取酶。但對胞內酶胞內酶則需將菌體細胞破壁，制成無細胞無細胞的懸液后再行提取。 菌體用生理鹽水洗滌除去培養(yǎng)基后，應深凍保存深凍保存。 干燥法干燥法，因為干燥干燥常能導致細胞自溶細胞自溶，增加酶的釋放，從而在后處理中破壁不必太劇烈就能

8、達到預期目的。 1、干燥法：、干燥法： 空氣干燥空氣干燥 2530 真空干燥還真空干燥還 原劑作保護劑原劑作保護劑 冷凍干燥對較敏感的酶冷凍干燥對較敏感的酶宜用此法。 2、機械法：、機械法：常用的方法有研磨法，組織勻漿法，超聲波法，高壓勻漿法等。 3、酶法處理、酶法處理 用得最多的是溶菌酶溶菌酶，如在37，pH8.0下對小球菌進行破壁處理，歷時15分鐘，即可提取核酸酶核酸酶。也有用脫氧核糖核酸酶脫氧核糖核酸酶處理，操作與溶菌酶溶菌酶同。二、酶的提取二、酶的提取1、水溶液法、水溶液法 常用稀鹽溶液或緩沖液提取稀鹽溶液或緩沖液提取。一般在低溫下操作低溫下操作。在酸性條件下穩(wěn)定的酶要在酸性條件下提取

9、。一般來一般來說說，堿性蛋白酶用酸性溶液提取堿性蛋白酶用酸性溶液提取，酸性蛋白酶用堿性酸性蛋白酶用堿性溶液提取。溶液提取。 鹽濃度鹽濃度一般以等滲為好等滲為好，相當于0.15molL NaCl的離子強度是最適宜于酶的提取。的離子強度是最適宜于酶的提取。2、有機溶劑法、有機溶劑法 某些結合酶結合酶如微粒體和線粒體膜的酶微粒體和線粒體膜的酶，由于和脂和脂質牢固結合質牢固結合，為此必須除去結合的脂質，且不能使酶變性，最常用的有機溶劑是丁醇有機溶劑是丁醇。 3、表面活性劑法、表面活性劑法 表面活性劑能與蛋白質結含而分散在溶液中，故表面活性劑能與蛋白質結含而分散在溶液中，故可用于提取結合酶?？捎糜谔崛〗Y

10、合酶。三、酶制劑的工業(yè)提取法三、酶制劑的工業(yè)提取法（一）發(fā)酵液的預處理及過濾（一）發(fā)酵液的預處理及過濾 微生物發(fā)酵液的分離分離，過濾過濾，發(fā)酵液中加絮凝劑絮凝劑或凝固劑或凝固劑 。絮凝劑絮凝劑有聚丙烯酰胺、右旋糖酐和聚谷聚丙烯酰胺、右旋糖酐和聚谷氨酸氨酸 。（二）酶液的脫色（二）酶液的脫色 活性炭、脫色樹脂活性炭、脫色樹脂 。（三）鹽析法（三）鹽析法 用得最多的是（NH4）2SO4，在常溫下不會造成酶在常溫下不會造成酶的失活的失活，若分級沉淀分級沉淀應用得當，雜蛋白雜質也較少。（四）有機溶劑法（四）有機溶劑法 有機溶劑沉淀蛋白質的能力有機溶劑沉淀蛋白質的能力為丙酮異丙醇乙丙酮異丙醇乙醇甲醇醇甲

11、醇 。工業(yè)上通常采用乙醇作為沉淀劑工業(yè)上通常采用乙醇作為沉淀劑。（五）噴霧干燥直接制備粉末酶制劑（五）噴霧干燥直接制備粉末酶制劑 噴霧干燥用于干燥菌體干燥菌體，藥用酶常用冷凍干燥。 四、酶的純化四、酶的純化 評價純化工藝主要看二個指標，一是酶比活酶比活，二二是總活力是總活力回收。 酶在純化過程中的一些技術難點：酶在純化過程中的一些技術難點：（一）雜質的除去（一）雜質的除去 酶提取液中，除所需酶外，還含有大量的雜蛋白雜蛋白、多糖、脂類和核酸多糖、脂類和核酸等 。（1）pH和加熱沉淀法和加熱沉淀法 （2）蛋白質表面變性法）蛋白質表面變性法 利用蛋白質表面變性表面變性性質的差別，也可除去雜蛋白除去雜

12、蛋白，加入氯仿和乙醇進行震蕩氯仿和乙醇進行震蕩，可以除去雜蛋白。（3）選擇性變性法）選擇性變性法 利用蛋白質穩(wěn)定性的不同，除去雜蛋白。甚至可用2.5%三氯乙酸三氯乙酸處理。（4）核酸沉淀劑法）核酸沉淀劑法 用核酸酶核酸酶，將核酸降解成核苷酸，使粘度下降便將核酸降解成核苷酸，使粘度下降便于離心分離于離心分離。 用核酸沉淀劑核酸沉淀劑如三甲基十六烷基溴化銨三甲基十六烷基溴化銨、硫酸鏈硫酸鏈霉素霉素、聚乙烯亞胺、魚精蛋白和二氯化錳聚乙烯亞胺、魚精蛋白和二氯化錳等。（5）將酶與底物結合）將酶與底物結合 酶和底物結合或競爭性抑制劑結合后，熱穩(wěn)定性酶和底物結合或競爭性抑制劑結合后，熱穩(wěn)定性大大提高，這樣就

13、可用加熱法除去雜蛋白。大大提高，這樣就可用加熱法除去雜蛋白。（二）脫鹽和濃縮（二）脫鹽和濃縮1、脫鹽、脫鹽脫鹽方法是透析和凝膠過濾透析和凝膠過濾。2、濃縮、濃縮 酶的濃縮方法濃縮方法很多，有冷凍干燥、離子交換、超濾離子交換、超濾、凝膠吸水凝膠吸水、聚乙二醇吸水聚乙二醇吸水等。（三）酶的結晶（三）酶的結晶 把酶提純酶提純到一定純度以后（通常純度應達純度應達50%以以上上），可使其結晶，酶的純度經常有一定程度的提高一定程度的提高。為研究蛋白質空間結構提供X射線衍射樣品射線衍射樣品。1、酶的結晶方法、酶的結晶方法 酶的結晶方法主要是緩慢地改變酶蛋白的溶解度緩慢地改變酶蛋白的溶解度，使其略處于過飽和狀

14、態(tài)。（1）鹽析法）鹽析法 操作要在低溫下進行低溫下進行，加鹽，緩沖液緩沖液pH要接近酶要接近酶的等電點。多數酶就可形成結晶的等電點。多數酶就可形成結晶。有時也可交替置交替置在在4冰箱中和室溫下冰箱中和室溫下來形成結晶。 （2）有機溶劑法）有機溶劑法 酶液中滴加有機溶劑，有時也能使酶液中滴加有機溶劑，有時也能使酶形成結晶。酶形成結晶。 一般要含少量無機鹽的情況下，選擇使酶穩(wěn)定的pH，緩慢地滴加有機溶劑有機溶劑 。使用的緩沖液使用的緩沖液一般不用不用磷酸鹽磷酸鹽，而用氯化物或乙酸鹽氯化物或乙酸鹽。 （3）復合結晶法）復合結晶法 有時可以利用某些酶與有機化合物有機化合物或金屬離子形成復合物或鹽的性質

15、金屬離子形成復合物或鹽的性質來結晶。（4）透析平衡法）透析平衡法 （5）等電點法）等電點法 2、結晶條件的選擇、結晶條件的選擇（1）酶的純度）酶的純度 酶的純度越高，結晶越容易，長成大的單晶可能性也越大。結晶對酶有明顯的純化作用純化作用。（2）酶的濃度）酶的濃度 （3）溫度）溫度 結晶的溫度通常在4下或室溫下或室溫25下下，低溫條件下酶不僅溶解度低，而且不易變性低溫條件下酶不僅溶解度低，而且不易變性。（4）時間）時間 結晶形成的時間,數小時到幾個月數小時到幾個月，有的甚至需要1年年或更長時間。一般來說，較大而性能好的結晶是在生長慢的情況下得到的。一般希望使微晶的形成快些，然后慢慢地改變沉淀條件

16、，再使微晶慢慢長大。（5）pH 調整pH可使結晶長到最佳大小最佳大小，也可改變晶形改變晶形。結晶溶液pH一般選擇在被結晶酶的等電點附近。被結晶酶的等電點附近。（6）金屬離子）金屬離子 許多金屬離子能引起或有助于酶的結晶引起或有助于酶的結晶，在酶的結晶過程中常用金屬離子有Ca2+、Zn2、Co2、Cu2、Mg2、Mn2、Ni2等等。（7）晶種）晶種 不易結晶不易結晶的蛋白質和酶，有的需加入微量加入微量的晶種才能結晶的晶種才能結晶， （8）結晶器皿處理）結晶器皿處理 結晶用的器皿要充分清洗、烘干清洗、烘干。使用前用結晶母液再沖洗再沖洗一次。 結晶的玻璃器皿，可用硅涂料硅涂料進行表面處理，以使表面光

17、滑且不潤濕光滑且不潤濕。這樣可減少晶減少晶核數目核數目 ，形成大的結晶。，形成大的結晶。（四）酶分離和純化工作的注意事項（四）酶分離和純化工作的注意事項 1、防止酶蛋白變性、防止酶蛋白變性 2、防止輔因子的流失、防止輔因子的流失3、防止酶被蛋白水解酶降解、防止酶被蛋白水解酶降解 第三節(jié)第三節(jié) 酶類藥物酶類藥物 一、藥用酶類的概述一、藥用酶類的概述 早期酶制劑主要用于治療消化道疾病消化道疾病，燒傷及感染引起的炎癥疾病炎癥疾病，現在國內外己廣泛應用于多種疾病的治療，其制劑品種已超過700余種。（一）促進消化酶類（一）促進消化酶類 （二）消炎酶類（二）消炎酶類 （三）與纖維蛋白溶解作用有關的酶類（三

18、）與纖維蛋白溶解作用有關的酶類（四）抗腫瘤的酶（四）抗腫瘤的酶（五）其它藥用酶（五）其它藥用酶（一）胃蛋白酶（一）胃蛋白酶（Pepsin，EC3.4.4.1） 胃蛋白酶胃蛋白酶廣泛存在于哺乳類動物的胃液胃液中，藥用胃蛋白酶系從豬、牛、羊等家畜的胃粘膜中提取胃粘膜中提取。 1、組成（結構）、性質、組成（結構）、性質藥用胃蛋白酶是胃液中多種蛋白水解酶多種蛋白水解酶的混合物混合物，含有胃蛋白酶胃蛋白酶、組織蛋白酶組織蛋白酶、膠原酶膠原酶等，為粗制的酶制劑。水溶液呈酸性酸性，難溶于乙醇、氯仿等有機溶劑。 pI為為pH1.0，最適最適pH1.52.0?？扇苡诳扇苡?0乙醇和乙醇和pH4的的20乙醇中。乙

19、醇中。 胃蛋白酶能水解大多數天然水解大多數天然蛋白質底物。 2、生產工藝、生產工藝（1）工藝路線：）工藝路線： 胃蛋白酶原鹽酸催化激活胃蛋白酶原鹽酸催化激活成胃蛋白酶。 常用的脫脂劑脫脂劑有乙醚乙醚、氯仿氯仿、四氯化碳四氯化碳。（2）工藝過程：）工藝過程：（3）胃膜素和胃蛋白酶聯產工藝）胃膜素和胃蛋白酶聯產工藝：向經消化消化、提取提取、脫脂脫脂、分層分層、濃縮濃縮及60丙酮沉淀分離胃膜素丙酮沉淀分離胃膜素的母液中，邊攪拌邊加冷丙酮冷丙酮，至比重為比重為0.91，即有淡黃色胃蛋白酶沉出，靜放過夜，去上清液，沉淀真空干燥，即得胃蛋白酶。（4）結晶胃蛋白酶的制備）結晶胃蛋白酶的制備：藥用胃蛋白酶原粉

20、，溶于20酒精酒精中，加H2SO4調pH3.0，5靜置20h后過濾，加硫酸鎂硫酸鎂至飽和，進行鹽析鹽析。鹽析物再在pH3.84.0的乙醇中溶解，過濾，濾液用硫酸調硫酸調pH至至1.82.0，即析出針狀胃蛋白酶。沉淀再溶于20% pH4的乙醇的乙醇中，過濾，濾液用硫酸調pH至至1.8，在20放置，可得板狀或針狀結晶。（二）胰蛋白酶（二）胰蛋白酶 胰蛋白酶是從牛、羊胰臟牛、羊胰臟提取、結晶的凍干制劑。易溶于水易溶于水，不溶于氯仿、乙醇、乙醚等有機溶劑不溶于氯仿、乙醇、乙醚等有機溶劑。在pH1.8時，短時煮沸幾乎不失活；在堿溶液中加熱則變性沉淀，Ca2+有保護和激活作用有保護和激活作用，胰蛋白酶的p

21、I為為10.1。 牛胰蛋白酶在腸激酶腸激酶或自身自身催化下，釋放出6肽，變成有活性的胰蛋白酶有活性的胰蛋白酶。胰蛋白酶分子量分子量24000，由223個氨基酸殘基組成。 胰蛋白酶胰蛋白酶專一作用于由堿性氨基酸精氨酸及亮氨堿性氨基酸精氨酸及亮氨酸羧基所組成的肽鍵酸羧基所組成的肽鍵。酶本身很容易自溶很容易自溶。2、生產工藝、生產工藝 （1）工藝路線：）工藝路線：（三）糜蛋白酶（三）糜蛋白酶（Chymotrypsin，EC3.4.4.5） 胰蛋白酶可激活糜蛋白酶原成胰蛋白酶可激活糜蛋白酶原成-糜蛋白酶糜蛋白酶。2、生產工藝、生產工藝（1）工藝路線：）工藝路線：（2）工藝過程：）工藝過程： 酶原加少量

22、胰蛋白酶酶原加少量胰蛋白酶 ，pH7.6 （四）尿激酶（四）尿激酶（Urokinase，EC3.4.99.26） 尿激酶，是一種堿性蛋白酶堿性蛋白酶。由腎臟腎臟產生，主要存在于人及哺乳動物的尿中尿中。人尿平均含量56國際單國際單位位m1。1、組成（結構）性質、組成（結構）性質（1）尿激酶有多種分子量形式。尿中的尿胃蛋白酶原，在酸性條件下酸性條件下可以激活生成尿胃蛋白酶，尿胃蛋白酶，把天然尿激酶降解降解成為尿激酶尿激酶。（2）尿激酶是專一性很強的蛋白水解酶蛋白水解酶，血纖維蛋白溶酶原是它唯一唯一的天然蛋白質底物，它作用于精氨精氨酸酸-纈氨酸鍵使纖溶酶原纈氨酸鍵使纖溶酶原轉為纖溶酶。尿激酶也具有酯

23、酶活力酯酶活力。（3）尿激酶的pI為為pH89，主要部分在pH8.6左右左右。溶液狀態(tài)不穩(wěn)定溶液狀態(tài)不穩(wěn)定，凍干狀態(tài)可穩(wěn)定數年穩(wěn)定數年。加入1EDTA、人血白蛋白或明膠人血白蛋白或明膠可防止酶的表面變性表面變性作用。2、生產工藝、生產工藝（1）工藝路線：）工藝路線：（2）工藝過程：）工藝過程：硅藻土吸附 ，0.02氨水加0.1molL氯化鈉洗脫。 QAESephadex層析柱 去熱原、色素。CMC濃縮 。 （五）細胞色素（五）細胞色素C（Cytochrome C） 細胞色素細胞色素C存在于自然界中一切生物細胞里，其含量與組織的活動強度成正比活動強度成正比。以哺乳動物的心肌心肌、鳥類的胸肌胸肌和

24、昆蟲的翼肌翼肌含量最多，肝、腎肝、腎次之，皮膚和肺中最少。 1、組成（結構）、性質、組成（結構）、性質 細胞色素細胞色素C是含鐵卟啉含鐵卟啉的結合蛋白質結合蛋白質，鐵卟啉環(huán)鐵卟啉環(huán)與蛋白質部分比例為比例為1 1。豬心細胞色素C分子量分子量12200。pI為為pH10.210.8。 細胞色素C對干燥、熱和酸干燥、熱和酸都較穩(wěn)定。 氧化型氧化型呈水溶液深紅色，在飽和硫酸銨中可溶解。 還原型還原型水溶液呈桃紅色，溶解度較小。2、生產工藝、生產工藝 （1）工藝路線：）工藝路線：人造沸石人造沸石 pH7.5吸附吸附 ，蒸餾水和氯化鈉溶液反復洗滌 ，25硫酸銨溶液洗脫硫酸銨溶液洗脫 。20三氯醋酸沉淀細胞

25、色素C，Amberlite IRC50（NH4）樹脂柱吸附 。（六）溶菌酶（六）溶菌酶（Lysozyme） 溶菌酶溶菌酶，又稱胞壁質酶胞壁質酶或N-乙酰胞壁質聚糖水解乙酰胞壁質聚糖水解酶酶。它廣泛存在于鳥類和家禽鳥類和家禽的蛋清蛋清、哺乳動物的淚、唾液、血漿、尿、乳汁、白細胞和組織（如肝、淚、唾液、血漿、尿、乳汁、白細胞和組織（如肝、腎）細胞內腎）細胞內，其中以蛋清含量最豐富蛋清含量最豐富。 溶菌酶是一種具有殺菌作用的天然抗感染物質殺菌作用的天然抗感染物質，具有抗菌、抗病毒、抗炎癥抗菌、抗病毒、抗炎癥。1、組成（結構）和性質、組成（結構）和性質 溶菌酶是一堿性球蛋白堿性球蛋白，分子中堿性氨基酸

26、堿性氨基酸、酰酰氨殘基氨殘基及芳香族氨基酸芳香族氨基酸（如色氨酸）比例很高。 溶菌酶能催化粘多糖粘多糖或甲殼素甲殼素中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之間的-1，4糖苷鍵糖苷鍵。 溶菌酶是一種罕見的穩(wěn)定蛋白質穩(wěn)定蛋白質。在pH5.5 加熱4h后，酶變得更活潑。低濃度的低濃度的Mn（10-7molL）在中性和堿性條件下中性和堿性條件下能使酶免受熱的失活作用。2、生產工藝、生產工藝（1）工藝路線）工藝路線（七）（七） L-天門冬酰胺酶天門冬酰胺酶 （L-asparaginase）1、組成（結構）、性質、組成（結構）、性質 L-天門冬酰胺酶天門冬酰胺酶是酰胺基水解酶酰胺基水解酶，是從大腸桿菌大腸

27、桿菌菌體中提取分離的酶類藥物，用于治療白血病。 性狀呈白色粉末狀，微有濕性，溶于水溶于水，不溶于丙酮丙酮、氯仿氯仿、乙醚及甲醇乙醚及甲醇。最適最適pH8.5，最適溫度最適溫度37。 L-天門冬酰胺酶的產生菌是霉菌和細菌霉菌和細菌，故可作制造酶的原料。2、生產工藝、生產工藝（1）工藝路線：）工藝路線： （八）激肽釋放酶（八）激肽釋放酶（Kallikrein） 激肽釋放酶激肽釋放酶是一種蛋白酶蛋白酶。哺乳動物的激肽釋放酶有兩大類：血液激肽釋放酶血液激肽釋放酶和組織激肽釋放酶組織激肽釋放酶。藥用激肽釋放酶又稱血管舒緩素血管舒緩素，主要來自頜下腺或胰頜下腺或胰腺。腺。 豬胰激肽釋放酶是一種糖蛋白糖蛋白

28、，含有唾液酸含有唾液酸，在腺體中以酶原形式酶原形式存在。唾液酸的除去并不影響酶的唾液酸的除去并不影響酶的活性活性 。（1）專一性）專一性 激肽釋放酶是一種內切蛋白水解酶內切蛋白水解酶 ，當它作用于蛋白質底物激肽原激肽原后釋放出激肽激肽。激肽釋放酶只作用于天然激肽原天然激肽原 。（2）穩(wěn)定性）穩(wěn)定性 一般說，激肽釋放酶的純度越高純度越高，穩(wěn)穩(wěn)定性越差定性越差。在水溶液中不穩(wěn)定，但在在水溶液中不穩(wěn)定，但在pH8.0的水或緩的水或緩沖液中，可在冷凍狀態(tài)下保存相當長時間不失活。沖液中，可在冷凍狀態(tài)下保存相當長時間不失活。 2、生產工藝、生產工藝 （1）工藝路線：）工藝路線： （2）工藝過程：）工藝過程

29、： 冷丙酮 33 、70，用丙酮、乙醚脫脂、脫水脫脂、脫水 。40%、60%冷丙酮 分級沉淀。弱酸性陽樹脂Amberlite CG50（鈉型） （九）超氧化物歧化酶（九）超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase SOD） 超氧化物歧化酶是一種重要的氧自由基清除劑自由基清除劑，作為藥用酶在美國、德國、澳大利亞等國有產品，此酶屬金屬酶金屬酶，它催化的化學反應是： 由于SOD能專一清除超氧陰離子自由基（超氧陰離子自由基（O2-）；故引起國內外生化界和醫(yī)藥界的極大關注。目前SOD臨床應用集中在自身免疫性疾病上如類風濕關節(jié)炎、紅斑性狼瘡、皮肌炎、肺氣腫等；也用抗輻射，抗腫瘤、治療氧中毒、

30、心肌缺氧與缺血再灌注綜合征以及某些心血管疾病。1、組成（結構）、性質、組成（結構）、性質 SOD屬金屬酶屬金屬酶，其性質不僅取決于蛋白質部分，其性質不僅取決于蛋白質部分，還取決于活性中心金屬離子的存在還取決于活性中心金屬離子的存在。按金屬離子種類不同，SOD有Cu，Zn-SOD、Mn-SOD和和Fe-SOD。三種酶都催化同一反應，但其性質有所不同，其中Cu，Zn-SOD與其它兩種SOD差別較大，而Mn-SOD與Fe-SOD之間差別較小。（2）SOD的活性中心和構象比較特殊，金屬輔基金屬輔基Cu和和Zn與必需基團與必需基團His等形成咪唑橋等形成咪唑橋 。（3）SOD的理化性質的理化性質 SOD是一種金屬蛋白，因此它因此它對熱、對對熱、對pH及在某些性質上表現出異常的穩(wěn)定性及在某些性質上表現出異常的穩(wěn)定性。對熱穩(wěn)定性對熱穩(wěn)定性 SOD對熱穩(wěn)定。但SOD