HPV分型檢測的介紹

1、最新HPV分型檢測的介紹最新HPV分型檢測的介紹123最新HPV分型檢測的介紹 最新HPV分型檢測的介紹1.1 宮頸癌的概況宮頸癌的概況v 宮頸癌是目前威脅女性健康的主要疾病，在全世界范圍內(nèi)也是導致女性死亡的第二大癌癥。 v 世界上每世界上每2 2分鐘就有一位婦女死于宮頸癌。分鐘就有一位婦女死于宮頸癌。v 我國宮頸癌兩率很高，屬于最嚴重的腫瘤之一。（每年有15萬新發(fā)病例，每年約有10萬名婦女死于宮頸癌）。v 發(fā)病年齡一般在4060歲。v 與公共衛(wèi)生狀況直接相關。最新HPV分型檢測的介紹 上世紀70年代末，Harald zur Hausen首先提出人乳頭瘤病毒(HPV)可能是宮頸癌的致癌病毒；1

2、.2 宮頸癌與宮頸癌與HPV的研究歷程的研究歷程 1977年，Laverty在電鏡中觀察到宮頸癌活檢組織中存在人乳頭瘤病毒顆粒； 1989年左右，Keerti Shah等發(fā)現(xiàn)99.7%99.7%的宮頸癌的宮頸癌與與HPVHPV感染有關感染有關，證實了宮頸癌與HPV感染有直接關系；HPV的感染使宮頸癌的相對危險性增加250倍最新HPV分型檢測的介紹v1995年 國際癌癥研究機構(gòu) (IARC)專題討論會通過： HPV感染是宮頸癌的主要感染是宮頸癌的主要原因原因；v2005年 IARC/WHO推薦HPV檢測可以用于宮頸癌篩查；最新HPV分型檢測的介紹v2008年10月6日公布Harald zur H

3、ausen獲諾貝爾生理學或醫(yī)學獎。哈拉爾德楚爾豪森 最新HPV分型檢測的介紹1.3 宮頸癌的致病因素宮頸癌的致病因素最新HPV分型檢測的介紹v 性接觸傳播：性接觸傳播： 丈夫陰莖HPV的存在可使妻子宮頸受染的危險增加9倍；相同的HPV型別可以在性伴侶中檢出；與此相反，處女通常是檢測不到HPV感染。 v 非性直接接觸感染：非性直接接觸感染：通過接觸病變部位及病人分泌物感染； v 間接接觸：間接接觸：通過病人的衣物和用品感染； v 母嬰傳播：母嬰傳播：在分娩過程中通過產(chǎn)道直接接觸傳播，還可以通過血液、羊水及胎盤傳播，或者可能通過嬰兒出生后與攜帶HPV的母親密切接觸傳染。1.4 HPV的傳播途徑的傳

4、播途徑最新HPV分型檢測的介紹最新HPV分型檢測的介紹HPV感染潛伏期與發(fā)病期感染潛伏期與發(fā)病期v 低危型HPV感染平均持續(xù)時間是4.8個月v 高危型HPV感染平均持續(xù)時間是8個月v HPV感染的最常見的結(jié)局是沒有明顯的臨床表現(xiàn)，絕大部分會被機體免疫力自動清除v 只有持續(xù)持續(xù)的高危型高危型的HPV感染才會發(fā)生癌前病變或?qū)m頸癌。v 一般平均8-24月可發(fā)生輕度、中度和重度的宮頸癌前病變（CIN1、CIN2和CIN3）；再平均5-10年才可發(fā)生浸潤癌，只要早查早治，是完全可以避免死于宮頸癌的。唯一病因明確唯一病因明確唯一可以早期預防和治療唯一可以早期預防和治療唯一可以徹底根除的癌癥唯一可以徹底根除

5、的癌癥最新HPV分型檢測的介紹1.5 HPV病毒學知識病毒學知識v 小環(huán)狀雙鏈DNA病毒，約8Kbv 顆粒直徑為5055nm，無包膜v 由72個病毒殼粒包被v 在自然界中穩(wěn)定性好，廣泛分布v 較高的種依賴性v 嗜上皮性，在基底層細胞中潛伏v 在鱗狀上皮細胞中復制、轉(zhuǎn)錄和翻譯、增殖HPV(human papillomavirus)是一組病毒的總稱是一組病毒的總稱最新HPV分型檢測的介紹 早期區(qū)早期區(qū)(early region, E) 含有E1、E2、E4、E5、E6、E7共6 個基因，是維持病毒復制、編碼病毒蛋白、維持細胞內(nèi)病毒的高拷貝數(shù)的基因 晚期區(qū)晚期區(qū)(late region, L) 長控

6、制區(qū)長控制區(qū)(long control region, LCR)最新HPV分型檢測的介紹HPV16L1: 主要衣殼蛋白，是疫苗研發(fā)的主要成分 L2: 次要衣殼蛋白，是抗體的主要識別位點E4：結(jié)合并破壞中表層細胞角蛋白網(wǎng)，形成中表層細胞的挖空外觀HPV 的主要致癌基因n E6 通過抑制p53而阻斷凋亡n E7 通過抑制pRB使細胞周期失控E2：負性調(diào)節(jié)E6和E7，維持凋亡和細胞周期的調(diào)控病毒整合時會破壞E2基因的結(jié)構(gòu)，導致失活Xp53 是一種核蛋白，負向調(diào)節(jié)細胞的生長和分化。是一種核蛋白，負向調(diào)節(jié)細胞的生長和分化。p53的的降解失活阻礙了細胞對降解失活阻礙了細胞對DNA損傷的反應，由此導致細胞遺

7、損傷的反應，由此導致細胞遺傳學性狀改變的積累，進而產(chǎn)生惡變的基因型。傳學性狀改變的積累，進而產(chǎn)生惡變的基因型。pRB是重要的抑癌基因，直接參與細胞周期的調(diào)控。是重要的抑癌基因，直接參與細胞周期的調(diào)控。pRB功能失效，改變了細胞生長周期的調(diào)控機制，使細功能失效，改變了細胞生長周期的調(diào)控機制，使細胞永生化，并對惡性病變的防御機制進一步影響。胞永生化，并對惡性病變的防御機制進一步影響。最新HPV分型檢測的介紹1.6 HPV的侵入、復制和釋放的侵入、復制和釋放侵入：侵入：病毒 微創(chuàng)口微創(chuàng)口 皮膚黏膜表層 感染感染 （副）基底層細胞 附加體形式附加體形式 在宿主細胞核內(nèi)復制復制：復制：依賴于上皮細胞的分

8、化，在基底層上層細胞中開始復制釋放：釋放：在表皮細胞中完成裝配并釋放完整病毒顆粒。當表皮細胞脫落時，在皮膚表 面可發(fā)現(xiàn)病毒顆粒。最新HPV分型檢測的介紹1.7 宮頸組織與宮頸組織病變宮頸組織與宮頸組織病變最新HPV分型檢測的介紹輕度不典型增生(CIN)： 中度不典型增生(CIN )重度不典型增生(CIN ):是一組病變的統(tǒng)稱，包括宮頸不典型增生和原位癌，為宮頸浸潤癌的癌前期病變。通常將CIN分為3級，以輕/中/重級不典型增生來區(qū)分最新HPV分型檢測的介紹正常宮頸正常宮頸感染感染清除清除HPV 感染感染演進演進消退消退癌前病變癌前病變癌癌浸潤浸潤 一過性一過性HPV感染感染持續(xù)性持續(xù)性HPV感染

9、感染E7E6E2E6E7E2最新HPV分型檢測的介紹一過性一過性HPV感染感染持續(xù)性持續(xù)性HPV感染感染LSILHSILCIN CIN CIN Very mild /mild dysplasiaModerate dysplasiaS e v e r e dysplasiaIn situ carcinomaI n v a s i v e carcinomaHPV溫和輕微的激活宿主細胞的遺傳學變化HPV嚴重的破壞宿主的遺傳學平衡E6和E7低水平的表達，以維持病毒基因組的復制和宿主細胞的生長E6和E7高水平表達，宿主細胞凋亡被阻斷，細胞周期失控，宿主細胞開始發(fā)生惡變E2負責E6、E7的負調(diào)控。保持宿

10、主細胞的分化和成熟；確保能夠產(chǎn)生完成的病毒顆粒E2基因在病毒DNA整合入宿主基因組時被破壞，導致失去對E6和E7的負調(diào)控的能力在上皮分化的終末階段L1和L2基因開始表達并組裝形成病毒衣殼完整的病毒顆粒從宿主細胞內(nèi)釋放出來大量E4 聚集溶解宿主細胞骨架蛋白呈現(xiàn)挖空細胞的外觀在宿主細胞發(fā)生惡變時細胞核的異形性：倍體的增多或非整倍體的出現(xiàn)細胞分裂活性：持續(xù)增生喪失分化能力：不同程度的細胞不成熟性最新HPV分型檢測的介紹1.8 HPV感染引起的疾病感染引起的疾病最新HPV分型檢測的介紹疾病疾病感染感染HPV型別型別扁平疣扁平疣 3、10、27、28、41尋常疣尋常疣1、2、4、7、27、29、40、5

11、4疣狀表皮發(fā)育不良疣狀表皮發(fā)育不良 5、8、12、14、15、17、19、25、38、46、47、49、50尖銳濕疣尖銳濕疣6、11、16、18、31、33、34、35、39、51宮頸上皮內(nèi)瘤宮頸上皮內(nèi)瘤6、11、 16、18、31、33、35、43、44、51、 56、58、61浸潤性宮頸癌浸潤性宮頸癌16、18、31、33、 35、39、45、51、52、56、58、59、68陰莖癌陰莖癌16、18女陰癌女陰癌16、18最新HPV分型檢測的介紹最新HPV分型檢測的介紹 最新HPV分型檢測的介紹2.1 乳頭瘤病毒的分類依據(jù)乳頭瘤病毒的分類依據(jù)主要以病毒基因組中L1區(qū)的DNA同源性作為分類依據(jù)

12、：v 屬屬：病毒全基因組DNA同源性23%43%；同時病毒基因 組L1區(qū)DNA同源性在60%以下；v 種種：病毒基因組L1區(qū)DNA同源性介于60%70%；v 型型：病毒基因組L1區(qū)DNA同源性介于71%89%；v 亞型及變異株亞型及變異株：L1區(qū)DNA同源性在90%100%。最新HPV分型檢測的介紹HPV的型別的型別v 目前已發(fā)現(xiàn)超過型別的人乳頭瘤病毒（HPV）。v 依據(jù)與生殖道腫瘤相關性，將HPV分為：最新HPV分型檢測的介紹2.2 HPV分型檢測的意義分型檢測的意義（1）預測受檢者發(fā)病的風險度，確定篩查間隔）預測受檢者發(fā)病的風險度，確定篩查間隔女性感染HPV16或18型患宮頸癌及癌前病變的

13、風險最新HPV分型檢測的介紹 對丹麥哥本哈根11088名登記在冊的婦女進行了為期數(shù)年的跟蹤隨訪研究，對受檢人群進行了宮頸細胞涂片檢查、HPV檢測和組織病理檢查。 該研究中假定連續(xù)兩次HPV檢測陰性的危險系數(shù)為1.0，各種持續(xù)感染情況的危險系數(shù)是其與1.0的比值。 Susanne K Kjaer,et al. Type specific persistence of high risk human papillomavirus (HPV) as indicator of high grade cervical squamous intraepithelial lesions in young w

14、omen:population based prospective follow up study. BMJ VOLUME 325 14 SEPTEMBER 2002（2）區(qū)分持續(xù)（重復）感染與一過性感染）區(qū)分持續(xù)（重復）感染與一過性感染最新HPV分型檢測的介紹HPV持續(xù)感染的危險性評定持續(xù)感染的危險性評定持續(xù)感染情況（相隔2年）致非典型鱗狀上皮細胞的危險系數(shù)致宮頸低度病變的危險系數(shù)致宮頸高度病變的危險系數(shù)連續(xù)兩次檢測都為陰性1.01.01.0第一次第二次都為陽性，但感染型別不同16.873.2192.7第一次第二次都為陽性，感染型別至少有一種相同沒有病例117.9813.0最新HPV分型檢測

15、的介紹v 對巴西1611名婦女在4個月間隔2次檢測HPV，HPV16、18持續(xù)陽性致HSIL風險性大于其他高危型HPV持續(xù)陽性。（Nicolas F. Schlecht, et.al. JAMA. 2001; 286(24): 3106-3114. ）宮頸癌的必要條件高危型的HPV感染HPV持續(xù)感染最新HPV分型檢測的介紹（3）區(qū)分單一感染和多重感染）區(qū)分單一感染和多重感染v 早期的文獻報道，HPV的多重感染與宮頸癌直接相關。v 現(xiàn)在越來越多的報道發(fā)現(xiàn)，HPV的多重感染與宮頸癌之間，不存在顯著性的關系。v 例如：一個病人的HPV檢測結(jié)果是18、51的多重感染，但隨訪后18型被免疫清除了，只有5

16、1型，由于51型的風險低，那么繼續(xù)隨訪并給予相應的干預即可。v 如果采用定量的方法，兩次結(jié)果的載量都很高，沒有型別的輔助，很容易就會判讀為高危亞型持續(xù)感染而給予過度的治療。最新HPV分型檢測的介紹（4）針對不同型別的感染采取不同的處理方案）針對不同型別的感染采取不同的處理方案v 據(jù)統(tǒng)計約有70%以上的生育年齡的婦女都曾有HPV感染v 90%以上婦女能自動清除HPV感染v 宮頸癌是一種常見感染常見感染的罕見結(jié)局罕見結(jié)局v 相同細胞及組織學類型HPV陽性與陰性要區(qū)別對待v 不同HPV感染型別要區(qū)別對待 例如：建議HPV16,18型的患者直接進行陰道鏡檢查；而對于其他型別的感染，要結(jié)合細胞學診斷，一

17、般不需要采取任何治療方法，但需要按時隨訪。最新HPV分型檢測的介紹2.3 HPV分型檢測的應用分型檢測的應用篩查篩查陰道鏡適應癥陰道鏡適應癥ASCUS分流分流宮頸病變隨訪宮頸病變隨訪指導疫苗的使用指導疫苗的使用最新HPV分型檢測的介紹（1）篩查）篩查v 從癌前病變發(fā)展到宮頸癌需要多年的時間(58年以上)，而且病情的發(fā)展具有可逆性具有可逆性。如果篩查和治療的及時、徹底，病變就會消失，身體恢復健康。反之，就會朝癌癥發(fā)展。最新HPV分型檢測的介紹HPV+細胞學陰道鏡檢查組織學診斷 宮頸病變的三階梯診斷技術是在國內(nèi)廣泛推行的針對宮頸癌及宮頸癌前病變的規(guī)范化診治流程。 由HPV檢測、宮頸細胞學、陰道鏡與

18、組織病理學組成:宮頸病變的三階梯診斷宮頸病變的三階梯診斷最新HPV分型檢測的介紹篩查方法：篩查方法： 敏感性差、假陰性率高（2%50%）、假陽性率高、漏診多。 可重復性差，受閱片人主觀影響。 敏感度、準確性有所提高 用途廣泛 沒有改變傳統(tǒng)的閱片方式，與人為主觀因素直接相關。 靈敏度高、特異性強（均高于95%） 可預測宮頸癌的風險陰性預測值高 （99.9%）最新HPV分型檢測的介紹HPV和細胞學檢測在子宮頸癌篩查中的對比和細胞學檢測在子宮頸癌篩查中的對比對比項目對比項目HPV DNA檢測檢測細胞學（巴氏細胞學（巴氏/液基）檢測液基）檢測檢測方法檢測方法分子生物學形態(tài)學檢測病變程度檢測病變程度HP

19、V潛伏期、感染期、亞臨床期、臨床癥狀期、癌癥相關期臨床癥狀期、癌癥相關期敏感度敏感度98以上，可以檢查出在PAP檢測中表現(xiàn)為假陰性的婦女專家水平為80-85陰性預測值陰性預測值99以上，一次檢測陰性可3-5年內(nèi)處于安全期低準確度準確度高低客觀性客觀性客觀的檢測方法，不受人為因素的影響，結(jié)果可靠。主觀檢測方法，無法避免主觀的人為因素的干擾，結(jié)果有一定的可疑性。重復性重復性目前重復性最好的HPV檢測因取材、制片、閱片等客觀因素的影響，重復性差。經(jīng)濟效益經(jīng)濟效益陰性者不用多次重復檢查，因此是最經(jīng)濟的檢測。需多次重復檢查，經(jīng)濟與心理負擔過重檢測風險檢測風險低，給醫(yī)生可靠的依據(jù)，給患者安心的答復高面臨醫(yī)

20、療糾紛最新HPV分型檢測的介紹最佳篩查方案最佳篩查方案最新HPV分型檢測的介紹一般篩查方案一般篩查方案最新HPV分型檢測的介紹2006/11 第第18屆屆FIGO會議正式提出：會議正式提出：v 現(xiàn)在的各種細胞學技術與巴氏涂片相比并沒有提高宮頸癌的早期檢出率；v 在WHO的協(xié)調(diào)下，南非和美國的研究提示，有條件的地區(qū)應以為首選。最新HPV分型檢測的介紹HPV-DNA檢測檢測陰性陰性陽性陽性篩查篩查 1次次/35年年液基細胞學檢查液基細胞學檢查篩查，篩查，1次次/6月月1年年正常正常異常異常陰道鏡陰道鏡/組織學檢查組織學檢查16+/18+2006 consensus guidelines for m

21、anagement of women with abnormal cervical cancer screening tests 推薦的子宮頸癌篩查方案推薦的子宮頸癌篩查方案最新HPV分型檢測的介紹適合篩查的人群適合篩查的人群v 任何有三年以上性行為或三年以上性行為或21歲以上有性行為歲以上有性行為的婦女均為篩查對象（因為21歲以下子宮頸癌患者極為罕見，而且從HPV感染到CIN需要3-8年時間)v 高危人群：有多個性伴侶、性生活過早、HIV/HPV感染、免疫功能低下、衛(wèi)生條件差/性保健知識缺乏的婦女v 對決定妊娠的婦女，在妊娠前妊娠前應進行HPV檢查最新HPV分型檢測的介紹（2）陰道鏡適應癥）

22、陰道鏡適應癥v 波特蘭的一項研究表明，30歲細胞學陰性的女性中，HPV16或或18陽性陽性的女性在10年隨訪中出現(xiàn)CIN3的比率分別為21%和和18%。與此相比，其他高危型HPV陽性的女性中，CIN3的風險性僅1.5%。 v 不同型別致CIN3的風險不同。 2009年，美國陰道鏡和宮頸病理學會（簡稱年，美國陰道鏡和宮頸病理學會（簡稱ASCCP）發(fā)布了發(fā)布了HPV 基因分型檢測指南，明確指出基因分型檢測指南，明確指出: 30婦女，婦女，細胞學未見上皮內(nèi)病變和惡性細胞，細胞學未見上皮內(nèi)病變和惡性細胞，HPV16，18建議建議陰道鏡；其他陰道鏡；其他HPV高危型，則在高危型，則在12個月后重復個月后

23、重復HPV DNA檢測和細胞學檢查。（檢測和細胞學檢查。（American Society for Colposcopy and Cervical Pathology, 2009）最新HPV分型檢測的介紹（3）ASCUS分流分流（atypical squamous cells of unknown significance診斷意義不明的不典型鱗狀上皮細胞）v 直接陰道鏡檢查或多點病理活檢，引起創(chuàng)傷和過度診治（40-60%）v 重復細胞學檢查，有25%失訪率，此外復檢會增加病人經(jīng)濟及精神負擔457例細胞學診斷為ASCUS/LSIL，進行HPV檢測和活檢： LSIL且高危HPV陽性陽性者，22.7

24、%為CIN II/III；LSIL但高危HPV陰性者，僅1%為CIN II/III。 Lee Nak-Woo, et al., Is the Human Papillomavirus Test in Combination With the Papanicolaou Test Useful for Management of Patients With Diagnoses of Atypical Squamous Cells of Undetermined Significance/Low-Grade Squamous Intraepithelial Lesions? Arch Pathol

25、Lab Med, 2001, 125:1453 HPV檢測為目前的檢測為目前的最優(yōu)方法最優(yōu)方法。 HPV檢測陰性，可列入常規(guī)篩查人群；檢測陰性，可列入常規(guī)篩查人群； HPV檢測陽性，則考慮配合陰道鏡檢查。檢測陽性，則考慮配合陰道鏡檢查。 最新HPV分型檢測的介紹（4）宮頸病變隨訪）宮頸病變隨訪v 據(jù)瑞典的一項研究，針對完成宮頸錐切術后，術后隨訪結(jié)果有26例CIN復發(fā)；22例未復發(fā)。術后3個月用PCR方法檢測宮頸細胞涂片HPV，其中： 26例復發(fā)者：25例為HPV陽性 22例對照組：全部為HPV陰性v 實驗說明：宮頸病變治療后檢測HPV-DNA，可預測殘余病變、估計療效。 Chua, K.L.,

26、 Hjerpe, A. Human papillomavirus analysis as a prognostic marker following conization of the cervix uteri. Gynecol Oncol, 1997, 66(1): 108-113最新HPV分型檢測的介紹術后術后HPV-DNA檢測檢測陰性陰性陽性陽性病灶切除干凈或病灶切除干凈或沒有再次感染沒有再次感染相同基因型相同基因型新的新的HPV感染感染有殘留病灶或有殘留病灶或重復感染重復感染不同基因型不同基因型宮頸病變治療后的隨訪宮頸病變治療后的隨訪最新HPV分型檢測的介紹（5）指導疫苗的使用）指導疫

27、苗的使用v HPV感染后可以激發(fā)機體產(chǎn)生特異性體液免疫和細胞免疫v 針對衣殼蛋白（L1）的IgG和IgA中和抗體在病毒感染的早期較為重要-預防性疫苗v 針對早期蛋白（E6E7）的細胞免疫反應對最終清除病毒可能更為重要-治療性疫苗默沙東：Gardasil（6、11、16、18） 43.94%葛蘭素史克： Cervarix（16、18） 26.47%約約200種種HPV最新HPV分型檢測的介紹中國中國HPV數(shù)據(jù)庫的目的和意義數(shù)據(jù)庫的目的和意義v 收集積累HPV不同型別感染數(shù)據(jù)和中國HPV基因研究資料，形成具有中國特色的開放數(shù)據(jù)平臺。v 應用網(wǎng)絡信息技術，對HPV流行趨勢開展長期監(jiān)測。v 積極探索H

28、PV與宿主、基因多態(tài)性及與腫瘤的發(fā)生發(fā)展演變的關系。v 解決宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)瘤等重大科學問題。v 指導適合中國人群HPV治療性和預防性疫苗的研制。v 為制定宮頸癌相關的公共衛(wèi)生政策提供理論基礎。最新HPV分型檢測的介紹 最新HPV分型檢測的介紹屬于分子醫(yī)學范疇，是。v具有高靈敏度、高特異性的特點。3.1 實驗原理實驗原理最新HPV分型檢測的介紹v 將PCR和低密度基因芯片技術結(jié)合成綜合工作平臺，具有高效、快速、靈敏、準確的特點。最新HPV分型檢測的介紹3.2 宮頸細胞樣本的采集宮頸細胞樣本的采集v 月經(jīng)期不可采集標本。（減少給受檢者的損傷）v 月經(jīng)正常婦女，在月經(jīng)來潮后1018天為最佳檢

29、查時間v 不可在碘試驗和醋酸試驗之后采集樣本。（可能會抑制PCR反應）v 檢查前48小時內(nèi)不要作陰道沖洗，不要用避孕藥膏等陰道內(nèi)用藥物。（可能會抑制PCR反應）v 檢查前48小時最好不要行性生活。（一過性假陽性） v 樣本采集后，注意避免交叉污染。最新HPV分型檢測的介紹u子宮頸的鱗狀上皮細胞與柱狀上皮細胞的連接處（轉(zhuǎn)化帶，Transformation Zone）是HPV的易感部位。uHPV-DNA檢測樣本是子宮子宮頸轉(zhuǎn)化帶的脫落細胞頸轉(zhuǎn)化帶的脫落細胞。最新HPV分型檢測的介紹被檢者脫掉褲子，然后按醫(yī)生指示仰臥于一張檢查床上。由醫(yī)生以窺陰器或陰道張開器暴露宮頸。 然后使用專用的置于宮頸口采集標本。（最好在取樣前先用棉簽擦去宮頸分泌物）最新HPV分型檢測的介紹 將專用宮頸刷置于宮頸口，輕輕搓動宮頸刷使其旋轉(zhuǎn)5圈。慢慢取出宮頸刷，將其放入標有病人編號的取樣管中，取樣管內(nèi)已加有專用細胞保存液，折斷其刷頭入管中，擰緊瓶蓋。最新HPV分型檢