DNA的粗提取與鑒定(修改版)ppt課件

1、DNADNA的粗提取與鑒定的粗提取與鑒定目的要求知道知道DNADNA提取原理提取原理據(jù)原理設(shè)計據(jù)原理設(shè)計DNADNA提取方法提取方法DNADNA進行鑒定進行鑒定掌握本實驗的基本操作方法掌握本實驗的基本操作方法1;.2一、實驗原理一、實驗原理 1.1.血細胞在蒸餾水中會滲透吸水過度而導(dǎo)致細胞膜和細胞核膜的破裂。利用此特性可得到含有血細胞在蒸餾水中會滲透吸水過度而導(dǎo)致細胞膜和細胞核膜的破裂。利用此特性可得到含有DNADNA的溶液。的溶液。2.DNA2.DNA在氯化鈉溶液中的溶解度，是隨著氯化鈉的濃度的變化而改變的。在氯化鈉溶液中的溶解度，是隨著氯化鈉的濃度的變化而改變的。DNADNA在物質(zhì)的量濃度

2、為在物質(zhì)的量濃度為0.14 mol0.14 molL L的氯化鈉溶液中的溶解度最低，利用這一原理，可以使溶解在氯化鈉溶液中的的氯化鈉溶液中的溶解度最低，利用這一原理，可以使溶解在氯化鈉溶液中的DNADNA析析出。出。 3.DNA3.DNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液，但細胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精。利用這一原理，可以進一步提取出但細胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精。利用這一原理，可以進一步提取出含雜質(zhì)較少的含雜質(zhì)較少的DNADNA。 4.DNA4.DNA遇二苯胺（沸水?。兂伤{色，因此，二苯胺可以作為鑒定遇二苯胺（沸水?。兂伤{色，因此，二苯胺可以作為鑒定DNADNA的試劑。的試劑。 最好使

3、用塑料的燒杯和試管盛放雞血細胞液最好使用塑料的燒杯和試管盛放雞血細胞液34實驗材料和用具實驗材料和用具實驗材料：實驗材料：1 1、新鮮雞血細胞液（、新鮮雞血細胞液（5 510ml10ml）；）；2 2、體積分數(shù)為、體積分數(shù)為95%95%的冷酒精溶液（實驗前置于冰箱內(nèi)冷卻的冷酒精溶液（實驗前置于冰箱內(nèi)冷卻24h24h）；）；3 3、蒸餾水；、蒸餾水；4 4、質(zhì)量濃度為、質(zhì)量濃度為0 0g/mlg/ml的檸檬酸鈉溶液的檸檬酸鈉溶液（抗凝劑）（抗凝劑） ；5 5、物質(zhì)的量濃度分別為、物質(zhì)的量濃度分別為2mol/L2mol/L和和0 0015mol/L015mol/L的的NaClNaCl溶液；溶液；6

4、 6、二苯胺試劑。、二苯胺試劑。5實驗用具：實驗用具：鐵架臺；鐵環(huán)；鑷子；三角架；酒精燈；石棉網(wǎng)；載玻片；玻璃棒；濾紙；滴管；量鐵架臺；鐵環(huán)；鑷子；三角架；酒精燈；石棉網(wǎng)；載玻片；玻璃棒；濾紙；滴管；量筒（筒（100ml100ml，一個）；燒杯；（，一個）；燒杯；（100ml100ml，一個，一個，50ml50ml、500ml500ml各二個）；試管（各二個）；試管（20ml20ml，二個）；漏斗；試管夾；紗布。二個）；漏斗；試管夾；紗布。 6二、方法與過程二、方法與過程 0.10.1g/mLg/mL檸檬酸鈉檸檬酸鈉100100mLmL活雞鮮血活雞鮮血180mL180mL500mL500mL燒

5、杯中，玻棒攪拌，離心、分離或靜置沉淀。燒杯中，玻棒攪拌，離心、分離或靜置沉淀。取血細胞取血細胞5-10mL5-10mL20mL20mL蒸餾水，用玻棒沿一個方向快速攪拌。蒸餾水，用玻棒沿一個方向快速攪拌。兩層紗布過濾：濾液中含兩層紗布過濾：濾液中含DNADNA和其他核物質(zhì)，如蛋白質(zhì)。和其他核物質(zhì)，如蛋白質(zhì)。原理：血細胞的細胞膜、核膜吸水漲破，玻璃棒快速攪拌，機械加速血細胞破裂。原理：血細胞的細胞膜、核膜吸水漲破，玻璃棒快速攪拌，機械加速血細胞破裂。. .提取血細胞核物質(zhì)：提取血細胞核物質(zhì)：. .溶解核內(nèi)的溶解核內(nèi)的DNADNA： 濾液濾液2mol/L2mol/L的的NaClNaCl溶液溶液40m

6、L40mL，玻棒沿一個方向輕緩攪拌。，玻棒沿一個方向輕緩攪拌。不要碰底！不要碰底！用吸管吸走上清液用吸管吸走上清液抗凝劑抗凝劑DNA含量高含量高防止防止DNA破碎破碎防止防止DNA破碎破碎溶解溶解DNA效果好效果好取濾液取濾液漲破漲破7. .析出含析出含DNADNA的粘稠物：的粘稠物：. .濾取含濾取含DNADNA的粘稠物：的粘稠物：. DNA. DNA粘稠物的再溶解：粘稠物的再溶解： 在上述溶液中緩緩加入蒸餾水，并沿一個方向輕輕攪拌，出現(xiàn)白色絲狀物；當絲狀物不再在上述溶液中緩緩加入蒸餾水，并沿一個方向輕輕攪拌，出現(xiàn)白色絲狀物；當絲狀物不再增加時，停止加水（此時增加時，停止加水（此時NaClN

7、aCl溶液的濃度相當于溶液的濃度相當于0.14mol/L0.14mol/L）。）。 用多層紗布過濾，含用多層紗布過濾，含DNADNA的粘稠物留在紗布上。的粘稠物留在紗布上。 20mL2mol/L20mL2mol/L的的NaClNaCl溶液溶液步驟含步驟含DNADNA的粘稠物的粘稠物在在20mL20mL燒杯中燒杯中一個方向一個方向輕緩攪拌輕緩攪拌3 3minmin，使盡，使盡可能多的可能多的DNADNA溶解在溶解在NaClNaCl溶液溶液。. .過濾含有過濾含有DNADNA的的NaClNaCl溶液：溶液： 用放有兩層紗布的漏斗過濾步驟所得的溶液，濾液中含有用放有兩層紗布的漏斗過濾步驟所得的溶液，

8、濾液中含有DNADNA。取濾渣（析出物）取濾渣（析出物）取濾液取濾液含雜質(zhì)的含雜質(zhì)的DNA8. .提取含有雜質(zhì)較少的提取含有雜質(zhì)較少的DNADNA： 步驟所得的濾液體積分數(shù)為步驟所得的濾液體積分數(shù)為95%95%的冷卻酒精的冷卻酒精50mL50mL，用玻棒沿一個方向輕緩攪拌，溶液中，用玻棒沿一個方向輕緩攪拌，溶液中析出乳白色絲狀物，用玻棒將絲狀物卷起，并用濾紙吸取上面的水分。析出乳白色絲狀物，用玻棒將絲狀物卷起，并用濾紙吸取上面的水分。 加入加入0.015mol/L0.015mol/L的的NaClNaCl溶液溶液5mL5mL和二苯胺試劑和二苯胺試劑4mL4mL，用玻棒攪拌使，用玻棒攪拌使DNAD

9、NA溶解，沸水浴溶解，沸水浴5min5min，待冷卻，待冷卻后觀察溶液是否出現(xiàn)藍色。后觀察溶液是否出現(xiàn)藍色。1.1.共有共有“三次過濾，兩次析出，七次攪拌三次過濾，兩次析出，七次攪拌”2.2.加入加入“兩次蒸餾水，三次兩次蒸餾水，三次NaCl溶液，一次酒精溶液，一次酒精”三、實驗小結(jié)三、實驗小結(jié)析出析出DNA效果好效果好DNA細小易碎細小易碎反應(yīng)條件反應(yīng)條件溶解溶解DNA9方法步驟方法步驟 加入物質(zhì)加入物質(zhì) 目的目的 1 1. .制備雞血細胞液制備雞血細胞液 檸檬酸鈉溶液檸檬酸鈉溶液 2 2. .提取雞血細胞細胞核物質(zhì)提取雞血細胞細胞核物質(zhì) 20 m120 m1 蒸餾水蒸餾水 3 3. .溶解

10、細胞核內(nèi)的溶解細胞核內(nèi)的 DNADNA 2 mo12 mo1 L L 的的 NaCINaCI 溶液溶液 4040mLmL 4 4. .析出含析出含 DNADNA 的黏稠物的黏稠物 蒸餾水蒸餾水 5 5. .濾取含濾取含 DNADNA 的黏稠物的黏稠物 多層紗布多層紗布 6 6. .將將 DNADNA 的黏稠物再溶解的黏稠物再溶解 2 mol2 molL L 的的 NaClNaCl 溶液溶液 20 mL20 mL 7 7. .過濾含過濾含 DNADNA 的的 NaCNaCl l 溶液溶液 兩層紗布兩層紗布 8 8. .提取含有雜質(zhì)較少的提取含有雜質(zhì)較少的DNADNA 冷卻的冷卻的 9595的酒精

11、的酒精 50 mL50 mL A A: :(1)(1)向試管中加入向試管中加入 0 0. .015 mol015 mol L L 的的 NaClNaCl 溶液溶液 5 5mLmL (2)(2)加入加入 DNADNA (3)4 mL(3)4 mL 二苯胺試劑二苯胺試劑 9 9. .DNADNA 的鑒定的鑒定 B B: :(1)(1)向試管中加入向試管中加入 0 0. .015mol015molL L 的的 NaClNaCl 溶液溶液 5 5mLmL (2)4 m(2)4 mL L 二苯胺試劑二苯胺試劑 防止血凝固防止血凝固使血細胞漲破使血細胞漲破溶解溶解DNADNA使使2mol/L2mol/L的

12、的NaClNaCl溶液稀釋至溶液稀釋至0.14mol/L0.14mol/L使得使得 DNA DNA最大限度地析出最大限度地析出使含使含DNADNA的黏稠物被留在紗布上的黏稠物被留在紗布上使含使含DNADNA的黏稠物盡可能多的溶解于溶液中的黏稠物盡可能多的溶解于溶液中除去含除去含DNADNA的濾液中的雜質(zhì)的濾液中的雜質(zhì)析出析出DNADNA A A出現(xiàn)藍色出現(xiàn)藍色 B B無變化無變化10112.2.實驗中實驗中NaClNaCl的物質(zhì)的量濃度為的物質(zhì)的量濃度為2 mol2 molL L和和0.14 mol0.14 molL L對對DNADNA有何影響有何影響? ?1.1.在在DNADNA的粗提取實驗

13、過程中，兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用是的粗提取實驗過程中，兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用是( )( )。A.A.稀釋血液、沖洗樣品稀釋血液、沖洗樣品B.B.使血細胞破裂、降低使血細胞破裂、降低NaClNaCl濃度使?jié)舛仁笵NADNA析出析出C.C.使血細胞破裂、增大使血細胞破裂、增大DNADNA溶解量溶解量 D.D.使血細胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的使血細胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的DNADNA答：答：B B答：前者是溶解答：前者是溶解DNADNA，后者是使，后者是使DNADNA析出析出反饋練習(xí)反饋練習(xí)123.DNA3.DNA遇二苯胺遇二苯胺( (沸水浴沸水浴) )會染成會染成( ) ( ) A. A.

14、磚紅色磚紅色 B.B.橘黃色橘黃色 C.C.紫色紫色 D.D.藍色藍色4.4.提取雞血中的提取雞血中的DNADNA時，為什么要除去血液時，為什么要除去血液中的上清液中的上清液? ?答：答：DNADNA的提取，關(guān)鍵是對雜質(zhì)的去除，由于上清液是血液中的血漿部分，不含的提取，關(guān)鍵是對雜質(zhì)的去除，由于上清液是血液中的血漿部分，不含DNADNA，所以要，所以要除去上清液除去上清液( (含有蛋白質(zhì)含有蛋白質(zhì)) )。答：答：D D131、在制備雞血細胞液的過程中，加入檸檬酸鈉的目的是（ ）A .防止凝血 B. 加快DNA析出C .加快DNA溶解 D.加速凝血142、DNA的溶解度最低時，NaCl的物質(zhì)的量濃

15、度為（ ）A 2mol/l B 0.1mol/l C 0.14mol/l D 0.015mol/l3、在向溶解DNA的NaCl溶液中，不斷加入蒸餾水的目的是（ ）A 加快DNA溶解的速度B 加快溶解雜質(zhì)的速度C 減小DNA的溶解度，加快DNA析出D減小雜質(zhì)的溶解度，加快雜質(zhì)的析出154、向溶有、向溶有DNA的的2mol/L的的NaCl溶液中不斷加入蒸餾水溶液中不斷加入蒸餾水,在這個過程中在這個過程中DNA的溶解度的溶解度變化情況分別是變化情況分別是A 減小減小;減小減小 B 增大增大;增大增大C 先減小后增大先減小后增大 D增大增大; 減小減小5、欲使溶有、欲使溶有DNA的的2mol/L的的N

16、aCl溶液中的溶液中的DNA析出，最有效的辦法是析出，最有效的辦法是A 加蒸餾水加蒸餾水 B 加礦泉水加礦泉水C 加清水加清水 D 加生理鹽水加生理鹽水166、與析出、與析出DNA粘稠物有關(guān)的敘述，不正確的是粘稠物有關(guān)的敘述，不正確的是A 操作時緩慢滴加蒸餾水，降低操作時緩慢滴加蒸餾水，降低DNA的溶解度的溶解度B 操作時用玻棒輕緩攪拌以保證操作時用玻棒輕緩攪拌以保證DNA分子的完整分子的完整C 加蒸餾水可以同時降低加蒸餾水可以同時降低DNA和蛋白質(zhì)的溶解度和蛋白質(zhì)的溶解度D 當絲狀粘稠物不再增加時，當絲狀粘稠物不再增加時，NaCl溶液的濃度可以認為是溶液的濃度可以認為是0.14mol/L7、

17、你能采用其他方法對、你能采用其他方法對DNA進行鑒定嗎？進行鑒定嗎？用甲基綠染液。結(jié)果絲狀呈現(xiàn)綠色。用甲基綠染液。結(jié)果絲狀呈現(xiàn)綠色。178、DNA遇二苯胺會染成（沸水?。〢 硅紅色 B 紅色 C 紫色 D 藍色1819四、實驗原理拓展介紹。四、實驗原理拓展介紹。1.DNA1.DNA的釋放。的釋放。 DNADNA主要在雞血細胞的細胞核內(nèi)，正常情況下不會釋放出來，蒸餾水對于雞血細胞是一種低滲主要在雞血細胞的細胞核內(nèi)，正常情況下不會釋放出來，蒸餾水對于雞血細胞是一種低滲液，水分可以大量進入血細胞，使之漲破，同時加上玻璃棒快速攪拌的機械作用，加速血細胞的液，水分可以大量進入血細胞，使之漲破，同時加上玻

18、璃棒快速攪拌的機械作用，加速血細胞的細胞膜和核膜的破裂。但釋放出來的大量細胞膜和核膜的破裂。但釋放出來的大量DNADNA與與RNARNA、蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，即釋放的不是純凈的、蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，即釋放的不是純凈的DNADNA，常稱為常稱為DNADNA核蛋白。核蛋白。2.DNA2.DNA與蛋白質(zhì)分離。與蛋白質(zhì)分離。 在高濃度（在高濃度（2mol/L2mol/L）的氯化鈉溶液中，核蛋白易溶解，釋放出的）的氯化鈉溶液中，核蛋白易溶解，釋放出的DNADNA也溶解在高濃度的氯化鈉也溶解在高濃度的氯化鈉溶液中溶液中3.DNA3.DNA的析出與獲取。的析出與獲取。 因為因為DNADNA在低濃度（在低濃度（ 0.14mol/L0.14mol/L ）的氯化鈉溶液中溶解度小，而蛋白質(zhì)的在其中的溶解度大。）的氯化鈉溶液中溶解度小，而蛋白質(zhì)的在其中的溶解度大。所以在向含所以在向含DNADNA的高濃度的氯化鈉溶液中加入