超聲波提取腎蕨總黃酮及辨別

1、超聲波提取腎蕨總黃酮及辨別黃鎖義，羅建華，蒙春越，李容【關(guān)鍵詞】超聲波提??；，腎蕨；，總黃酮；，辨別摘要：目的為充分利用腎蕨植物資源，幸免資源的浪費(fèi)，探 討腎蕨植物總黃酮的提取及辨別方式。方式采納超聲波乙醇浸提法從 腎蕨植物中提取黃酮類物質(zhì)，對(duì)所提取的黃酮類物質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證，并用 紫外分光光度法測(cè)定含量。結(jié)果測(cè)得樣品中總黃酮的含量為9 mg/ml, 回收率為，其純度和產(chǎn)率均較高。結(jié)論該方式采納全物理進(jìn)程，無任 何污染，是提取腎蕨植物黃酮類物質(zhì)的有效途徑。關(guān)鍵詞：超聲波提??；腎蕨；總黃酮；辨別The Total Flavanone of Nephrolepis cordifolia (L.) Pre

2、sl Extraction and the Identification by Ultrasonic WaveAbstract： Objective To investigate the extraction and distinguishing method of total flavanone of Nephrolepis cordifolia (L. ) Presl. MethodsThe flavonoids were extracted by ethanol as the solvent from Nephrolepis cordifolia (L. ) presl with ult

3、rasonic wave and ethanol flavanone of Nephrolepis cordifolia (L.) Presl was checked and determined by content of the total flavanone of nephrolepis cordifolia (L.) Presl obtained by this method was C= mg/ml and the rate of recovery was %. ConclusionThis text provides the extraction and purifying met

4、hods to get the outcome and the purity of the method is a purely physical process and has no pollution. It is an ideal way to extract the flavanone of Nephrolepis cordifolia (L. ) Presl.Key words： Ultrasonic wave extraction； Nephrolepis cordifolia (L. ) Presl； Total flavanone； Identification蕨類植物是具有椎

5、管制的泡子植物，全世界現(xiàn)有蕨類植物約 12 000種。散布于熱帶、亞熱帶為多。喜生擅長溫暖陰濕的叢林地帶, 我國約有2 600種。其中可供藥用的約300余種，藥用蕨類植物因其 散布普遍、資源豐碩，歷年來為民間所習(xí)用。為擴(kuò)大藥源，最近幾年 來對(duì)其研究慢慢重視起來。藥用蕨類植物的化學(xué)成份較復(fù)雜，其中具 有生物活性的成份要緊有酚類化合物、黃酮類成份、生物堿類、笛體、 三葩類化臺(tái)物、糅質(zhì)、氨基酸及脂肪酸等1L腎蕨，又名石黃皮、狗 駱卵、圓羊齒，連年生草本，高3060 emo地生或附生于溪邊下、石 縫中或樹干上。主產(chǎn)于我國西南及福建、臺(tái)灣、廣東、廣西、浙江、 湖南。其藥用部位為骨碎補(bǔ)科植物腎蕨(Neph

6、rolepis cordifolia (L.) Presl.)的塊莖或全草。性味功效為：甘、澀、涼。清 肺止咳，止血，清熱利濕。用全草煎服可治濕熱黃疸；地莖加糖濃煎 沖酒服，可醫(yī)治疝氣；配杉樹尖、夏枯草、野蘿卜菜煎服，可治淋濁、 小便點(diǎn)滴、疼痛難忍2。還具有專門好的抗菌、抗微生物、抗腫瘤 等作用3o最近幾年來，超聲技術(shù)應(yīng)用于提取植物中的生物堿、甘 類、生物活性物質(zhì)、動(dòng)物組織漿的毒質(zhì)等研究己有報(bào)導(dǎo)4, 5,說明 其具有能耗低、效率高、不破壞有效成份的特點(diǎn)。很多研究說明，利 用超聲波產(chǎn)生的強(qiáng)烈振動(dòng)、高的加速度、強(qiáng)烈的空化效應(yīng)、攪拌作用 等，可加速植物材料中的有效成份進(jìn)入溶劑，從而增加有效成份的提

7、取率，縮短提取時(shí)刻，而且還可幸免高溫對(duì)提取成份的阻礙5。但 超聲技術(shù)應(yīng)用于提取蕨類植物中黃酮類物質(zhì)的研究尚未見報(bào)導(dǎo)，本文 報(bào)導(dǎo)用超聲波提取腎蕨植物總黃酮及辨別。1儀器與試劑儀器KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器）； UV755B紫外可見分光光度計(jì)（上海分析儀器總廠）；ZFI型三用紫外分 析儀（上海顧村光電儀器廠）；SHBIII循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城 科工貿(mào)）。試劑95%乙醇AR；亞硝酸鈉AR；硝酸鋁AR；正丁醇AR;氫 氧化鈉AR；三氯化鋁AR；鹽酸AR；氨水AR；鎂粉AR;乙酸鎂AR;冰醋 酸AR；乙酸乙酯AR；蘆】標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢定所）;新鮮腎蕨植物采自廣西

8、金秀縣。2方式與結(jié)果總黃酮成份提取取新鮮腎蕨植物，烘干，粉碎。稱取腎蕨植 物粉末約6 g,加80 ml 95%乙醇，超聲波提取h,抽濾。濾渣再加 80 ml 95 %乙醇，超聲波提取h,抽濾，歸并兩次濾液，減壓回收乙 醇至濾液僅剩25 ml為止，放置250 ml容量瓶中，用60%乙醇稀釋至 刻度，得樣品液。測(cè)定方式依據(jù)以蘆丁為對(duì)照品測(cè)定腎蕨植物中總黃酮的含 量，加入鋁離子試劑，同時(shí)操縱適宜pH值，使黃酮化合物與鋁鹽形成 絡(luò)合物，在可見光區(qū)能取得穩(wěn)固的特點(diǎn)吸收峰。定量實(shí)驗(yàn)總黃酮的含量測(cè)定波長的選擇取樣品液適量，在ml 5%亞硝酸鈉溶液存在的堿 性條件下，經(jīng)硝酸鋁顯色后，以試劑為空白參比液在420

9、700nni波長 范圍測(cè)定絡(luò)合物的吸光度，絡(luò)合物于510 nm波優(yōu)勢(shì)有最大吸收，故測(cè) 按時(shí)選用此波長。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制別離周密吸取蘆丁對(duì)照液(mg/ml), , ml于ml容量瓶中，別離加入5%亞硝酸鈉溶液ml, 搖勻，靜置6 min；再加10%硝酸鋁溶液ml,搖勻，靜置6 min；再 加4%氫氧化鈉溶液ml,用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置12 min, 以試劑作空白，于510nm處測(cè)吸光度。吸光度測(cè)定結(jié)果見表1。依照 表1得回歸方程：A=1+ 4C, r= 9o提取物含量的測(cè)定周密吸取樣品液ml,置ml容量瓶，按 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備方式測(cè)定吸光度A二，依照回歸方程：A=1+ 4C,計(jì) 算樣品中

10、總黃酮的含量O 9 mg/mlo表1紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定（略）回收實(shí)驗(yàn)周密量取樣品液ml,加入標(biāo)準(zhǔn)蘆丁對(duì)照品ml （mg/ml）,同前樣品測(cè)定的操作方式測(cè)定吸光度，求出回收率為%。定性實(shí)驗(yàn)-總黃酮的辨別顏色反映紫外光下呈色反映：取該樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，在 可見光下呈灰黃色，在紫外光下呈灰褐色并有熒光斑點(diǎn)。濃氨水反映: 取該樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，將濾紙?jiān)诎彼戏窖琺in,當(dāng)即在紫外光 下觀看，呈極明顯的黃褐色熒光斑點(diǎn)。三氯化鋁反映：取樣品溶液點(diǎn) 在濾紙上，滴加1 %三氯化鋁乙醇溶液，吹干。在可見光下呈灰黃色, 在紫外光下呈黃色熒光斑點(diǎn)。乙酸鎂反映：取樣品溶液點(diǎn)在濾紙上， 滴加1%乙酸鎂甲醇溶液，

11、吹干，紫外光下呈黃色斑點(diǎn)。鹽酸鎂粉反映: 取乙醇提取液1ml于試管中加鎂粉，再加入濃鹽酸數(shù)滴（1次加入）, 在泡沫處呈紫紅色。紙層析取樣品溶液10 U 1點(diǎn)在濾紙上。用正丁醇：醋酸： 水=4： 1： 5為展開劑，上行展開5 h,掏出晾干。噴1%氯化鋁乙醇溶 液。吹干后于紫外光下，可見熒光斑點(diǎn)。3討論實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，本實(shí)驗(yàn)方式工藝簡單，回收率為,利用本 文所提供的超聲波提取、純化方式而取得的黃酮類物質(zhì)其純度較高。 超聲波能夠強(qiáng)化乙醇浸提法，達(dá)到省時(shí)、高效、節(jié)能的目的，此方式 采納全物理進(jìn)程，無任何污染，是一層次想的提取黃酮類物質(zhì)的途徑, 具有廣漠的應(yīng)用前景。黃酮類化合物是一大類天然產(chǎn)物，普遍存在于

12、植物界，是許 多中草藥的有效成份。在自然界中最多見的是黃酮和黃酮醇，其它包 括雙氫黃（醇）、異黃酮、雙黃酮、黃烷醇、查爾酮、橙酮、花色甘及 新黃酮類等6o天然來源的生物黃酮分子量小，能被人體迅速吸收, 能通過血腦屏障，能進(jìn)入脂肪組織，進(jìn)而表現(xiàn)出如下功能：排除疲勞、 愛惜血管預(yù)防動(dòng)脈硬化、擴(kuò)張毛細(xì)血管、疏通微循環(huán)、抗脂肪氧化、 抗衰老、活化大腦及其它臟器細(xì)胞的功能。黃酮類化合物具有抗癌、 抗腫瘤、抗心腦血管疾病、抗炎鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)劑、降血糖、醫(yī)治骨質(zhì) 疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗輻射等作用最近幾 年來，世界上掀起了植物藥開發(fā)的熱潮，植物藥以其天然低毒的特點(diǎn) 倍受青睞，而黃酮類化合物以其廣譜

13、的藥理作用引人注視。當(dāng)前，天 然產(chǎn)物有效成份的研究與開發(fā)方興未艾，從中提取分離的有效成份應(yīng) 用于醫(yī)藥、保健食物、食物添加劑和化妝品等行業(yè)，深受消費(fèi)者青睞, 因此具有廣漠的進(jìn)展前景。木文實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，腎蕨植物中含有較為 豐碩的黃酮。因此，腎蕨植物具有普遍開發(fā)和利用價(jià)值，值得綜合利 用，增強(qiáng)資源開發(fā)。參考文獻(xiàn)：1徐冬英.藥用蕨類植物的研究進(jìn)展J.中醫(yī)藥信息, 1997, (4)： 20.2譚樹輝,潘超美.中草藥野外識(shí)別手冊(cè)(一)M.廣州: 廣東科技出版社，2004： 30.3趙莉，楊文鋅.蕨類植物的活性成份研究進(jìn)展J. 中藥材，2004, 27(6) :452.4劉祥義.超聲波提取元寶楓葉總黃酮方式研究J.云南化工,2003, 30 (1)： 27.5謝明杰，宋明，鄒翠霞，等.超聲波提取大豆異黃酮 JJ .大豆科學(xué),2004, 23(1):75.6夏杏洲，張輝，魏傳晚.榕樹葉中黃酮類化合物的提 取條件研究J.食物研究與開發(fā)，2002, 23(5):35.7華光軍,郭勇.黃酮類化合物藥理研究進(jìn)展J.廣 東藥學(xué)，1999, 9 (4)： 9.8