流式細(xì)胞術(shù)原理與應(yīng)用簡(jiǎn)介

1、流式細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞術(shù)原理與應(yīng)用簡(jiǎn)介原理與應(yīng)用簡(jiǎn)介湖北中醫(yī)學(xué)院中醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)中心 田代志流式細(xì)胞術(shù)發(fā)展史 1930年年caspersson和和thorell開始致力于開始致力于細(xì)細(xì)胞計(jì)數(shù)胞計(jì)數(shù)的研究的研究 1934年年moldaven最早設(shè)想細(xì)胞檢測(cè)自動(dòng)化，最早設(shè)想細(xì)胞檢測(cè)自動(dòng)化，用光電儀記錄流過一根用光電儀記錄流過一根毛細(xì)管毛細(xì)管的細(xì)胞的細(xì)胞 1940年年coons提出結(jié)合提出結(jié)合熒光素?zé)晒馑氐牡目贵w抗體去標(biāo)記去標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)的特定蛋白細(xì)胞內(nèi)的特定蛋白 1949年年wallace coulter申請(qǐng)了在申請(qǐng)了在懸液中計(jì)懸液中計(jì)數(shù)粒子數(shù)粒子的方法的專利的方法的專利 1950年年caspersson用顯微

2、用顯微uv-vis檢測(cè)細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞流式細(xì)胞術(shù)發(fā)展史 1953年年croslannd-taylor應(yīng)用應(yīng)用分層鞘流分層鞘流原理，原理，成功設(shè)計(jì)紅細(xì)胞光學(xué)自動(dòng)計(jì)數(shù)器成功設(shè)計(jì)紅細(xì)胞光學(xué)自動(dòng)計(jì)數(shù)器 1969年年van dilla及其同事在及其同事在los alamos, nm發(fā)明第一臺(tái)發(fā)明第一臺(tái)熒光熒光檢測(cè)細(xì)胞計(jì)檢測(cè)細(xì)胞計(jì) 1972年年herzenberg研制出研制出細(xì)胞分選細(xì)胞分選器器 1975年年kohler等提出等提出單克隆抗體單克隆抗體技術(shù)，為技術(shù)，為細(xì)胞研究提供大量的特異免疫試劑細(xì)胞研究提供大量的特異免疫試劑 大量廠家不斷生產(chǎn)流式細(xì)胞儀大量廠家不斷生產(chǎn)流式細(xì)胞儀流式細(xì)胞術(shù)發(fā)展史 目前國(guó)內(nèi)主要

3、流式細(xì)胞儀廠家：目前國(guó)內(nèi)主要流式細(xì)胞儀廠家： beckton dickinson(bd)公司公司 backman coulter公司公司流式細(xì)胞儀構(gòu)造 流式細(xì)胞儀流式細(xì)胞儀(flow cytometer，fcm)的結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)分五部分：分五部分： 流動(dòng)室及液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)流動(dòng)室及液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng) 激光光源及光束成形系統(tǒng)激光光源及光束成形系統(tǒng) 光學(xué)系統(tǒng)光學(xué)系統(tǒng) 信號(hào)檢測(cè)與存貯、顯示、分析系統(tǒng)信號(hào)檢測(cè)與存貯、顯示、分析系統(tǒng) 細(xì)胞分選及濃縮系統(tǒng)細(xì)胞分選及濃縮系統(tǒng) 流式細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry，fcm)圖示如下頁：圖示如下頁：流式細(xì)胞儀構(gòu)造模式圖流式細(xì)胞儀構(gòu)造示意圖流動(dòng)室與液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng) 流

4、動(dòng)室流動(dòng)室是儀器核心部件，被測(cè)樣品在此與激光相是儀器核心部件，被測(cè)樣品在此與激光相交。交。 流動(dòng)室由石英玻璃制成，中央有一長(zhǎng)方形小孔，流動(dòng)室由石英玻璃制成，中央有一長(zhǎng)方形小孔，供單個(gè)細(xì)胞通過。供單個(gè)細(xì)胞通過。 流動(dòng)室內(nèi)充滿了鞘液，其作用是將樣品環(huán)形包繞。流動(dòng)室內(nèi)充滿了鞘液，其作用是將樣品環(huán)形包繞。 鞘液流速穩(wěn)定，樣品流在鞘流的環(huán)包下形成鞘液流速穩(wěn)定，樣品流在鞘流的環(huán)包下形成流體流體動(dòng)力學(xué)聚焦動(dòng)力學(xué)聚焦，從而得到準(zhǔn)確的細(xì)胞熒光信息。，從而得到準(zhǔn)確的細(xì)胞熒光信息。 流動(dòng)室上裝有壓電晶體，受到振蕩信號(hào)可發(fā)生振流動(dòng)室上裝有壓電晶體，受到振蕩信號(hào)可發(fā)生振動(dòng)。動(dòng)。 流動(dòng)室與液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)激光光源及光束成形系

5、統(tǒng) 目前臺(tái)式機(jī)目前臺(tái)式機(jī)fcm，大多采用氬離子氣體激，大多采用氬離子氣體激光器。光器。 激光光束在到達(dá)流動(dòng)室前，先經(jīng)過透鏡聚激光光束在到達(dá)流動(dòng)室前，先經(jīng)過透鏡聚焦，形成約焦，形成約2266m的光斑，這樣激光能的光斑，這樣激光能量較強(qiáng)，以激發(fā)熒光染料。量較強(qiáng)，以激發(fā)熒光染料。 臺(tái)式機(jī)的整個(gè)光路是封閉的，在安裝時(shí)由臺(tái)式機(jī)的整個(gè)光路是封閉的，在安裝時(shí)由工程師調(diào)試完畢后，無需用戶作任何調(diào)節(jié)，工程師調(diào)試完畢后，無需用戶作任何調(diào)節(jié)，使用十分方便。使用十分方便。激光光源及光束成形系統(tǒng)光學(xué)系統(tǒng) fcm的光學(xué)系統(tǒng)由若干組透鏡、濾光片和的光學(xué)系統(tǒng)由若干組透鏡、濾光片和小孔組成，它們將不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào)分小孔組成，

6、它們將不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào)分別送入到不同的電子測(cè)控器。別送入到不同的電子測(cè)控器。 主要光學(xué)原件：主要光學(xué)原件：濾光片濾光片(filter) 長(zhǎng)通濾片長(zhǎng)通濾片 long pass filter, lp 短通濾片短通濾片 short pass filter, sp 帶通濾片帶通濾片 band pass filter, bp長(zhǎng)通濾片短通濾片帶通濾片信號(hào)檢測(cè)與分析 當(dāng)細(xì)胞攜帶熒光素標(biāo)記物，通過激光照射當(dāng)細(xì)胞攜帶熒光素標(biāo)記物，通過激光照射時(shí)，產(chǎn)生代表細(xì)胞內(nèi)不同物質(zhì)、不同波長(zhǎng)時(shí)，產(chǎn)生代表細(xì)胞內(nèi)不同物質(zhì)、不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào)，這些信號(hào)以細(xì)胞為中心，向的熒光信號(hào)，這些信號(hào)以細(xì)胞為中心，向空間空間360度立體角發(fā)射

7、，產(chǎn)生度立體角發(fā)射，產(chǎn)生散射光散射光和和熒光熒光信號(hào)。信號(hào)。 以激發(fā)光光源波長(zhǎng)以激發(fā)光光源波長(zhǎng)488nm為例示意圖：為例示意圖：熒光信號(hào)示意圖散射光信號(hào) 散射光信號(hào)不依賴任何樣品的制備技術(shù)散射光信號(hào)不依賴任何樣品的制備技術(shù)（如染色），因此稱為細(xì)胞的物理參數(shù)。（如染色），因此稱為細(xì)胞的物理參數(shù)。 前向散射角前向散射角(forward scatter，fsc)：與細(xì)胞與細(xì)胞的大小有關(guān)，在的大小有關(guān)，在fcm應(yīng)用中，常取應(yīng)用中，常取fsc作閾值，作閾值，來排除樣品中的各種碎片。來排除樣品中的各種碎片。 側(cè)向散射角側(cè)向散射角(side scatter，ssc)：與激光束正與激光束正交交90度的散射光信

8、號(hào)，與細(xì)胞粒度及復(fù)雜程度度的散射光信號(hào)，與細(xì)胞粒度及復(fù)雜程度正相關(guān)。正相關(guān)。 散射光信號(hào)波長(zhǎng)與激光相同。散射光信號(hào)波長(zhǎng)與激光相同。散射光信號(hào)示意圖right angle light detectora a cell complexityforward light detector a a cell surface areaincident light source熒光信號(hào) 一種是細(xì)胞自身在激光照射下發(fā)出微弱的一種是細(xì)胞自身在激光照射下發(fā)出微弱的熒光信號(hào)，稱熒光信號(hào)，稱自發(fā)熒光自發(fā)熒光。 一種是經(jīng)過特異熒光素標(biāo)記后，受激發(fā)光一種是經(jīng)過特異熒光素標(biāo)記后，受激發(fā)光照射得到的熒光信號(hào)，通過對(duì)這類熒光信

9、照射得到的熒光信號(hào)，通過對(duì)這類熒光信號(hào)的檢測(cè)和定量就能了解所研究細(xì)胞參數(shù)號(hào)的檢測(cè)和定量就能了解所研究細(xì)胞參數(shù)的存在與定量。的存在與定量。常用熒光染料 目前臺(tái)式機(jī)目前臺(tái)式機(jī)fcm配置配置 488nm激光管常用染料有激光管常用染料有 pi (propidium iodide) pe (phycorey- thrin) fitc (fluorescein isothiocyanate) percp (peridinin chlorophyll protein) pe-cy5等等 633nm激光管常用染料有激光管常用染料有 apc apc-cyfcm測(cè)量數(shù)據(jù)的存貯、顯示和分析 目前目前fcm所采用的都

10、是多參數(shù)指標(biāo)，熒光所采用的都是多參數(shù)指標(biāo)，熒光參數(shù)標(biāo)記物最多可達(dá)參數(shù)標(biāo)記物最多可達(dá)4個(gè)，數(shù)據(jù)的存貯采用個(gè)，數(shù)據(jù)的存貯采用列表排隊(duì)方式，可節(jié)省存貯空間。列表排隊(duì)方式，可節(jié)省存貯空間。 數(shù)據(jù)文件為二進(jìn)制文件，缺乏直觀性，數(shù)數(shù)據(jù)文件為二進(jìn)制文件，缺乏直觀性，數(shù)據(jù)的顯示常用以下幾種方式：據(jù)的顯示常用以下幾種方式： 直方圖直方圖 散點(diǎn)圖散點(diǎn)圖 等高線圖等高線圖 密度圖密度圖 三維圖三維圖直方圖 直方圖直方圖(distribution histogram) 橫坐標(biāo)代表熒光信號(hào)或散射光信號(hào)相對(duì)強(qiáng)度，橫坐標(biāo)代表熒光信號(hào)或散射光信號(hào)相對(duì)強(qiáng)度，單位是道數(shù)，可以是線性或?qū)?shù)坐標(biāo)。單位是道數(shù)，可以是線性或?qū)?shù)坐標(biāo)。

11、縱坐標(biāo)一般是細(xì)胞數(shù)?？v坐標(biāo)一般是細(xì)胞數(shù)。散點(diǎn)圖 散點(diǎn)圖散點(diǎn)圖(dot plot) x坐標(biāo)為該細(xì)胞一參數(shù)相對(duì)含量，坐標(biāo)為該細(xì)胞一參數(shù)相對(duì)含量，y坐標(biāo)為該坐標(biāo)為該細(xì)胞另一參數(shù)的含量，可以將細(xì)胞亞群分開。細(xì)胞另一參數(shù)的含量，可以將細(xì)胞亞群分開。等高線圖和密度圖三維圖設(shè)門分析 可以通過設(shè)可以通過設(shè)“門門” (gate)，分析、分，分析、分選感興趣的細(xì)胞。選感興趣的細(xì)胞。fcm的分辨率 分辨率是衡量分辨率是衡量fcm測(cè)量精度的指標(biāo)，通常測(cè)量精度的指標(biāo)，通常用變異系數(shù)用變異系數(shù)cv表示。表示。 一般要求一般要求cv8，最好，最好cv15% dna倍體分析：倍體分析：結(jié)合臨床病理的形態(tài)學(xué)診斷，對(duì)一些惡性腫瘤

12、進(jìn)行早期診結(jié)合臨床病理的形態(tài)學(xué)診斷，對(duì)一些惡性腫瘤進(jìn)行早期診斷，跟蹤隨訪和早期治療，大大提高一些腫瘤的治愈率和斷，跟蹤隨訪和早期治療，大大提高一些腫瘤的治愈率和生存率。尤其對(duì)一些細(xì)胞抽吸物、體液、組織液的脫落細(xì)生存率。尤其對(duì)一些細(xì)胞抽吸物、體液、組織液的脫落細(xì)胞的分析，意義尤為重要。胞的分析，意義尤為重要。 增殖狀態(tài)分析：增殖狀態(tài)分析：反映了腫瘤的生長(zhǎng)速度和侵襲性反映了腫瘤的生長(zhǎng)速度和侵襲性正常人骨髓細(xì)胞dna分析(modifit)多發(fā)性骨髓瘤fcm在腫瘤早期診斷和鑒別診斷中的作用 dna非整倍體的出現(xiàn)可能是癌前病變發(fā)生早期癌非整倍體的出現(xiàn)可能是癌前病變發(fā)生早期癌變的一個(gè)重要標(biāo)志變的一個(gè)重要標(biāo)

13、志 在病理形態(tài)學(xué)不能做出診斷前可提供確切診斷信在病理形態(tài)學(xué)不能做出診斷前可提供確切診斷信息息 dna非整倍體的交界瘤應(yīng)按惡性對(duì)待非整倍體的交界瘤應(yīng)按惡性對(duì)待 形態(tài)學(xué)表現(xiàn)良性的腫瘤出現(xiàn)非整倍體提示惡變可形態(tài)學(xué)表現(xiàn)良性的腫瘤出現(xiàn)非整倍體提示惡變可能能 dna指數(shù)可作為判斷間葉組織腫瘤良惡性的輔助指數(shù)可作為判斷間葉組織腫瘤良惡性的輔助指標(biāo)指標(biāo)細(xì)胞凋亡分析 細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死是兩個(gè)不同的過程細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死是兩個(gè)不同的過程 細(xì)胞凋亡的主要檢查手段細(xì)胞凋亡的主要檢查手段 形態(tài)學(xué)檢測(cè)形態(tài)學(xué)檢測(cè) ladders實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn) 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) 與凋亡相關(guān)的病理過程與凋亡相關(guān)的病理過程 hiv 自身免

14、疫性疾病自身免疫性疾病 腫瘤腫瘤細(xì)胞凋亡分析 細(xì)胞凋亡的主要指標(biāo)細(xì)胞凋亡的主要指標(biāo) 細(xì)胞內(nèi)酶改變：細(xì)胞內(nèi)酶改變：caspase-3活化活化 細(xì)胞膜不對(duì)稱性改變，磷脂酰絲氨酸外翻，細(xì)胞膜不對(duì)稱性改變，磷脂酰絲氨酸外翻，但仍然保持膜的完整性：但仍然保持膜的完整性：annexin v/pi 細(xì)胞核細(xì)胞核dna的斷裂改變：的斷裂改變：tunnel實(shí)驗(yàn)（實(shí)驗(yàn)（apo-brdu，apo-direct） 凋亡相關(guān)蛋白：凋亡相關(guān)蛋白： fas bcl-2細(xì)胞凋亡pi分析pi - fluorescenceevents調(diào)亡細(xì)胞調(diào)亡細(xì)胞正常正常g0/g1期細(xì)胞期細(xì)胞細(xì)胞凋亡active caspases-3細(xì)胞凋亡

15、caspases-3細(xì)胞凋亡annexin v細(xì)胞凋亡annexin v細(xì)胞凋亡brdufcm的應(yīng)用免疫學(xué) 淋巴細(xì)胞免疫分型淋巴細(xì)胞免疫分型 淋巴細(xì)胞亞群分析淋巴細(xì)胞亞群分析 cd4絕對(duì)計(jì)數(shù)絕對(duì)計(jì)數(shù) hiv的診斷與研究的診斷與研究 淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 cd4/cd8分析分析 cd4絕對(duì)計(jì)數(shù)絕對(duì)計(jì)數(shù) t細(xì)胞活化細(xì)胞活化 細(xì)胞移植的交叉配型和免疫狀態(tài)監(jiān)測(cè)細(xì)胞移植的交叉配型和免疫狀態(tài)監(jiān)測(cè)fcm的免疫學(xué)應(yīng)用 免疫功能和免疫調(diào)控的研究免疫功能和免疫調(diào)控的研究 淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的活化淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的活化 細(xì)胞因子的研究細(xì)胞因子的研究 淋巴細(xì)胞的增殖淋巴細(xì)胞的增殖 樹突狀細(xì)胞的研究樹突狀細(xì)胞的研究 hl

16、a-b27檢測(cè)檢測(cè)淋巴細(xì)胞亞群分析 使用特異的單克隆抗體，進(jìn)行多色分析，使用特異的單克隆抗體，進(jìn)行多色分析，同時(shí)分析淋巴細(xì)胞上多種抗原的表達(dá)，可同時(shí)分析淋巴細(xì)胞上多種抗原的表達(dá)，可以將淋巴細(xì)胞亞群區(qū)分開，進(jìn)行定量分析以將淋巴細(xì)胞亞群區(qū)分開，進(jìn)行定量分析 各淋巴細(xì)胞亞群的各淋巴細(xì)胞亞群的百分含量百分含量 淋巴細(xì)胞亞群的淋巴細(xì)胞亞群的絕對(duì)計(jì)數(shù)絕對(duì)計(jì)數(shù)臨床意義 了解在不同情況下體內(nèi)免疫功能狀態(tài)了解在不同情況下體內(nèi)免疫功能狀態(tài) 輔助臨床疾病的診斷輔助臨床疾病的診斷 探索疾病的發(fā)病機(jī)理、病程、預(yù)后探索疾病的發(fā)病機(jī)理、病程、預(yù)后 監(jiān)測(cè)、指導(dǎo)臨床治療方案監(jiān)測(cè)、指導(dǎo)臨床治療方案 免疫系統(tǒng)疾病免疫系統(tǒng)疾病 免疫

17、缺陷病，免疫缺陷病，aids 移植病人排斥反應(yīng)或移植物抗宿主反應(yīng)的檢測(cè)移植病人排斥反應(yīng)或移植物抗宿主反應(yīng)的檢測(cè) 腫瘤病人化療后免疫力檢測(cè)腫瘤病人化療后免疫力檢測(cè)淋巴細(xì)胞亞群分析 根據(jù)功能，淋巴細(xì)胞主要分為根據(jù)功能，淋巴細(xì)胞主要分為 b淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞（cd19+），與體液免疫有關(guān)），與體液免疫有關(guān) t淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞（cd3+），與細(xì)胞免疫有關(guān)），與細(xì)胞免疫有關(guān) 總總t和總和總b可以用來判斷某些免疫缺陷和自身免疫可以用來判斷某些免疫缺陷和自身免疫性疾病性疾病 nk細(xì)胞細(xì)胞（cd3- cd16+ 56+），行使免疫監(jiān)），行使免疫監(jiān)控功能，能夠介導(dǎo)對(duì)某些腫瘤細(xì)胞和病毒感控功能，能夠介導(dǎo)對(duì)某些腫瘤細(xì)

18、胞和病毒感染細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用。染細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用。simultest imk-lymphocyte 試劑盒試劑盒 cd45/cd14，leucogate：確定淋巴細(xì)胞門，評(píng)：確定淋巴細(xì)胞門，評(píng)估門的有效性，并自動(dòng)計(jì)算淋巴細(xì)胞亞群占門估門的有效性，并自動(dòng)計(jì)算淋巴細(xì)胞亞群占門內(nèi)淋巴細(xì)胞的比例，排除門內(nèi)雜細(xì)胞的干擾內(nèi)淋巴細(xì)胞的比例，排除門內(nèi)雜細(xì)胞的干擾 1/ 2a，陰性對(duì)照，陰性對(duì)照：確定淋巴細(xì)胞的陰性界值，：確定淋巴細(xì)胞的陰性界值，評(píng)估實(shí)驗(yàn)的非特異染色評(píng)估實(shí)驗(yàn)的非特異染色 cd3/cd19：分析：分析t淋巴細(xì)胞和淋巴細(xì)胞和b淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 cd3/cd4：分析：分析t輔助輔助/誘導(dǎo)細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)

19、胞 cd3/cd8：分析：分析t抑制抑制/細(xì)胞毒性細(xì)胞細(xì)胞毒性細(xì)胞 cd3/cd16+56：分析：分析t淋巴細(xì)胞和淋巴細(xì)胞和nk細(xì)胞細(xì)胞淋巴細(xì)胞雙色分析 leucogate：back-gating，準(zhǔn)確圈定，準(zhǔn)確圈定淋巴細(xì)胞門，并評(píng)估門的有效性淋巴細(xì)胞門，并評(píng)估門的有效性淋巴細(xì)胞雙色分析aids病人t細(xì)胞亞群分析fcm的應(yīng)用血液病學(xué) 白血病和淋巴瘤免疫分型白血病和淋巴瘤免疫分型 殘留白血病殘留白血病 造血干細(xì)胞計(jì)數(shù)造血干細(xì)胞計(jì)數(shù) pnhpnh診斷診斷 網(wǎng)織紅細(xì)胞分析網(wǎng)織紅細(xì)胞分析 血小板分析血小板分析 血小板膜糖蛋白分子的表達(dá)血小板膜糖蛋白分子的表達(dá) 血小板活化血小板活化 網(wǎng)織血小板分析網(wǎng)織血

20、小板分析fcm的應(yīng)用分子生物學(xué) 分選細(xì)胞后進(jìn)行分選細(xì)胞后進(jìn)行fish 分選細(xì)胞后進(jìn)行分選細(xì)胞后進(jìn)行pcr 流式細(xì)胞免疫表型與聚合酶鏈反應(yīng)及熒流式細(xì)胞免疫表型與聚合酶鏈反應(yīng)及熒光原位雜交（光原位雜交（pcr-fish）結(jié)合測(cè)定血液）結(jié)合測(cè)定血液cd4細(xì)胞中細(xì)胞中hiv特異的特異的dna或或rna 流式熒光原位雜交（流式熒光原位雜交（flow-fish）測(cè)定）測(cè)定染色體端粒長(zhǎng)度染色體端粒長(zhǎng)度性別選擇fcm在中醫(yī)藥研究中的應(yīng)用 我科室開展較多的有如下幾個(gè)方面的應(yīng)用：我科室開展較多的有如下幾個(gè)方面的應(yīng)用： 中藥對(duì)腫瘤細(xì)胞的中藥對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期及凋亡細(xì)胞周期及凋亡影響，抗腫瘤影響，抗腫瘤中藥成份的篩

21、選中藥成份的篩選 中藥對(duì)細(xì)胞表面（細(xì)胞因子、激素）中藥對(duì)細(xì)胞表面（細(xì)胞因子、激素）受體表達(dá)受體表達(dá)的的影響影響 中藥對(duì)細(xì)胞中藥對(duì)細(xì)胞粘附分子粘附分子表達(dá)的影響表達(dá)的影響 中藥對(duì)中藥對(duì)淋巴細(xì)胞亞群淋巴細(xì)胞亞群（反映免疫狀態(tài)）的影響（反映免疫狀態(tài)）的影響 針灸及中藥對(duì)針灸及中藥對(duì)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞內(nèi)酶的表達(dá)影響酶的表達(dá)影響 中藥對(duì)中藥對(duì)生精細(xì)胞生精細(xì)胞的影響研究的影響研究 中藥治療中藥治療艾滋病艾滋病的研究（我實(shí)驗(yàn)室僅提供技術(shù)支的研究（我實(shí)驗(yàn)室僅提供技術(shù)支持）持）本實(shí)驗(yàn)室流式細(xì)胞儀及應(yīng)用介紹 生產(chǎn)廠家：美國(guó)生產(chǎn)廠家：美國(guó)becton dickinson(bd)公司公司 型號(hào)：型號(hào)：facscalibur

22、激光器：激光器：488nm和和633nm各一個(gè)各一個(gè) 熒光通道（共熒光通道（共4通道通道6參數(shù)）參數(shù)） fsc及及ssc：480-495nm fl1：515-545nm fl2：564-606nm fl3：670nm fl4：653-667nm 技術(shù)參數(shù)技術(shù)參數(shù) 分析速度分析速度10000個(gè)個(gè)/秒，分選速度秒，分選速度700個(gè)個(gè)/秒。秒。 常用熒光染料光譜學(xué)特征常用熒光染料光譜學(xué)特征細(xì)胞周期分析pi單染細(xì)胞周期分析pi單染細(xì)胞周期分析modifit 分析細(xì)胞周期分析modifit 分析大鼠生精細(xì)胞分析pi單染細(xì)胞凋亡pi加annexin v雙染雙染fitc-annexin vpi淋巴細(xì)胞亞群分析cy5.5-cd3fitc-cd4pe-cd8培養(yǎng)細(xì)胞表面粘附分子表達(dá)培養(yǎng)細(xì)胞表面粘附分子表達(dá)fcm樣品來源 需要制備細(xì)胞懸液需要制備細(xì)胞懸液 血液、體液