動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)(講課)

1、12動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體制備單克隆抗體制備動(dòng)物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞核移植核移植（基礎(chǔ)）（基礎(chǔ)）3一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物機(jī)體內(nèi)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物機(jī)體內(nèi)取出相關(guān)的組織，將它分散成單取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)個(gè)細(xì)胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖?；?，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。1 1、概念：、概念：原理：原理：細(xì)胞增殖細(xì)胞增殖4動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官動(dòng)物的組織、器官細(xì)胞懸液細(xì)胞懸液10代細(xì)胞代細(xì)胞50代細(xì)胞代細(xì)胞傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)無限傳代無限傳代單個(gè)細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液

2、加培養(yǎng)液原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)胰蛋白酶或膠原蛋白酶胰蛋白酶或膠原蛋白酶剪碎剪碎動(dòng)物組織細(xì)胞間隙中含動(dòng)物組織細(xì)胞間隙中含有一定量蛋白質(zhì)有一定量蛋白質(zhì)2 2、過程、過程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)適動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)適宜的宜的PH為為7.27.4，此環(huán)境下，此環(huán)境下胃蛋白酶（胃蛋白酶（2.0）沒有活性，而胰沒有活性，而胰蛋白酶蛋白酶(7.2-8.4)的活性較高。的活性較高。563、能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？、能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)取材時(shí)，一般是取、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)取材時(shí)，一般是取胚胎組織或幼齡動(dòng)胚胎組織或幼齡動(dòng)物的組織或器官物的組織或器官，請(qǐng)解釋原因？，請(qǐng)解釋原因？不能不能，因?yàn)閯?dòng)物細(xì)

3、胞培養(yǎng)適宜的，因?yàn)閯?dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)適宜的PHPH為為7.27.47.27.4，此環(huán)境，此環(huán)境下胃蛋白酶沒有活性。下胃蛋白酶沒有活性。 胚胎組織或幼齡動(dòng)物的組織或器官胚胎組織或幼齡動(dòng)物的組織或器官生命力旺盛，生命力旺盛，分裂能力強(qiáng)分裂能力強(qiáng)探究探究2、如何將動(dòng)物組織分散成單個(gè)的細(xì)胞呢？、如何將動(dòng)物組織分散成單個(gè)的細(xì)胞呢？先用剪刀先用剪刀剪碎剪碎, ,后用后用胰蛋白酶胰蛋白酶處理處理74.什么叫什么叫細(xì)胞貼壁細(xì)胞貼壁？5.什么叫什么叫接觸抑制接觸抑制？ 懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。細(xì)胞貼壁。 當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就當(dāng)貼壁

4、細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。 探究探究6 6、如何理解原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？、如何理解原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？ 8 8、傳代培養(yǎng)的細(xì)胞都能一直傳代下去嗎？、傳代培養(yǎng)的細(xì)胞都能一直傳代下去嗎？9 9、有些為何能一直傳下去？、有些為何能一直傳下去？上述過程中，在第一培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是上述過程中，在第一培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)，之后轉(zhuǎn)移到其它培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是之后轉(zhuǎn)移到其它培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)不都能不都能8懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。稱為

5、細(xì)胞貼壁。 當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，就會(huì)停當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，就會(huì)停止分裂增殖，稱為接觸抑制。止分裂增殖，稱為接觸抑制。 原代培養(yǎng)：原代培養(yǎng)：9細(xì)胞細(xì)胞懸浮懸浮液液1010代代細(xì)胞細(xì)胞5050代代細(xì)胞細(xì)胞無限無限傳代傳代原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞株細(xì)胞系細(xì)胞系如何界定原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)；細(xì)如何界定原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)；細(xì)胞株和細(xì)胞系？胞株和細(xì)胞系？10動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官物的組織、器官細(xì)胞懸液細(xì)胞懸液10代細(xì)胞代細(xì)胞50代細(xì)胞代細(xì)胞無限傳代無限傳代原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)剪碎剪碎胰蛋白酶處理胰蛋白酶處理胰蛋白酶除了可胰

6、蛋白酶除了可消化細(xì)胞間的蛋消化細(xì)胞間的蛋白質(zhì)外，白質(zhì)外，長(zhǎng)時(shí)間長(zhǎng)時(shí)間作用也會(huì)消化細(xì)作用也會(huì)消化細(xì)胞膜蛋白胞膜蛋白，對(duì)細(xì)，對(duì)細(xì)胞有損傷作用，胞有損傷作用，因此必須控制好因此必須控制好胰蛋白酶的消化胰蛋白酶的消化時(shí)間。時(shí)間。細(xì)胞貼壁、接觸抑制細(xì)胞貼壁、接觸抑制培養(yǎng)液培養(yǎng)培養(yǎng)液培養(yǎng)一般而言，一般而言，10代以內(nèi)能保持代以內(nèi)能保持正常二倍體的正常二倍體的核型核型增殖會(huì)逐漸緩慢，增殖會(huì)逐漸緩慢，以至于完全停止，以至于完全停止，這時(shí)部分細(xì)胞的這時(shí)部分細(xì)胞的細(xì)胞核可能會(huì)發(fā)細(xì)胞核可能會(huì)發(fā)生變化，生變化，2 2、過程、過程111 1、無菌、無毒、無菌、無毒 2 2、營養(yǎng)（培養(yǎng)基成分）、營養(yǎng)（培養(yǎng)基成分） 3 3

7、、適宜的溫度和、適宜的溫度和PHPH值值 4 4、必要的氣體條件、必要的氣體條件（糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無機(jī)鹽、微量元素、（糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無機(jī)鹽、微量元素、血清、血漿血清、血漿等。等。）O O2 2和和COCO2 23 3、條件：、條件：添加一定量的抗生素添加一定量的抗生素定期更換培養(yǎng)液定期更換培養(yǎng)液培養(yǎng)液和培養(yǎng)器具無菌處理培養(yǎng)液和培養(yǎng)器具無菌處理培養(yǎng)基的不同是培養(yǎng)基的不同是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)最植物組織培養(yǎng)最重要的區(qū)別重要的區(qū)別36.5 +0.5度度 PH為為7.2-7.412 4 4、應(yīng)用、應(yīng)用 大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品（病毒疫苗、大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品（病毒

8、疫苗、干擾素、單克隆抗體）干擾素、單克隆抗體） 培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞可以用于檢測(cè)有毒物培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞可以用于檢測(cè)有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性 用于生理、病理、藥理等方面的研究，用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)13細(xì)胞的全能性細(xì)胞的全能性細(xì)胞株、細(xì)胞系細(xì)胞株、細(xì)胞系植株植株培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)結(jié)果獲得細(xì)胞獲得細(xì)胞或或細(xì)胞產(chǎn)物細(xì)胞產(chǎn)物快速繁殖、培育快速繁殖、培育無病毒植株等無病毒植株等培養(yǎng)目的培養(yǎng)目的動(dòng)物血清動(dòng)物血清植物激素植物激素培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖細(xì)胞增

9、殖原理原理動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較植物細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較141.1.動(dòng)物細(xì)胞核移植的概念、種類：動(dòng)物細(xì)胞核移植的概念、種類：2.2.體細(xì)胞核移植的過程：體細(xì)胞核移植的過程：3.3.體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景：體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景：4.4.體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題：體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題：15 將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成為一個(gè)新的胚胎，的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成為一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體（克隆動(dòng)物）這

10、個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體（克隆動(dòng)物）分分類類細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性容易細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性容易 細(xì)胞分化程度細(xì)胞分化程度高高，恢復(fù)全能性，恢復(fù)全能性不不容易容易概念：概念：1.1.動(dòng)物細(xì)胞核移植的概念、種類：動(dòng)物細(xì)胞核移植的概念、種類：16例：克隆羊例：克隆羊黑面綿羊去黑面綿羊去核卵細(xì)胞核卵細(xì)胞白面綿羊乳白面綿羊乳腺細(xì)胞核腺細(xì)胞核細(xì)胞核移植細(xì)胞核移植重組細(xì)胞重組細(xì)胞電脈沖刺激電脈沖刺激早期胚胎早期胚胎胚胎移植胚胎移植另一頭綿羊的子宮另一頭綿羊的子宮妊娠、出生妊娠、出生克隆羊多利克隆羊多利2.2.體細(xì)胞核移植的過程：體細(xì)胞核移植的過程：17卵細(xì)胞卵細(xì)胞母綿羊母綿羊母綿羊母綿羊乳腺細(xì)

11、胞乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核細(xì)胞核移植細(xì)胞核移植早期胚胎早期胚胎卵裂卵裂C母綿羊子宮母綿羊子宮胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠多莉羊的培育過程多莉羊的培育過程融合后的卵細(xì)胞融合后的卵細(xì)胞核移植技術(shù)核移植技術(shù)1819 加速家畜遺傳改良進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育加速家畜遺傳改良進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育 保護(hù)瀕危物種，增加存活數(shù)量保護(hù)瀕危物種，增加存活數(shù)量 克隆動(dòng)物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白克隆動(dòng)物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白 可以作為異種移植的供體可以作為異種移植的供體 可以用于組織器官的移植可以用于組織器官的移植3.3.體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景：體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景：4.4.體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題：體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題：20思考題思考題、核在進(jìn)行體細(xì)胞核移植之前，為何要去掉受體卵母、核在進(jìn)行體細(xì)胞核移植之前，為何要去掉受體卵母細(xì)胞的核？細(xì)胞的核？為使核移植動(dòng)物的遺傳物質(zhì)全部來自有利用價(jià)值的動(dòng)為使核移植動(dòng)物的遺傳物質(zhì)全部來自有利用價(jià)值的動(dòng)物提供的細(xì)胞。物提供的細(xì)胞。、用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用傳代、用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用傳代1010代以內(nèi)的細(xì)代以內(nèi)的細(xì)胞，為什么？胞，為什么？1010代以內(nèi)的細(xì)胞保持一般保持正常二倍體的核型，代以內(nèi)的細(xì)胞保持一般保持正常二倍體的核