smad3在馬兜鈴酸腎病中的作用機(jī)制參考PPT

1、logosmad3smad3在馬兜鈴酸腎病在馬兜鈴酸腎病中中的的作用機(jī)制作用機(jī)制 參考文獻(xiàn)：參考文獻(xiàn)：1.diverse roles of tgf-/smads in renal fibrosis and inflammation2.mechanism of chronic aristolochic acid nephropathy:role of smad3馬兜鈴酸腎病馬兜鈴酸腎病u馬兜鈴酸腎?。R兜鈴酸腎?。╝an）：為一種全球性疾病，是使用為一種全球性疾病，是使用中草藥中草藥嚴(yán)重的并發(fā)癥嚴(yán)重的并發(fā)癥之一之一。然然而而導(dǎo)致導(dǎo)致aan的發(fā)病機(jī)制的發(fā)病機(jī)制尚不尚不明確明確，繼而阻礙了對(duì)繼而阻礙

2、了對(duì)aan病人的有效治療。病人的有效治療。uaan的特征是的特征是進(jìn)行性腎損害進(jìn)行性腎損害，表現(xiàn)為腎小管壞死、萎，表現(xiàn)為腎小管壞死、萎縮和腎間質(zhì)纖維化?？s和腎間質(zhì)纖維化。腎小管間質(zhì)纖維化腎小管間質(zhì)纖維化是終末期腎病是終末期腎病的共同特征，也是決定腎臟疾病進(jìn)展的主要因素，因的共同特征，也是決定腎臟疾病進(jìn)展的主要因素，因此深入研究腎纖維化發(fā)生發(fā)展的機(jī)制尤為重要。此深入研究腎纖維化發(fā)生發(fā)展的機(jī)制尤為重要。u腎臟纖維化是以腎臟纖維化是以膠原蛋白膠原蛋白合成增加、降解受到抑制導(dǎo)合成增加、降解受到抑制導(dǎo)致大量致大量細(xì)胞外基質(zhì)（細(xì)胞外基質(zhì)（ecm）不恰當(dāng)沉積和分布為特點(diǎn)。不恰當(dāng)沉積和分布為特點(diǎn)。tgf-tg

3、f-的生物特性的生物特性u(píng)各種腎病發(fā)展至腎纖維化與多種細(xì)胞因子有關(guān)，其中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（tgf-）/smad信號(hào)通路在腎纖維化過(guò)程中起重要作用，并且被公認(rèn)為是最主要的致纖維化通路。utgf-(transforming growth factor beta,轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-beta)是一種多向性、多效性的細(xì)胞因子，以自分泌或旁分泌的方式通過(guò)細(xì)胞表面的受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化、凋亡，對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的合成、創(chuàng)傷的修復(fù)、免疫功能等有重要的調(diào)節(jié)作用。創(chuàng)傷的修復(fù)、免疫功能等有重要的調(diào)節(jié)作用。smads smads 蛋白蛋白smadssmads蛋白是蛋白是tgf-tgf- / smad/ smad信號(hào)

4、通路中信號(hào)通路中細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的中的中介分子。介分子。smad蛋白家族受體調(diào)節(jié)型smad蛋白receptor regulate smad共同調(diào)節(jié)型smad蛋白common mediator smad抑制型smad蛋白inhabitory smadsmad2、smad3smad1、smad5smad8、smad9smad4smad6、smad7紅色標(biāo)記者為參與紅色標(biāo)記者為參與tgf-tgf-信號(hào)傳導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)的smadsmad蛋白。蛋白。tgf-/smad3信號(hào)通路的傳導(dǎo)信號(hào)通路的傳導(dǎo)信號(hào)通路在傳導(dǎo)中的信號(hào)通路在傳導(dǎo)中的3 3個(gè)主要步驟個(gè)主要步驟1 1、tgf-tgf-與細(xì)胞表面受

5、體結(jié)合，形成異源三聚體與細(xì)胞表面受體結(jié)合，形成異源三聚體2 2、異源三聚體通過(guò)激活、異源三聚體通過(guò)激活r-smadr-smad蛋白，將信號(hào)傳導(dǎo)蛋白，將信號(hào)傳導(dǎo)至胞漿內(nèi)至胞漿內(nèi)3 3、r-smadr-smad與與co-smadco-smad結(jié)合后，轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核，與結(jié)合后，轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核，與靶基因結(jié)合，調(diào)節(jié)蛋白合成靶基因結(jié)合，調(diào)節(jié)蛋白合成tgf-/smad3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)示意圖信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)示意圖u本研究進(jìn)行了一項(xiàng)本研究進(jìn)行了一項(xiàng)假設(shè)假設(shè)試驗(yàn)，即假設(shè)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子試驗(yàn)，即假設(shè)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子/smad3是導(dǎo)致慢性是導(dǎo)致慢性aan的關(guān)鍵途徑。的關(guān)鍵途徑。u本研究分為體內(nèi)試驗(yàn)和體外試驗(yàn)兩部分。本研究分為體內(nèi)試驗(yàn)和體外試驗(yàn)

6、兩部分。體內(nèi)試驗(yàn)體內(nèi)試驗(yàn)技術(shù)路線技術(shù)路線ihc、rt-pcrt-ihc、western blot 、rt-pcrihc、rt-pcrtgf-i，p-smad2/3-sma 和e-cadcol.i和col.iii腎功能檢測(cè)建立smad3 wt/ko caan模型血清肌酐試劑盒考馬斯-尿蛋白結(jié)果結(jié)果結(jié)果結(jié)果b：4周后，smad wt小鼠scr含量升高顯著，smad3 ko升高減弱。c：整體水平上smad3ko小鼠蛋白尿量增加不明顯。說(shuō)明smad3ko對(duì)腎損 傷有保護(hù)作用smad3 wt col1和3大量積聚，smad3 ko未出現(xiàn)積聚現(xiàn)象。結(jié)果結(jié)果e-cad和-smaa和b:smad3 wt腹腔注

7、射4周 c:smad3 ko腹腔注射4周a.b.d:-sma（肌成纖維細(xì)胞）大量蓄積c.d:蓄積程度減弱。結(jié)果結(jié)果wt型-sma表達(dá)顯著增加，ko型沒(méi)有出現(xiàn)增加顯著現(xiàn)象。體外試驗(yàn)總結(jié)體外試驗(yàn)總結(jié) 小結(jié)（一）小結(jié)（一）u以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明smad3蛋白在蛋白在caan過(guò)程中有過(guò)程中有重要作用，基因敲除重要作用，基因敲除smad3后可明顯減少后可明顯減少caan模型中模型中scr和蛋白尿的含量，有效降低和蛋白尿的含量，有效降低col.i、col.iii、-sma、tgf-1、p-smad2/3的的表達(dá)量，從而抑制了細(xì)胞外基質(zhì)大量蓄積造成的纖表達(dá)量，從而抑制了細(xì)胞外基質(zhì)大量蓄積造成的纖

8、維化以及其它更嚴(yán)重的腎臟疾病。維化以及其它更嚴(yán)重的腎臟疾病。體外試驗(yàn)體外試驗(yàn)細(xì)胞試驗(yàn)細(xì)胞試驗(yàn)aaaa處理處理retcretcaa處理導(dǎo)入sirna后的retctgf-1、col.i、-sma、e-cadaa處理正常處理正常tec以上細(xì)胞外實(shí)驗(yàn)說(shuō)明aa對(duì)腎小管上皮細(xì)胞有較嚴(yán)重的損傷作用，導(dǎo)致col.i、-sma、tgf-1大量蓄積，e-cad表達(dá)量下降。aa處理正常處理正常teca表示smad2的sirna不影響smad3的表達(dá)，smad3的sirna不影響smad2的表達(dá)然后進(jìn)行b實(shí)驗(yàn)b表示添加aa和s3-sirna的細(xì)胞中，-sma下降，e-鈣粘蛋白升高；添加aa和s3-sirna的細(xì)胞中，

9、-sma和e-鈣粘蛋白都有上升趨勢(shì)。aa處理導(dǎo)入干擾處理導(dǎo)入干擾rna的的tecsmad3 sirna：本該升高的降低了，smad2 sirna：原來(lái)升高的現(xiàn)在還是升高。結(jié)論結(jié)論 小結(jié)（二）小結(jié)（二）uaaaa可引起大鼠腎小管上皮細(xì)胞可引起大鼠腎小管上皮細(xì)胞col.icol.i、-sma-sma、tgf-1tgf-1上調(diào)，引起上調(diào)，引起e-e-鈣粘蛋白下調(diào)，且都呈現(xiàn)一鈣粘蛋白下調(diào)，且都呈現(xiàn)一定的時(shí)間依賴(lài)性和濃度依賴(lài)性。加入干擾定的時(shí)間依賴(lài)性和濃度依賴(lài)性。加入干擾rnarna后后證明證明smad3smad3干擾干擾rnarna可以有效的抑制可以有效的抑制col.icol.i、-sma-sma、tgf-1tgf-1的上調(diào)及的上調(diào)及e-e-鈣粘蛋白的下調(diào)，而鈣粘蛋白的下調(diào)，而smad2smad2沒(méi)沒(méi)有明顯作用。有明顯作用?？偨Y(jié)總結(jié)utgf-/smad3tgf-/smad3信號(hào)通路在信號(hào)通路在caancaan有重要作用，特有重要作用，特