DB333007-食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)食品中4-己基間苯二酚殘留量的測(cè)定

1、DB33浙 江 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB 33/ 3007 2015食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)食品中4-己基間苯二酚殘留量的測(cè)定2015- 12- 10 實(shí)施2015- 09- 10發(fā)布浙江省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)DB 33/ 3007 2015本標(biāo)準(zhǔn)為首次發(fā)布。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為資料性附錄。IDB 33/ 3007 2015食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)食品中4-己基間苯二酚殘留量的測(cè)定1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了蝦、蟹類水產(chǎn)品和果蔬中4-己基間苯二酚（4-HR）殘留量的高效液相色譜測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于蝦、蟹類水產(chǎn)品和果蔬中4-己基間苯二酚的測(cè)定。2原理用乙睛-二氯甲烷溶液提取樣品中4-己基間苯二酚，提取液經(jīng)氨基固相萃取柱凈化、

2、濃縮，殘?jiān)?流動(dòng)相溶解，液相色譜-熒光檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。3試劑和材料除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。3.1 乙睛（CH3CN）:色譜純。3.2 二氯甲烷（CH2c12）。3.3 甲醇（CH3OH）。3.4 丙酮（CH3COCH3）。3.5 正己烷（C6H14）。3.6 乙睛水溶液（6+4, V/V）:量取60 mL乙睛（3.1）和40 mL水，混勻后備用。3.7 甲醇-丙酮溶液（1 + 1, V/V）:量取50 mL甲醇和50 mL丙酮，混勻后備用。3.8 乙睛-二氯甲烷溶液（7+3, V/V）:量取70 mL乙睛和30 mL二氯甲烷，混勻后

3、備用。3.9 4-己基間苯二酚標(biāo)準(zhǔn)品：CAS136-77-6,純度大于 99.0%。3.10 4-己基間苯二酚標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取100 mg （精確到0.1 mg）的標(biāo)準(zhǔn)品于100 mL容量瓶中，用乙睛水溶液（3.6）溶解并定容至刻度，配制成濃度為1 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，貯存于 0c4c冰箱中密封保存，溶液有效期1個(gè)月。臨用前，取此儲(chǔ)備液，用乙睛水溶液（3.6）稀釋成所需濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液。3.11 氨基固相萃取柱：500 mg, 3 mL,或相當(dāng)者。使用前用6 mL甲醇丙酮溶液（3.7）和6mL正己烷活化。3.12 微孔濾膜：0.45 g,有機(jī)系。3.13 氮?dú)猓杭兌却笥诘扔?99.9% o

4、 4儀器4.1 高效液相色譜儀：配熒光檢測(cè)器。4.2 天平：感量 0.01 go4.3 分析天平：感量 0.000 1 go4.4 離心機(jī)：最大轉(zhuǎn)速10 000r/min。4.5 旋渦混合器。4.6 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。4.7 固相萃取裝置。4.8 氮?dú)獯蹈蓛x。4.9 高速組織搗碎機(jī)。5 操作方法5.1 樣品處理5.1.1 試樣制備和保存從原始樣品中取出代表性樣品500g ，蝦去頭、去殼、去附肢，取可食部分；蟹去殼、去鰓等取可食部分；果蔬去皮。用組織搗碎機(jī)搗碎混勻，均分成兩份分別裝入潔凈容器中作為試樣，密封并標(biāo)識(shí)。將試樣放入 -18 以下保存。制樣和試樣保存過程中，應(yīng)防止試樣受到污染或發(fā)生殘留物含量的

5、變化。5.1.2 提取稱取5 g （精確到0.01 g）樣品置于50 mL離心管中，加入10 mL乙睛二氯甲烷溶液（3.8）,高速 組織搗碎機(jī)勻漿2 min ,蓋塞，旋渦混勻 1 min,超聲提取10 min , 8500 r/min離心5 min ,取上清液轉(zhuǎn)入 100 mL 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，重復(fù)上述操作一次。合并提取液于45旋發(fā)至近干，取7.5 mL 二氯甲烷分三次超聲溶解，合并，待凈化。5.1.3 凈化將 5.1.2 中的待凈化液轉(zhuǎn)移至固相萃取柱（ 3.11）中。用 6 mL 正己烷淋洗，將固相萃取小柱抽至近干，用 6mL 甲醇丙酮溶液（3.7 ）洗脫，流速不超過1 mL/min ，收集洗

6、脫液。洗脫液于50用氮?dú)獯蹈?，殘留物?1.0 mL 流動(dòng)相溶解，過微孔濾膜（3.12），供液相色譜測(cè)定。5.2 樣品測(cè)定5.2.1 色譜條件a） 色譜柱：C18柱，150 mm X4.6mm （內(nèi)徑），5”。b） 流動(dòng)相：乙腈+水（6+4 ， V/V）。c） 流速：1.0 mL/min 。d） 柱溫：35。e） 激發(fā)波長(zhǎng)：280 nm。f） 發(fā)射波長(zhǎng)：310 nm。g） 進(jìn)樣量：10 （U5.2.2 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的繪制用流動(dòng)相將 4-己基間苯二酚標(biāo)準(zhǔn)溶液（3.10）稀釋成為0.05 wg/mL0.50科g/mL2.0科g/mL5.0科g/mL10.0 g/mL20.0g/mL50科g/mUR

7、列標(biāo)準(zhǔn)工作液，供高效液相色譜分析。5.2.3 色譜分析分別注入10 wL 4己基間苯二酚標(biāo)準(zhǔn)工作溶液及樣品溶液于液相色譜儀中，按 5.2.1色譜條件進(jìn)行分析，記錄峰面積，響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍之內(nèi)。根據(jù)4- 己基間苯二酚標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖見附錄A 。6 空白試驗(yàn)除不加試樣外，均按上述測(cè)定步驟進(jìn)行。7結(jié)果計(jì)算結(jié)果保留2位有效數(shù)字。CD樣品中4-己基間苯二酚的殘留量按公式（1）計(jì)算，計(jì)算結(jié)果需扣除空白值。、,C-C0 V 1000 X =m 1000式中：X試樣中4-己基間苯二酚的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）;C 試樣溶液中4-己基間苯二酚的含量，單位為

8、微克每毫升（聞/mL）;C0空白試驗(yàn)中4-己基間苯二酚的含量，單位為微克每毫升（閔/mL）;m 試樣質(zhì)量，單位為克（g）;V 試樣溶液體積，單位為毫升 （mL）。8方法靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度8.1 靈敏度本方法檢出限為 0.002 mg/kg ,定量限為0.010 mg/kg。8.2 準(zhǔn)確度本方法添加濃度為 0.010 mg/kg10 mg/kg時(shí)，回收率為70%110%。8.3 精密度本方法批內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差w10%,批間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差w 15%。3DB 33/ 3007 2015AA附錄 A（資料性附錄）4-己基間苯二酚標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)色譜圖A.1 4-己基間苯二酚標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)液相色譜圖（1.0聞/mL）A.2 4-己基