分子流行病學(xué)th課件

1、1第一章第一章 分子流行病學(xué)分子流行病學(xué)molecular epidemiology2本章要點(diǎn)本章要點(diǎn)第一節(jié)第一節(jié) 概述概述第二節(jié)第二節(jié) 研究?jī)?nèi)容研究?jī)?nèi)容第三節(jié)第三節(jié) 研究方法研究方法第四節(jié)第四節(jié) 發(fā)展與應(yīng)用前景發(fā)展與應(yīng)用前景3第一節(jié)第一節(jié) 概概 述述隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，流行病學(xué)的發(fā)展總體上經(jīng)歷了三個(gè)大的轉(zhuǎn)折。19至20世紀(jì)初，醫(yī)學(xué)微生物學(xué)與免疫學(xué)的發(fā)展，給流行病學(xué)研究提供了病原學(xué)與血清學(xué)的證據(jù)，從而有力地推動(dòng)了傳染病流行病學(xué)的發(fā)展；20世紀(jì)中葉，現(xiàn)代統(tǒng)計(jì)學(xué)方法的建立與電子計(jì)算機(jī)出現(xiàn)，為分析性流行病學(xué)與多因素分析奠定了基礎(chǔ)，從而得以深入地研究慢性疾病的復(fù)雜病因；現(xiàn)代分子生物學(xué)與免疫學(xué)的迅猛發(fā)展

2、，單克隆抗體與基因工程技術(shù)的產(chǎn)生，使流行病學(xué)能在基因與分子水平上研究疾病與健康的影響因素，觀察疾病的流行病學(xué)規(guī)律，乃至揭示暴露因素引起疾病的致病機(jī)制。分子生物學(xué)等現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù)引入了流行病學(xué)研究，在此基礎(chǔ)上產(chǎn)生了一門嶄新的分支學(xué)科分-分子流行病學(xué)。分子流行病學(xué)。4一一 產(chǎn)生的背景產(chǎn)生的背景( (一一) )疾病預(yù)防控制中的需求疾病預(yù)防控制中的需求傳染性疾病傳染性疾病 耐藥性質(zhì)粒；病原體變異；新發(fā)現(xiàn)傳染病。 慢性非傳染病慢性非傳染病 多病因、多階段、多基因、長(zhǎng)潛隱期。人群易感性人群易感性 生物個(gè)體間的遺傳和環(huán)境不同，易感性差異很大；傳統(tǒng)流行病學(xué)無(wú)法有效測(cè)量。實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué) 實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)的病因假設(shè)和防

3、治措施的人群檢驗(yàn)。5( (二二) )分子生物學(xué)的快速發(fā)展分子生物學(xué)的快速發(fā)展理論的突破理論的突破 如：dna雙螺旋結(jié)構(gòu)，遺傳中心法則，遺傳密碼子，rna逆轉(zhuǎn)錄，斷裂基因，操縱子模型，限制性內(nèi)切酶，dna聚合酶，dna連結(jié)酶，染色體外遺傳物質(zhì)等。技術(shù)的創(chuàng)新技術(shù)的創(chuàng)新 凝膠電泳技術(shù)，核酸體外擴(kuò)增，dna測(cè)序，蛋白質(zhì)測(cè)序，分子雜交，基因克隆，色譜技術(shù)，計(jì)算機(jī)應(yīng)用。6二二 分子流行病學(xué)的產(chǎn)生與發(fā)展分子流行病學(xué)的產(chǎn)生與發(fā)展 概念的演變 定義 分子流行病學(xué)的發(fā)展7( (一一) )概念的演變概念的演變國(guó)外：國(guó)外：19721972年年提出“流感分子流行病學(xué)”的名詞。19771977年年英國(guó)的定義：分子流行病學(xué)

4、是應(yīng)用精細(xì)技術(shù)進(jìn)行生物材料的流行病學(xué)研究。819861986年年定義：分子流行病學(xué)的核心在于把先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)室方法和分析流行病學(xué)結(jié)合起來(lái)，從而查明環(huán)境和宿主病因。 19931993年年定義：分子流行病學(xué)是在流行病學(xué)中應(yīng)用生物標(biāo)志或生物學(xué)測(cè)量。19961996年年定義：分子流行病學(xué)狹義上講是測(cè)量作為暴露和效應(yīng)的生物標(biāo)志信息大分子：dna、rna和蛋白質(zhì)。9國(guó)內(nèi)：國(guó)內(nèi)：19881988年年：分子生物學(xué)理論和技術(shù)應(yīng)用于流行病學(xué)的邊緣學(xué)科，主要是通過(guò)對(duì)造成某一疾病流行的病原體，在基因水平上分析其特征，從而更準(zhǔn)確地解決傳染源和傳播途徑等有關(guān)流行病學(xué)問(wèn)題。19921992年年：利用分子生物學(xué)原理和技術(shù)，從分子

5、乃至基因水平上研究醫(yī)學(xué)事件在人群和環(huán)境生物群眾的分布及其決定因素和調(diào)控手段的學(xué)科。10 ( (二二) )定義定義 分子流行病學(xué)分子流行病學(xué) 是闡明人群和醫(yī)學(xué)相關(guān)生物群體中生物標(biāo)志的分布及其與疾病/健康的關(guān)系和影響因素，并研究防治疾病、促進(jìn)健康的策略與措施的科學(xué)。 生物標(biāo)志生物標(biāo)志（biological marker，biomarker，簡(jiǎn)稱m） 指能代表生物結(jié)構(gòu)和功能的可識(shí)別物質(zhì)。分子事件（molecular event）或分子生物標(biāo)志（molecular biomarker）主要指代表生物結(jié)構(gòu)和功能的生物大分子特征。如dna、rna、蛋白質(zhì)等。11分子流行病學(xué)與血清流行病學(xué)分子流行病學(xué)與血清

6、流行病學(xué) 應(yīng)用血清學(xué)方法血清學(xué)方法對(duì)血清中各種成分（包括抗原、抗體、代謝產(chǎn)物、生化物質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)成分及遺傳因子等）的出現(xiàn)和分布進(jìn)行研究，以闡明疾病及健康狀態(tài)在人群中的分布及其影響因素，并在采取預(yù)防措施后應(yīng)用血清學(xué)方法來(lái)考核其效果。 1950年paulpaul等等首先提出“血清流行病學(xué)” 。 1960年who建立了三個(gè)血清參考庫(kù)血清參考庫(kù)，分別設(shè)在美國(guó)耶魯大學(xué)、原捷克斯洛伐克布拉格流行病學(xué)和微生物學(xué)研究所和南非約翰內(nèi)斯堡醫(yī)學(xué)中心。 12分子流行病學(xué)與人類基因組流行病學(xué)分子流行病學(xué)與人類基因組流行病學(xué) 1998年由khoury和dorman提出人類基因組流行病學(xué)(human genome epidem

7、iology, huge)的概念，定定義義：應(yīng)用流行病學(xué)與基因組信息相結(jié)合的研究方法，開(kāi)展以人群為基礎(chǔ)的研究，評(píng)價(jià)基因組信息（基因或基因變異及其相應(yīng)編碼的產(chǎn)物）對(duì)人群健康和疾病的流行病學(xué)意義。1314( (三三) )分子流行病學(xué)的發(fā)展分子流行病學(xué)的發(fā)展 研究?jī)?nèi)容更加豐富研究?jī)?nèi)容更加豐富 從最初研究傳染病的傳染源、傳播途徑，病原體檢測(cè)鑒定等，到疾病和健康狀態(tài)相關(guān)生物標(biāo)志的分布、影響因素、人群易感性、防治效果評(píng)價(jià)及病原生物的群體進(jìn)化與變異規(guī)律和檢測(cè)手段研究等。 研究手段越來(lái)越多研究手段越來(lái)越多 除應(yīng)用傳統(tǒng)流行病學(xué)的群體調(diào)查研究方法外，還應(yīng)用分子生物學(xué)方法和技術(shù)。 應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大

8、不僅限于預(yù)防醫(yī)學(xué)，流行病學(xué)、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、遺傳學(xué)、環(huán)境科學(xué)和人類學(xué)等領(lǐng)域也有應(yīng)用。15 三、與傳統(tǒng)流行病學(xué)關(guān)系健 康 者 “ “海平面海平面” ” 圖圖16-1 16-1 疾病的疾病的“冰山現(xiàn)象冰山現(xiàn)象”亞臨床者患者i、病例為基礎(chǔ)ii、冰山現(xiàn)象iii、生物標(biāo)志為基礎(chǔ)16 分子流行病學(xué)與傳統(tǒng)流行病學(xué)既是一個(gè)統(tǒng)一體，又有各自不同的特征。我們把從暴露到疾病發(fā)生的連續(xù)過(guò)程稱為暴露發(fā)病連續(xù)帶（edc），從暴露到健康的連續(xù)過(guò)程稱為暴露健康狀態(tài)連續(xù)帶（ehc）。 傳統(tǒng)流行病學(xué)在研究暴露與疾病關(guān)系時(shí)，常常使用“黑箱”原理。雖然發(fā)病和死亡測(cè)量可以直接反映人群疾病和健康狀態(tài)，但由于黑箱的存在，使暴露與疾病關(guān)系

9、的判斷顯得缺乏直接證據(jù)；而且對(duì)于疾病易感性的研究也僅僅限于在整個(gè)發(fā)病過(guò)程中的粗略估計(jì)，無(wú)法判斷edc進(jìn)程中不同階段的易感性情況。分子流行病學(xué)則不僅可以闡明edc/ehc進(jìn)程中不同階段的暴露效應(yīng)關(guān)系(即因果關(guān)聯(lián))，也可以研究edc/ehc不同階段機(jī)體易感性的具體特征和意義，以揭示傳統(tǒng)流行病學(xué)中的“黑箱”秘密，使其成為“白箱”，以闡明疾病發(fā)生、發(fā)展過(guò)程及其規(guī)律；而“白箱”中的各種生物標(biāo)志，又可以成為分子流行病學(xué)進(jìn)一步研究的工具，作為暴露標(biāo)志、易感性標(biāo)志、效應(yīng)標(biāo)志研究人群中疾病/健康的影響因素、防治策略與措施，并準(zhǔn)確評(píng)價(jià)其效果。因此，從“黑箱”到“白箱”，再到“工具箱”是分子流行病學(xué)研究的重要內(nèi)容，

10、也是分子流行病學(xué)對(duì)流行病學(xué)發(fā)展的最大貢獻(xiàn)。17 健 康 疾 病主觀感覺(jué)主觀感覺(jué)客觀指標(biāo)客觀指標(biāo)健康指標(biāo)健康指標(biāo)疾病指標(biāo)疾病指標(biāo) 模式模式i i 暴露因素暴露因素 健康態(tài)健康態(tài) 潛在疾病態(tài)潛在疾病態(tài)臨界疾病態(tài)臨界疾病態(tài)亞臨床態(tài)亞臨床態(tài)臨床態(tài)臨床態(tài) 機(jī)體易感性因素機(jī)體易感性因素模式模式iiii健康疾病連續(xù)帶示意圖健康疾病連續(xù)帶示意圖亞健康態(tài)亞健康態(tài)潛在疾病態(tài)潛在疾病態(tài)健康態(tài)健康態(tài)臨床態(tài)臨床態(tài)亞臨床態(tài)亞臨床態(tài)臨界疾病態(tài)臨界疾病態(tài) 任何生命現(xiàn)象都具有生物分子基礎(chǔ)，疾病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程也表現(xiàn)為一系列相關(guān)分子事件的相互作用及分布變遷，傳染病是這樣，慢性非傳染性疾病也是這樣，這就是分子水平的疾病自然史，也稱

11、為健康疾病連續(xù)帶(health-disease continuum，hdc)。18a 暴露暴露 疾病疾病 易感性易感性分子流行病學(xué)分子流行病學(xué)b 暴露暴露內(nèi)暴露內(nèi)暴露早期生物學(xué)效應(yīng)早期生物學(xué)效應(yīng)結(jié)構(gòu)和功能變異結(jié)構(gòu)和功能變異臨床疾病臨床疾病 易感性易感性 暴露暴露內(nèi)暴露內(nèi)暴露早期生物學(xué)效應(yīng)早期生物學(xué)效應(yīng)續(xù)發(fā)生物學(xué)效應(yīng)續(xù)發(fā)生物學(xué)效應(yīng)健康狀態(tài)健康狀態(tài) 易感性易感性傳統(tǒng)流行病學(xué)與分子流行病學(xué)的關(guān)系傳統(tǒng)流行病學(xué)與分子流行病學(xué)的關(guān)系傳統(tǒng)流行病學(xué)傳統(tǒng)流行病學(xué)19 傳統(tǒng)流行病學(xué)在研究暴露與疾病關(guān)系時(shí)，使用“黑箱”原理。雖然發(fā)病和死亡測(cè)量能反映人群疾病和健康狀態(tài)，但由于黑箱的存在，使暴露與疾病關(guān)系的判斷顯得缺乏

12、直接證據(jù)；而且對(duì)于疾病易感性的研究也僅限于在整個(gè)發(fā)病過(guò)程中的粗略估計(jì)，無(wú)法判斷edc進(jìn)程中不同階段的易感性情況。 分子流行病學(xué)則不僅可以闡明edc/ehc進(jìn)程中不同階段的暴露-效應(yīng)關(guān)系(即因果關(guān)聯(lián))，也可研究不同階段機(jī)體易感性的具體特征和意義，揭示 “黑箱”秘密，使其成為“白箱”，以闡明疾病發(fā)生、發(fā)展過(guò)程及其規(guī)律. “白箱”中的各種生物標(biāo)志，又成為分子流行病學(xué)進(jìn)一步研究的工具，作為暴露標(biāo)志、易感性標(biāo)志、效應(yīng)標(biāo)志研究人群中疾病健康的影響因素、防治策略與措施，并準(zhǔn)確評(píng)價(jià)其效果。 20第二節(jié)第二節(jié) 研究?jī)?nèi)研究?jī)?nèi)容容 生物標(biāo)志（測(cè)量指標(biāo)）的研究 暴露測(cè)量及其與疾病的關(guān)系 效應(yīng)測(cè)量及其與疾病的關(guān)系 易感

13、性測(cè)量及其與疾病的關(guān)系 疾病防治效果評(píng)價(jià) 21生物標(biāo)志生物標(biāo)志 暴露標(biāo)志暴露標(biāo)志 與疾病或健康狀態(tài)有關(guān)的暴露因素的生物標(biāo)志，包括外暴露標(biāo)志和內(nèi)暴露標(biāo)志。 效應(yīng)標(biāo)志效應(yīng)標(biāo)志 指宿主暴露后產(chǎn)生功能性或結(jié)構(gòu)性變化的生物標(biāo)志，如突變的基因、畸變的染色體等。 易感標(biāo)志易感標(biāo)志 指宿主對(duì)疾病發(fā)生、發(fā)展易感程度的生物標(biāo)志。主要與遺傳特征、生長(zhǎng)發(fā)育、營(yíng)養(yǎng)、免疫、機(jī)體活動(dòng)等有關(guān)。 生物標(biāo)志 暴露測(cè)量 效應(yīng)測(cè)量 易感性測(cè)量 防治效果評(píng)價(jià) 22外暴露標(biāo)志外暴露標(biāo)志是指暴露因素進(jìn)入機(jī)體之前進(jìn)入機(jī)體之前的標(biāo)志和劑量如病毒、細(xì)菌、生物毒素、吸煙煙霧、環(huán)境物質(zhì)等內(nèi)暴露標(biāo)志內(nèi)暴露標(biāo)志指暴露因素進(jìn)入機(jī)體之后進(jìn)入機(jī)體之后的標(biāo)志對(duì)

14、生物性病原因子生物性病原因子，可以是生物病原因子本身、其代謝產(chǎn)物或與宿主體內(nèi)生物大分子結(jié)合產(chǎn)物，像病毒整合基因、生物毒素-dna加合物等對(duì)非生物性病原因子非生物性病原因子,可以是體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)分子、代謝產(chǎn)物或與宿主靶體結(jié)合物等 232425實(shí)用性實(shí)用性 edc不同階段的候選生物標(biāo)志的特性、在疾病過(guò)程中的意義、檢測(cè)方法等都需要進(jìn)行深入研究，然后根據(jù)研究目的和生物標(biāo)志與所要代表edc進(jìn)程中特定階段的關(guān)聯(lián)程度進(jìn)行篩選?？尚判钥尚判?可信性強(qiáng) 有效性有效性 靈敏度和特異度，注意區(qū)分流行病學(xué)的靈敏度和實(shí)驗(yàn)室測(cè)量中所謂的敏感性的不同 生物標(biāo)志檢測(cè)方法生物標(biāo)志檢測(cè)方法26暴露測(cè)量暴露測(cè)量 外暴露研究外暴露研究 指

15、環(huán)境因素暴露，分為生物性因素和非生物性因素。作為分子流行病學(xué)測(cè)量的生物標(biāo)志一般是生物性病原因子，如病原生物、生物毒素等。 生物標(biāo)志 暴露測(cè)量 效應(yīng)測(cè)量 易感性測(cè)量 防治效果評(píng)價(jià) 27 生物性病原因子檢測(cè)鑒定生物性病原因子檢測(cè)鑒定 流感嗜血桿菌 病原生物進(jìn)化變異規(guī)律研究病原生物進(jìn)化變異規(guī)律研究 根據(jù)病原體的基因型或其它分子生物學(xué)特征，判斷它們之間的遺傳關(guān)系，從而確定傳染病或傳播途徑。 確定傳播途徑確定傳播途徑 s.munchen菌感染 非生物性因素的暴露測(cè)量非生物性因素的暴露測(cè)量確定其與內(nèi)暴露和早期生物效應(yīng)的關(guān)系，為進(jìn)一步的病因研究提供依據(jù)。吸煙煙霧 28內(nèi)暴露研究?jī)?nèi)暴露研究 傳染性疾病傳染性疾

16、病 感染狀況 傳染源追蹤 29慢性非傳染性疾病慢性非傳染性疾病 內(nèi)暴露水平：內(nèi)暴露水平：由于個(gè)體差異以及物質(zhì)的特性和暴露途徑的不同等，外暴露水平有時(shí)不能確切評(píng)判其在疾病中的意義。而體內(nèi)暴露水平的測(cè)量不僅可以研究外暴露與內(nèi)暴露的關(guān)系，也可以為下一步確定其與早期生物效應(yīng)之間的關(guān)系提供有力的證據(jù)。fg:血液中煙草代謝產(chǎn)物可替寧血液中煙草代謝產(chǎn)物可替寧-吸煙暴露相關(guān)吸煙暴露相關(guān) 生物作用水平：生物作用水平： 30效應(yīng)測(cè)量效應(yīng)測(cè)量 傳染病傳染病 免疫效應(yīng)免疫效應(yīng):闡明流行規(guī)律、制定防控對(duì)策，免疫效果評(píng)價(jià)病理性效應(yīng)病理性效應(yīng): :了解感染情況及影響因素，致病特征及預(yù)后。慢性非傳染病慢性非傳染病健康狀態(tài)健康

17、狀態(tài): :通過(guò)人群中健康狀態(tài)相關(guān)生物標(biāo)志的分布及其影響因素如生長(zhǎng)、發(fā)育通過(guò)人群中健康狀態(tài)相關(guān)生物標(biāo)志的分布及其影響因素如生長(zhǎng)、發(fā)育和衰老等，可以為闡明健康分布規(guī)律、制定促進(jìn)健康的策略和措施、評(píng)價(jià)干預(yù)效果和衰老等，可以為闡明健康分布規(guī)律、制定促進(jìn)健康的策略和措施、評(píng)價(jià)干預(yù)效果提供科學(xué)依據(jù)。提供科學(xué)依據(jù)。 生物標(biāo)志 暴露測(cè)量 效應(yīng)測(cè)量 易感性測(cè)量 防治效果評(píng)價(jià) 31易感性測(cè)量易感性測(cè)量 遺傳性疾病遺傳性疾病 huntington病應(yīng)用分子流行病學(xué)方法很快確定了hd基因緊密連鎖遺傳位點(diǎn)d4s10及其dna標(biāo)志。 慢性非傳染病慢性非傳染病 載脂蛋白e(apoe)不同基因型在動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病發(fā)病中的

18、易感性是不同的。 傳染病傳染病 不同基因特征的人群對(duì)hiv、hbv的易感性也具有很大差異。 生物標(biāo)志 暴露測(cè)量 效應(yīng)測(cè)量 易感性測(cè)量 防治效果評(píng)價(jià) 32疾病防治效果評(píng)價(jià)疾病防治效果評(píng)價(jià) 預(yù)防接種效果評(píng)價(jià) 預(yù)防接種相關(guān)發(fā)病研究 慢性非傳染病防治效果控制 生物標(biāo)志 暴露測(cè)量 效應(yīng)測(cè)量 易感性測(cè)量 防治效果評(píng)價(jià) 33第三節(jié)第三節(jié) 研究方法研究方法 測(cè)量指標(biāo) 標(biāo)本采集 現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查研究方法 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù) 研究設(shè)計(jì) 資料分析 34測(cè)量指標(biāo)的選擇的測(cè)量指標(biāo)的選擇的原則原則 生物標(biāo)志應(yīng)特異、穩(wěn)定 標(biāo)本采集、儲(chǔ)存方便 檢測(cè)方法比較簡(jiǎn)單、實(shí)用，而且操作規(guī)范，便于 與同類研究結(jié)果比較 檢測(cè)方法靈敏度和特異度高 35

19、測(cè)量指標(biāo)測(cè)量指標(biāo)暴露指標(biāo)暴露指標(biāo) 最好能代表接觸劑量或生物作用劑量 易感性指標(biāo)易感性指標(biāo) 一般選擇抗體水平作為傳染病易感性指標(biāo)，易感基因及其表達(dá)產(chǎn)物等作為心腦血管病、惡性腫瘤、糖尿病、遺傳病等慢性非傳染病的易感性標(biāo)志。 36效應(yīng)指標(biāo)效應(yīng)指標(biāo) 一般以最早期生物效應(yīng)標(biāo)志早期生物效應(yīng)標(biāo)志作為探索暴露因素的致病作用或干預(yù)措施的短期效果評(píng)價(jià)指標(biāo)，如抗體產(chǎn)生、代謝異常、基因表達(dá)異常等選擇結(jié)構(gòu)和功能改變結(jié)構(gòu)和功能改變作為確定暴露的致病作用和早期診斷、早期預(yù)防的指標(biāo)臨床診斷標(biāo)志臨床診斷標(biāo)志作為干預(yù)措施長(zhǎng)期效果評(píng)價(jià)或預(yù)后的指標(biāo)37標(biāo)本采集標(biāo)本采集 生物標(biāo)本生物標(biāo)本 一般包括病原的和人體的生物標(biāo)本。常用的有：微生

20、物標(biāo)本、血液（血清）標(biāo)本、組織標(biāo)本、其他生物標(biāo)本（如唾液、胃液、尿液、精液、糞便等） 生物標(biāo)本庫(kù)生物標(biāo)本庫(kù) 通常將儲(chǔ)存有一種類型或多種類型生物標(biāo)本，并能保持它們的生物活性以供研究之用的系統(tǒng)稱為生物標(biāo)本庫(kù)(biological specimen bank, bsb)，如血清庫(kù)、組織庫(kù)、病原生物庫(kù)等。 38生物標(biāo)本采集和儲(chǔ)存 分子流行病學(xué)研究成功的關(guān)鍵要求要求 在采集和儲(chǔ)存過(guò)程中不能受到“污染” 儲(chǔ)存的生物標(biāo)本在任何時(shí)候進(jìn)行檢測(cè)都可以獲得一致的結(jié)果 所有的生物標(biāo)本都應(yīng)有詳細(xì)的背景材料和鑒別標(biāo)識(shí)39現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查研究方法現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查研究方法 一般需要的樣本量相對(duì)較小 不宜作大規(guī)?，F(xiàn)場(chǎng)調(diào)查研究 分子流行病學(xué)在橫

21、斷面研究橫斷面研究中多是小樣本抽樣調(diào)查，在分析性研究分析性研究中多為病例對(duì)照研究、隊(duì)列與病例對(duì)照結(jié)合的巢式病例對(duì)照研究、病例-病例研究等，在實(shí)驗(yàn)性研究實(shí)驗(yàn)性研究也多采用小樣本隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)。 40實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù) 核酸技術(shù)核酸技術(shù) 核酸電泳圖譜 核酸酶切電泳圖譜 核酸分子雜交 核酸體外擴(kuò)增 核酸序列分析 蛋白質(zhì)技術(shù)蛋白質(zhì)技術(shù) 凝膠電泳、蛋白轉(zhuǎn)印雜交、蛋白質(zhì)測(cè)序酶學(xué)技術(shù)酶學(xué)技術(shù) 多位點(diǎn)酶電泳法 生物芯片技術(shù)生物芯片技術(shù) 基因芯片 其他技術(shù)其他技術(shù) 免疫學(xué)技術(shù)免疫學(xué)技術(shù) 如酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(elisa)、熒光免疫試驗(yàn)(fia) 等；色譜技術(shù)色譜技術(shù) 如高效液相色譜技術(shù)(hplc)等41研

22、究設(shè)計(jì)研究設(shè)計(jì) 研究目的研究目的 充分考慮創(chuàng)新性、實(shí)用性、可行性 測(cè)量指標(biāo)測(cè)量指標(biāo) 生物標(biāo)志是否特異、穩(wěn)定，標(biāo)本采集是否方便，是否有靈敏而特異的檢測(cè)方法 測(cè)量方法測(cè)量方法 簡(jiǎn)便、成熟，靈敏度和特異度高 調(diào)查方法與樣本調(diào)查方法與樣本 樣本有代表性，適量 結(jié)果與分析結(jié)果與分析 設(shè)計(jì)中要預(yù)測(cè)研究結(jié)果，并根據(jù)選擇的測(cè)量指標(biāo)和測(cè)量方法確定資料分析方法 質(zhì)量控制質(zhì)量控制 注重現(xiàn)場(chǎng)質(zhì)量控制的同時(shí)，特別重視實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 預(yù)實(shí)驗(yàn) 42資料分析資料分析傳統(tǒng)流行病學(xué)分析傳統(tǒng)流行病學(xué)分析 生物標(biāo)志發(fā)生率、檢出率 血清流行病學(xué)分析血清流行病學(xué)分析 抗體的幾何平均滴度、陽(yáng) 轉(zhuǎn)率、感染率等 遺傳多態(tài)性

23、分析遺傳多態(tài)性分析 等位基因頻率、遺傳多態(tài) 度、雜合度等遺傳關(guān)系分析遺傳關(guān)系分析 基因型、克隆、克隆群43 基因型基因型(genotype)(genotype)：具有相同遺傳結(jié)構(gòu)的一類生物體。 克隆克隆(clone)(clone)：廣義廣義 許多生物特征（表型或基因型）相同的生物體，雖然分離來(lái)源、地區(qū)、時(shí)間可能不同，但它們的這些特征幾乎只能解釋為共同來(lái)源，則這些生物體稱為一個(gè)克隆。狹義狹義 一個(gè)生物體的無(wú)性繁殖群體，稱為一個(gè)克隆。 克隆群克隆群(clone cluster)(clone cluster)：遺傳關(guān)系非常緊密的多個(gè)生物克隆，可以劃分為一個(gè)克隆群。 4445實(shí)例一實(shí)例一研究題目研究題

24、目 波蘭某工業(yè)區(qū)環(huán)境中芳香族化合物暴露人群的dna加合物研究測(cè)量指標(biāo)測(cè)量指標(biāo) dna加合物/淋巴細(xì)胞dna（介質(zhì)）測(cè)量方法測(cè)量方法 采集血液淋巴細(xì)胞，應(yīng)用熒光檢測(cè)競(jìng)爭(zhēng)elisa法和dna加合物32p后標(biāo)記技術(shù)。研究設(shè)計(jì)研究設(shè)計(jì) 采用橫斷面分析研究；選擇煤焦油作業(yè)工人為暴露組，當(dāng)?shù)爻鞘芯用窈徒嫁r(nóng)民分別為對(duì)照組。排除年齡、吸煙、其他職業(yè)暴露等因素的影響；比較3組dna加合物水平。46 結(jié)果分析結(jié)果分析 結(jié)果：當(dāng)?shù)爻鞘芯用瘢?9例）與煤焦油作業(yè)工人（63例）的dna加合物水平相似，而近郊農(nóng)民（15例）的dna加合物水平與煤焦油作業(yè)工人相比,僅為后者的二分之一或三分之一。結(jié)論：環(huán)境中芳香族化合物（煤

25、焦油）暴露可導(dǎo)致體內(nèi)dna加合物水平升高。 質(zhì)量控制質(zhì)量控制 每份標(biāo)本都同時(shí)在2個(gè)不同實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果具有很好的一致性(r=0.66, p0.01)。47實(shí)例二實(shí)例二 研究題目研究題目 應(yīng)用hbv-dna序列多態(tài)性研究hbv的傳播 測(cè)量標(biāo)志測(cè)量標(biāo)志 第2551-2650位點(diǎn)核酸序列/血清hbv-dna（介質(zhì)） 測(cè)量方法測(cè)量方法 elisa法和pcr法 研究設(shè)計(jì)研究設(shè)計(jì) 類病例對(duì)照研究：96名hbeag陽(yáng)性兒童和用elisa檢測(cè)hbv血清陽(yáng)性的97名父母；假設(shè)該位點(diǎn)核酸序列在兒童與父母之間分配是隨機(jī)的。 結(jié)果分析結(jié)果分析 結(jié)果：該序列在兒童和父母之間是非隨機(jī)分配的（p0.00005);結(jié)論：

26、hbv具有家庭內(nèi)傳播。 質(zhì)量控制質(zhì)量控制 關(guān)于家庭成員之間1%的序列差異的解釋。排除了pcr錯(cuò)配可能。 48實(shí)例三實(shí)例三 研究目的研究目的 應(yīng)用pcr測(cè)序追蹤hiv傳染源 測(cè)量指標(biāo)測(cè)量指標(biāo) hiv/外周血單核細(xì)胞（介質(zhì)） 測(cè)量方法測(cè)量方法 pcr和核酸測(cè)序 研究設(shè)計(jì)研究設(shè)計(jì) 橫斷面調(diào)查：1名牙科醫(yī)生（hiv攜帶者，可疑傳染源），7名hiv感染者（都曾接受該牙醫(yī)的治療）；35名當(dāng)?shù)嘏c牙醫(yī)無(wú)關(guān)的hiv感染者。比較這些hiv毒株之間的關(guān)系。 結(jié)果分析結(jié)果分析 牙醫(yī)的hiv株與其曾治療的5名病人的hiv株具有克隆關(guān)系，而與其他毒株遺傳關(guān)系較遠(yuǎn)。結(jié)論：牙醫(yī)是其曾治療的5名病人的hiv的傳染源。49第四節(jié)

27、第四節(jié) 發(fā)展與應(yīng)發(fā)展與應(yīng)用前景用前景 傳染病預(yù)防控制 慢性非傳染病預(yù)防控制 健康狀態(tài)研究 50傳染病預(yù)防控制傳染病預(yù)防控制 病原體耐藥、新病原體的出現(xiàn)、病原體變異、發(fā)病譜的變化、傳染源的判定、傳播途徑復(fù)雜化、疫苗免疫效果下降等，大多需要應(yīng)用分子流行病學(xué)來(lái)解決。病原體研究：病原體研究：如病原體的分布及其影響因素、病原體的流行病學(xué)分類和檢測(cè)鑒定、病原體群體進(jìn)化變異規(guī)律及影響因素人群感染和傳染源研究：人群感染和傳染源研究：如感染類型及群體發(fā)病譜、傳染源確定等。 傳播途徑研究：傳播途徑研究：確認(rèn)與流行傳播規(guī)律、傳染來(lái)源追蹤等。人群易感性研究：人群易感性研究：群體中對(duì)重要傳染病的特異抗體進(jìn)行檢測(cè)、易感基

28、因分布及其與流行的關(guān)系等研究。疫苗及免疫預(yù)防制劑的研究：疫苗及免疫預(yù)防制劑的研究：免疫效果研究、高效安全新型疫苗研制等。防治對(duì)策和措施研究及其效果評(píng)價(jià)：防治對(duì)策和措施研究及其效果評(píng)價(jià)：如干預(yù)對(duì)感染率、發(fā)病率、發(fā)病譜的影響，免疫預(yù)防效果評(píng)價(jià)、疫苗相關(guān)病例的研究、疫苗逃逸病例的研究等。 51慢性非傳染病預(yù)防控制慢性非傳染病預(yù)防控制 暴露測(cè)量更加科學(xué)、準(zhǔn)確；如將暴露測(cè)量分為外暴露、內(nèi)暴露、生物作用劑量等； 細(xì)微效應(yīng)可以察覺(jué)，可以測(cè)定健康疾病連續(xù)帶不同階段的效應(yīng)指標(biāo)； 易感性研究深入到基因和分子水平； 防治措施效果評(píng)價(jià)更加有效。 52健康狀態(tài)研究健康狀態(tài)研究 醫(yī)學(xué)研究對(duì)象是病人，在漫長(zhǎng)的醫(yī)學(xué)實(shí)踐中，主要是探討疾病的發(fā)生原因、醫(yī)學(xué)研究對(duì)象是病人，在漫長(zhǎng)的醫(yī)學(xué)實(shí)踐中，主要是探討疾病的發(fā)生原因、診斷、治療和預(yù)防?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)則不僅表現(xiàn)在防治疾病，也非常重視促進(jìn)健康。診斷、治療和預(yù)防?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)則不僅表現(xiàn)在防治疾病，也非常重視促進(jìn)健康。流行病學(xué)不僅關(guān)注病人