生物利用度和生物等效性

1、化學(xué)藥物制劑人體生物利用度和生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則二五年三月一、概述藥物制劑要產(chǎn)生最佳療效，其藥物活性成分應(yīng)當(dāng)在預(yù)期時(shí)間段內(nèi)釋放吸收并被轉(zhuǎn)運(yùn)到作用部位達(dá)到預(yù)期的有效濃度。大多數(shù)藥物是進(jìn)入血液循環(huán)后產(chǎn)生全身治療效果的，作用部位的藥物濃度和血液中藥物濃度存在一定的比例關(guān)系，因此可以通過測定血液循環(huán)中的藥物濃度來獲得反映藥物體內(nèi)吸收程度和速度的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，間接預(yù)測藥物制劑的臨床治療效果，以評價(jià)制劑的質(zhì)量。允許這種預(yù)測的前提是制劑中活性成分進(jìn)入體內(nèi)的行為是一致并且可重現(xiàn)的。生物利用度（bioavailability ba（生物利用度）是反映藥物活性成分吸收進(jìn)入體內(nèi)的程度和速度的指標(biāo)。過去出

2、現(xiàn)的一些由于制劑生物利用度不同而導(dǎo)致的不良事件，使人們認(rèn)識到確有必要對制劑中活性成分生物利用度的一致性或可重現(xiàn)性進(jìn)行驗(yàn)證，尤其是在含有相同活性成分的仿制產(chǎn)品要替代它的原創(chuàng)制劑進(jìn)入臨床使用的時(shí)候。鑒于藥物濃度和治療效果相關(guān)，假設(shè)在同一受試者，相同的血藥濃度-時(shí)間曲線意味著在作用部位能達(dá)到相同的藥物濃度，并產(chǎn)生相同的療效，那么就可以藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)作為替代的終點(diǎn)指標(biāo)來建立等效性，即生物等效性（bioequivalence be（生物等效性）。ba（生物利用度） 和be（生物等效性） 研究已經(jīng)成為評價(jià)制劑質(zhì)量的重要手段。本指導(dǎo)原則將重點(diǎn)闡述ba（生物利用度） 和be（生物等效性） 研究的相關(guān)概念，應(yīng)用

3、范圍和ba（生物利用度） 和be（生物等效性） 研究的設(shè)計(jì)、操作和評價(jià)等。本指導(dǎo)原則主要是針對化學(xué)藥品口服制劑的ba（生物利用度） 和be（生物等效性） 研究，也適用于其他需要吸收起全身作用的化學(xué)藥品制劑。因?yàn)樵诰唧w應(yīng)用過程中有可能面臨多種情況，對于一些特殊問題，仍應(yīng)遵循具體問題具體分析的原則。二、ba（生物利用度） 和be（生物等效性） 基本概念及應(yīng)用1. 生物利用度：是指藥物活性成分從制劑釋放吸收進(jìn)入全身循環(huán)的程度和速度。一般分為絕對生物利用度和相對生物利用度。絕對生物利用度是以靜脈制劑（通常認(rèn)為靜脈制劑生物利用度為100%）為參比制劑獲得的藥物活性成分吸收進(jìn)入體內(nèi)循環(huán)的相對量；相對生物利

4、用度則是以其他非靜脈途徑給藥的制劑（如片劑和口服溶液）為參比制劑獲得的藥物活性成分吸收進(jìn)入體循環(huán)的相對量，2. 生物等效性：是指藥學(xué)等效制劑或可替換藥物在相同試驗(yàn)條件下，服用相同劑量，其活性成分吸收程度和速度的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。通常意義的be（生物等效性） 研究是指用ba（生物利用度） 研究方法，以藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)為終點(diǎn)指標(biāo)，根據(jù)預(yù)先確定的等效標(biāo)準(zhǔn)和限度進(jìn)行的比較研究。在藥代動(dòng)力學(xué)方法確實(shí)不可行時(shí), 也可以考慮以臨床綜合療效、藥效學(xué)指標(biāo)或體外試驗(yàn)指標(biāo)等進(jìn)行比較性研究，但需充分證實(shí)所采用的方法具有科學(xué)性和可行性。了解以下幾個(gè)概念將有助于理解ba（生物利用度） 和be（生物等效性）：原創(chuàng)藥（inno

5、vator product）：是指已經(jīng)過全面的藥學(xué)、藥理學(xué)和毒理學(xué)研究以及臨床研究數(shù)據(jù)證實(shí)其安全有效性并首次被批準(zhǔn)上市的藥品。藥學(xué)等效性(pharmaceutical equivalence)：如果兩制劑含等量的相同活性成分，具有相同的劑型，符合同樣的或可比較的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，則可以認(rèn)為他們是藥學(xué)等效的。藥學(xué)等效不一定意味著生物等效，因?yàn)檩o料的不同或生產(chǎn)工藝差異等可能會(huì)導(dǎo)致藥物溶出或吸收行為的改變。治療等效性(therapeutic equivalence)：如果兩制劑含有相同活性成分，并且臨床上顯示具有相同的安全性和有效性，可以認(rèn)為兩制劑具有治療等效性。如果兩制劑中所用輔料本身并不會(huì)導(dǎo)致有效性和安

6、全性問題，生物等效性研究是證實(shí)兩制劑治療等效性最合適的辦法。如果藥物吸收速度與臨床療效無關(guān),吸收程度相同但吸收速度不同的藥物也可能達(dá)到治療等效。而含有相同的活性成分只是活性成分化學(xué)形式不同（如某一化合物的鹽、酯等）或劑型不同（如片劑和膠囊劑）的藥物制劑也可能治療等效?；鞠嗨扑幬铮╡ssentially similar product）：如果兩個(gè)制劑具有等量且符合同一質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的藥物活性成分，具有相同劑型，并且經(jīng)過證明具有生物等效性,則兩個(gè)制劑可以認(rèn)為是基本相似藥物。從廣義上講，這一概念也應(yīng)適用于含同一活性成分的不同的劑型，如片劑和膠囊劑。與原創(chuàng)藥基本相似藥物是可以替換原創(chuàng)藥使用的。ba（生物利

7、用度） 和be（生物等效性） 均是評價(jià)制劑質(zhì)量的重要指標(biāo)，ba（生物利用度） 強(qiáng)調(diào)反映藥物活性成分到達(dá)體內(nèi)循環(huán)的相對量和速度，是新藥研究過程中選擇合適給藥途徑和確定用藥方案(如給藥劑量和給藥間隔)的重要依據(jù)之一。be（生物等效性） 則重點(diǎn)在于以預(yù)先確定的等效標(biāo)準(zhǔn)和限度進(jìn)行的比較，是保證含同一藥物活性成分的不同制劑體內(nèi)行為一致性的依據(jù)，是判斷后研發(fā)產(chǎn)品是否可替換已上市藥品使用的依據(jù)。ba（生物利用度） 和be（生物等效性） 研究在藥品研發(fā)的不同階段有不同作用：在新藥研究階段，為了確定新藥處方、工藝合理性，通常需要比較改變上述因素后制劑是否能達(dá)到預(yù)期的生物利用度；開發(fā)了新劑型，要對擬上市劑型進(jìn)行生

8、物利用度研究以確定劑型的合理性，通過與原劑型比較的ba（生物利用度） 研究來確定新劑型的給藥劑量，也可通過be（生物等效性） 研究來證實(shí)新劑型與原劑型是否等效；在臨床試驗(yàn)過程中，可通過be（生物等效性） 研究來驗(yàn)證同一藥物的不同時(shí)期產(chǎn)品的前后一致性，如：早期和晚期的臨床試驗(yàn)用藥品，臨床試驗(yàn)用藥品（尤其是用于確定劑量的試驗(yàn)藥）和擬上市藥品等。在仿制生產(chǎn)已有國家標(biāo)準(zhǔn)藥品時(shí)，可通過be（生物等效性） 研究來證明仿制產(chǎn)品與原創(chuàng)藥是否具有生物等效性，是否可與原創(chuàng)藥替換使用。藥品批準(zhǔn)上市后，如處方組成成分、比例以及工藝等出現(xiàn)一定程度的變更時(shí)，研究者需要根據(jù)產(chǎn)品變化的程度來確定是否進(jìn)行be（生物等效性） 研

9、究，以考察變更后和變更前產(chǎn)品是否具有生物等效性。以提高生物利用度為目的研發(fā)的新制劑，需要進(jìn)行ba（生物利用度） 研究，了解變更前后生物利用度的變化。三、研究方法be（生物等效性） 研究是在試驗(yàn)制劑和參比制劑生物利用度比較基礎(chǔ)上建立等效性，ba（生物利用度） 研究多數(shù)也是比較性研究，兩者的研究方法與步驟基本一致，只是研究目的不同，導(dǎo)致在某些設(shè)計(jì)和評價(jià)上有一些不同，故在這部分主要闡述be（生物等效性）研究方法，該方法同樣適合于ba（生物利用度） 研究，建議研究者根據(jù)產(chǎn)品研究目的來進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。目前推薦的生物等效性研究方法包括體內(nèi)和體外的方法。按方法的優(yōu)先考慮程度從高到低排列：藥代動(dòng)力學(xué)研究方法、藥

10、效動(dòng)力學(xué)研究方法、臨床比較試驗(yàn)方法、體外研究方法。具體如下：藥代動(dòng)力學(xué)研究即采用人體生物利用度比較研究的方法。通過測量不同時(shí)間點(diǎn)的生物樣本（如全血、血漿、血清或尿液）中藥物濃度，獲得藥物濃度-時(shí)間曲線（concentration-time curve,c-t）來反映藥物從制劑中釋放吸收到體循環(huán)中的動(dòng)態(tài)過程。并經(jīng)過適當(dāng)?shù)臄?shù)據(jù)，得出與吸收程度和速度有關(guān)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)如曲線下面積（auc）、達(dá)峰濃度（cmax）、達(dá)峰時(shí)間（tmax）等，通過統(tǒng)計(jì)學(xué)比較以上參數(shù)，判斷兩制劑是否生物等效。藥效動(dòng)力學(xué)研究在無可行的藥代動(dòng)力學(xué)研究方法建立生物等效性研究時(shí)（如無靈敏的血藥濃度檢測方法、濃度和效應(yīng)之間不存在線性

11、相關(guān)），可以考慮用明確的可分級定量的人體藥效學(xué)指標(biāo)通過效應(yīng)-時(shí)間曲線（effect-time curve）與參比制劑比較來確定生物等效性。臨床比較試驗(yàn)當(dāng)無適宜的藥物濃度檢測方法，也缺乏明確的藥效學(xué)指標(biāo)時(shí)，也可以通過以參比制劑為對照的臨床比較試驗(yàn)，以綜合的療效終點(diǎn)指標(biāo)來驗(yàn)證兩制劑的等效性。然而，作為生物等效研究方法，對照的臨床試驗(yàn)可能因?yàn)闃颖玖坎蛔慊驒z測指標(biāo)不靈敏而缺乏足夠的把握度去檢驗(yàn)差異，故建議盡量采用藥代動(dòng)力學(xué)研究方法。通過增加樣本量或嚴(yán)格的臨床研究實(shí)施在一定程度上可以克服以上局限。體外研究一般不提倡用體外的方法來確定生物等效性，因?yàn)轶w外并不能完全代替體內(nèi)行為，但在某些情況下，如能提供充分

12、依據(jù)，也可以采用體外的方法來證實(shí)生物等效性。根據(jù)生物藥劑學(xué)分類證明屬于高溶解度，高滲透性，快速溶出的口服制劑可以采用體外溶出度比較研究的方法驗(yàn)證生物等效，因?yàn)樵擃愃幬锏娜艹?、吸收已?jīng)不是藥物進(jìn)入體內(nèi)的限速步驟。對于難溶性但高滲透性的藥物，如已建立良好的體內(nèi)外相關(guān)關(guān)系，也可用體外溶出的研究來替代體內(nèi)研究。四、ba（生物利用度） 和be（生物等效性） 研究具體要求以藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)為終點(diǎn)指標(biāo)的研究方法是目前普遍采用的生物等效性研究方法。一個(gè)完整的生物等效性研究包括生物樣本分析、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、統(tǒng)計(jì)分析、結(jié)果評價(jià)四個(gè)方面內(nèi)容。（一）生物樣本分析方法的建立和確證生物樣品一般來自全血、血清、血漿、尿液或其他組織

13、，具有取樣量少、藥物濃度低、干擾物質(zhì)多以及個(gè)體的差異大等特點(diǎn)，因此必須根據(jù)待測物的結(jié)構(gòu)、生物介質(zhì)和預(yù)期的濃度范圍，建立適宜的生物樣品定量分析方法，并對方法進(jìn)行確證。1. 常用分析方法，目前常用的幾種分析方法有：（1）色譜法：氣相色譜法(gc)、高效液相色譜法(hplc)、色譜質(zhì)譜聯(lián)用法（lcms、lc-ms-ms、gc-ms、gc-ms-ms）等，可用于大多數(shù)藥物的檢測；（2）免疫學(xué)方法：放射免疫分析法、酶免疫分析法、熒光免疫分析法等，多用于蛋白質(zhì)多肽類物質(zhì)檢測；（3）微生物學(xué)方法，可用于抗生素藥物的測定。生物樣本分析方法的選擇宜盡量選擇可行的靈敏度高的方法。2. 方法學(xué)確證（method v

14、alidation）建立可靠的和可重現(xiàn)的定量分析方法是進(jìn)行生物等效性研究的關(guān)鍵之一。為了保證分析方法可靠，必須進(jìn)行充分的方法確證，一般應(yīng)進(jìn)行以下幾方面的考察：特異性(specificity)特異性是指樣品中存在干擾成分的情況下，分析方法能夠準(zhǔn)確、專一地測定分析物的能力。必須提供證明所測定物質(zhì)是受試藥品的原形藥物或特定活性代謝物，生物樣品所含內(nèi)源性物質(zhì)和相應(yīng)代謝物、降解產(chǎn)物不得干擾對樣品的測定，如果有幾個(gè)分析物，應(yīng)保證每一個(gè)分析物都不被干擾。應(yīng)確定保證分析方法特異性的最佳檢測條件。對于色譜法至少要考察6個(gè)來自不同個(gè)體的空白生物樣品色譜圖、空白生物樣品外加對照物質(zhì)色譜圖（注明濃度）及用藥后的生物樣

15、品色譜圖反映分析方法的特異性。對于以軟電離質(zhì)譜為基礎(chǔ)的檢測法（lcms、lc-ms-ms）應(yīng)注意考察分析過程中的介質(zhì)效應(yīng)，如離子抑制等。標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量范圍（calibration curve）標(biāo)準(zhǔn)曲線反映了所測定物質(zhì)濃度與儀器響應(yīng)值之間的關(guān)系，一般用回歸分析方法（如用加權(quán)最小二乘法）所得的回歸方程來評價(jià)。應(yīng)提供標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性方程和相關(guān)系數(shù)，說明其線性相關(guān)程度。標(biāo)準(zhǔn)曲線高低濃度范圍為定量范圍，在定量范圍內(nèi)濃度測定結(jié)果應(yīng)達(dá)到試驗(yàn)要求的精密度和準(zhǔn)確度。配制標(biāo)準(zhǔn)樣品應(yīng)使用與待測樣品相同生物介質(zhì)，不同生物樣品應(yīng)制備各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線，用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)濃度個(gè)數(shù)取決于分析物可能的濃度范圍和分析物/響應(yīng)值關(guān)

16、系的性質(zhì)。必須至少用6個(gè)濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，對于非線性相關(guān)可能需要更多濃度點(diǎn)。定量范圍要能覆蓋全部待測的生物樣品濃度范圍，不得用定量范圍外推的方法求算未知樣品的濃度。建立標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)應(yīng)隨行空白生物樣品，但計(jì)算時(shí)不包括該點(diǎn)，僅用于評價(jià)干擾。標(biāo)準(zhǔn)曲線各濃度點(diǎn)的實(shí)測值與標(biāo)示值之間的偏差在可接受的范圍之內(nèi)時(shí)，可判定標(biāo)準(zhǔn)曲線合格?？山邮芊秶话阋?guī)定為最低濃度點(diǎn)的偏差在±20%以內(nèi)，其余濃度點(diǎn)的偏差在±15%以內(nèi)。只有合格的標(biāo)準(zhǔn)曲線才能對臨床待測樣品進(jìn)行定量計(jì)算。當(dāng)線性范圍較寬的時(shí)候，推薦采用加權(quán)的方法對標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行計(jì)算，以使低濃度點(diǎn)計(jì)算得比較準(zhǔn)確。定量下限（lower limit of

17、quantitation，lloq）定量下限是標(biāo)準(zhǔn)曲線上的最低濃度點(diǎn)，表示測定樣品中符合準(zhǔn)確度和精密度要求的最低藥物濃度。lloq 應(yīng)能滿足測定35 個(gè)消除半衰期時(shí)樣品中的藥物濃度或能檢測出cmax 的110120 時(shí)的藥物濃度。其準(zhǔn)確度應(yīng)在真實(shí)濃度的80%120%范圍內(nèi)，相對標(biāo)準(zhǔn)差(rsd（相對標(biāo)準(zhǔn)差）)應(yīng)小于20%。應(yīng)至少由5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣品測試結(jié)果證明。精密度與準(zhǔn)確度(prcision and accuracy) （偏差=【（實(shí)測值標(biāo)示值）/標(biāo)示值】x100%）精密度是指在確定的分析條件下，相同介質(zhì)中相同濃度樣品的一系列測量值的分散程度。通常用質(zhì)控樣品的批內(nèi)和批間rsd（相對標(biāo)準(zhǔn)差）來考察方法

18、的精確度。一般rsd（相對標(biāo)準(zhǔn)差） 應(yīng)小于15，在lloq 附近rsd（相對標(biāo)準(zhǔn)差） 應(yīng)小于20。準(zhǔn)確度是指在確定的分析條件下，測得的生物樣品濃度與真實(shí)濃度的接近程度(即質(zhì)控樣品的實(shí)測濃度與真實(shí)濃度的偏差)，重復(fù)測定已知濃度分析物樣品可獲得準(zhǔn)確度。一般應(yīng)在85115范圍內(nèi)，在lloq附近應(yīng)在80120范圍內(nèi)。一般要求選擇高、中、低3個(gè)濃度的質(zhì)控樣品同時(shí)進(jìn)行方法的精密度和準(zhǔn)確度考察。低濃度選擇在lloq 的3倍以內(nèi)，高濃度接近于標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限，中間選一個(gè)濃度。在測定批內(nèi)精密度時(shí)，每一濃度至少制備并測定5個(gè)樣品。為獲得批間精密度應(yīng)至少在不同天連續(xù)制備并測定3個(gè)合格的分析批(analytical r

19、un/analytical ba（生物利用度）tch)，至少45 個(gè)樣品。樣品穩(wěn)定性(stability)根據(jù)具體情況，對含藥生物樣品在室溫、冰凍或凍融條件下以及不同存放時(shí)間進(jìn)行穩(wěn)定性考察，以確定生物樣品的存放條件和時(shí)間。還應(yīng)注意考察儲(chǔ)備液的穩(wěn)定性以及樣品處理后的溶液中分析物的穩(wěn)定性，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。提取回收率從生物樣本基質(zhì)中回收得到分析物質(zhì)的響應(yīng)值除以純標(biāo)準(zhǔn)品產(chǎn)生的響應(yīng)值即為分析物的提取回收率。也可以說是將供試生物樣品中分析物提取出來供分析的比例。應(yīng)考察高、中、低3個(gè)濃度的提取回收率，其結(jié)果應(yīng)當(dāng)精密和可重現(xiàn)。微生物學(xué)和免疫學(xué)方法確證上述分析方法確證主要針對色譜法，很多參數(shù)和原

20、則也適用于微生物學(xué)或免疫學(xué)分析，但在方法確證中應(yīng)考慮到它們的一些特殊之處。微生物學(xué)或免疫學(xué)分析的標(biāo)準(zhǔn)曲線本質(zhì)上是非線性的，所以應(yīng)盡可能采用比化學(xué)分析更多的濃度點(diǎn)來建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果的準(zhǔn)確度是關(guān)鍵的因素，如果重復(fù)測定能夠改善準(zhǔn)確度，則應(yīng)在方法確證和未知樣品測定中采用同樣的步驟。3. 方法學(xué)質(zhì)控只有在生物樣本分析方法確證完成之后才能開始測定未知樣品。在測定生物樣品中的藥物濃度時(shí)應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量控制，以保證所建立的方法在實(shí)際應(yīng)用中的可靠性。推薦由獨(dú)立的人員配制不同濃度的質(zhì)控樣品對分析方法進(jìn)行考核。每個(gè)未知樣品一般測定一次，必要時(shí)可進(jìn)行復(fù)測。生物等效性試驗(yàn)中，來自同一個(gè)體的生物樣品最好在同一批中測定。每個(gè)分

21、析批生物樣品測定時(shí)應(yīng)建立新的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并隨行測定高、中、低三個(gè)濃度的質(zhì)控樣品。每個(gè)濃度至少雙樣本，并應(yīng)均勻分布在未知樣品測試順序中。當(dāng)一個(gè)分析批中未知樣品數(shù)目較多時(shí)，應(yīng)增加各濃度質(zhì)控樣品數(shù)，使質(zhì)控樣品數(shù)大于未知樣品總數(shù)的5%。質(zhì)控樣品測定結(jié)果的偏差一般應(yīng)小于15%，低濃度點(diǎn)偏差一般應(yīng)小于20%，最多允許1/3 的質(zhì)控樣品結(jié)果超過上述限度，但不能出現(xiàn)在同一濃度質(zhì)控樣品中。如質(zhì)控樣品測定結(jié)果不符合上述要求，則該分析批樣品測試結(jié)果作廢。濃度高于定量上限的樣品，應(yīng)采用相應(yīng)的空白介質(zhì)稀釋后重新測定。對于濃度低于定量下限的樣品，在進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)分析時(shí)，在達(dá)到cmax以前取樣的樣品應(yīng)以零值計(jì)算，在達(dá)到cma

22、x 以后取樣的樣品應(yīng)以無法定量（not detectable, nd）計(jì)算，以減小零值對auc 計(jì)算的影響。4 分析數(shù)據(jù)的記錄與保存分析方法的有效性應(yīng)通過實(shí)驗(yàn)證明。在臨床報(bào)告中，應(yīng)提供完成這些實(shí)驗(yàn)工作的相關(guān)的詳細(xì)資料。建立一般性和特殊性標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程、保存完整的實(shí)驗(yàn)記錄是分析方法有效性的基本要素。生物分析方法建立中產(chǎn)生的數(shù)據(jù)和質(zhì)控樣品測試結(jié)果應(yīng)全部記錄并妥善保存，并提供足夠的可供評價(jià)的方法學(xué)建立和樣品分析的數(shù)據(jù)。至少應(yīng)當(dāng)提供的數(shù)據(jù)包括：4.1 方法建立的數(shù)據(jù)分析方法的詳細(xì)描述；儀器設(shè)備、分析條件；該方法所用對照品（被測藥物、代謝物、內(nèi)標(biāo)物）的純度和來源；描述測定特異性、準(zhǔn)確度、精密度、回收率、定

23、量限、標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)驗(yàn)并給出獲得的主要數(shù)據(jù)列表；列出批內(nèi)批間精密度和準(zhǔn)確度的詳細(xì)結(jié)果；描述穩(wěn)定性考察及相關(guān)數(shù)據(jù)；根據(jù)具體情況提供代表性的色譜圖或質(zhì)譜圖并加以說明。4.2 樣品分析的數(shù)據(jù)樣品處理和保存的情況；分析樣品時(shí)標(biāo)準(zhǔn)曲線列表；用于計(jì)算結(jié)果的回歸方程；各分析批質(zhì)控樣品測定結(jié)果綜合列表并計(jì)算批內(nèi)和批間精密度、準(zhǔn)確度；各分析批包括的未知樣品濃度計(jì)算結(jié)果。提供20%受試者樣品測試的色譜圖復(fù)印件，包括相應(yīng)分析批的標(biāo)準(zhǔn)曲線和質(zhì)控樣品的色譜圖復(fù)印件。注明缺失樣品的原因，重復(fù)測試的結(jié)果。對舍棄任何分析數(shù)據(jù)和選擇所報(bào)告的數(shù)據(jù)說明理由。4.3 其他相關(guān)信息項(xiàng)目編號、分析方法編號、分析方法類型、分析方法確證進(jìn)行簡

24、化的理由、以及相應(yīng)的項(xiàng)目計(jì)劃編號、標(biāo)題等。（二）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與操作1. 交叉設(shè)計(jì)交叉設(shè)計(jì)是目前應(yīng)用最多最廣的方法，因?yàn)槎鄶?shù)藥物吸收和清除在個(gè)體之間均存在很大變異，個(gè)體間的變異系數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于個(gè)體內(nèi)變異系數(shù)，因此生物等效性研究一般要求按自身交叉對照的方法設(shè)計(jì)。把受試對象隨機(jī)分為幾組，按一定順序處理，一組受試者先服用受試制劑，后服用參比制劑；另一組受試者先服用參比制劑，后服用受試制劑。兩順序間應(yīng)有足夠長的間隔時(shí)間，為清洗期（wash-out period）。這樣，對每位受試者都連續(xù)接受兩次或更多次的處理，相當(dāng)于自身對照，可以將制劑因素對藥物吸收的影響與其他因素區(qū)分開來，減少了不同試驗(yàn)周期和個(gè)體間差異對試驗(yàn)

25、結(jié)果的影響。根據(jù)試驗(yàn)制劑數(shù)量不同一般采用2×2 交叉、3×3 交叉等設(shè)計(jì)。如果是兩種制劑比較，雙處理、雙周期，兩序列的交叉設(shè)計(jì)是較好的選擇。如試驗(yàn)包括3個(gè)制劑（受試制劑2個(gè)和參比制劑1個(gè)）時(shí)，宜采用3制劑3周期二重3×3 拉丁方試驗(yàn)設(shè)計(jì)。各周期間也應(yīng)有足夠的清洗期。設(shè)定清洗期是為了消除兩制劑的互相干擾，避免上個(gè)周期內(nèi)的處理影響到隨后一周期的處理中。清洗期一般不應(yīng)短于7 個(gè)消除半衰期。但有些藥物或其活性代謝物半衰期很長時(shí)則難以按此方法設(shè)計(jì)實(shí)施，在此情況下可能需要考慮按平行組設(shè)計(jì)進(jìn)行，但樣本量可能要增加。而對于某些高變異性藥物（highly variable drug

26、），根據(jù)具體情況，除采用增加例數(shù)的辦法外，可采用重復(fù)交叉設(shè)計(jì),對同一受試者兩次接受同一制劑時(shí)可能存在的個(gè)體內(nèi)差異進(jìn)行測定。2. 受試者的選擇2.1 受試者入選條件：受試者的選擇應(yīng)當(dāng)盡量使個(gè)體間差異減到最小，以便能檢測出制劑間的差異。試驗(yàn)方案中應(yīng)明確入選和剔除條件。一般情況應(yīng)選擇男性健康受試者。特殊作用的藥品，則應(yīng)根據(jù)具體情況選擇適當(dāng)受試者。選擇健康女性受試者應(yīng)避免懷孕的可能性。如待測藥物存在已知的不良反應(yīng)，可能帶來安全性擔(dān)憂，也可考慮選擇患者作為受試者。年齡:一般1840 周歲，同一批受試者年齡不宜相差10 歲以上。體重：正常受試者的體重一般不應(yīng)低于50kg。按體質(zhì)指數(shù)(body massin

27、dex , bmi)體重（kg）身高2（m2）計(jì)算，一般應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)體重范圍內(nèi)。同一批受試者體重（kg）不宜懸殊過大，因?yàn)槭茉囌叻玫乃幬飫┝渴窍嗤摹Ｊ茉囌邞?yīng)經(jīng)過全面體檢，身體健康，無心、肝、腎、消化道、神經(jīng)系統(tǒng)、精神異常及代謝異常等病史；體格檢查示血壓、心率、心電圖、呼吸狀況、肝、腎功能和血象無異常，避免藥物體內(nèi)過程受到疾病干擾。根據(jù)藥物類別和安全性情況，還應(yīng)在試驗(yàn)前、試驗(yàn)期間、試驗(yàn)后進(jìn)行特殊項(xiàng)目檢查，如降糖藥應(yīng)檢查血糖水平。為避免其他藥物干擾，試驗(yàn)前兩周內(nèi)及試驗(yàn)期間禁服任何其他藥物。實(shí)驗(yàn)期間禁煙、酒及含咖啡因的飲料，或某些可能影響代謝的果汁等，以免干擾藥物體內(nèi)代謝。受試者應(yīng)無煙、酒嗜好。如有

28、吸煙史，在討論結(jié)果時(shí)應(yīng)考慮可能的影響。如已知藥物存在遺傳多態(tài)性導(dǎo)致代謝差異，應(yīng)考慮受試者由于慢代謝可能出現(xiàn)的安全性等問題。2.2 受試者例數(shù)受試者例數(shù)應(yīng)當(dāng)符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，對于目前的統(tǒng)計(jì)方法,18-24 例可滿足大多數(shù)藥物對樣本量的要求，但對某些變異性大的藥物可能需要適當(dāng)增加例數(shù)。一個(gè)臨床試驗(yàn)的例數(shù)多少是由三個(gè)基本因素決定的：（1）顯著性水平：即值的大小，通常取0.05 或5%；（2）把握度：即1-值的大小，一般定為不小于80%，其中是犯第類錯(cuò)誤的概率，也就是把實(shí)際有效誤判為無效的概率；（3）變異性（cv%）和差別（）：兩藥等效性檢驗(yàn)中檢測指標(biāo)的變異性和差別越大所需例數(shù)越多。在試驗(yàn)前并不知道和c

29、v%，只能根據(jù)已有的參比制劑的上述參數(shù)來估算或進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)。另外，當(dāng)一個(gè)生物利用度試驗(yàn)完成后，可以根據(jù) 、cv%和把握度等參數(shù)來求n 值，并與試驗(yàn)所選擇例數(shù)進(jìn)行對比，檢驗(yàn)試驗(yàn)所采用例數(shù)是否合適。2.3 受試者分組必須采用隨機(jī)方法分組，各組間應(yīng)具有可比性。3. 受試制劑和參比制劑(test product and reference product ,t and r )參比制劑的質(zhì)量直接影響生物等效性試驗(yàn)結(jié)果的可靠性，一般應(yīng)選擇國內(nèi)已經(jīng)批準(zhǔn)上市相同劑型藥物中的原創(chuàng)藥。在無法獲得原創(chuàng)藥時(shí)，可考慮選用上市主導(dǎo)產(chǎn)品作為參比制劑，但須提供相關(guān)質(zhì)量證明（如含量、溶出度等檢查結(jié)果）及選擇理由。若為完成特定研究

30、目的，可選用相同藥物的其它藥劑學(xué)性質(zhì)相近的上市劑型作為參比制劑，這類參比制劑亦應(yīng)該是已上市的且質(zhì)量合格的產(chǎn)品。參比制劑和受試制劑含量差別不能超過5%。對于受試制劑，應(yīng)為符合臨床應(yīng)用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的中試/生產(chǎn)規(guī)模的產(chǎn)品。應(yīng)提供該制劑的體外溶出度、穩(wěn)定性、含量或效價(jià)測定、批間一致性報(bào)告等，供試驗(yàn)單位參考。個(gè)別藥物尚需提供多晶型及光學(xué)異構(gòu)體的資料。參比制劑和受試制劑均應(yīng)注明研制單位、批號、規(guī)格、保存條件、有效期。試驗(yàn)結(jié)束后受試制劑和參比制劑應(yīng)保留足夠長時(shí)間直到產(chǎn)品批準(zhǔn)上市以備查。4. 給藥劑量進(jìn)行藥物制劑生物利用度和生物等效性研究時(shí)，給藥劑量一般應(yīng)與臨床單次用藥劑量一致，不得超過臨床推薦的單次最大劑量或已

31、經(jīng)證明的安全劑量。受試制劑和參比制劑一般應(yīng)服用相等劑量，需要使用不相等劑量時(shí)，應(yīng)說明理由并提供所用劑量范圍內(nèi)的線性藥代動(dòng)力學(xué)特征依據(jù)，結(jié)果可以劑量校正方式計(jì)算生物利用度。一般情況下普通制劑僅進(jìn)行單劑量給藥研究即可,但在某些情況下可能需要考慮進(jìn)行多次給藥研究，如：（1）受試藥單次服用后原形藥或活性代謝物濃度很低，難以用相應(yīng)分析方法精密測定血藥濃度時(shí)；（2）受試藥的生物利用度有較大個(gè)體差異；（3）藥物吸收程度相差不大，但吸收速度有較大差異；（4）緩控釋制劑。進(jìn)行多次給藥研究應(yīng)按臨床推薦的給藥方案給藥，至少連續(xù)3次測定谷濃度確定血藥濃度達(dá)穩(wěn)態(tài)后選擇一個(gè)給藥間隔取樣進(jìn)行測定，并據(jù)此計(jì)算生物利用度。5.

32、 取樣取樣點(diǎn)的設(shè)計(jì)對保證試驗(yàn)結(jié)果可靠性及藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)計(jì)算的合理性，均有十分重要的意義。通常應(yīng)有預(yù)試驗(yàn)或參考國內(nèi)外的藥代文獻(xiàn)，為合理設(shè)計(jì)采樣點(diǎn)提供依據(jù)。應(yīng)用血藥濃度測定法時(shí)，一般應(yīng)兼顧到吸收相、平衡相（峰濃度）和消除相。在藥物濃度時(shí)間曲線各時(shí)相及預(yù)計(jì)達(dá)峰時(shí)間前后應(yīng)有足夠采樣點(diǎn)，使?jié)舛葧r(shí)間曲線能全面反應(yīng)藥物在體內(nèi)處置的全過程。服藥前應(yīng)先取空白血樣。一般在吸收相部分取2-3個(gè)點(diǎn)，峰濃度附近至少需要3個(gè)點(diǎn)，消除相取3-5個(gè)點(diǎn)。盡量避免第一個(gè)點(diǎn)即為cmax，預(yù)試驗(yàn)將有助于避免這個(gè)問題。采樣持續(xù)到受試藥原形或其活性代謝物35個(gè)半衰期時(shí)，或至血藥濃度為cmax 的110120,auc0-t/auc0-通常

33、應(yīng)當(dāng)大于80%。對于長半衰期藥物，應(yīng)盡可能取樣持續(xù)到足夠比較完整的吸收過程，因?yàn)槟┒讼?xiàng)對該類制劑吸收過程的評價(jià)影響不大。多次給藥研究中，對于一些已知生物利用度受晝夜節(jié)律影響的藥物，則應(yīng)該連續(xù)24小時(shí)取樣。當(dāng)受試藥不能用血藥濃度測定方法進(jìn)行生物利用度檢測時(shí)，若該藥原形或活性代謝物主要由尿排泄（大于給藥劑量的70%），可以考慮尿藥法測定，以尿樣中藥物的累積排泄量來反映藥物攝入量。試驗(yàn)藥品和試驗(yàn)方案應(yīng)當(dāng)符合生物利用度測定要求。尿樣的收集采用分段收集法,其采集頻度、間隔時(shí)間應(yīng)滿足估算受試藥原形藥或活性代謝物經(jīng)尿的排泄程度。但該方法不能反映藥物吸收速度，誤差因素較多，一般不提倡采用。某些藥物在體內(nèi)迅

34、速代謝無法測定生物樣品中原形藥物，也可采用測定生物樣品中主要代謝物濃度的方法，進(jìn)行生物利用度和生物等效性試驗(yàn)。6. 藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)計(jì)算一般用非房室數(shù)學(xué)模型分析方法來估算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。用房室模型方法估算藥代參數(shù)時(shí)，采用不同的方法或軟件其值可能有較大差異。研究者可根據(jù)具體情況選擇使用，但所用軟件必須經(jīng)確證并應(yīng)在研究報(bào)告中注明所用軟件。在生物等效性研究中，其主要測量參數(shù)cmax 和tmax 均以實(shí)測值表示。auc0t 以梯形法計(jì)算，故受數(shù)據(jù)處理程序影響不大。7. 研究過程標(biāo)準(zhǔn)化整個(gè)研究過程應(yīng)當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)化，以使得除制劑因素外，其他各種因素導(dǎo)致的體內(nèi)藥物釋放吸收差異減少到最小，包括受試者的飲食、活動(dòng)都應(yīng)控

35、制。試驗(yàn)工作應(yīng)在i 期臨床試驗(yàn)觀察室進(jìn)行。受試者應(yīng)得到醫(yī)護(hù)人員的監(jiān)護(hù)。受試期間發(fā)生的任何不良反應(yīng)，均應(yīng)及時(shí)處理和記錄，必要時(shí)停止試驗(yàn)。（三）數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析1. 數(shù)據(jù)表達(dá)ba（生物利用度） 和be（生物等效性） 研究必須提供所有受試者各個(gè)時(shí)間點(diǎn)受試制劑和參比制劑的藥物濃度測定數(shù)據(jù)、每一時(shí)間點(diǎn)的平均濃度（mean）及其標(biāo)準(zhǔn)差（sd）和相對標(biāo)準(zhǔn)差（rsd），提供每個(gè)受試者的濃度時(shí)間曲線（c-t 曲線）和平均c-t 曲線以及c-t 曲線各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)差。不能隨意剔除任何數(shù)據(jù)。脫落者的數(shù)據(jù)一般不可用其他數(shù)據(jù)替代。2. 藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)2.1 單次給藥的ba（生物利用度） 和be（生物等效性） 研究，

36、提供所有受試者服用受試制劑和參比制劑的auc0t，auc0、cmax、tmax、t1/2、cl、vd、 f 等參數(shù)及其平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。cmax 和tmax 均以實(shí)測值表示。auc0t 以梯形法計(jì)算；auc0按公式計(jì)算：auc0auc0tct/ z（t 為最后一次可實(shí)測血藥濃度的采樣時(shí)間；ct 為末次可測定樣本藥物濃度； z 系對數(shù)濃度-時(shí)間曲線末端直線部份求得的末端消除速率常數(shù)，可用對數(shù)濃度-時(shí)間曲線末端直線部分的斜率求得；t1/2 用公式t1/20.693 z 計(jì)算。以各個(gè)受試者受試制劑（t）和參比制劑（r）的auc0t 按下式分別計(jì)算其相對生物利用度（f）值：當(dāng)受試制劑和參比制劑劑量相同時(shí)

37、：fauctaucr×100受試制劑和參比制劑劑量不同時(shí)，若受試藥物具備線性藥代動(dòng)力學(xué)特征，可按下式以劑量予以校正：f【auct×draucr×dt】 ×100（auct、aucr分別為t 和r 的auc；dr、dt 分別為t 和r 的劑量）.3.2.2 對于多次給藥的 ba（生物利用度） 和be（生物等效性） 研究，提供受試制劑和參比制劑的三次谷濃度數(shù)據(jù)（cmin），達(dá)穩(wěn)態(tài)后的aucss css-max、css-min 、t ss-max、t1/2 、f、df 等參數(shù)。當(dāng)受試制劑與參比制劑劑量相等時(shí)，f 值按下式計(jì)算：faucss taucss r&#

38、215;100（式中aucss t 和aucss r 分別為t 和r 穩(wěn)態(tài)條件下的auc）3. 統(tǒng)計(jì)分析3.1 對數(shù)轉(zhuǎn)換評價(jià)be（生物等效性） 的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)auc0t 和cmax 在進(jìn)行等效性檢驗(yàn)前必須作對數(shù)轉(zhuǎn)換。當(dāng)數(shù)據(jù)有偏倚時(shí)經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換可校正其對稱性。此外,統(tǒng)計(jì)中數(shù)據(jù)對比宜用比值法而不用差值法,通過對數(shù)轉(zhuǎn)換,可實(shí)現(xiàn)將均值之比置信區(qū)間轉(zhuǎn)換為對數(shù)形式的均值之差的計(jì)算。3.2 等效判斷標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)前普遍采用主要藥代參數(shù)經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后以多因素方差分析（anova）進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，然后用雙單側(cè)t檢驗(yàn)和計(jì)算90置信區(qū)間的統(tǒng)計(jì)分析方法來評價(jià)和判斷藥物間的生物等效性。方差檢驗(yàn)是顯著性檢驗(yàn)，設(shè)定的無效假設(shè)是兩藥無

39、差異，檢驗(yàn)方式為是與否，在p<0.05 時(shí)認(rèn)為兩者差異有統(tǒng)計(jì)意義，但不一定不等效；p>0.05時(shí)認(rèn)為兩藥差異無統(tǒng)計(jì)意義，但p>0.05 并不能認(rèn)為兩者相等或相近。在生物利用度試驗(yàn)中，采用多因素方差分析（anova）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以判斷藥物制劑間、個(gè)體間、周期間和服藥順序間的差異。在生物等效性實(shí)驗(yàn)中，方差分析可提示誤差來源，為雙單側(cè)t 檢驗(yàn)計(jì)算提供了誤差值（mse）。雙單側(cè)t 檢驗(yàn)及（12 ）%置信區(qū)間法是目前生物等效檢驗(yàn)的唯一標(biāo)準(zhǔn)。雙向單側(cè)t檢驗(yàn)是等效性檢驗(yàn)，設(shè)定的無效假設(shè)是兩藥不等效，受試制劑在參比制劑一定范圍之外，在p<0.05 時(shí)說明受試制劑沒有超過規(guī)定的參比制劑

40、的高限和低限，拒絕無效假設(shè)，可認(rèn)為兩藥等效。（12 ）%置信區(qū)間是雙單側(cè)t檢驗(yàn)另一種表達(dá)方式。其基本原理是在高、低2 個(gè)方向?qū)κ茉囍苿┑膮?shù)均值與高低界值之間的差異分別作單側(cè)t 檢驗(yàn)，若受試制劑均數(shù)在高方向沒有大于等于參比制劑均數(shù)的125（p0.05），且在低方向也沒有小于等于參比制劑均數(shù)的80（p0.05），即在兩個(gè)方向的單側(cè)t檢驗(yàn)，都能以95的置信區(qū)間確認(rèn)沒有超出規(guī)定范圍，則可認(rèn)為受試制劑與參比制劑生物等效。等效判斷標(biāo)準(zhǔn)，一般規(guī)定，經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后的受試制劑的auc0t 在參比制劑的80-125范圍， 受試制劑的cmax 在參比制劑的70-143范圍 。根據(jù)雙單側(cè)檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)量，同時(shí)求得（12

41、）%置信區(qū)間，如在規(guī)定范圍內(nèi)，即可有12 的概率判斷兩藥生物等效。如有必要時(shí)，應(yīng)對tmax 經(jīng)非參數(shù)法檢驗(yàn)，如無差異，可以認(rèn)定受試制劑與參比制劑生物等效。4. 群體生物等效性和個(gè)體生物等效性目前均采用平均生物等效性（average bioequivalence ,abe（生物等效性）評價(jià)方法，藥物生物等效性的統(tǒng)計(jì)推斷是以受試制劑和參比制劑生物利用度參數(shù)平均值為考察指標(biāo)的,從他們的樣本均數(shù)推斷總體均數(shù)是否等效。由于平均生物等效性只考慮參數(shù)平均值,未考慮變異及分布,不能保證個(gè)體間生物利用度相近,對低變異和高變異藥物設(shè)置的生物等效性標(biāo)準(zhǔn)一樣。因此也有提出群體等效（population bioequi

42、valence, pbe（生物等效性）和個(gè)體生物等效性（individualbioequivalence,ibe（生物等效性）的概念。pbe（生物等效性） 評價(jià)的目的是為了獲得某仿制藥應(yīng)用于人群的效果，不但要對被比較制劑均值的差別進(jìn)行檢驗(yàn)，還要比較被比較制劑的群體變異。ibe（生物等效性） 評價(jià)除了比較均值的差別，還要比較個(gè)體內(nèi)變異、個(gè)體和制劑間的交互作用，從而判斷患者換用其它藥物后是否合適。因?yàn)槟壳皩be（群體生物等效性） 和ibe（個(gè)體生物等效性） 評價(jià)方法經(jīng)驗(yàn)有限，而且目前大多數(shù)藥物運(yùn)用abe（平均生物等效性） 評價(jià)方法可以滿足要求，因此暫不對此提出要求。建議結(jié)合申報(bào)品種考慮，參照相關(guān)

43、文獻(xiàn)選擇適宜的評價(jià)方法。（四）結(jié)果評價(jià)生物等效性是指一種藥物的不同制劑在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，給予相同劑量，其吸收程度和吸收速度沒有明顯差異。故對受試制劑與參比制劑的生物等效性評價(jià)，應(yīng)從藥物吸收程度和吸收速度兩方面進(jìn)行，評價(jià)反映這兩方面的3 個(gè)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)即auc0t、cmax 和tmax 是否符合前述等效標(biāo)準(zhǔn)。目前比較肯定auc 對藥物吸收程度的衡量作用，而cmax、tmax 依賴取樣時(shí)間的安排，用它們衡量吸收速率有時(shí)是不夠準(zhǔn)確的，不適合用于具有多峰現(xiàn)象的制劑及個(gè)體變異大的實(shí)驗(yàn)。故在評價(jià)時(shí)，若出現(xiàn)某些不等效特殊情況，需具體問題加以具體分析。對于auc，一般要求90可信區(qū)間在80125范圍內(nèi)。對

44、于治療窗窄的藥物，這個(gè)范圍可能應(yīng)適當(dāng)縮小，而在極少數(shù)情況下，如果經(jīng)臨床證實(shí)合理的情況下，也可以適當(dāng)放寬范圍。對cmax 也是如此。而對于tmax，一般在釋放快慢與臨床療效和安全性密切相關(guān)時(shí)需要統(tǒng)計(jì)評價(jià)，其等效范圍可根據(jù)臨床要求來確定。對于出現(xiàn)受試制劑生物利用度高于參比制劑的情況，即所謂超生物利用度（suprabioavailability），可以考慮兩種情況：1）參比制劑是否本身生物利用度低的產(chǎn)品，因而受試制劑表現(xiàn)出生物利用度相對較高；2）參比制劑質(zhì)量符合要求，受試制劑確實(shí)超生物利用度。結(jié)果的評價(jià)應(yīng)結(jié)合研究目的出發(fā)，進(jìn)行生物等效性評價(jià)的目的提供兩制劑可替換使用的依據(jù)；進(jìn)行生物利用度研究，則主要

45、分析獲得的相對生物利用度數(shù)值進(jìn)一步指導(dǎo)確定新劑型的臨床使用劑量。（五）臨床報(bào)告內(nèi)容為了滿足評價(jià)的需求，一份生物等效性研究臨床報(bào)告內(nèi)容至少應(yīng)包括以下內(nèi)容（1）實(shí)驗(yàn)?zāi)康?；?）生物樣本分析方法的建立和考察的數(shù)據(jù)，提供必要的圖譜；（3）詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和操作方法，包括全部受試者的資料、樣本例數(shù)、參比制劑、給藥劑量、服藥方法和采樣時(shí)間安排；（4）原始測定未知樣品濃度全部數(shù)據(jù)，每個(gè)受試者藥代參數(shù)和藥時(shí)曲線；（5）采用的數(shù)據(jù)處理程序和統(tǒng)計(jì)分析方法以及詳細(xì)統(tǒng)計(jì)過程和結(jié)果；（6）服藥后的臨床不良反應(yīng)觀察結(jié)果，受試者中途退出和脫落記錄及原因；（7）生物利用度或生物等效性結(jié)果分析以及討論；（8）參考文獻(xiàn)。正文前應(yīng)有

46、簡短摘要；正文末，應(yīng)注明實(shí)驗(yàn)單位、研究負(fù)責(zé)人、參加實(shí)驗(yàn)人員，并簽名蓋章，以示對研究結(jié)果負(fù)責(zé)。五、特殊制劑以上研究方法主要針對普通口服制劑，在某些特殊劑型要求可能不同：（一）口服緩（控）釋制劑緩（控）釋制劑因?yàn)椴捎昧诵录夹g(shù)改變了其體內(nèi)釋放吸收過程，因此必須進(jìn)行生物利用度比較研究以證實(shí)其緩（控）釋特征，但在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和評價(jià)時(shí)與普通制劑都有不同。一般要求應(yīng)在單次給藥和多次給藥達(dá)穩(wěn)態(tài)兩種條件下進(jìn)行。由于緩（控）釋制劑釋放時(shí)間長，可能受食物影響大，因此必要時(shí)還應(yīng)考慮食物對吸收的影響。1. 單次給藥試驗(yàn)旨在比較受試者于空腹?fàn)顟B(tài)下服用緩（控）釋受試制劑與參比制劑的吸收速度和吸收程度的生物等效性，確認(rèn)受試制劑的

47、緩（控）釋藥代動(dòng)力學(xué)特征。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)基本同普通制劑，給藥方式應(yīng)與臨床推薦用法用量一致。1.1 參比制劑：若國內(nèi)已有相同產(chǎn)品上市，應(yīng)選用該緩（控）釋制劑相同的國內(nèi)上市的原創(chuàng)藥或主導(dǎo)產(chǎn)品作為參比制劑；若系創(chuàng)新的緩（控）釋制劑，則以該藥物已上市同類普通制劑的原創(chuàng)藥或主導(dǎo)產(chǎn)品作為參比制劑。1.2 應(yīng)提供藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)：同樣應(yīng)提供（1）各受試者受試制劑與參比制劑的不同時(shí)間點(diǎn)生物樣品藥物濃度，以列表和曲線圖表示；（2）計(jì)算各受試者的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)并計(jì)算均值與標(biāo)準(zhǔn)差：auc0t、auc0、cmax、tmax、f 值，并盡可能提供其它參數(shù)如平均滯留時(shí)間（mrt）等體現(xiàn)緩（控）釋特征的指標(biāo)。1.3 結(jié)果評價(jià)：

48、緩（控）釋受試制劑單次給藥的相對生物利用度估算同普通制劑。如緩（控）釋受試制劑與緩（控）釋參比制劑比較，如auc、cmax、tmax均符合生物等效性統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，可認(rèn)定兩制劑于單次給藥條件下生物等效；若緩（控）釋受試制劑與普通制劑比較，一般要求auc 不低于普通制劑80%，而cmax 明顯降低，tmax 明顯延遲，即顯示該制劑具緩釋或控釋動(dòng)力學(xué)特征。2. 多次給藥試驗(yàn)旨在比較受試制劑與參比制劑多次連續(xù)用藥達(dá)穩(wěn)態(tài)時(shí)，藥物的吸收程度、穩(wěn)態(tài)血藥濃度和波動(dòng)情況。2.1 給藥方法：按臨床推薦的給藥方案連續(xù)服藥的時(shí)間達(dá)7個(gè)消除半衰期后，通過連續(xù)測定至少3 次谷濃度（谷濃度采樣時(shí)間應(yīng)安排在不同日的同一時(shí)間內(nèi)）

49、，以證實(shí)受試者血藥濃度已達(dá)穩(wěn)態(tài)。達(dá)穩(wěn)態(tài)后參照單次給藥采樣時(shí)間點(diǎn)設(shè)計(jì)，測定末次給藥完整血藥濃度-時(shí)間曲線。以普通制劑為參比時(shí)，普通制劑與緩（控）釋制劑應(yīng)分別按推薦臨床用藥方法給藥（例如普通制劑每日2 次，緩（控）釋制劑每日1 次），達(dá)到穩(wěn)態(tài)后，緩（控）釋制劑選末次給藥，參照單次給藥采樣時(shí)間點(diǎn)設(shè)計(jì)，然后計(jì)算各參數(shù)，而普通制劑仍按臨床用法給藥，按2次給藥的藥時(shí)曲線確定采樣時(shí)間點(diǎn)，測得auc是實(shí)際2次給藥后的總和，穩(wěn)態(tài)峰濃度、達(dá)峰時(shí)間及谷濃度可用2次給藥的平均值。如用劑量調(diào)整公式計(jì)算auc（如以1次給藥auc的2倍計(jì)），將會(huì)使測得的auc值不能準(zhǔn)確反映實(shí)際auc值。2.2 應(yīng)提供的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)與數(shù)據(jù)

50、：（1）各受試者緩（控）釋受試制劑與參比制劑不同時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度數(shù)據(jù)以及均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差；（2）各受試者末次給藥前至少連續(xù)3次測定的谷濃度（cmin）；（3）各受試者在血藥濃度達(dá)穩(wěn)態(tài)后末次給藥的血藥濃度-時(shí)間曲線。穩(wěn)態(tài)峰濃度（css-max）、達(dá)峰時(shí)間（tmax）及谷濃度（c ss-min）的實(shí)測值。并計(jì)算末次劑量服藥前與達(dá) 時(shí)間點(diǎn)實(shí)測css-min 的平均值；（4）各受試者的穩(wěn)態(tài)藥時(shí)曲線下面積（aucss）、平均穩(wěn)態(tài)血藥濃度（cav）。cavaucss ，式中aucss 系穩(wěn)態(tài)條件下用藥間隔期0 時(shí)間的auc， 是用藥間隔時(shí)間；（5）各受試者血藥濃度波動(dòng)度（dfss）。df（cmax-cmin）

51、/cav×1002.3 結(jié)果評價(jià)：一般同緩（控）釋制劑的單次給藥試驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)。當(dāng)緩釋制劑與普通制劑比較時(shí)，對于波動(dòng)系數(shù)的評價(jià)，應(yīng)結(jié)合緩釋制劑本身的特點(diǎn)具體分析。另外，對于不同的緩（控）釋劑型，如結(jié)腸定位片、延遲釋放片等，還應(yīng)當(dāng)考慮劑型的特殊性來設(shè)計(jì)試驗(yàn)，增加相應(yīng)考察指標(biāo)以體現(xiàn)劑型特點(diǎn)。（二）特殊活性成分制劑如活性成分為蛋白質(zhì)多肽、激素、維生素、電解質(zhì)等，因?yàn)榇嬖趦?nèi)源性物質(zhì)干擾問題以及體內(nèi)降解問題，所以生物樣本分析方法的確定是其重點(diǎn)。同樣建議參照國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)針對自身品種考慮。（三）復(fù)方制劑對復(fù)方化學(xué)藥品制劑生物等效性研究，一般情況下某一成分的體內(nèi)行為不能說明其它成分的體內(nèi)行為，故原則上

52、應(yīng)證實(shí)每一個(gè)有效成分的生物等效性。試驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)盡量兼顧各個(gè)成分的特點(diǎn)。六、結(jié)語生物利用度和生物等效性研究只是作為一個(gè)驗(yàn)證制劑質(zhì)量的方法學(xué)手段。受試制劑能否達(dá)到預(yù)期的生物利用度，受試制劑是否能達(dá)到與原創(chuàng)制劑或其他已經(jīng)過臨床試驗(yàn)證明了安全與有效藥物的生物等效，都應(yīng)該從最開始的處方篩選、生產(chǎn)工藝條件以及質(zhì)量研究等方面著手，盡可能分析原創(chuàng)制劑或參比制劑的有關(guān)文獻(xiàn)，以實(shí)現(xiàn)研究目的。七、名詞解釋介質(zhì)效應(yīng):由于樣品中存在干擾物質(zhì),對響應(yīng)造成的直接或間接的影響。標(biāo)準(zhǔn)樣品(standard sample)：在生物介質(zhì)中加入已知量分析物配制的樣品，用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算質(zhì)控樣品和未知樣品中分析物濃度。質(zhì)控樣品（quality control sample）：質(zhì)控樣品系將已知量的待測藥物加入到生物介質(zhì)中配制的樣品，用于監(jiān)測生物分析方法的效能和評價(jià)每一分析批中未知樣品分析結(jié)果的完整性和正確性。一般配制高、中、低三個(gè)濃度的質(zhì)控樣品。分析批（analytical run/batch）：包括待測樣品、適當(dāng)數(shù)目的標(biāo)準(zhǔn)樣品和質(zhì)控樣品的完整系列。由于儀器性能的改善和自動(dòng)進(jìn)樣器的使用，一天內(nèi)可以完成幾個(gè)分析批，一個(gè)分析批也可以持續(xù)