島津液相色譜常見問題及其對策

1、SHIMADZU歡迎參加島津液相歡迎參加島津液相維修培訓(xùn)班維修培訓(xùn)班SHIMADZU 采用采用 “HPLC” 級溶劑級溶劑 避免使用會引起柱效損失或保留特性變避免使用會引起柱效損失或保留特性變化的溶劑化的溶劑 對試樣有適宜的溶解度對試樣有適宜的溶解度 溶劑粘度要小溶劑粘度要小 與檢測器相匹配與檢測器相匹配其他問題SHIMADZU其他問題 水的等級水的等級 純化水純化水 蒸餾水蒸餾水 去離子去離子水水波長波長 (nm)純化水純化水去離子水去離子水因為不純物的存在，去離子的吸光率較高因為不純物的存在，去離子的吸光率較高純化水中去除了無機(jī)和有機(jī)的污染物純化水中去除了無機(jī)和有機(jī)的污染物SHIMADZU

2、其他問題水水 / MeOH梯度梯度ODS 柱柱鬼峰鬼峰Gradient Curve1 ml/min, 0-100% MeOHover 10 mins and hold for15 mins.SHIMADZU其他問題 溶劑的等級溶劑的等級HPLC級級優(yōu)級純優(yōu)級純分析純分析純都經(jīng)過蒸餾和都經(jīng)過蒸餾和0.45u的過濾的過濾(除纖維毛除纖維毛,未溶解的機(jī)械顆粒未溶解的機(jī)械顆粒優(yōu)級純的純度比分析純大優(yōu)級純的純度比分析純大,但里面含有防腐劑和抗氧化劑但里面含有防腐劑和抗氧化劑HPLC級經(jīng)過級經(jīng)過0.2u的過濾的過濾,且除去有紫外吸收的雜質(zhì)且除去有紫外吸收的雜質(zhì)SHIMADZU其他問題甲醇甲醇 乙睛乙睛 正

3、己烷正己烷分析純級和 HPLC 級溶劑的吸光度比較圖SHIMADZU其他問題溶劑的過濾 濾膜類型： 聚四氟乙烯濾膜：適用于所有溶劑，酸和鹽。 醋酸纖維濾膜：不適用于有機(jī)溶劑，特別適用于水基溶劑。 尼龍66濾膜：適用于絕大多數(shù)有機(jī)溶劑和水溶液，可以用于強酸，不適用于二甲基甲酰胺。 再生纖維素濾膜：蛋白吸收低，同樣適用于水溶性樣品和有機(jī)溶劑SHIMADZU脫氣：脫氣： 除去流動相中溶解或因混合而產(chǎn)生的氣泡除去流動相中溶解或因混合而產(chǎn)生的氣泡 氣泡對測定的影響：氣泡對測定的影響： 1）泵中氣泡使液流波動，改變保留時間和）泵中氣泡使液流波動，改變保留時間和峰面積峰面積 2）柱中氣泡使流動相繞流，峰變形

4、）柱中氣泡使流動相繞流，峰變形 3）檢測器中的氣泡產(chǎn)生基線波動）檢測器中的氣泡產(chǎn)生基線波動其他問題SHIMADZU脫氣的目的脫氣的目的 1. 防止由氣泡的產(chǎn)生引起的故障 2. 防止由溶解（在液體中的）氣體量 的變動引起的檢測不穩(wěn)定程度 1）示差折射率檢測器 *使折射率變化 2）UV檢測器（200nm以下） *溶解氧氣有吸收 3）熒光檢測器 *溶解氧氣有消光作用其他問題SHIMADZU其他問題脫氣的方法脫氣的方法1. 超身波脫氣法超身波脫氣法2. He清除法清除法3. 使用氟樹脂膜的減壓脫氣法使用氟樹脂膜的減壓脫氣法SHIMADZU其他問題He清除法清除法調(diào)壓閥調(diào)壓閥排氣閥排氣閥往送液泵往送液泵

5、流動相流動相過濾器過濾器SHIMADZU其他問題氟樹脂膜氟樹脂膜真空室真空室往送液泵往送液泵真空泵真空泵控制器控制器流動相流動相使用氟樹脂膜的減壓脫氣法使用氟樹脂膜的減壓脫氣法SHIMADZU梯度洗脫法梯度洗脫法高壓梯度：用兩臺高壓輸液泵將兩種溶劑輸入低壓梯度：在常壓下將兩種溶劑（或多元溶劑）混合，然后用高壓輸液泵將流動相輸入到色譜柱中。優(yōu)點：可提高分離度、縮短分離時間、降低最小檢測量和提高分離精度SHIMADZU梯度洗脫法的注意點梯度洗脫法的注意點l 溶劑的純度要高，否則梯度洗脫的重現(xiàn)性差l 梯度混合的溶劑互溶性要好l 梯度洗脫應(yīng)使用對流動相組成變化不敏感的選擇性檢測器（如紫外吸收檢測器或熒

6、光檢測器），而不能使用對流動相組成變化敏感的通用型檢測器（如示差折光檢測器）l 查看空白實驗的數(shù)據(jù)。l 遵守分析周期。（最初的分析數(shù)據(jù)不采用）SHIMADZU1. 使用流動相溶解樣品 - 減少溶劑峰，尤其是組分峰靠近溶劑峰時由為重要 - 保證樣品在流動相中的溶解度，避免樣品在系統(tǒng)中尤其在柱中產(chǎn)生沉淀 SHIMADZU其他問題緩沖液緩沖液 選擇緩沖液的步驟 1 .確定最佳分離狀態(tài)時的流動相pH 2 .選擇具有與流動相的pH相近的pKa 的緩沖液 （即使?jié)舛认∫簿哂休^強能力的緩沖液） 3 .確認(rèn)檢測波長下緩沖液是否有大的吸收 （在波長210nm附近進(jìn)行檢測時，不能用醋酸和 檸檬酸的緩沖液）SHIM

7、ADZU一些代表性弱酸的一些代表性弱酸的pKa pK1 pK2 pK3 醋酸 4.87 檸檬酸 3.13 4.76 6.40 磷酸 2.16 7.2 1 12.32其他問題SHIMADZU緩沖液的使用緩沖液的使用 使用前必須過濾使用前必須過濾 使用后一定要進(jìn)行清洗使用后一定要進(jìn)行清洗 ，以免造成腐蝕、磨損，以免造成腐蝕、磨損、阻塞、阻塞: 用純水沖洗用純水沖洗30-60min（1ml/min），再用甲醇），再用甲醇沖洗沖洗30min易受到細(xì)菌和霉菌的影響易受到細(xì)菌和霉菌的影響 不能直接用有機(jī)溶劑沖洗不能直接用有機(jī)溶劑沖洗SHIMADZU液相色譜容易出問題的部件維護(hù)流程圖吸濾頭單向閥柱塞密封圈線

8、路過濾器手動進(jìn)樣器檢測器SHIMADZU管線選擇材料 不銹鋼 Teflon PEEK (聚醚酮)尺寸 0.1 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.3 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.5 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.8 mmI.D. x 1.6 mmO.D.SHIMADZU管線材料 不銹鋼不銹鋼 (可用于所有連接可用于所有連接) 能承受幾千能承受幾千 kg/cm2 壓力壓力 酸性或高濃度鹽環(huán)境中易腐蝕酸性或高濃度鹽環(huán)境中易腐蝕 (尤其在尤其在pH小于小于2時時) PEEK (可用于所有連接可用于所有連接) 能承受高達(dá)能承受高達(dá) 250 kg/cm2壓力壓力 可

9、在整個可在整個PH范圍范圍(pH 1-14)內(nèi)使用內(nèi)使用 不適用于高溶解性溶劑如氯仿等不適用于高溶解性溶劑如氯仿等 Teflon (用于柱后阻尼管、反應(yīng)管和排液管用于柱后阻尼管、反應(yīng)管和排液管) 化學(xué)惰性大化學(xué)惰性大 能承受能承受 5 kgf/cm2 壓力壓力SHIMADZU材料：不銹鋼燒結(jié)，孔徑10um故障：堵塞表現(xiàn)：管路中不斷有氣泡生成措施：用520的稀硝酸，超聲波清洗， 再用蒸餾水清洗注意點：吸濾頭拆下時不必將塑料管剪斷吸濾頭吸濾頭液相色譜容易出問題的部件SHIMADZULC-10ATvp泵：串聯(lián) 式往復(fù)泵LC-10ADvp泵：并聯(lián)式 往復(fù)泵液相色譜容易出問題的部件SHIMADZU液相色

10、譜容易出問題的部件單向閥結(jié)構(gòu)單向閥結(jié)構(gòu)拋光面透明塑料墊片寶石球吸液沖程排液沖程出口單向閥進(jìn)口單向閥泵頭流動相單向閥原理單向閥原理吸液沖程排液沖程出口單向閥進(jìn)口單向閥泵頭SHIMADZU液相色譜容易出問題的部件故障1：寶石球粘附于墊片表現(xiàn)：泵無法吸液或排液，流路不通措施：1）用針筒抽出口單向閥以產(chǎn)生負(fù)壓， 使寶石球與墊片分開 2）拆下單向閥，放入異丙醇或水中， 用超聲波清洗單向閥單向閥SHIMADZU液相色譜容易出問題的部件故障2：寶石球或塑料墊片受污導(dǎo)致密封不好表現(xiàn)：系統(tǒng)壓力波動大措施：拆下單向閥，放入異丙醇或水中，用超 聲波清洗單向閥單向閥SHIMADZU故障：密封圈磨損而導(dǎo)致 密封不良現(xiàn)象

11、：系統(tǒng)壓力波動大或 漏夜措施：更換密封圈注意點： 更換密封圈 拆卸泵頭前，柱塞桿 復(fù)位 （PSET）柱塞密封圈柱塞密封圈流動相泵頭清洗管路柱塞桿密封圈液相色譜容易出問題的部件SHIMADZU故障：堵塞現(xiàn)象：系統(tǒng)壓力波動大或壓 力偏高措施：5稀硝酸，超聲波清 洗判斷依據(jù)：關(guān)閉排液閥，斷開出口管路，設(shè)定流速1mL/min，如壓力3kgf/cm2，則可能堵塞。線路過濾器線路過濾器排液閥壓力傳感器線路過濾器流動相液相色譜容易出問題的部件SHIMADZU液相色譜容易出問題的部件進(jìn)樣器 自動進(jìn)樣器 手動進(jìn)樣器 原理：（六通閥） 注入方式： 1）全量注入 2）部分注入SHIMADZU液相色譜容易出問題的部件

12、進(jìn)樣量和檢測器響應(yīng)的關(guān)系示意圖進(jìn)樣量和檢測器響應(yīng)的關(guān)系示意圖進(jìn)樣進(jìn)樣體體積積 檢檢測測器器響響應(yīng)應(yīng)值值定量定量環(huán)環(huán)體體積積的一半的一半3倍定量倍定量環(huán)環(huán)體體積積全量注入全量注入部分注入部分注入SHIMADZU手動進(jìn)樣器的原理圖手動進(jìn)樣器的原理圖 裝填狀態(tài)裝填狀態(tài)進(jìn)樣狀態(tài)進(jìn)樣狀態(tài)SHIMADZUSHIMADZU 便捷的方法（不需清洗）便捷的方法（不需清洗） 1.進(jìn)樣狀態(tài)下插入微量注射器進(jìn)樣狀態(tài)下插入微量注射器 2.切到裝填狀態(tài)切到裝填狀態(tài) 3.注入樣品注入樣品 4.切回到進(jìn)樣狀態(tài)切回到進(jìn)樣狀態(tài)手動進(jìn)樣法手動進(jìn)樣法SHIMADZU 操作注意點：操作注意點： 1）插針應(yīng)插到底 2）進(jìn)樣應(yīng)使用液相色譜

13、專用平頭進(jìn)樣針 3）清洗應(yīng)使用專用針口清洗器手動進(jìn)樣器手動進(jìn)樣器定子轉(zhuǎn)子塑料箍彈簧不銹鋼套液相色譜容易出問題的部件SHIMADZU手動進(jìn)樣閥 故障：轉(zhuǎn)子密封損壞 現(xiàn)象：漏液 原因：a 擰的太緊 b 樣品太臟 c 針頭損壞或不使用液相專用針 解決措施：更換轉(zhuǎn)子密封，并在使用液相色譜容易出問題的部件SHIMADZU液相色譜容易出問題的部件手動進(jìn)樣閥 故障：載樣困難 原因：a 定量環(huán)堵塞 b 進(jìn)樣器污染 解決措施：清洗或更換定量環(huán)、進(jìn)樣器SHIMADZU液相色譜容易出問題的部件 分析結(jié)果重現(xiàn)性好分析結(jié)果重現(xiàn)性好 提高柱效提高柱效 降低柱壓降低柱壓 保證檢測穩(wěn)定性保證檢測穩(wěn)定性 SHIMADZU柱子

14、故障：系統(tǒng)高壓、峰型變差（拖尾峰、前沿峰、分叉峰），保留時間的改變 解決措施：清洗 正相柱，正庚烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇 反相柱，甲醇、乙腈、氯仿、異丙醇、0.05M稀硫酸液相色譜容易出問題的部件SHIMADZU液相色譜容易出問題的部件峰產(chǎn)生有肩或分叉的原因峰產(chǎn)生有肩或分叉的原因1. 柱子劣化柱子劣化 （進(jìn)口處產(chǎn)生不均勻的空隙）（進(jìn)口處產(chǎn)生不均勻的空隙）2. 樣品劣化樣品劣化 （生成氧化物、分解物等）（生成氧化物、分解物等）判斷標(biāo)準(zhǔn)判斷標(biāo)準(zhǔn) 所有的峰都產(chǎn)生有肩峰或分叉時則為柱子劣化所有的峰都產(chǎn)生有肩峰或分叉時則為柱子劣化SHIMADZU延長柱壽命方法：延長柱壽命方法： 倒沖柱倒沖柱 換過

15、濾片換過濾片 修補柱頭修補柱頭 液相色譜容易出問題的部件SHIMADZU液相色譜容易出問題的部件柱的補修柱的補修SHIMADZU填料的取出填料的取出液相色譜容易出問題的部件SHIMADZU恢復(fù)例恢復(fù)例液相色譜容易出問題的部件SHIMADZU硅膠基底硅膠基底聚合物基底聚合物基底pH 范圍范圍2 - 7.5寬范圍寬范圍有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑所有所有有限制有限制壓力壓力 250 kgf/cm2低壓低壓溫度溫度寬范圍寬范圍60C色譜柱的類型及適用范圍色譜柱的類型及適用范圍液相色譜容易出問題的部件SHIMADZU分分 析析 柱柱 的的 維維 護(hù)護(hù)在使用新柱之前，最好用強溶劑在低流量下在使用新柱之前，最好用強溶

16、劑在低流量下 (0.2-0.3 ml/min)沖洗沖洗 30 mins，長時間未用的分析柱也要同，長時間未用的分析柱也要同樣樣 處理處理定期使用強溶劑沖洗柱子定期使用強溶劑沖洗柱子3、使用緩沖鹽時，要先用水沖洗，再用有機(jī)溶劑沖洗、使用緩沖鹽時，要先用水沖洗，再用有機(jī)溶劑沖洗4、凈化樣品、凈化樣品5、分離條件、分離條件6、不使用時，要蓋上蓋子，避免固定相干枯、不使用時，要蓋上蓋子，避免固定相干枯7、使用預(yù)柱、使用預(yù)柱8、避免流動相組成及極性的劇烈變化、避免流動相組成及極性的劇烈變化9、避免壓力脈沖的劇烈變化、避免壓力脈沖的劇烈變化液相色譜容易出問題的部件SHIMADZU 柱壓低于柱壓低于150k

17、gf/cm2 柱溫在柱溫在40左右，最高使用溫度為左右，最高使用溫度為50 緩沖液緩沖液PH使用范圍為使用范圍為27 流動相有機(jī)溶劑比例過低流動相有機(jī)溶劑比例過低, 柱效下降快柱效下降快液相色譜容易出問題的部件SHIMADZU紫外檢測器紫外檢測器參比池樣品池光線光電倍增管液相色譜容易出問題的部件SHIMADZU更換氘燈更換氘燈（紫外檢測器） 判斷氘燈能量： 設(shè)定220nm波長，檢查參比池能量，如 能量低于800，需更換氘燈。 操作注意點： 不要用手直接接觸氘燈表面液相色譜容易出問題的部件SHIMADZU液相色譜容易出問題的部件故障：樣品池受污故障：樣品池受污表現(xiàn)：樣品池和參比池能量相差較大表現(xiàn)

18、：樣品池和參比池能量相差較大檢查方法：設(shè)定檢查方法：設(shè)定250nm250nm波長，通甲醇或水，查看波長，通甲醇或水，查看SMPL ENSMPL EN和和 REF EN REF EN，如兩者相差較大，則樣品，如兩者相差較大，則樣品池受污。池受污。措施：用針筒注入異丙醇，清洗樣品池；如污染措施：用針筒注入異丙醇，清洗樣品池；如污染嚴(yán)重，嚴(yán)重， 拆開樣品池，將透鏡等放入異丙醇中拆開樣品池，將透鏡等放入異丙醇中超聲波清洗。超聲波清洗。紫外檢測器紫外檢測器SHIMADZU 原理：連續(xù)測定流通池中溶液折射率來測原理：連續(xù)測定流通池中溶液折射率來測定試樣中各組分濃度。定試樣中各組分濃度。 優(yōu)點：通用型檢測器

19、，優(yōu)點：通用型檢測器， 缺點：缺點： 1）對溫度變化敏感）對溫度變化敏感 2）對溶劑組成變化敏感，不能用于梯度）對溶劑組成變化敏感，不能用于梯度檢測檢測 3）屬于中等靈敏度的檢測器）屬于中等靈敏度的檢測器SHIMADZU液相色譜常見問題及其對策液相色譜常見問題及其對策液相色譜常見問題類型液相色譜常見問題類型l A. A. 壓力異常（偏高、波動）壓力異常（偏高、波動）l B. B. 漏液漏液 l C. C. 保留時間漂移保留時間漂移l D. D. 基線問題（漂移、噪聲）基線問題（漂移、噪聲） l E. E. 峰形異常峰形異常SHIMADZU現(xiàn)象：無壓力，流動相不流動可能原因 1、保險絲斷或電源問

20、題 2、柱塞桿折斷 3、泵頭內(nèi)有空氣或流動相不足 4、單向閥損壞 5、漏液 6、壓力傳感器損壞(流動相流動正常，但無壓力)壓力異常壓力異常SHIMADZU現(xiàn)象：壓力持續(xù)偏高或不斷上升 1、流速設(shè)定過高 2、保護(hù)柱或柱子篩板堵塞 3、流動相使用不當(dāng)或有緩沖鹽析出 4、色譜柱選擇不當(dāng) 5、進(jìn)樣閥損壞 6、線路過濾器堵塞壓力異常壓力異常SHIMADZU壓力異常壓力異?，F(xiàn)象：壓力持續(xù)偏低 1、流速設(shè)定過低 2、色譜柱選擇不當(dāng) 3、柱溫過高 4、系統(tǒng)漏液SHIMADZU現(xiàn)象：壓力持續(xù)偏低 1、流速設(shè)定過低 2、色譜柱選擇不當(dāng) 3、柱溫過高 4、系統(tǒng)漏液壓力異常壓力異常SHIMADZU壓力異常壓力異?，F(xiàn)象

21、：壓力波動可能原因 1、泵頭中有氣泡 2、單向閥損壞 3、柱塞密封圈損壞 4、脫氣不充分 5、系統(tǒng)漏液 6、使用了梯度洗脫SHIMADZU漏液漏液接頭處漏液 1、接頭處松動 2、接頭磨損 3、接頭被污染 4、部件不匹配 SHIMADZU漏液漏液泵漏液 1、單向閥松動 2、泵密封損壞 3、放空閥損壞 4、接頭松動（不要擰的太緊）SHIMADZU漏液漏液泵漏液 1、單向閥松動 2、泵密封損壞 3、放空閥損壞 4、接頭松動（不要擰的太緊）SHIMADZU進(jìn)樣閥漏液 可能原因 1、轉(zhuǎn)子密封損壞 2、定量環(huán)堵塞 3、進(jìn)樣口密封松動 4、進(jìn)樣針尺寸不合適 5、廢液管產(chǎn)生虹吸 6、廢液管堵塞漏液漏液SHIMADZU檢測器漏液 可能原因 1、流通池墊片損壞 2、流通池透鏡破碎 3、手緊接頭處漏液 4、進(jìn)樣針尺寸不合適 5、廢液管堵塞 6、流通池堵塞漏液漏液SHIMADZU保留時間漂移保留時間漂移 可能原因 1、柱溫變化 2、流動相組分變化 3、色譜柱沒有平衡 4、流速變化 5、泵中有氣泡 6、流動相選擇不當(dāng) 7、鍵合相流失 8、緩沖容量不夠保留時間漂移保留時間漂移SHIMADZU基線漂移基線漂移 可能原因 1、溫度波動 2、流動相不均勻(脫氣，使用純度更高的溶劑) 3、流通池被