堿性磷酸酶的分離提取課件_第1頁(yè)
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1、堿性磷酸酶的分離提取1實(shí)驗(yàn) 堿性磷酸酶的分離提取及比活力的測(cè)定堿性磷酸酶的分離提取2堿性磷酸酶的分離提取3堿性磷酸酶的分離提取4堿性磷酸酶的分離提取5堿性磷酸酶的分離提取6堿性磷酸酶的分離提取7堿性磷酸酶的分離提取8勻漿液上清液沉淀粗酶液堿性磷酸酶的分離提取9以對(duì)硝基苯酚的絕對(duì)量(mol數(shù))為橫坐標(biāo)，od405nm值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。求出pnp的克分子消光系數(shù)()值。8.80103( mol/l)-1cm-1堿性磷酸酶的分離提取102.2.2 酶活力的測(cè)定酶活力的測(cè)定以0號(hào)管調(diào)零點(diǎn)，測(cè)定各管的od405nm值，從對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線求出產(chǎn)物的mol數(shù)，算出酶活力。堿性磷酸酶的分離提取11堿性磷酸

2、酶的分離提取12堿性磷酸酶的分離提取13avc= (mg/ml)vtb=(u/ml) 21蛋白濃度酶活力計(jì)算：式中：a為稀釋倍數(shù)，b為由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的pnp mol數(shù)，t為反應(yīng)時(shí)間，c為由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的蛋白mg數(shù)，v1為測(cè)定酶活力所用的酶量(ml數(shù)) v2為測(cè)定酶活力所用的酶量(ml數(shù))酶的比活力（u/mg） 純化倍數(shù)=各步比活力/第一步比活力得率%=各步總活力*100/第一步總活力 酶活力（u/ml）蛋白濃度（mg/ml）堿性磷酸酶的分離提取14步驟總體積 ml蛋白mg/ml總蛋白mg酶活力u/ml總活力u比活力u/mg純化倍數(shù)得率%勻漿過(guò)濾液4007.24 20.3 正丁醇處理上清液470 33.8 0.35飽和(nh4)2so4上清液440 35.3 0.7飽和(nh4)2so4沉淀溶解透析上清液40.3 314.7 deae-32酶液9.63.82 1002.2 sephadex g75酶液13.20.49 451.5 sep

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