【高中生物】金黃色葡萄球菌生物危害評估報告

1、【最新卓越管理方案您可自由編輯】（生物科技行業(yè)）金黃色葡 萄球菌生物危害評估報告2020年5月多年的企業(yè)咨洵顧問屋儂,經(jīng)過實戰(zhàn)驗證可以落地執(zhí)i亍的卓越管理方窠，值得您下我擁有金黃色葡萄球菌生物危害評估報告 一、金黃色葡萄球菌的傳播與致病金黃色葡萄球菌在自然界中無處不在，在空氣、水、灰塵及人和動物的排泄物中都可找到。因而，食品受其污染的機會很多。金黃色葡萄球菌腸毒素是個世界性衛(wèi)生問題，在美國由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒占整個細菌性食物中毒的33% ， 加拿大則更多，占 45% ，我國每年發(fā)生的此類中毒事件也非常多。金黃色葡萄球菌的流行病學(xué)一般有如下特點：季節(jié)分布，多見于春夏季；中毒食品種

2、類多，如奶、肉、蛋、魚及其制品。此外，剩飯、油煎蛋、糯米糕及涼粉等引起的中毒事件也有報道；上呼吸道感染患者鼻腔帶菌率83% ，所以人畜化膿性感染部位常成為污染源。一般說，金黃色葡萄球菌可通過以下途徑污染食品：食品加工人員、炊事員或銷售人員帶菌，造成食品污染；食品在加工前本身帶菌，或在加工過程中受到了污染，產(chǎn)生了腸毒素，引起食物中毒；熟食制品包裝不嚴，運輸過程受到污染；奶牛患化膿性乳腺炎或禽畜局部化膿時，對肉體其他部位的污染。而腸毒素形成條件包括：存放溫度，在37 內(nèi)，溫度越高，產(chǎn)毒時間越短；存放地點，通風(fēng)不良氧分壓低易形成腸毒素；食物種類，含蛋白質(zhì)豐富，水分多，同時含一定量淀粉的食物，腸毒素易

3、生成。金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌，可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。葡萄球菌性菌血癥可發(fā)生于任何與血管內(nèi)導(dǎo)管或其他異物有關(guān)的局限性葡萄球菌膿腫或感染 ,它是嚴重?zé)齻∪怂劳龅某Ｒ娫?。持續(xù)性發(fā)熱常見,而且可伴有休克。葡萄球菌性心內(nèi)膜炎特別好發(fā)于靜脈注射給藥者和裝有人工心臟瓣膜的病人。突然出現(xiàn)心臟雜音,膿毒性栓子和其他經(jīng)典體征便可作出可疑診斷,確診需依據(jù)超聲心動圖和血培養(yǎng)。葡萄球菌性骨髓炎主要見于兒童,可引起寒戰(zhàn),發(fā)熱和受累骨疼痛,繼之出現(xiàn)紅腫。關(guān)節(jié)周圍感染常引起關(guān)節(jié)積液，提示為化膿性關(guān)節(jié)炎而不是骨髓炎。白細胞計數(shù)常15000

4、/3并且血培養(yǎng)常陽性。X 線變化在1014 日內(nèi)不明顯,骨質(zhì)疏松和骨皮質(zhì)反應(yīng)甚至更長時間仍不能測出,而放射性核素骨掃描則常能較早出現(xiàn)異?！，F(xiàn)在葡萄球菌性小腸結(jié)腸炎很罕見,但若住院病人出現(xiàn)發(fā)熱,腸梗阻,腹痛和腹脹,低血壓或腹瀉 ,特別是新近作過腹部手術(shù)或接受過抗生素者,可提示本病。若糞便鏡檢發(fā)現(xiàn)大片的嗜中性白細胞和革蘭氏陽性球菌,則可能作出診斷,但必須排除產(chǎn)毒性艱難梭狀芽胞桿菌感染,這是抗生素相關(guān)性結(jié)腸炎最常見的原因。金黃色葡萄球菌的致病力強弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶：a. 溶血毒素：外毒素，分“、3、丫、8四種，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌體局部缺血和壞死；b.殺白細胞素：可破壞人

5、的白細胞和巨噬細胞；c. 血漿凝固酶：當(dāng)金黃色葡萄球菌侵入人體時，該酶使血液或血漿中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固，阻礙吞噬細胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化與此酶有關(guān)；d. 脫氧核糖核酸酶：金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的脫氧核糖核酸酶能耐受高溫，可用來作為依據(jù)鑒定金黃色葡萄球菌；e.腸毒素：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生數(shù)種引起急性胃腸炎的蛋白質(zhì)性腸毒素，分為A、 B、 C、 D、 E 及 F 五種血清型。腸毒素可耐受100 °C煮沸 30 分鐘而不被破壞。它引起的食物中毒癥狀是嘔吐和腹瀉。此外，金黃色葡萄球菌還產(chǎn)生溶表皮素、明膠酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。二、金黃色葡萄球菌的生物學(xué)特性典型的

6、金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8 g 左右，顯微鏡下呈單個、成雙以及排列成葡萄串狀。金黃色葡萄球菌屬于葡萄球菌屬，無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜，革蘭氏染色陽性衰老、死亡和被白細胞吞噬后的菌體革蘭染色呈陰性。金黃色葡萄球菌營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度3537 、最適生長pH7.47.6 。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在10-15%NaCl 肉湯中生長?？煞纸馄咸烟?、麥芽糖、乳糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅反應(yīng)陽性，VP 反應(yīng)弱陽性。許多菌株可分解精氨酸，水解尿素，還原硝酸鹽，液化明膠。金黃色葡萄球菌具有較強的抵抗力，對磺胺類藥物敏感性低，但對青霉素、紅霉素等

7、高度敏感。三、金黃色葡萄球菌的檢測與診斷1. 標(biāo)本采集采自不同感染部位的各種標(biāo)本，包括血液、腦脊液、穿刺液；痰液、膿液、創(chuàng)傷分泌物、尿液、糞便和嘔吐物等。2. 直接涂片鏡檢直接涂片檢查在正常情況下呈無菌狀態(tài)的體液標(biāo)本如血液、腦脊液、穿刺液等，若有檢出革蘭氏陽性，顯微鏡下呈葡萄狀排列、無芽胞、莢膜，直徑 0.5-1 的球菌。即具有重要的臨床價值。3. 分離培養(yǎng)可以選用普通營養(yǎng)瓊脂平板、血平板和高鹽甘露醇平板，血平板用葡萄糖肉湯增菌培養(yǎng)基。該菌在普通肉湯中呈均勻迅速混濁生長；若接種于瓊脂平板上35 過夜后可形成直徑約 23mm 的厚菌落、濕潤有光澤、呈金黃色不透明圓形凸起。若接種于血平板，菌落周圍

8、可形成明顯的透明的3溶血環(huán)。在高甘露醇平板上金黃色葡萄球菌生成淡橙黃色菌落，以此可與其他凝固酶陰性的葡萄球菌相鑒別。4. 鑒別實驗（ 1 ）血漿凝固酶試驗：血漿凝固酶是金黃色葡萄球菌所產(chǎn)生的，與其致病力有關(guān)的一種侵襲性酶，其作用是使血漿中的纖維蛋白在菌體表面沉積和凝固以阻礙吞噬細胞的吞噬。血漿凝固酶分為結(jié)合型和游離型。前者結(jié)合在細菌的細胞壁上，能直接作用于血漿中的纖維蛋白原，使之轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，環(huán)繞菌體而形成凝塊。而游離型血漿凝固酶則在產(chǎn)生后被分泌到菌體外，不能直接作用于纖維蛋白原，但可以激活血漿凝血酶原，使之轉(zhuǎn)化成凝血酶，后者 再作用于纖維蛋白原使其轉(zhuǎn)化為纖維蛋白。具體的測量方法也因此分為玻

9、片法和試管法兩 種。玻片法:將待試菌落乳化于玻片上的鹽水中，經(jīng) 1020S 證實無自凝后，用接種環(huán)取人或兔血漿一環(huán)，與乳化菌液混合，出現(xiàn)凝集者為陽性，另設(shè)生理鹽水為陰性對照。試管法:吸取0.5mL 兔血漿與0.5mL 金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯24 小時培養(yǎng)物充分混勻，置 37 培養(yǎng)，每隔半小時觀察一次，連續(xù)觀察6 小時，出現(xiàn)凝固，即將小試管傾斜或倒置時，內(nèi)容物不流動，判為陽性。（ 2 ）耐熱核酸酶試驗：將24 小時肉湯培養(yǎng)物沸水浴處理15min ，用接種環(huán)劃線刺種于甲苯胺蘭 -DNA 平板， 35 培養(yǎng) 24 小時，在刺種線周圍出現(xiàn)淡粉色者為陽性。本試驗金黃色葡萄球菌為陽性。（ 3 ）甘露醇發(fā)

10、酵實驗金黃色葡萄球菌可發(fā)酵甘露醇。4. 4） Staphaurex 膠乳凝集實驗是鑒定金黃色葡萄球菌的一種快速、簡便的商品化直接凝集試驗。其基本原理是在紙片上滴加包被有纖維蛋白原和IgG 抗體的聚苯乙烯膠乳，然后用接種環(huán)挑取待鑒定菌株的新鮮培養(yǎng)物加入混勻，若出現(xiàn)凝集塊現(xiàn)象即為陽性。5. 生化鑒定如上述，注意與其他凝固酶陽性的葡萄球菌的鑒別要點：PYR （口比咯烷酮-3-蔡基酰胺試驗陰性；VP 試驗陽性；鳥氨酸脫羧酶試驗陰性。6. 免疫學(xué)方法用酶聯(lián)免疫吸附試驗和對流免疫電泳方法可檢測金葡菌的磷壁酸抗體。7. 分子生物學(xué)方法包括PFGE 脈沖場凝膠電泳以及酶切圖譜分析等。四、金黃色葡萄球菌的防治及

11、生物安全防護一、細菌的防治金黃色葡萄球菌的控制主要包括：1 ）防止金黃色葡萄球菌污染食品，防止帶菌人群對各種食物的污染：定期對生產(chǎn)加工人員、上呼吸道感染（如鼻竇炎、化進行健康檢查，患局部化膿性感染（如疥瘡、手指化膿等）膿性肺炎、口腔疾病等）的人員要暫時停止其工作或調(diào)換崗位。防止金黃色葡萄球菌對奶及 其制品的污染：如牛奶廠要定期檢查奶牛的乳房，不能擠用患化膿性乳腺炎的牛奶；奶擠出后，要迅速冷至-10 以下，以防毒素生成、細菌繁殖。奶制品要以消毒牛奶為原料，注意低溫保存。對肉制品加工廠，患局部化膿感染的禽、畜尸體應(yīng)除去病變部位，經(jīng)高溫或其他適當(dāng)方式處理后進行加工生產(chǎn)。2 ）防止金黃色葡萄球菌腸毒素

12、的生成應(yīng)在低溫和通風(fēng)良好的條件下貯藏食物，以防腸毒素形成；在氣溫高的春夏季，食物置冷藏或通風(fēng)陰涼地方也不應(yīng)超過6 小時，并且食用前要徹底加熱。3 ） 無菌措施（如檢查病人前后徹底洗手和消毒合用的器械）至關(guān)重要。已被感染的病人應(yīng)與其他易感病人隔離,患有活動性葡萄球菌感染,即使是局部性的感染（如癤）的醫(yī)護人員,在其感染治愈前不得接觸病人或器械。無癥狀的鼻腔帶菌者,除非所帶菌株十分危險或被懷疑為暴發(fā)流行的傳染源,一般不必隔離。治療包括膿腫引流,抗生素（重癥病人需腸外給藥）和全身支持療法。培養(yǎng)標(biāo)本應(yīng)在開始治療前或更換抗生素之前獲取。抗生素的選擇和劑量取決于感染的部位,疾病的嚴重程度和細菌對藥物的敏感性

13、。醫(yī)院獲得的葡萄球菌和大多數(shù)社區(qū)獲得的菌株，通常對青霉素 G,氨芳青霉素和抗假單胞菌青霉素有耐藥性。大多數(shù)菌株對耐青霉素酶青霉素（甲氧苯青霉素，苯甲異嗯口青霉素，乙氧蔡青霉素，鄰氯青霉素,雙氯青霉素，頭抱菌素（頭抱菌素I ，頭抱睫咻，頭抱菌素IV，頭抱拉定，頭抱羥唑 ,頭孢西丁和第三代頭孢菌素）,卡巴培南類（亞胺培南,美羅匹寧）,慶大霉素,萬古霉素,替考拉寧 ,林可霉素和氯林可霉素,是敏感的。雖然頭孢菌素和萬古霉素都有效,但通常首選一種耐青霉素酶的青霉素。很多葡萄球菌菌株對紅霉素 ,四環(huán)素類藥物,氨基糖苷類,桿菌肽和氯霉素也敏感,但因有更好更安全的藥可用,故很少使用氯霉素和桿菌肽。目前耐甲氧苯

14、青霉素金黃色葡萄球菌(MRSA) 菌株日益增多，這種細菌雖可從社區(qū)獲得感染的病人中分離得到,但多數(shù)是從感染的靜脈吸毒者和重癥監(jiān)護室的病人中分離獲得。MRSA 菌株通常對耐3 -內(nèi)酰胺酶青霉素，頭抱菌素和卡巴培南類有耐藥性。這些細菌對氨基糖昔類和大環(huán)內(nèi)酯類(紅霉素,克拉霉素,阿齊霉素,林可霉素和氯林可霉素)的耐藥性也很普遍。雖然亞胺培南- 西拉司丁或喹諾酮類對某些MRSA 感染是有效的,但靜脈注射萬古霉素為首選。腎功能正常成人的通用劑量是每6 小時靜脈注射500mg 或每 12 小時靜滴注1000mg,至少在 1 小時內(nèi)滴完。腎功能受損時,劑量應(yīng)根據(jù)血清中藥物的濃度加以調(diào)整,療程視感染部位及病人

15、的反應(yīng)而定,但一般為24 周。某些嚴重的或有并發(fā)癥的感染,可能需要靜脈給藥治療 68 周 ,然后再口服治療1 個月或更長時間?？?用 于 替 代 萬 古 霉 素 治 療 MRSA 感 染 的 藥 物 有 ： TMP-SMZ, 成 人 劑 量 為TMP1015mg/(kg.d) 加 SMZ5075mg/(kg.d), 分劑口服或腸外給藥,每次間隔8 小時或 12小時 ,連續(xù) 24 周；利福平(600mg/d) 口服或腸外給藥；腸外給亞胺培南-西拉司丁(500mg每 6 小時 1 次 )或美羅匹寧(0.51.0g 每 8 小時 1 次。但利福平不要單獨應(yīng)用,因為細菌很易產(chǎn)生抗藥性。在治療異物相關(guān)性

16、MRSA 感染或漿膜腔MRSA 感染時 ,利福平和氨基糖苷類是有 用 的 輔 助 藥 物 。 鄰 氯 青 霉 素 ,雙 氯 青 霉 素 ,TMP-SMZ, 環(huán) 丙 沙 星 及 局 部 用 莫 匹 羅 星(mupirocin) 可用于治療MRSA 帶菌狀態(tài),但MRSA 對這些藥物可產(chǎn)生抗藥性。抗萬古霉素的腸球菌(VRE)菌株的流行日益增加，這種菌株在實驗室中可將引起抗萬古霉素的基因轉(zhuǎn)為凝固酶陽性的金黃色葡萄球菌菌株,而在感染的病人中則轉(zhuǎn)變?yōu)槟堂戈幮云咸亚蚓蛛x株?？墒沁@些葡萄球菌很容易對治療這類感染的其他藥物產(chǎn)生抗藥性。桿菌肽,若有的話,可試用于治療抗萬古霉素的葡萄球菌感染。對這些病人應(yīng)嚴格隔

17、離,以防他們的細菌傳播。二、細菌的生物安全防護根據(jù) 病原微生物生物實驗室生物安全管理條例人間傳播的微生物名錄（待頒布）金黃色葡萄球菌屬于三類，BSL-2 。相關(guān)的防護事宜包括：（ 1 ）操作要求1 、實驗時，未經(jīng)實驗室主任同意，限制或禁止進入實驗室。2 、不許在工作區(qū)域飲食、吸煙、清洗隱型眼鏡和化妝。食物應(yīng)存放在工作區(qū)域以外專用櫥柜或冰箱中。3 、所有的操作過程應(yīng)盡量細心，避免產(chǎn)生和濺出氣溶膠。4 、對于污染的銳器，必須時刻保持高度的警惕，包括針、注射器、玻片、加樣器等。5 、注射和吸取感染材料時，只能使用針頭固定注射器或一次性注射器（即注射器和針頭是一體的） 。用過的一次性針頭必須彎曲、切斷

18、、破碎、重新套上針頭套、從一次性注射器上去掉，或在丟棄前進行人工處理，要不將之小心放入不會被刺穿的、用于收集廢棄銳器的容器中。非一次性銳器必須放置在堅壁容器中，轉(zhuǎn)移至處理區(qū)消毒，最好高壓殺菌。6 、打碎的器皿不能直接用手處理，必須用其它工具處理，如刷子和簸箕、夾子或鑷子。盛污染的針頭、銳器、碎玻璃的容器在倒掉前，應(yīng)按照相關(guān)的規(guī)定進行消毒。7 、所有的培養(yǎng)物、儲存物及其它規(guī)定的廢物在釋放前，均應(yīng)使用可行的消毒方法進行消毒，如高壓滅菌。轉(zhuǎn)移到就近實驗室消毒的物料應(yīng)置于耐用、防漏容器內(nèi)，密封運出實驗室。離開該系統(tǒng)進行消毒的物料，在轉(zhuǎn)移前應(yīng)包裝，其包裝應(yīng)符合有關(guān)的法規(guī)。8 、濺出或偶然事件中，明顯暴露于傳染