【doc】頭孢丙烯中有關(guān)物質(zhì)檢查的HPLC法

1、頭孢丙烯中有關(guān)物質(zhì)檢查的hplc法?研究與交流?2009年第33卷第1期第34頁doi:10.3969/j.issn.10015094.2009.01.007藥學(xué)進展342009,vol33,no.1頭孢丙烯中有關(guān)物質(zhì)檢查的hplc法劉文華,張國成(東瑞制藥有限公司研發(fā)中心,江蘇蘇州215128)摘要】目的:建立頭孢丙烯中有關(guān)物質(zhì)的檢測方法.方法:采用高效液相色譜法,固定相為c.柱,流動相為乙腈一磷酸二氫銨溶液(10:90),檢測波長為280hill.結(jié)果:頭孢丙烯與各有關(guān)物質(zhì)達到了較好的分離,順式異構(gòu)體和反式異構(gòu)體峰的相對保留時間分別為0.7和1.0,分離度大于2.5.3批樣品的中間體雜質(zhì)含

2、量分別為0.14%,0.15%和0.15%,其它最大單個雜質(zhì)含量分別為0.38%,0.39%和0.36%,雜質(zhì)總量分別為1.20%,1.15%和1.18%.結(jié)論:本法簡便,專屬性強,準確度高,重復(fù)性好,可用于測定頭孢丙烯中的有關(guān)物質(zhì).關(guān)鍵詞頭孢丙烯;有關(guān)物質(zhì);hplc中圖分類號r927.1文獻標識碼b文章編號10015094(2009)01003404determinationofrelatedsubstancesincefproziibvhplcliuwenhua,zhangguocheng(researchanddevelopmentcenter,suzhoudawnrayspharmac

3、euticalco.,ltd.,suzhou215128,china)【abstract】objective:toestablishasuitablemethodforthedeterminationofrelatedsubstancesincefrlrozilbyrphplc.methods:thec18column(250nlnlx4.6mm,5i.lm)andtheacetonitrilephosphatebufferssolution(10:90)wereused,andthedetectionwavelengthwasat280nm.results:theresolutionbetw

4、eencefprozilandtherelatedsubstanceswasidea1.threebatchesofsamplesweretestedandthecontentoftheknownrelatedsubstanceswas0.14%,0.15%and0.15%,respectively.thecontentoftheothermaximumindividualimpuritywas0.38%,0.39%and0.36%,respectivelyandthetotalcontentwas1.20%,1.15%and1.18%,respectively.conclusion:this

5、methodissimpleandaccurate.itmaybeusedtodeterminetherelatedsubstancesincefprozil.【keywords】cefprozil;relatedsubstances;hplc頭孢丙烯是第二代口服頭孢類抗生素,具有高效,低毒,耐酶,廣譜的特點,對革蘭陽性菌,革蘭陰性菌,厭氧菌的抗菌活性強,其中對革蘭陽性菌活性尤為突出.本文參考美國藥典,采用乙腈一磷酸二氫銨溶液(10:90)為流動相,測定頭孢丙烯中有關(guān)物質(zhì),并進行了方法驗證.1儀器與試藥agilentl100型高效液相色譜儀(dad檢測器,agilent色譜工作站).接受日期2

6、008.09.09頭孢丙烯原料藥(以下簡稱本品,由蘇州東瑞制藥有限公司研制,批號分別為20020601,20020602,20020603);乙腈為色譜純,磷酸二氫銨,磷酸及其它試劑均為分析純.2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱:alltechcl8柱(250mln×4.6mm,5ixm);流動相為乙腈磷酸二氫銨溶液(1o:9o),其制備方法為:取磷酸二氫銨2o.7g,加水溶解并稀釋通訊作者:劉文華,副主任藥師;研究方向:新藥研究與開發(fā);tel:051265626868-3102;e-mail:1whdawnrays.corn2009,vol33,no.135progressinpha

7、rmaceuticalsciences藥學(xué)蓮履至1800ml,用磷酸調(diào)節(jié)至ph4.4¨j,檢測波長為280nm,流速為iml?rain,進樣量為10l.2.2檢測波長的選擇分別取合成起始原料和中間體(含順,反式異構(gòu)體)適量,以流動相制成每1ml含0.3mg的起始原料溶液和中間體溶液;分別取順式,反式頭孢丙烯各適量,以流動相制成1.5g?l的順式頭孢丙烯溶液和反式頭孢丙烯溶液;取本品75mg,置50ml量瓶中,加人1ml4.o%氫氧化鈉溶液,混合1分鐘,用鹽酸調(diào)節(jié)ph至中性,再加流動相稀釋至刻度,搖勻,濾過,制得堿破壞液;取本品75mg,置5oml量瓶中,加入1ml鹽酸,混合io分鐘后

8、,用4.0%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph至中性,再加流動相稀1600l2003800e400o2002503003504002/nm504o三oe20100l050.5-10-15.20400?研究與交流?2009年第33卷第1期第35頁釋至刻度,搖勻,濾過,制得酸破壞液;取本品75mg,加流動相制成1.5g?l的溶液,在強光(6000lx)下照射5小時,濾過,制得強光照射破壞液;取本品75mg,置50ml量瓶中,加入lml過氧化氫,混合75分鐘,加流動相稀釋至刻度,搖勻,濾過,制得氧化破壞液;取本品75mg,置50ml量瓶中,加流動相稀釋至刻度,搖勻,置人60ci=水浴中90分鐘,取出,放冷,濾過,

9、制得濕熱破壞液.取上述各溶液,分別注入帶有dad檢測器的液相色譜儀中,記錄色譜圖,并掃描uv圖,結(jié)果表明,除末端吸收外,起始原料,中間體,本品及其降解產(chǎn)物在280nm波長處有最大或較大吸收,如圖1所示.故選擇280nm作為檢測波長.loo8o60402002002503003504002/nm200i501005o02002503003504002/nml0008006o0400200omnm2/nma:起始原料;b:中間體(順式);c:中間體(反式);d:頭孢丙烯(順式);e:頭孢丙烯(反式);f:酸破壞液(3.855min);g:酸破壞液(15.114min);h:酸破壞液(19.237m

10、in);i:堿破壞液(5.188min);j:強光破壞液(13.521min);k:氧化破壞液(2.964min);l:氧化破壞液(5.188min);m:氧化破壞液(4.161min);n:濕熱破壞液(4.025min)圖1頭孢丙烯有關(guān)物質(zhì)紫外全波長掃描圖figureluvt0talwavelengthscanningspectrumoftherelatedsubstancesincefdrozil2009-(-136藥學(xué)進履第33卷第期第頁.''2.3系統(tǒng)適用性取本品適量,以流動相制成1.5g?l的溶液,按"2.1"項下色譜條件,注入液相色譜儀中,記錄色

11、譜圖,順式異構(gòu)體和反式異構(gòu)體峰的相對保留時間分別為0.7和1.0,分離度大于2.5,理論塔板數(shù)按順式頭孢丙烯峰計算不小于2500.2.4專屬性試驗分別取合成起始原料,中間體及本品溶液各5ml,混合均勻,制成原混合溶液,按"2.1"項下色2502003150<e1o05oo706o50403o2o1o01la墨jl._-o5l0l520min706o5040302o1o0362009,vo/.33,no.1progresspharmaceuticalsciences譜條件,取10l進樣,結(jié)果如圖2所示.出峰順序為起始原料,中間體(順式),中間體(反式),頭孢丙烯

12、(順式),頭孢丙烯(反式).分別取"2.2"項下的酸,堿,強光,氧化及濕熱破壞液進樣,記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3倍,并對出現(xiàn)的主要雜質(zhì)進行dad掃描,在各條件下,因破壞而出現(xiàn)的雜質(zhì)峰均能與主峰有效分離,起始原料,中間體與頭孢丙烯也有較好的分離度(見圖2),表明該法測定頭孢丙烯中有關(guān)物質(zhì)的專屬性良好.:.b:.,.一一105lol52o25f,min圣0一c,o5l0152o25t/min三:f:-獸05loi52025l|raina:混合溶液;b:酸破壞液;c:堿破壞液;d:強光照射破壞液;e:氧化破壞液;f:濕熱破壞液圖2頭孢丙烯專屬性試驗色譜圖figure2chm

13、matoamsofspecialitytestofcefprozil2.5溶液穩(wěn)定性取"2.3"項下的溶液,按"2.1"項下色譜條件,分別于0,2,4小時進樣,記錄色譜圖,以面積歸一化法計算,測得最大單個雜質(zhì)含量和雜質(zhì)總量分別為0.37%和1.21%(0h),0.37%和1.23%(2h),0.38%和1.18%(4h),表明供試品溶液在4小時內(nèi)穩(wěn)定.2.6重復(fù)性試驗按"2.3"項下方法分別配制6份溶液,按"2.1"項下的色譜條件,分別進樣,記錄色譜圖,以面積歸一化法計算,測得最大單個雜質(zhì)含量和雜質(zhì)總量的平均值分別

14、為0.35%和1.18%,rsd分別為0.5%和0.6%,表明方法重復(fù)性較好.2.7檢測限分別取合成起始原料,中間體及頭孢丙烯適量,精密稱定,置50ml量瓶中,用流動相溶解并稀釋制成一系列濃度的溶液,分別進樣,記錄色譜圖.按信噪比3:1計算,起始原料,中間體,順式及反式頭孢丙烯的檢測限分別為0.38,0.15,0.24和0.16ixg?ml.如如加m0舳加如如加02oo9,vo1.33,no.137progressinpharmaceuticalsciences藥學(xué)蓮展2.8線性關(guān)系分別取合成起始原料和中間體適量,精密稱定,置同一量瓶中,以流動相制成0.5g?l的溶液,以此溶液作為貯備液,然后

15、梯度稀釋成各濃度溶液,并分別進樣,記錄色譜圖,以峰面積為縱坐標,濃度為橫坐標繪制標準曲線,其起始原料的線性方程和相關(guān)系數(shù)分別為:a=3422.36c+0.09157,r=0.99997;順式中間體為a=18677.36c+1.99457,r=0.99998.結(jié)果表明,該色譜條件下,起始原料在1.55一l5.5ixg?ml,順式中間體在3.9439.4txg?ml均有較好的線性關(guān)系.2.9校正因子分別取合成起始原料和中間體及頭孢丙烯適量,精密稱定,置同一量瓶中,以流動相制成0.3g?l的溶液,平行制備3份;精密量取每份溶液適量,用流動相稀釋1o倍和100倍,共9份溶液,分別進樣,記錄色譜圖,測定

16、峰面積,計算各校正因子.結(jié)果上述3種物質(zhì)的平均校正因子分別為2.812×10i4,5.450×10.,6.829×10,故合成起始原料和中間體相對于頭孢丙烯的相對校正因子分別為4.12和0.80.2.10樣品檢查采用加校正因子的主成分自身對照法控制有關(guān)物質(zhì).取本品適量,用流動相溶解并稀釋制成1.5g?l的溶液,作為供試品溶液.精密量取lml,置100ml量瓶中,以流動相稀釋至刻度,作為對照溶液.稱取合成起始原料和中間體各少量,分別以流動相制成0.3g?lg的溶液,作為定位溶液.按照"2.1"項下色譜條件,取對照溶液進樣,調(diào)節(jié)儀器靈敏度,使主成分

17、峰的峰高約為滿量程的?研究與交流?2009年第33卷第1期第37頁10%一25%;取定位溶液進樣,確定特定雜質(zhì)的出峰時間;取供試品溶液進樣,記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3倍.供試品溶液色譜圖中如顯合成起始原料峰或中間體峰,則分別按校正因子4.12和0.80計算峰面積,二者均不得大于對照溶液主峰面積的0.5倍(0.5%);如顯其它雜質(zhì)峰,單個最大雜質(zhì)峰面積不得大于對照溶液的主峰面積(1.o%);各雜質(zhì)峰面積之和不得大于對照溶液主峰面積的2倍(2.0%).3批樣品(批號:20020601,20020602,20020603)的相關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果如下:起始原料均未檢出;中間體含量分別為0.14%,0.15%,0.15%;其它最大單個雜質(zhì)含量分別為0.38%,0.39%,0.36%;雜質(zhì)總量分別為1.20%,1.15%,1.18%,符合要求.3討論采用加雜質(zhì)校正因子的主成