三 谷氨酸生菌及擴(kuò)大培養(yǎng)

1、三三 谷氨酸生產(chǎn)菌及擴(kuò)大培養(yǎng)谷氨酸生產(chǎn)菌及擴(kuò)大培養(yǎng)教學(xué)內(nèi)教學(xué)內(nèi)容1，了解谷氨氨酸生產(chǎn)產(chǎn)菌的主要特征、特點(diǎn)。2，掌握菌種種的擴(kuò)擴(kuò)大培養(yǎng)養(yǎng)方法。3，了解影響響生產(chǎn)產(chǎn)菌生長(zhǎng)長(zhǎng)的主要因素。教學(xué)教學(xué)目的與與要求學(xué)時(shí)：4作業(yè)業(yè)安排小論論文前言：一，谷氨氨酸菌種種的選選育進(jìn)進(jìn)展：1，應(yīng)應(yīng)用常規(guī)規(guī)育種種技術(shù)術(shù)及其所選選育的谷氨氨酸高產(chǎn)產(chǎn)新菌種種 前言：2，谷氨氨酸生產(chǎn)產(chǎn)菌抗噬菌株的選選育前言：3 ，采用遺傳遺傳工程新技術(shù)選術(shù)選育谷氨氨酸優(yōu)優(yōu)良菌種種 前言：二，谷氨氨酸生產(chǎn)產(chǎn)菌保存方法 1，幾種種斜面培 養(yǎng)養(yǎng)基 保存方法前言：二，谷氨氨酸生產(chǎn)產(chǎn)菌保存方法 2磷酸鹽緩鹽緩沖液保存方法的改進(jìn)進(jìn)前言：二，谷氨氨酸生產(chǎn)

2、產(chǎn)菌保存方法 3試試管熔封法保存谷氨氨酸菌種種的研研究 前言：二，谷氨氨酸生產(chǎn)產(chǎn)菌保存方法 4液氮氮超低 溫溫保 存谷氨氨酸菌種種 第一節(jié)第一節(jié) 谷氨酸生產(chǎn)菌的主要特征和菌學(xué)性質(zhì)谷氨酸生產(chǎn)菌的主要特征和菌學(xué)性質(zhì)一，現(xiàn)有谷氨酸生產(chǎn)菌的分類：一，現(xiàn)有谷氨酸生產(chǎn)菌的分類： 現(xiàn)有谷氨酸生產(chǎn)菌主要是棒狀桿菌屬、短桿菌屬、小桿菌屬及節(jié)桿菌屬中的細(xì)菌。這四個(gè)屬在細(xì)菌的分類系統(tǒng)中彼此比較接近。短桿菌屬隸屬于短桿菌科(brevibacteriaceace)，而棒狀桿菌屬、小桿菌屬及節(jié)桿菌屬則都隸屬于棒狀桿菌科(corynebacteriaceae)。短桿菌科和棒狀桿菌科均屬于真細(xì)菌目中的革蘭氏染色陽(yáng)性、無(wú)芽抱桿

3、菌及有芽抱桿菌的一大類。 二，現(xiàn)有谷氨酸生產(chǎn)菌的菌學(xué)性質(zhì)： 三，現(xiàn)有谷氨酸生產(chǎn)菌的主要特征：三，現(xiàn)有谷氨酸生產(chǎn)菌的主要特征： 三，現(xiàn)有谷氨酸生產(chǎn)菌的主要特征：三，現(xiàn)有谷氨酸生產(chǎn)菌的主要特征： 三、現(xiàn)有谷氨酸生產(chǎn)菌的主要特征三、現(xiàn)有谷氨酸生產(chǎn)菌的主要特征（總結(jié)）（總結(jié)） 第二節(jié)第二節(jié) 谷氨酸生產(chǎn)菌在發(fā)酵過(guò)谷氨酸生產(chǎn)菌在發(fā)酵過(guò)程中的形態(tài)變化程中的形態(tài)變化 人們發(fā)現(xiàn)，谷氨酸生產(chǎn)菌在發(fā)酵過(guò)程中會(huì)發(fā)生明顯人們發(fā)現(xiàn)，谷氨酸生產(chǎn)菌在發(fā)酵過(guò)程中會(huì)發(fā)生明顯的菌體形態(tài)的變化。實(shí)踐證明，在發(fā)酵過(guò)程中發(fā)現(xiàn)的菌體形態(tài)的變化。實(shí)踐證明，在發(fā)酵過(guò)程中發(fā)現(xiàn)菌體形態(tài)有明顯的變化時(shí)，正是產(chǎn)谷氨酸的激增時(shí)菌體形態(tài)有明顯的變化時(shí)，正

4、是產(chǎn)谷氨酸的激增時(shí)間。但在發(fā)酵培養(yǎng)基含有過(guò)剩生物素的培養(yǎng)條件下，間。但在發(fā)酵培養(yǎng)基含有過(guò)剩生物素的培養(yǎng)條件下，菌體形態(tài)則沒(méi)有明顯變化，卻呈現(xiàn)耗糖、長(zhǎng)菌、不菌體形態(tài)則沒(méi)有明顯變化，卻呈現(xiàn)耗糖、長(zhǎng)菌、不產(chǎn)谷氨酸的異常發(fā)酵。產(chǎn)谷氨酸的異常發(fā)酵。 一、種子的菌體形態(tài)一、種子的菌體形態(tài) 斜面和一、二級(jí)種子培養(yǎng)在不同培養(yǎng)條件下斜面和一、二級(jí)種子培養(yǎng)在不同培養(yǎng)條件下,細(xì)胞形態(tài)基本相似。斜面培養(yǎng)的菌體較細(xì)小細(xì)胞形態(tài)基本相似。斜面培養(yǎng)的菌體較細(xì)小,一、一、二級(jí)種子比斜面菌體大而粗壯，革蘭氏染色深。多二級(jí)種子比斜面菌體大而粗壯，革蘭氏染色深。多為短桿至棒桿狀，有的微呈彎曲狀，兩端鈍圓，無(wú)為短桿至棒桿狀，有的微呈彎

5、曲狀，兩端鈍圓，無(wú)分枝；細(xì)胞排列呈單個(gè)、成對(duì)及分枝；細(xì)胞排列呈單個(gè)、成對(duì)及“v”字形，有柵狀字形，有柵狀或不規(guī)則聚塊；分裂的細(xì)胞大小為或不規(guī)則聚塊；分裂的細(xì)胞大小為0.70.9*1.03.4um。由于生物素充足，繁殖的菌體細(xì)胞均為谷。由于生物素充足，繁殖的菌體細(xì)胞均為谷氨酸非積累型細(xì)胞。氨酸非積累型細(xì)胞。 二、谷氨酸發(fā)酵不同階段的菌體形態(tài)二、谷氨酸發(fā)酵不同階段的菌體形態(tài) 從谷氨酸發(fā)酵中菌體形態(tài)的變化來(lái)看,大致可以分為長(zhǎng)菌型細(xì)胞、轉(zhuǎn)移期細(xì)胞和產(chǎn)酸型細(xì)胞3種不同時(shí)期的細(xì)胞形態(tài)。三、谷氨酸發(fā)酵感染噬菌體后的菌體三、谷氨酸發(fā)酵感染噬菌體后的菌體形態(tài)形態(tài) 發(fā)酵前期感染噬菌體后，菌體細(xì)胞明顯減少發(fā)酵前期感

6、染噬菌體后，菌體細(xì)胞明顯減少,細(xì)胞不規(guī)則，發(fā)圓、發(fā)胖，缺乏細(xì)胞不規(guī)則，發(fā)圓、發(fā)胖，缺乏“”字形排列，字形排列，有明顯的細(xì)胞碎片，嚴(yán)重時(shí)出現(xiàn)拉絲、拉網(wǎng)，有明顯的細(xì)胞碎片，嚴(yán)重時(shí)出現(xiàn)拉絲、拉網(wǎng)，互相堆在一起，幾乎找不到完整的菌體細(xì)胞互相堆在一起，幾乎找不到完整的菌體細(xì)胞,類類似蛛網(wǎng)或魚翅狀。似蛛網(wǎng)或魚翅狀。 在發(fā)酵中、后期感染噬菌體后，菌體細(xì)胞在發(fā)酵中、后期感染噬菌體后，菌體細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，邊緣不整齊，有的邊緣似乎有許形態(tài)不規(guī)則，邊緣不整齊，有的邊緣似乎有許多毛刺狀的東西，有細(xì)胞碎片多毛刺狀的東西，有細(xì)胞碎片 。第三節(jié)第三節(jié) 谷氨酸生產(chǎn)菌的育種谷氨酸生產(chǎn)菌的育種1，日常菌種工作 第三節(jié)第三節(jié) 谷氨

7、酸生產(chǎn)菌的育種谷氨酸生產(chǎn)菌的育種育種思路 第三節(jié)第三節(jié) 谷氨酸生產(chǎn)菌的育種谷氨酸生產(chǎn)菌的育種育種思路育種思路1.1.切斷或減弱支路代謝切斷或減弱支路代謝 2 2. .解除自身的反饋抑制解除自身的反饋抑制 3.3.增加前體物的合成增加前體物的合成 4.4.提高細(xì)胞膜的滲透性提高細(xì)胞膜的滲透性 5.5.強(qiáng)化能量代謝強(qiáng)化能量代謝6.6.利用基因工程技術(shù)構(gòu)建谷氨酸工程菌株利用基因工程技術(shù)構(gòu)建谷氨酸工程菌株 第三節(jié)第三節(jié) 谷氨酸生產(chǎn)菌的育種谷氨酸生產(chǎn)菌的育種2 2，選育耐高滲透壓的菌株，選育耐高滲透壓的菌株 第三節(jié)第三節(jié) 谷氨酸生產(chǎn)菌的育種谷氨酸生產(chǎn)菌的育種3 3，選育不分解利用谷氨酸的突變株：即選育以

8、谷氨酸為，選育不分解利用谷氨酸的突變株：即選育以谷氨酸為唯一碳源菌體不長(zhǎng)或生長(zhǎng)微弱的突變株。唯一碳源菌體不長(zhǎng)或生長(zhǎng)微弱的突變株。 第三節(jié)第三節(jié) 谷氨酸生產(chǎn)菌的育種谷氨酸生產(chǎn)菌的育種4，選育細(xì)胞膜滲透性好的突變株 第三節(jié)第三節(jié) 谷氨酸生產(chǎn)菌的育種谷氨酸生產(chǎn)菌的育種5，選育強(qiáng)化co2固定反應(yīng)的突變株 第三節(jié)第三節(jié) 谷氨酸生產(chǎn)菌的育種谷氨酸生產(chǎn)菌的育種6，選育減弱乙醛酸循環(huán)的突變株 第三節(jié)第三節(jié) 谷氨酸生產(chǎn)菌的育種谷氨酸生產(chǎn)菌的育種7，選育強(qiáng)化三羧酸循環(huán)中從檸檬酸到a-酮戊二酸代謝的突變株 第三節(jié) 谷氨酸生產(chǎn)菌的育種8，選育解除谷氨酸對(duì)谷氨酸脫氫酶反饋調(diào)節(jié)的突變株 第三節(jié)第三節(jié) 谷氨酸生產(chǎn)菌的育種谷

9、氨酸生產(chǎn)菌的育種9，選育強(qiáng)化能量代謝的突變株 第三節(jié)第三節(jié) 谷氨酸生產(chǎn)菌的育種谷氨酸生產(chǎn)菌的育種10，選育減弱hmp途徑后段酶活性的突變株 第四節(jié)第四節(jié) 利用生物工程新技術(shù)選育谷氨酸生利用生物工程新技術(shù)選育谷氨酸生產(chǎn)菌產(chǎn)菌 一、應(yīng)用原生質(zhì)體融合新技術(shù)選育谷氨酸生產(chǎn)菌一、應(yīng)用原生質(zhì)體融合新技術(shù)選育谷氨酸生產(chǎn)菌1)標(biāo)記標(biāo)記菌株的篩選篩選；2)原生質(zhì)質(zhì)體的制備備；3)原生質(zhì)質(zhì)體的再生；4)原生質(zhì)質(zhì)體的融合；5)融合子的選擇選擇；6)實(shí)實(shí)用性菌株的篩選篩選。第四節(jié)第四節(jié) 利用生物工程新技術(shù)選育谷氨酸生利用生物工程新技術(shù)選育谷氨酸生產(chǎn)菌產(chǎn)菌 二，應(yīng)用轉(zhuǎn)化法選育谷氨酸生產(chǎn)菌二，應(yīng)用轉(zhuǎn)化法選育谷氨酸生產(chǎn)菌

10、所謂轉(zhuǎn)化，是指受體細(xì)胞直接吸收了來(lái)自供所謂轉(zhuǎn)化，是指受體細(xì)胞直接吸收了來(lái)自供體細(xì)胞的體細(xì)胞的dna片段，并將它整合到自己的基因片段，并將它整合到自己的基因組中，從而獲得了供體細(xì)胞部分遺傳性狀的現(xiàn)組中，從而獲得了供體細(xì)胞部分遺傳性狀的現(xiàn)象。轉(zhuǎn)化作用需要受體菌和轉(zhuǎn)化象。轉(zhuǎn)化作用需要受體菌和轉(zhuǎn)化dna。轉(zhuǎn)化既。轉(zhuǎn)化既是進(jìn)行細(xì)菌遺傳分析的有效工具，亦是微生物是進(jìn)行細(xì)菌遺傳分析的有效工具，亦是微生物育種的有效方法。育種的有效方法。 第四節(jié)第四節(jié) 利用生物工程新技術(shù)選育谷氨酸生利用生物工程新技術(shù)選育谷氨酸生產(chǎn)菌產(chǎn)菌 三，應(yīng)用轉(zhuǎn)導(dǎo)法選育谷氨酸生產(chǎn)菌三，應(yīng)用轉(zhuǎn)導(dǎo)法選育谷氨酸生產(chǎn)菌 所謂轉(zhuǎn)導(dǎo)，是指通過(guò)溫和型噬菌

11、體為媒介，將供體細(xì)腦中的所謂轉(zhuǎn)導(dǎo)，是指通過(guò)溫和型噬菌體為媒介，將供體細(xì)腦中的dna片段攜帶到受體細(xì)胞中，從而使受體細(xì)胞獲得了供體細(xì)胞片段攜帶到受體細(xì)胞中，從而使受體細(xì)胞獲得了供體細(xì)胞部分遺傳性狀的現(xiàn)象。轉(zhuǎn)導(dǎo)作用需要三個(gè)組成部分，即供體菌，部分遺傳性狀的現(xiàn)象。轉(zhuǎn)導(dǎo)作用需要三個(gè)組成部分，即供體菌，轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體，受體菌。由于絕大多數(shù)細(xì)菌轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體，受體菌。由于絕大多數(shù)細(xì)菌(包括谷氨酸生產(chǎn)菌在包括谷氨酸生產(chǎn)菌在內(nèi)內(nèi))都有噬菌體，所以轉(zhuǎn)導(dǎo)遠(yuǎn)較轉(zhuǎn)化作用普遍。又因?yàn)檗D(zhuǎn)導(dǎo)都有噬菌體，所以轉(zhuǎn)導(dǎo)遠(yuǎn)較轉(zhuǎn)化作用普遍。又因?yàn)檗D(zhuǎn)導(dǎo)dna位于噬菌體蛋白質(zhì)外殼內(nèi)，所以不會(huì)像轉(zhuǎn)化位于噬菌體蛋白質(zhì)外殼內(nèi)，所以不會(huì)像轉(zhuǎn)化dna那樣容

12、易被那樣容易被外界的外界的dna分解酶所破壞，因此比較穩(wěn)定。轉(zhuǎn)導(dǎo)同轉(zhuǎn)化一樣，分解酶所破壞，因此比較穩(wěn)定。轉(zhuǎn)導(dǎo)同轉(zhuǎn)化一樣，也是微生物育種的有效方法。也是微生物育種的有效方法。 第四節(jié)第四節(jié) 利用生物工程新技術(shù)選育谷氨酸生利用生物工程新技術(shù)選育谷氨酸生產(chǎn)菌產(chǎn)菌 四、應(yīng)用重組四、應(yīng)用重組dna技術(shù)選育谷氨酸生產(chǎn)菌技術(shù)選育谷氨酸生產(chǎn)菌 重組重組dna技術(shù)也稱為基因工程，它是在分子遺傳技術(shù)也稱為基因工程，它是在分子遺傳學(xué)理論的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的。它綜合了生物化學(xué)和微學(xué)理論的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的。它綜合了生物化學(xué)和微生物學(xué)的現(xiàn)代技術(shù)和手段在離體條件下將某種生物的生物學(xué)的現(xiàn)代技術(shù)和手段在離體條件下將某種生物的基因

13、與作為載體的基因與作為載體的dna分子連接起來(lái)，然后轉(zhuǎn)化到某分子連接起來(lái)，然后轉(zhuǎn)化到某一寄主細(xì)胞中，使之進(jìn)行復(fù)制并得以表達(dá)，從而使寄一寄主細(xì)胞中，使之進(jìn)行復(fù)制并得以表達(dá)，從而使寄主菌獲得新的遺傳性狀。利用重組主菌獲得新的遺傳性狀。利用重組dna技術(shù)，可以使技術(shù)，可以使編碼限速酶的基因擴(kuò)增以排除生物合成途徑中的編碼限速酶的基因擴(kuò)增以排除生物合成途徑中的“瓶瓶頸頸”，從而使谷氨酸產(chǎn)量增加。因比重組，從而使谷氨酸產(chǎn)量增加。因比重組dna技術(shù)是技術(shù)是提高谷氨酸產(chǎn)量的一種新的有效手段。提高谷氨酸產(chǎn)量的一種新的有效手段。 第四節(jié)第四節(jié) 利用生物工程新技術(shù)選育谷氨酸生利用生物工程新技術(shù)選育谷氨酸生產(chǎn)菌產(chǎn)菌

14、五、應(yīng)用固定化細(xì)胞技術(shù)發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸五、應(yīng)用固定化細(xì)胞技術(shù)發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸 固定化細(xì)胞是固定化細(xì)胞是60年代后期發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)新技術(shù)，年代后期發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)新技術(shù)，是通過(guò)物理的或化學(xué)的方法將細(xì)胞束縛在一定區(qū)間內(nèi)是通過(guò)物理的或化學(xué)的方法將細(xì)胞束縛在一定區(qū)間內(nèi)使之仍具有催化活性的固定化生物催化劑。由于它既使之仍具有催化活性的固定化生物催化劑。由于它既能保持酶或微生物細(xì)胞的催化功能，又能使細(xì)胞很方能保持酶或微生物細(xì)胞的催化功能，又能使細(xì)胞很方便地與反應(yīng)液分離，并能進(jìn)行重復(fù)使用，所以對(duì)原材便地與反應(yīng)液分離，并能進(jìn)行重復(fù)使用，所以對(duì)原材料的合理利用，縮短不必要的操作時(shí)間，防止環(huán)境污料的合理利用，縮短不必要

15、的操作時(shí)間，防止環(huán)境污染及進(jìn)行現(xiàn)代化的工業(yè)生產(chǎn)部具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。染及進(jìn)行現(xiàn)代化的工業(yè)生產(chǎn)部具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。 在谷氨酸生產(chǎn)中，依其代謝途徑，把不必要的代謝途徑 (經(jīng)誘變阻斷了a一酮戊二酸到琥珀酰coa和乙醛酸兩條代謝途徑) 切斷后，同時(shí)誘變出細(xì)胞滲漏型甘油缺陷 b 4 ，以便讓谷氨酸有效外漏，解除因代謝途徑改變后細(xì)胞內(nèi)代謝產(chǎn)物谷氨酸過(guò)度積累而產(chǎn)生的反饋抑制，谷氨酸產(chǎn)量有一定提高( 經(jīng)誘變篩選得到的營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株 b 4比其出發(fā)菌株 b l提高產(chǎn)酸率 18.6 和對(duì)糖的轉(zhuǎn)化率提高 12.3 ) 。1.1 ，菌株和質(zhì)粒 1.2 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件1.2 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件1.3 dna的提取與

16、純化1.4 pcr克隆pfka基因1.5 重組質(zhì)粒ku一1的構(gòu)建及重組菌的篩選和鑒定1.6 重組質(zhì)粒的穩(wěn)定性 1.7 磷酸果糖激酶活性測(cè)定 1.8 糖轉(zhuǎn)化率和谷氨酸生成比較 結(jié)結(jié)果： 經(jīng)經(jīng)基因工程改造后的 b 4 4對(duì)對(duì)糖的轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化率有所提高，谷氨氨酸產(chǎn)產(chǎn)量有較較大的提高， 這這主要是增大磷酸果糖激酶劑劑量，解除了emp途徑徑中的磷酸果糖激酶的限制， 以致解除了磷酸果糖激酶對(duì)對(duì)已經(jīng)經(jīng)改造的谷氨氨酸整個(gè)個(gè)代謝謝途徑徑的限制，故物流代謝謝增強(qiáng)。以致b44對(duì)對(duì)糖的轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化率有所提高，谷氨氨酸產(chǎn)產(chǎn)量有較較大的提高。 第五節(jié)第五節(jié) 菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)和種子的質(zhì)量要求菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)和種子的質(zhì)量要求 國(guó)內(nèi)谷氨酸發(fā)酵

17、種子擴(kuò)大培養(yǎng)普遍采用二級(jí)種子培養(yǎng)的流程，即；斜面菌種-一級(jí)種子培養(yǎng)-二級(jí)種子培養(yǎng)-發(fā)酵罐。 第五節(jié) 菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)和種子的質(zhì)量要求菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)和種子的質(zhì)量要求 一，菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)1斜面菌種的培養(yǎng)第五節(jié)第五節(jié) 菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)和種子的質(zhì)量要求菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)和種子的質(zhì)量要求 一，菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)2一級(jí)種子培養(yǎng) 第五節(jié)第五節(jié) 菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)和種子的質(zhì)量要求菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)和種子的質(zhì)量要求 一，菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)2一級(jí)種子培養(yǎng) 第五節(jié)第五節(jié) 菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)和種子的質(zhì)量要求菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)和種子的質(zhì)量要求 一，菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)3二級(jí)種子培養(yǎng) (1) 培養(yǎng)基組成第五節(jié)第五節(jié) 菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)和種子的質(zhì)量要求菌種的擴(kuò)大培

18、養(yǎng)和種子的質(zhì)量要求 一，菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)3二級(jí)種子培養(yǎng)第五節(jié)第五節(jié) 菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)和種子的質(zhì)量要求菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)和種子的質(zhì)量要求 一，菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)3二級(jí)種子培養(yǎng)第五節(jié)第五節(jié) 菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)和種子的質(zhì)量要求菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)和種子的質(zhì)量要求 二，影響種子質(zhì)量的因素1培養(yǎng)基構(gòu)成：種子培養(yǎng)基要求合有豐富的氮源，足夠的生物素，少量的碳源，以利于菌體生長(zhǎng)。如果糖分過(guò)多，菌體代謝活動(dòng)旺盛，產(chǎn)生有機(jī)酸，使ph降低菌種容易衰老。2溫度；幼齡菌對(duì)溫度變化敏感，應(yīng)避免溫度過(guò)高和波動(dòng)大。3ph值：零小時(shí)時(shí)ph不宜過(guò)高，培養(yǎng)結(jié)束ph不宜過(guò)低，ph上升后有所下降時(shí)，培養(yǎng)時(shí)間已接近結(jié)束。4溶解氧：長(zhǎng)菌階段對(duì)氧要求比發(fā)酵時(shí)低，溶氧水平過(guò)高，抑制長(zhǎng)菌。5接種量：種量過(guò)少，菌體增長(zhǎng)緩慢，適應(yīng)期長(zhǎng)，培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，影響種子活力。但種量過(guò)大，在拼瓶操作中易引起污染。一般種且以1左右為宜。6培養(yǎng)時(shí)間：培養(yǎng)時(shí)間不宜太長(zhǎng)，以78h為好，掌握對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期作為種子接入發(fā)酵罐。 谷氨酸生產(chǎn)的種子制備谷氨酸生產(chǎn)的種子制備制備過(guò)程制備過(guò)程斜面菌種斜面菌種一級(jí)種子培養(yǎng)一級(jí)種子培養(yǎng)二級(jí)二級(jí)種子培養(yǎng)種子培養(yǎng)發(fā)酵發(fā)酵（1）斜面）斜面 (as1.299)培養(yǎng)基：蛋白胨培養(yǎng)基：蛋白胨 1%，牛肉膏，牛肉膏1%，