病毒感染的檢查及防治原則ppt課件

1、第二十五章第二十五章 病毒感染的檢查與防治原病毒感染的檢查與防治原那么那么第一節(jié)第一節(jié) 病毒感染的檢查病毒感染的檢查一、標(biāo)本的采集與送檢一、標(biāo)本的采集與送檢1.標(biāo)本采集標(biāo)本采集根據(jù)臨床評(píng)價(jià)及病期采集不同的標(biāo)本。根據(jù)臨床評(píng)價(jià)及病期采集不同的標(biāo)本。如呼吸道感染普通采集鼻咽洗漱液或痰液；如呼吸道感染普通采集鼻咽洗漱液或痰液；腸道感染采集糞便；腸道感染采集糞便；腦內(nèi)感染取腦脊液；腦內(nèi)感染取腦脊液；病毒血癥時(shí)期取血液；病毒血癥時(shí)期取血液；作病毒分別或病毒抗原的標(biāo)本，應(yīng)在發(fā)病初期或急性作病毒分別或病毒抗原的標(biāo)本，應(yīng)在發(fā)病初期或急性期采集，因此時(shí)病毒在體內(nèi)大量增殖，檢出率高。期采集，因此時(shí)病毒在體內(nèi)大量增殖

2、，檢出率高。病毒分別標(biāo)本的采取，最好在發(fā)病病毒分別標(biāo)本的采取，最好在發(fā)病1-2天進(jìn)展。天進(jìn)展。血清學(xué)檢查的標(biāo)本應(yīng)采取雙份血清送檢即以發(fā)病初期血清學(xué)檢查的標(biāo)本應(yīng)采取雙份血清送檢即以發(fā)病初期和病后和病后2-3周分別采取血清標(biāo)本。雙份血清同時(shí)進(jìn)周分別采取血清標(biāo)本。雙份血清同時(shí)進(jìn)展檢查，如抗體滴度有展檢查，如抗體滴度有4倍以上升高才有診斷意義。倍以上升高才有診斷意義。第一節(jié)第一節(jié) 病毒感染的檢查病毒感染的檢查一標(biāo)本的采集與送檢一標(biāo)本的采集與送檢1.標(biāo)本采集標(biāo)本采集2.標(biāo)本處置標(biāo)本處置標(biāo)本采取必需嚴(yán)厲無(wú)菌操作。標(biāo)本采取必需嚴(yán)厲無(wú)菌操作。對(duì)于本身帶有雜菌的標(biāo)本，如糞便、咽嗽液、痰液對(duì)于本身帶有雜菌的標(biāo)本，

3、如糞便、咽嗽液、痰液等，應(yīng)參與高濃度青霉素、鏈霉素、慶大霉素等等，應(yīng)參與高濃度青霉素、鏈霉素、慶大霉素等處置。處置。大多數(shù)病毒對(duì)甘油有抵抗力，送檢組織、糞便標(biāo)本大多數(shù)病毒對(duì)甘油有抵抗力，送檢組織、糞便標(biāo)本等可置于含抗生素的等可置于含抗生素的50%甘油緩沖鹽水中，低溫甘油緩沖鹽水中，低溫保管送檢。保管送檢。第一節(jié)第一節(jié) 病毒感染的檢查病毒感染的檢查一標(biāo)本的采集與送檢一標(biāo)本的采集與送檢1.標(biāo)本采集標(biāo)本采集2.標(biāo)本處置標(biāo)本處置3.標(biāo)本送檢與保管標(biāo)本送檢與保管病毒在室溫下很快滅活，標(biāo)本采集后應(yīng)立刻送到病病毒在室溫下很快滅活，標(biāo)本采集后應(yīng)立刻送到病毒實(shí)驗(yàn)室，照實(shí)驗(yàn)室間隔較遠(yuǎn)或一時(shí)無(wú)法立刻送毒實(shí)驗(yàn)室，照實(shí)

4、驗(yàn)室間隔較遠(yuǎn)或一時(shí)無(wú)法立刻送檢時(shí)，應(yīng)將標(biāo)本放入裝有冰塊的冰壺內(nèi)，最好在檢時(shí)，應(yīng)將標(biāo)本放入裝有冰塊的冰壺內(nèi)，最好在1-2小時(shí)內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室，立刻進(jìn)展檢查或分別培育。小時(shí)內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室，立刻進(jìn)展檢查或分別培育。暫時(shí)不能檢查或分別培育時(shí)，應(yīng)將標(biāo)本存放在暫時(shí)不能檢查或分別培育時(shí)，應(yīng)將標(biāo)本存放在-70低溫冰箱內(nèi)保管。低溫冰箱內(nèi)保管。第一節(jié)第一節(jié) 病毒感染的檢查病毒感染的檢查一標(biāo)本的采集與送檢一標(biāo)本的采集與送檢二病毒的形狀學(xué)檢查二病毒的形狀學(xué)檢查1.光學(xué)顯微鏡檢查光學(xué)顯微鏡檢查用光學(xué)顯微鏡可直接察看痘類病毒的單個(gè)病毒體；用光學(xué)顯微鏡可直接察看痘類病毒的單個(gè)病毒體；也可直接被某些病毒受染的組織細(xì)胞中的包涵體。也

5、可直接被某些病毒受染的組織細(xì)胞中的包涵體。根據(jù)包涵體的特點(diǎn)，作出輔助診斷。根據(jù)包涵體的特點(diǎn)，作出輔助診斷。2.電子顯微鏡檢查電子顯微鏡檢查1電鏡直接檢查法：用于從皰疹液、糞便或血清電鏡直接檢查法：用于從皰疹液、糞便或血清標(biāo)本中直接檢查皰疹病毒、甲肝病毒、乙肝病毒標(biāo)本中直接檢查皰疹病毒、甲肝病毒、乙肝病毒顆粒等；顆粒等；2免疫電鏡檢查法：將病毒標(biāo)本制成懸液，參與免疫電鏡檢查法：將病毒標(biāo)本制成懸液，參與特異性抗體混合，可使標(biāo)本中的病毒顆粒凝聚成特異性抗體混合，可使標(biāo)本中的病毒顆粒凝聚成團(tuán)。再用電鏡，可提高病毒的檢出率。團(tuán)。再用電鏡，可提高病毒的檢出率。第一節(jié)第一節(jié) 病毒感染的檢查病毒感染的檢查一標(biāo)

6、本的采集與送檢一標(biāo)本的采集與送檢二病毒的形狀學(xué)檢查二病毒的形狀學(xué)檢查三病毒的分別培育三病毒的分別培育1.動(dòng)物接種動(dòng)物接種2.雞胚培育雞胚培育3、組織細(xì)胞培育、組織細(xì)胞培育第一節(jié)第一節(jié) 病毒感染的檢查病毒感染的檢查三病毒的分別培育三病毒的分別培育1.動(dòng)物接種：動(dòng)物接種：是最原始的病毒培育方法。目前對(duì)某些病毒分別依是最原始的病毒培育方法。目前對(duì)某些病毒分別依然運(yùn)用。然運(yùn)用。常用的動(dòng)物有小鼠、大鼠、豚鼠、兔和猴等。常用的動(dòng)物有小鼠、大鼠、豚鼠、兔和猴等。接種途徑有鼻內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、腦內(nèi)、腹腔內(nèi)、靜接種途徑有鼻內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、腦內(nèi)、腹腔內(nèi)、靜脈等。脈等。根據(jù)病毒種類不同，選擇敏感的動(dòng)物及適宜接種部根據(jù)

7、病毒種類不同，選擇敏感的動(dòng)物及適宜接種部位。如嗜神經(jīng)病毒乙腦病毒、狂犬病毒可選位。如嗜神經(jīng)病毒乙腦病毒、狂犬病毒可選用小鼠腦內(nèi)接種，以使病毒增殖，并根據(jù)動(dòng)物出用小鼠腦內(nèi)接種，以使病毒增殖，并根據(jù)動(dòng)物出現(xiàn)的病癥特征協(xié)助診斷?，F(xiàn)的病癥特征協(xié)助診斷。2.雞胚培育雞胚培育第一節(jié)第一節(jié) 病毒感染的檢查病毒感染的檢查三病毒的分別培育三病毒的分別培育1.動(dòng)物接種：動(dòng)物接種：2.雞胚培育：是一種經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便的方法。雞胚培育：是一種經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便的方法。普通采用孵化普通采用孵化9-12天的雞胚，根據(jù)病毒的特天的雞胚，根據(jù)病毒的特性將病毒標(biāo)本接種于雞胚的不同部位。性將病毒標(biāo)本接種于雞胚的不同部位。如皰疹病毒接種于絨毛尿囊上

8、，流感病毒初如皰疹病毒接種于絨毛尿囊上，流感病毒初次分別接種于羊膜腔，傳代培育接種于尿次分別接種于羊膜腔，傳代培育接種于尿囊內(nèi)。囊內(nèi)。3、組織細(xì)胞培育、組織細(xì)胞培育第一節(jié)第一節(jié) 病毒感染的檢查病毒感染的檢查三病毒的分別培育三病毒的分別培育1.動(dòng)物接種：動(dòng)物接種：2.雞胚培育：雞胚培育：3、組織細(xì)胞培育、組織細(xì)胞培育將離體活組織塊或分散的活細(xì)胞加以培育，統(tǒng)稱為組織將離體活組織塊或分散的活細(xì)胞加以培育，統(tǒng)稱為組織培育。后者雙稱為單層細(xì)胞培育。是目前分別培育病培育。后者雙稱為單層細(xì)胞培育。是目前分別培育病毒的主要方法。毒的主要方法。通常用人胚腎細(xì)胞、人胎盤(pán)羊膜細(xì)胞、人胚二培體細(xì)胞、通常用人胚腎細(xì)胞、

9、人胎盤(pán)羊膜細(xì)胞、人胚二培體細(xì)胞、雞胚等原代細(xì)胞以及傳代細(xì)胞等制備單層細(xì)胞培育。雞胚等原代細(xì)胞以及傳代細(xì)胞等制備單層細(xì)胞培育。病毒感染細(xì)胞后，大多數(shù)能引起細(xì)胞病變，無(wú)需染色即病毒感染細(xì)胞后，大多數(shù)能引起細(xì)胞病變，無(wú)需染色即可直接在普通光學(xué)顯微鏡下察看?？芍苯釉谄胀ü鈱W(xué)顯微鏡下察看。有的細(xì)胞不產(chǎn)生病變，但能改動(dòng)培育液的有的細(xì)胞不產(chǎn)生病變，但能改動(dòng)培育液的PH，或出現(xiàn)，或出現(xiàn)紅細(xì)胞吸附及血凝景象流感病毒，有時(shí)還可用免紅細(xì)胞吸附及血凝景象流感病毒，有時(shí)還可用免疫熒光技術(shù)檢查細(xì)胞中的病毒和細(xì)胞變化。疫熒光技術(shù)檢查細(xì)胞中的病毒和細(xì)胞變化。組織培育多用于病毒分別培育和檢測(cè)中和抗體，制備疫組織培育多用于病毒分

10、別培育和檢測(cè)中和抗體，制備疫苗等。苗等。雞胚接種四其他檢查方法四其他檢查方法1.病毒感染的血清學(xué)檢查病毒感染的血清學(xué)檢查運(yùn)用血清學(xué)方法診斷病毒感染或進(jìn)展流行病學(xué)調(diào)查運(yùn)用血清學(xué)方法診斷病毒感染或進(jìn)展流行病學(xué)調(diào)查就是利用抗原抗體能特異性結(jié)合的原理，用知的就是利用抗原抗體能特異性結(jié)合的原理，用知的病毒和特異性抗體檢測(cè)病人標(biāo)本新分別的病毒株病毒和特異性抗體檢測(cè)病人標(biāo)本新分別的病毒株制備的抗原，或用知的病毒抗原檢查病人血清中制備的抗原，或用知的病毒抗原檢查病人血清中有無(wú)相應(yīng)抗體。有無(wú)相應(yīng)抗體。病人恢復(fù)期血清的抗體效價(jià)必需比急性期增高病人恢復(fù)期血清的抗體效價(jià)必需比急性期增高4倍倍以上才有診斷意義。以上才有

11、診斷意義。常用的方法有中和實(shí)驗(yàn)、補(bǔ)休結(jié)合實(shí)驗(yàn)、血凝抑制常用的方法有中和實(shí)驗(yàn)、補(bǔ)休結(jié)合實(shí)驗(yàn)、血凝抑制實(shí)驗(yàn)、免疫分散及熒光素、酶、放射性核素標(biāo)志實(shí)驗(yàn)、免疫分散及熒光素、酶、放射性核素標(biāo)志技術(shù)等。技術(shù)等。2.病毒核酸雜交技術(shù)病毒核酸雜交技術(shù) 3.聚合酶鏈反響聚合酶鏈反響四其他檢查方法四其他檢查方法1.病毒感染的血清學(xué)檢查病毒感染的血清學(xué)檢查2.病毒核酸雜交技術(shù)病毒核酸雜交技術(shù)是一種敏感性高、特異性強(qiáng)、運(yùn)用面廣的診是一種敏感性高、特異性強(qiáng)、運(yùn)用面廣的診斷技術(shù)和研討手段。斷技術(shù)和研討手段。原理是根據(jù)雙股原理是根據(jù)雙股DNA具有解離和重新組合的具有解離和重新組合的特性，用一條知的單鏈特性，用一條知的單鏈D

12、NA，標(biāo)志上放射，標(biāo)志上放射性核素作探針與固定在硝酸纖維膜上的待性核素作探針與固定在硝酸纖維膜上的待測(cè)單股測(cè)單股DNA進(jìn)展雜交，再用放射自顯影技進(jìn)展雜交，再用放射自顯影技術(shù)檢測(cè)，以確定有無(wú)病原體存在。術(shù)檢測(cè)，以確定有無(wú)病原體存在。 3.聚合酶鏈反響聚合酶鏈反響四其他檢查方法四其他檢查方法1.病毒感染的血清學(xué)檢查病毒感染的血清學(xué)檢查2.病毒核酸雜交技術(shù)病毒核酸雜交技術(shù)3.聚合酶鏈反響聚合酶鏈反響PCR是一種快速體外擴(kuò)增特異性是一種快速體外擴(kuò)增特異性DNA片段的技術(shù)，片段的技術(shù)，能在一至數(shù)小時(shí)內(nèi)經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單的酶促反響使能在一至數(shù)小時(shí)內(nèi)經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單的酶促反響使待測(cè)的待測(cè)的DNA擴(kuò)增至數(shù)百萬(wàn)倍，然后取反響擴(kuò)增

13、至數(shù)百萬(wàn)倍，然后取反響產(chǎn)物進(jìn)展瓊脂糖凝膠電泳，即可察看到核產(chǎn)物進(jìn)展瓊脂糖凝膠電泳，即可察看到核酸條帶，不需放射性核素標(biāo)志。酸條帶，不需放射性核素標(biāo)志。該技術(shù)可用于病毒、細(xì)菌等微生物疾病的診該技術(shù)可用于病毒、細(xì)菌等微生物疾病的診斷。斷。用于病毒培育的細(xì)胞單層用于病毒培育的細(xì)胞單層人胚肺成纖維細(xì)胞單層人胚肺成纖維細(xì)胞單層MRC，呈棱形，呈棱形非洲綠猴腎細(xì)胞單層非洲綠猴腎細(xì)胞單層VeroVero 正常細(xì)胞 細(xì)胞病變CPE雞紅細(xì)胞吸附于流感病毒感染的細(xì)胞雞紅細(xì)胞吸附于流感病毒感染的細(xì)胞第二節(jié)第二節(jié) 病毒感染的防治原那么病毒感染的防治原那么一病毒感染的預(yù)防一病毒感染的預(yù)防1.人工自動(dòng)免疫人工自動(dòng)免疫目前

14、運(yùn)用各種滅活疫苗或減毒活疫苗進(jìn)展人工自動(dòng)免疫。目前運(yùn)用各種滅活疫苗或減毒活疫苗進(jìn)展人工自動(dòng)免疫。滅活疫苗常用的有流腦疫苗、狂犬疫苗、流感滅活疫苗等。滅活疫苗常用的有流腦疫苗、狂犬疫苗、流感滅活疫苗等。減毒活疫苗常用的有脊髓灰質(zhì)炎疫苗、麻疹疫苗、流感疫苗、流減毒活疫苗常用的有脊髓灰質(zhì)炎疫苗、麻疹疫苗、流感疫苗、流行性腮腺炎疫苗、風(fēng)疹疫苗、黃熱病疫苗以及上些結(jié)合疫苗行性腮腺炎疫苗、風(fēng)疹疫苗、黃熱病疫苗以及上些結(jié)合疫苗如麻疹、風(fēng)疹、腮腺炎結(jié)合疫苗等。如麻疹、風(fēng)疹、腮腺炎結(jié)合疫苗等。滅活疫苗是用甲醛滅活劑滅活病毒核酸，但不影響病毒的抗原性。滅活疫苗是用甲醛滅活劑滅活病毒核酸，但不影響病毒的抗原性。減毒

15、活疫苗是用自然或人工選擇法對(duì)人無(wú)毒或弱毒的變異株來(lái)制減毒活疫苗是用自然或人工選擇法對(duì)人無(wú)毒或弱毒的變異株來(lái)制備。備?；钜呙缑庖咝Ч?，但能夠返祖，恢復(fù)毒力而致病，也可激活埋活疫苗免疫效果好，但能夠返祖，恢復(fù)毒力而致病，也可激活埋伏病毒引起繼續(xù)性感染，故有潛在危險(xiǎn)性。伏病毒引起繼續(xù)性感染，故有潛在危險(xiǎn)性。為提高疫苗的平安性，目前正試用于人體的還有亞單位疫苗流為提高疫苗的平安性，目前正試用于人體的還有亞單位疫苗流感疫苗等和基因工程疫苗，也稱多肽疫苗乙肝疫苗感疫苗等和基因工程疫苗，也稱多肽疫苗乙肝疫苗第二節(jié)第二節(jié) 病毒感染的防治原那么病毒感染的防治原那么一病毒感染的預(yù)防一病毒感染的預(yù)防1.人工自動(dòng)免

16、疫人工自動(dòng)免疫2.人工被動(dòng)免疫人工被動(dòng)免疫常用的免疫制劑有免疫血清、胎盤(pán)球蛋白、人血球常用的免疫制劑有免疫血清、胎盤(pán)球蛋白、人血球蛋白，以及與細(xì)胞免疫有關(guān)的轉(zhuǎn)移因子蛋白，以及與細(xì)胞免疫有關(guān)的轉(zhuǎn)移因子 等。等。注入人免疫球蛋白對(duì)甲肝、麻疹、脊髓灰質(zhì)炎等具注入人免疫球蛋白對(duì)甲肝、麻疹、脊髓灰質(zhì)炎等具有緊急預(yù)防作用，可使接觸者不出現(xiàn)病癥或僅出有緊急預(yù)防作用，可使接觸者不出現(xiàn)病癥或僅出現(xiàn)細(xì)微病癥?，F(xiàn)細(xì)微病癥。近年來(lái)已運(yùn)用含有高滴度抗近年來(lái)已運(yùn)用含有高滴度抗-HBs的乙肝免疫球蛋白的乙肝免疫球蛋白來(lái)預(yù)防乙肝，有一定療效。來(lái)預(yù)防乙肝，有一定療效。第二節(jié)第二節(jié) 病毒感染的防治原那么病毒感染的防治原那么一病毒

17、感染的預(yù)防一病毒感染的預(yù)防二病毒感染的治療二病毒感染的治療1.干擾素干擾素是機(jī)體遭到病毒或其他干擾素誘生劑刺激，由巨噬是機(jī)體遭到病毒或其他干擾素誘生劑刺激，由巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞以及體細(xì)胞等多種細(xì)胞所產(chǎn)生的細(xì)胞、淋巴細(xì)胞以及體細(xì)胞等多種細(xì)胞所產(chǎn)生的一種糖蛋白。一種糖蛋白。1種類：種類：、又稱又稱I型干擾素，型干擾素， 又稱又稱型干擾素。型干擾素。型干擾素對(duì)免疫細(xì)胞的調(diào)理作用強(qiáng)于型干擾素對(duì)免疫細(xì)胞的調(diào)理作用強(qiáng)于I型干擾素，型干擾素，而抗病毒作用而抗病毒作用I型干擾素強(qiáng)于型干擾素強(qiáng)于型干擾素。型干擾素。第二節(jié)第二節(jié) 病毒感染的防治原那么病毒感染的防治原那么二病毒感染的治療二病毒感染的治療1.干擾素干

18、擾素1種類：種類：、2作用機(jī)理：干擾素作用于臨近的正常細(xì)胞，使作用機(jī)理：干擾素作用于臨近的正常細(xì)胞，使之合成抗病毒蛋白，抑制病毒蛋白的合成，影響病之合成抗病毒蛋白，抑制病毒蛋白的合成，影響病毒的組裝和釋放。毒的組裝和釋放?？共《镜鞍字蛔饔糜诓《?，對(duì)宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)合成沒(méi)抗病毒蛋白只作用于病毒，對(duì)宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)合成沒(méi)有影響，故其副作用小。有影響，故其副作用小。3生物學(xué)活性：廣譜抗病毒作用治療病毒感染生物學(xué)活性：廣譜抗病毒作用治療病毒感染-乙肝、皰疹性角膜炎、帶狀皰疹、水痘等、免疫乙肝、皰疹性角膜炎、帶狀皰疹、水痘等、免疫調(diào)理作用、抗腫瘤作用調(diào)理作用、抗腫瘤作用第二節(jié)第二節(jié) 病毒感染的防治原那么病毒感染的防治原那么二病毒感染的治療二病毒感染的治療1.干擾素干擾素2.化學(xué)藥物化學(xué)藥物由于病毒只能在活細(xì)胞內(nèi)增殖，故對(duì)病毒有效的化學(xué)由于病毒只能在活細(xì)胞內(nèi)增殖，故對(duì)病毒有效的化學(xué)治療劑多對(duì)機(jī)體細(xì)胞有一定損傷作用。治療劑多對(duì)機(jī)體細(xì)胞有一