糞便基因組dna提取試劑盒說明書

1、磁珠法糞便基因組DNA提取試劑盒(常規(guī)版)MagBeads Faeces DNA Extraction Kit (Regular Version)【目錄號】FDE-5005. FDE-5030運(yùn)輸條件225°C；【保存條件】磁珠懸浮液、裂解液2 28,蛋白酶K-20,其它組分室溫；【試劑盒組成】Kit Component 試劑盒組成FDE-5005 (50T)FDE-5030 (300T)FDE Magnetic Beads磁珠懸浮液5mL25mLFDE Buffer 1裂解液150mL300mLFDE Buffer 2裂解液212.5mL75mLProteinase K solut

2、ion蛋白酶K溶液1mL6mLWash Buffer 清洗液30mL180mLElute Buffer 洗脫液5mL30mL【注意事項(xiàng)】1.磁珠懸浮液嚴(yán)禁反復(fù)凍融和離心，以免磁珠受到損害，使用前務(wù)必充分混勻；2使用前請檢查裂解液1/2中是否出現(xiàn)結(jié)晶，如有結(jié)晶請將置于于37環(huán)境中重新溶解;3 .蛋白酶K長期不使用，請置于-20保存，融化后4七保存，并盡快使用；4本操作指南經(jīng)本公司反復(fù)驗(yàn)證，使用前請仔細(xì)閱讀，并且按照操作指南建議操作?！井a(chǎn)品簡介】本試劑盒適用于從各種固態(tài)或液態(tài)糞便樣本中分離純化基因組DNAo試劑盒采用具有 獨(dú)特分離作用的納米磁珠和緩沖液體系，特殊技術(shù)包埋的磁珠在特定條件下對核酸具有

3、極 強(qiáng)的富集能力，當(dāng)條件改變時(shí)，磁珠會(huì)釋放所吸附的核酸，從而達(dá)到快速分離純化核酸的口 的。方法簡便、快捷、質(zhì)量穩(wěn)定。提取所得基因組DNA產(chǎn)物，純度優(yōu)良，可應(yīng)用于酶切、 PCR、熒光定量PCR、文庫構(gòu)建、Sputhem雜交、芯片檢測和高通量測序等各種下游分子 生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。本試劑盒可手動(dòng)法在EP管中進(jìn)行操作，亦可配合核酸提取儀實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作?！驹噭┖姓f明】樣本類型樣本量DNA提取范圍固態(tài)糞便200mg540Pg液態(tài)糞便200pL120Pg【自備試劑】異丙醇.80%乙醇、RNase A 溶液(100mg/mL,分散液 10mM Tris-HCI, 1mM EDTA,pH 值 8.0)o【自備儀器&a

4、mp;耗材】儀器自動(dòng)版：渦旋混合儀、高速離心機(jī)、金屬浴或水浴鍋、96孔方孔圓底板、英芮誠 ETP-300核酸提取儀、磁棒套。手動(dòng)版：渦旋混合儀、高速離心機(jī)、EP管、EP管用磁力架。【儀器自動(dòng)版操作步驟】以英芮誠ETP-300型全自動(dòng)核酸提取儀為例，可同步完成32個(gè)樣本的提取工作。1.96孔板加液參照下表用量向96孔板中分別加入相應(yīng)試劑。樣本位1.72、83、94x105.116、12試劑磁珠懸浮液 75pL異丙醇 400pL清洗液 600pL80%乙醇 600pL80%乙醇 600pL洗脫液 100pL注：1）每次吸取磁珠懸浮液前盡量搖晃均勻2）為提高效率建議使用排槍進(jìn)行加液 操作。2 .樣本

5、裂解1）取約200mg固態(tài)糞便樣本或約200PL液態(tài)糞便樣本，置于EP管中，依次加入 裂 解液1和20PL蛋白酶K,渦旋振蕩1 min （須將管底糞便充分振蕩起來），然后置 于 58環(huán)境中裂解30min,每隔5min顛倒混勻一次；注:如窸去除RNA,請額外加入5 Pl RNase A溶液。2）裂解完畢，室溫、12Q00rpm離心5min,轉(zhuǎn)移400PL上清液至新的EP管內(nèi)：3）向新的EP管中加入250PL裂解液2,上下顛倒5次混合均勻，室溫、12,000rpm離 心5min后待用。3 .上機(jī)提取從步驟2裂解完畢樣本中吸取450pL上清液至加液完畢的96孔板第2/8列孔位中，將 96孔板置于ET

6、P-300型核酸提取儀中，并插入磁棒套，運(yùn)行儀器操作軟件，調(diào)用“糞 便 核酸提取”程序并執(zhí)行?！凹S便核酸提取'程序參數(shù)設(shè)置如下，如儀器程序參數(shù)與說明書不一致,請以 說明書為準(zhǔn):步型第號孔位運(yùn)行類繪廂蕩時(shí)間（秒）分澳時(shí)間矽）揮發(fā)時(shí)間（秒）振解度瞬勞;度CC)co三姐逞度CC）四姐逞度CC）11耐轉(zhuǎn)移11002弱000022DNA結(jié)合120004000032DNA結(jié)合4001504弱0000432501005000054麗22801005000065麗2240103005000076磁50020026060606083砂珠15005迄00C4 .核酸轉(zhuǎn)移程序運(yùn)行完畢，取下96孔板，將洗脫液

7、轉(zhuǎn)移至干凈的EP管或者PCR板中，提取過程完 畢，此時(shí)可棄去96孔板?！臼謩?dòng)版操作步驟】1 .樣本裂解參照【儀器自動(dòng)版操作步驟】中步驟2進(jìn)行操作。2 .核酸結(jié)合向裂解完畢的EP管中按照等體積加入異丙醇和75JJL磁珠懸浮液，顛倒混勻后高速渦旋振蕩10min,然后靜置2mirio3 .磁性分離將EP管置于磁力架上靜置20s至磁珠吸附完全，如果EP管內(nèi)蓋有液體，可保持EP 管在磁力架上，整體上下顛倒23次，使磁珠完全被磁力架吸附。保持EP管固定于 磁力架上，用移液槍完全棄去上清液，期間避免接觸磁珠。4 .清洗1）向EP管中加入600PL清洗液，將EP管從磁力架上取下，劇烈搖動(dòng)使磁珠充分 分 散，渦旋震蕩1min后，參照步驟3進(jìn)行磁性分離。2）使用600JJL80%乙醇，參照上述步驟4 （2）操作2次。5 .除醇將除盡上清液后的EP管置于磁力架上，連同磁力架一起放入45七真空干燥箱中， 干燥 約10min至無明顯乙醇味。注:若無真空干燥箱，亦可在保持通風(fēng)櫥通風(fēng)或電鳳扇的狀態(tài)下靜置約lomin, 具體時(shí)間根據(jù)氣溫變化可能需要適當(dāng)調(diào)整,以磁珠干燥完全為原則。6 .核酸洗脫取出EP管，加AIOOpL洗脫液（或去離子水），移液槍吹打使磁珠與洗脫液充分混 勻，將EP管置于65環(huán)境中加熱洗脫5min,然后渦旋洗脫